多发性骨髓瘤患者DAPK的表达及启动子区甲基化状态的研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者抑癌基因DAPK的表达及其启动子区甲基化状态,探讨其在MM发生发展中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术及实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)研究MM患者骨髓单个核细胞DAPK基因启动子甲基化发生率及其mRNA的表达水平。结果 MM患者DAPK基因启动子甲基化阳性率为18.52%,对照组中DAPK基因启动子区甲基化阳性率为0;MM组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。MM组和对照组DAPK mRNA表达情况,差异无统计学意义(P>0.05);MM患者中甲基化组低于非甲基化组;甲基化组、非甲基化组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.0167);MM患者的初治组低于复发组,初治组、复发组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.0167)。结论 DAPK基因启动子区甲基化可能是其mRNA表达的机制之一,并在MM的发病中具有一定的作用。     

抑癌基因PTEN在急性白血病中的表达及意义

目的 研究在急性白血病（AL）中抑癌基因PTEN的表达情况,并对急性白血病发生与预后的关系进行探究分析.方法 使用聚合酶链式反应法（PCR）对2010年2月至2011年8月安徽医科大学第一附属医院血液科就诊的住院及门诊收治的111例急性白血病（AL）患者抑癌基因的表达情况进行检测,并分析PTEN表达情况与临床指标之间的相关性.结果 111例AL患者中检测到34例患者抑癌基因PTEN表达阴性缺失,AL患者中PTEN（-）患者的完全缓解率低于PTEN（＋）的患者（P＜0.05）;PTEN基因阴性缺失与骨髓原始细胞百分比、外周血白细胞计数存在正相关.结论 急性白血病的发生可能有抑癌基因PTEN的参与,其对急性白血病患者的转归和复发具有重要意义.     

白血病干细胞相关基因在急性白血病中的表达及临床意义

目的 探讨白血病干细胞相关基因在急性白血病中的表达及临床意义,为临床白血病的诊治研究提供参照.方法 随机选取2008年1月～2012年12月本院收治的急性白血病(观察组)以及血液良性病(对照组)患者各50例,分别检测患者骨髓细胞HOX、Bmi-1与PTEN基因的表达水平并进行比较分析；同时,对观察组治疗后达到缓解患者(观察组A)与难治复发患者(观察组B)骨髓细胞HOX、Bmi-1与PTEN基因的表达水平进行检测并进行分析比较.结果 观察组患者HOX 、Bmi-1与PTEN基因均呈现出较高表达水平,对照组患者HOX、Bmi-1与PTEN均未见相应的表达；观察组A患者HOX、Bmi-1与PTEN表达水平较观察组B患者低,以上基因表达水平比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 白血病干细胞相关基因(HOX、Bmi-1与PTEN)在急性白血病患者骨髓细胞中存在较高表达,对患者疗效观察及预后判断具有重要意义.     

白血病患者p16基因失活机制研究

目的了解白血病患者p16基因纯合性缺失、点突变及启动子区甲基化状态,探讨白血病发生中p16基因失活机制。方法采用聚合酶链反应、聚合酶链反应-单链构象多态性以及巢式甲基化特异性PCR法,对57例白血病患者进行p16基因纯合性缺失、点突变及启动子区甲基化状态研究。结果在受检的57例白血病患者中,共有6例发生p16基因纯合性缺失（10.53%）;无p16第1、2外显子缺失的51例白血病患者中均未见点突变发生;无p16基因第1、2外显子缺失、突变的51例白血病患者中共有16例发生p16基因甲基化（31.37%）,其中14例（27.45%）发生在急性白血病患者;57例白血病患者中共有22例发生p16基因失活（38.60%）。结论白血病发生过程中表观遗传学机制和遗传学机制相互作用,p16基因启动子区高甲基化可能是急性白血病发生中p16基因失活的主要机制。     

Skp2在急性白血病中的表达及与预后的关系

目的：探讨Skp2（S期激酶相关蛋白2）在急性白血病中的表达并分析其与预后的关系。方法：采用免疫组织化学法检测Skp2在51例初治急性白血病患者及20倒良性血液病患者（对照组）骨髓细胞中的表达,并分析急性白血病阳性表达与阴性表达完全缓解率的差别。结果：Skp2在急性白血病骨髓细胞中阳性结果的表达率明显高于对照组（P〈0．01）;Skp2阳性表达患者的完全缓解率显著低于阴性表达患者（P〈0．05）。结论：Skp2的过度表达与急性白血病的发生发展密切相关,且阳性表达可能提示急性白血病的预后不良。     

牙龈鳞癌中PTEN基因启动子甲基化状态及预后分析

目的 探讨牙龈鳞癌中PTEN基因启动子甲基化状态及其预后的价值.方法 以唐山市协和医院2005年9月至2010年9月收治的牙龈癌患者石蜡标本30例为研究对象,从中随机抽取高、中、低分化各10例(共30例),用甲基化特异性PCR法检测其PTEN基因启动子区甲基化的状态,统计这些病例PTEN启动子区的甲基化状况,结合牙龈癌患者病历资料和随访信息,采用Kaplan-Meier方法 绘制生存曲线,分析PTEN甲基化状态与牙龈癌预后的相关性.结果 30例牙龈鳞癌中PTEN启动子甲基化率为36.7％,且N分期甲基化率高于T分期;PTEN启动子甲基化情况与牙龈鳞癌患者的N分期、细胞分化程度有显著相关性(P<0.05);PTEN基因启动子甲基化患者的中位生存时间85个月,无甲基化患者的中位生存时间108个月,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 PTEN启动子甲基化与N分期和细胞分化程度相关,可能是影响牙龈鳞癌患者预后的独立危险因素,对评价患者预后具有重要临床实际意义.PTEN启动子甲基化在口腔鳞癌的发生、发展及预后起着重要作用,可作为判断预后的参考指标之一.     

丁酸钠诱导Raji细胞表达DAPK的研究

目的探讨丁酸钠(SB)对人淋巴瘤Raji细胞生长和DAPK表达变化的影响。方法用丁酸钠作用于Raji细胞株,观察形态、增殖情况、细胞周期分布变化、死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子甲基化的变化及该酶表达的变化。结果成团悬浮生长的Raji细胞呈现贴壁生长,细胞增殖速度明显被抑制,细胞阻滞在G0/G1期;DAPK启动子去甲基化,DAPK表达量增加,细胞凋亡增加。结论丁酸钠具有诱导Raji细胞DAPK基因启动子去甲基化,使DAPK重新表达,诱导细胞凋亡的作用。     

散发性乳腺癌组织BRCA1基因启动子甲基化与蛋白表达的相关性

目的：探讨BRCA1基因启动子甲基化对BRCA1蛋白表达的影响，与散发性乳腺癌发病之间的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MS-PCR）检测51例散发的乳腺浸润性导管癌和10例乳腺良性组织的BRCA1基因启动子甲基化状态，免疫组织化学SP法检测相应组织的石蜡标本BRCA1蛋白表达水平。结果：10例乳腺良性组织中均未检测到BRCA1启动子的异常甲基化，结合免疫组织化学检测，BRCA1蛋白均在细胞核阳性表达，其中70％为强阳性表达；在51例散发性乳腺浸润性导管癌组织中检测到7例BRCA1启动子发生异常甲基化，甲基化比例为13．73％（7／51）；其余44例（44／51，86．27％）未检测到BRCA1启动子甲基化。     

骨关节炎患者关节软骨TIMP-3启动子区甲基化水平的初步研究

目的探讨关节软骨中组织金属蛋白酶抑制因子-3（TIMP～3）基因启动子区甲基化与其蛋白表达的相关性,并分析TIMP一3基因CpG岛异常甲基化与骨关节炎（OA）的关联性。方法应用甲基化特异性的聚合酶链反应（MSP）技术和免疫组织化学SP法分别检测14例健康人的正常关节软骨细胞和35例骨关节炎（OA）患者软骨细胞TIMP-3基因启动子区甲基化和蛋白表达情况。结果OA患者和健康人关节软骨中TIMP-3基因启动子区均有甲基化修饰,其阳性率分别为74.3％（26／35）和35．7％（5／14）,0A组TIMP-3基因启动子区甲基化率明显高于健康组（P〈0．05）。14例健康人中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性10例（71．4％）,而35例OA患者中,软骨细胞TIMP-3蛋白表达阳性11例（31．4％）。24例OA患者软骨细胞蛋白表达阴性的标本中．TIMP-3启动子区甲基化阳性21例（87．5％）;26例TIMP-3启动子区甲基化阳性的标本中,蛋白表达阴性21例（80．8％）,TIMP-3启动子区甲基化与蛋白表达呈显著负相关（P〈0．05）。结论启动子区CpG岛高甲基化是OA患者关节软骨细胞TIMP-3表达失活的主要机制之一,其可能参与了OA的发生和发展。     

老年白血病患者Survivin基因表达及临床意义

目的探讨Survivin基因在老年白血病患者白血病细胞中的表达,并分析与预后的关系。方法应用RT-PCR对32例不同时期老年急性白血病（AL）患者及5例慢性淋巴细胞白血病患者的白血病细胞Survivin基因mRNA表达情况进行检测,以10例健康人作为对照。结果 32例老年AL患者白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率为71.87%,急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞Survivin mRNA表达率为71.42%与急性非淋巴细胞白血病（ANLL）细胞76%的表达率比较差异无统计学意义,二者均高于对照组（χ2=5.90、6.81,P〈0.05）。初治和复发AL患者白血病细胞Survivin mRNA阳性表达率分别为78.01%、84.15%,明显高于对照组（χ2=12.61、9.23,P〈0.05）,老年慢性淋巴细胞白血病患者的白血病细胞中无Survivin表达。结论老年急性白血病的发生、发展可能与Survivin基因的过度表达密切相关。     

高危骨髓增生异常综合征PTEN基因异常表达的临床意义

目的观察高危骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓细胞中PTEN表达情况,探讨其在高危MDS患者临床病理意义以及与疾病转归的关系（相关性）,初步评价其对高危MDS的临床意义和判断预后的指导作用。方法采用免疫组化方法（S-P法）检测高危MDS 25例、良性血液病24例（对照组）患者的骨髓（病理石蜡切片）细胞中PTEN表达情况,并对25例高危MDS的治疗反应及疾病转归进行随访。结果高危MDS的PTEN阳性表达率为56.00%;对照组为90%;两者间差异有非常显著性（P〈0.01）。以PTEN表达水平标本积分判定≥3分为标准,设高表达组和低表达组：高表达组8例,低表达组17例。高表达组治疗反应率（有效率）62.50%（5/8例）;低表达组治疗反应率（有效率）47.06%（8/17例）,两者之间差异有显著性（P〈0.05）。25例高危MDS均行染色体核型分析,其中异常9例;正常16例;PTEN的表达水平与染色体核型异常无相关性。转急性白血病（MDS-AL）高表达组3/8例（37.50%）;低表达组11/17例（64.71%）。结论高危MDS存在PTEN基因表达的异常,PTEN表达与治疗反应有相关性,PTEN对于高危MDS的预后判断有一定的意义。     

Survivin和PLK1在急性白血病中的表达及临床意义

目的：探讨保罗样激酶1（polo样激酶 PLK1）和抗凋亡蛋白（Survivin）在急性白血病（AL）中的表达水平及临床意义。方法：应用免疫细胞化学技术（ICC）检测54例AL初治患者骨髓细胞中PLK1和抗凋亡蛋白Survivin的表达水平,经过标准化化疗方案化疗后分为缓解组、未缓解组。并取19例健康体检成人（同期闻在本院确诊的非血液病患者）骨髓标本作为对照组。结果：PLK1和Survivin在初治急性髓细胞性白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（AL）患者骨髓细胞中的表达均显著高于正常对照组和完全缓解组,其显著性差异存在统计学意义（P〈0．05）;PLK1和Survivin高表达组CR率低于低表达组,差异有显著性（P〈0．05）;二者的表达呈正相关。结论：PLK1和Survivin的过表达对急性白血病的发生和发展有着不同程度地影响,有希望成为急性白血病预后判断的监测指标。PLK1和Survivin表达呈正相关,提示PLK1的过表达可能促进Survivin的表达,增强Survivin的抗凋亡活性。     

急性白血病患者血清乳酸脱氢酶及白细胞介素-10的表达及意义

目的：探讨急性白血病（AL）患者血清乳酸脱氢酶（LDH）与自细胞介素-10（IL-1O）的表达及意义。方法：采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定30例正常（对照组）和45例白血病（白血病组）患者治疗前后血清IL—10的水平，用酶法检测LDH水平：结果：白血病患者治疗前LDH、IL-10水平高于正常对照组．差异均有显著性（P〈0．05）；治疗后缓解时LDH、IL-10水平低于治疗前，二者差异均有显著性（P〈0．05）。结论：LDH、IL—10的测定在白血痫的冶疗监测中有较好的应用价值，     

FCM联合多重PCR技术在慢性淋巴细胞白血病基因异常检测的效果分析

目的探讨流式细胞术（FCM）技术联合多重PCR技术在慢性淋巴细胞白血病基因异常检测的效果。方法选择30例白血病患者的外周血标本和骨髓标本及10例阴性对照标本,均采用FCM技术与多重PCR技术检测基因异常表达情况。结果在30例慢性粒细胞白血病患者中,FCM检测有25例发生基因甲基化转录阳性,阳性率为83.3%,PCR甲基化检测结果都为阳性。而在对照组中,FCM与PCR检测都未发生阳性表达情况。结论 FCM技术联合多重PCR技术既可以定性又可以定量检测白血病基因甲基化表达情况,可成为白血病治疗过程中疗效评价的重要参考方法。     

PTEN基因甲基化及其表达与非小细胞肺癌侵袭转移的关系

目的观察非小细胞肺癌组织中第10号染色体缺失的张力蛋白同源的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)mRNA表达和启动子区甲基化状态变化,探讨其与肺癌临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR和甲基化特异性PCR法(MSP)分析肺癌及相应癌旁肺组织中PTEN基因表达情况及其启动子区甲基化状态。结果肺癌组织中PTEN基因启动子区甲基化率为57.8%(48/83),明显高于癌旁肺组织的30.1%(25/83)(P<0.05)。肺癌组织中PTENmRNA的阳性率为32.5%(27/83),明显低于癌旁肺组织的55.4%(46/83)(P<0.05);PTEN基因启动子甲基化与mRNA的表达与NSCLC的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及术后生存时间有明显关系,PTEN甲基化状态与mRNA表达呈负相关(P<0.05)。结论肺癌组织中PTEN基因失表达与其启动子区甲基化有关,这可能是肺癌发生发展以及转移的原因之一。     

VEGF与P53在急性白血病中表达及意义

目的：观察急性白血病细胞中VEGF及P^53的表达,井分析其在治疗和预后中的作用。方法：采用免疫组化（SABC）法检测VEGF及P^53在急性白血病细胞中的表达。结果：VEGF及P^53在急性白血病细胞中表达（分别为69．39％和55．10％）较对照组细胞（分别为17．50％及22．50％）明显增高（P〉0．01）,且VEGF及P^53表达均为阳性时,完全缓解率（CR）明显减低（12．5％）;二者均为阴性时,CR率可达100%。结论：急性白血病细胞中VEGF及P^53高表达,二者结合起来可作为了解病情,观察疗效及判断预后的指标之一。     

肿瘤细胞JWA基因启动子甲基化的初步研究

目的：探讨肿瘤细胞中JWA基因启动子甲基化的状态及其对基因转录活性的影响。方法用报告基因法检测JWA基因启动子甲基化对基因转录活性的影响，用亚硫酸氢盐测序法检测JWA基因启动子CpG岛内的甲基化位点。用甲基化特异性PCR法（methylation specific PCR，MSP）法检测不同肿瘤细胞株（U937、HL60、K562、NB4）以及在白血病患者外周血单个核细胞中JWA基因启动子甲基化的分布。亚硫氢酸盐测序法检测CpG岛内发生甲基化位点。结果用甲基化酶处理报告基因后JWA基因启动子的转录活性明显下降。用亚硫氢酸盐测序法检测肿瘤细胞株中JWA基因启动子CpG岛未发现甲基化的CpG位点。用MSP法检测U937、HL60、K562、NB4肿瘤细胞和白血病患者外周血单个核细胞的DNA样本均未发现肿瘤细胞启动子甲基化。结论JWA基因启动子甲基化可导致肿瘤细胞JWA基因的转录活性下降，但在所检测的肿瘤细胞及白血病细胞中可能无甲基化现象。     

PTEN表达异常与急性髓性白血病患者预后的关系

目的 探讨PTEN在急性髓性白血病(AML)中的表达情况及其对预后的影响.方法 应用免疫组化(S-P)技术分别检测45例初治AML及40例对照(正常骨髓10例及非恶性血液病30例)骨髓单个核细胞中PTEN的表达,分析PTEN与外周血白细胞数及特异性融合基因的关系,追踪疾病的转归.结果 PTEN基因阳性表达在对照组中非恶...     

急性自血病患者LDH及SF水平测定的临床意义

目的探讨急性白血病患者的乳酸脱氢酶（LDH）、血清铁蛋白（SF）的表达水平及意义。方法采用酶反应速率法、放射免疫法检测118例初治急性白血病患者（87例急性髓系白血病患者、31例急性淋巴细胞白血病患者）、93例经化疗诱导完全缓解的急性白血病患者、37例经诱导化疗完全缓解后1年内复发的急性白血病患者和60例健康志愿者的LDH、SF表达水平,并进行各组间比较分析。结果急性白血病组、急性淋巴细胞白血病组、急性髓系白血病组LDH、SF表达水平与正常对照组差异均有统计学意义（P〈0．05）,急性淋巴细胞白血病组LDH、SF表达水平与急性髓系白血病组差异均有统计学意义（P〈0．05）。完全缓解组LDH、SF表达水平与急性白血病组／初治前组、缓解后复发组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。缓解后复发组与急性白血病组／初治前组、正常对照组与完全缓解组LDH、SF表达水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LDH及SF可作为急性白血病患者观察病情发展、预后预测的指标。     

microRNA-103b在急性淋巴细胞白血病患者中的表达及意义

目的：微小RNA（ microRNA,miRNA）是一类长度为21-25nt的内源性单链非编码RNA小分子。本研究旨在探讨miR-103b在急性淋巴细胞白血病（ ALL）中的表达及临床意义。方法用实时定量聚合酶链反应（ qRT-PCR）技术检测80例初诊ALL患者和20例正常人骨髓单个核细胞标本中miR-103b的相对表达量,并与患者临床资料进行相关性分析。结果 miR-103b在ALL患者中的相对表达量高于正常对照组（ P ＜0创．05）,但其在急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）及急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）中的表达水平差异无统计学意义（ P ＞0．05）,miR-103b的表达与是否存在bcr-abl融合基因及其mRNA的表达水平无相关性（ P ＞0．05）。结论 miR-103b在ALL患者中表达上调,可作为临床诊断ALL的潜在分子标记物,bcr-abl融合基因的表达对miR-103b在ALL中的表达无明显影响。