4-HPR体外诱导A549细胞凋亡与Bcl-2家族蛋白相关性研究

目的研究4-HPR对肺腺癌细胞A549体外生长的影响及机制的初步探讨。方法MTT法观察4-HPR对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用,流式细胞术观察4-HPR诱导A549细胞凋亡作用和对细胞周期的影响,Western blot分析凋亡相关蛋白表达。结果4-HPR抑制A549的增殖呈剂量依赖性;4-HPR诱导A549细胞凋亡,凋亡过程伴随Bcl-2、Bcl-xS/L表达下降,而Caspase-3、Caspase-9的表达无明显变化。结论4-HPR可明显抑制肺腺癌细胞的增殖,通过降低Bcl-2和Bcl-xS/L促进A549细胞凋亡,为进一步探讨4-HPR治疗肺腺癌的机制提供实验依据。     

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物[N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺]对人肺腺癌A549细胞株体外增殖及凋亡的影响。方法3种浓度的ATRA衍生物和ATRA(1、5、10mg/L)分别处理A549细胞1、2、3、7d,应用MTT法和流式细胞技术分别观察该ATRA衍生物对A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响;Western blot分析凋亡相关蛋白表达的变化。结果ATRA衍生物处理组A549细胞增殖抑制率随药物浓度的增加而提高,分别为9.1%、17.8%、47.0%;抑制率亦随药物作用时间的延长而提高,分别为18.1%、20.6%、40.4%、83.4%。10mg/LATRA衍生物可明显诱导A549细胞凋亡,凋亡率达到40.9%,G0～G1期细胞比例明显下降,细胞凋亡峰较对照组明显提前,凋亡过程伴随Bcl-2表达下降,而Bax、Bak、酶原形式的Caspase-3、p53、NF-κB的表达无明显变化。结论ATRA衍生物对A549细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;并诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2蛋白的表达下调有关。     

新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡

目的研究新型鬼臼毒素衍生物LGN体外诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测LGN抑制人肺腺癌细胞株A549增殖的情况,利用Giemsa染色、Hoechst染色、流式细胞仪、DNA ladder检测LGN诱导人肺腺癌细胞株A549凋亡的情况,利用反转录-聚合酶链反应检测凋亡相关基因半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、原癌基因bcl-2、促凋亡基因bax、p53等。结果 LGN对A549细胞有良好的抑制活性,半数抑制率明显优于阳性对照药依托泊苷,差异有统计学意义(P<0.05)。LGN可诱导A549细胞产生显著凋亡,并可增加A549细胞中p53、caspase-3及bax的mRNA表达,同时降低bcl-2的mRNA表达,并有良好的量效关系。结论鬼臼毒素新衍生物LGN可以诱导A549细胞发生凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因表达有关。     

腺病毒介导的hIL-24基因对肺腺癌细胞生长的影响

目的研究重组腺病毒Ad-hIL-24对A549肺癌细胞的影响。方法将载有hIL-24基因的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-hIL-24）感染A549肺癌细胞,RT-PCR法检测hIL-24基因的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察病毒感染前后细胞形态的变化,运用MTT法和流式细胞术（FCM）分别检测其对A549细胞的生长抑制及凋亡效应,通过免疫细胞化学分析caspase-3的变化。结果Ad-hIL-24感染A549细胞后有hIL-24目的基因的转录,可明显抑制A549细胞的生长,凋亡率明显增加,并能上调caspase-3的表达。结论腺病毒介导的hIL-24基因具有抑制A549肺癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷对人肺腺癌A-549细胞株增殖及c-Myc基因表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞株的生长增殖、细胞周期、凋亡等方面的影响,并初步探讨其机制。方法选用不同浓度As2O3处理人肺腺癌A549细胞株,以MTT比色法检测细胞生长增殖的抑制情况;用流式细胞术测定细胞周期、凋亡率;以免疫组织化学法分析不同浓度As2O3对c-Myc基因表达的影响。结果 As2O3以时间和浓度依赖的方式抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖,并能诱导细胞凋亡。不同浓度As2O3处理组可调控细胞周期分别发生G2/M期阻滞和S期阻滞,并下调c-Myc基因表达。结论三氧化二砷对人肺腺癌细胞株A-549的生长、增殖有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和抑制c-Myc基因的表达和诱导细胞凋亡有关。     

苦参碱诱导A549细胞凋亡的机制研究

目的:观察苦参碱抑制人肺腺癌细胞A549的增殖作用,并探讨其分子机制.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Bax及caspase-3蛋白表达水平.结果:苦参碱对A549细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈现剂量和时间依赖关系;电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;细胞周期分析显示细胞增殖发生S/G2期阻滞;苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01);而显著升高Bax蛋白表达水平及caspase-3活性.结论:苦参碱可显著抑制A549细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Bcl-2表达水平改变线粒体膜通透性有关.     

蟾蜍灵联合阿霉素对人肺癌A549细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：探讨天然药物蟾蜍灵、阿霉素以及两者联用对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影 响。方法：采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT )法观察蟾蜍灵、阿霉素以及两者联用对A549细胞增 殖的影响;采用赫斯特(Hoechst 33342)染色法观察细胞核形态变化;采用流式细胞仪检测蟾蜍灵、阿霉素以及两者联 用对A549细胞凋亡和细胞周期的影响;采用Western印迹检测凋亡蛋白的表达。结果：蟾蜍灵和阿霉素单独用药均能 抑制A549细胞的增殖,且呈剂量与时间依赖关系;与蟾蜍灵和阿霉素单独用药相比,1,20,100 nmol/L蟾蜍灵分别 与1.0 μg/mL阿霉素联合作用A549细胞24,48,72 h的抑制率显著升高(均P<0.05)。蟾蜍灵和阿霉素均可在一定程度上 诱导细胞凋亡,两药联用后诱导细胞凋亡作用显著增强。蟾蜍灵和阿霉素联用可将细胞周期阻滞在S期,并上调凋亡 蛋白caspase-3的表达。结论：蟾蜍灵联合阿霉素可显著抑制A549细胞的增殖,其抗肿瘤的机制可能与诱导细胞凋亡、 细胞周期S期阻滞及凋亡蛋白caspase-3的上调有关。     

紫草素通过促进ROS的产生诱导人非小细胞性肺癌A549细胞凋亡的机制

目的 研究紫草素对人非小细胞性肺癌A549细胞的抗肿瘤作用,并探讨其可能的机制。方法 不同浓度紫草素处理A549细胞和人正常肺MRC-5细胞,四氮唑盐还原（MTT）法检测细胞的活性;流式细胞术结合PI-FITC双染色测定细胞凋亡;2''7''-二氯双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针测定活性氧（reactive oxygen species,ROS）;Western blot法测定caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达。结果 紫草素对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性（P<0.05,P<0.01）;当剂量≤10μmol/L时,其对MRC-5细胞的增殖没有明显的影响（P>0.05）。不同浓度紫草素处理24h后,A549细胞的凋亡率（早期凋亡+晚期凋亡）显著增加（P<0.05或P<0.01）,caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白被诱导活化,caspase抑制剂（Z-VAD-FMK）预处理则明显降低A549细胞的凋亡率（P<0.01）,并抑制以上3种蛋白的活化。另外,紫草素处理可引起A549细胞ROS的产生,且呈现出一定的剂量依赖性。ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）和L-谷胱甘肽（GSH）预处理可使A549细胞的凋亡率下降（P<0.01）。同时,紫草素处理可明显下调抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）,NAC和GSH预处理亦能上调Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）。结论 紫草素可明显抑制肺癌A549细胞的增殖,其作用机制与诱导A549细胞产生大量的ROS,抑制抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL表达,进而激活caspase依赖的凋亡途径有关。     

大麻受体激动剂对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响

目的研究大麻受体激动剂(delta9-tetrahydrocannabinol,THC)对肺癌A549细胞凋亡和增殖的影响。方法 MTT法测定THC对A549细胞增殖的影响;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察细胞的形态学变化;Western blot法分析大麻受体CB1、CB2的蛋白表达;DNA梯度电泳检测A549细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡率变化。结果 THC预处理后,MTT检测表明THC对A549细胞增殖有明显抑制作用,随着药物浓度增大,抑制作用更加明显;苏木精-伊红染色、扫描电镜观察显示:肺癌A549细胞有典型的细胞凋亡形态;Western blot检测显示:A549细胞大麻受体CB1、CB2水平较正常气道上皮细胞株16HBE升高;DNA梯度电泳法及流式细胞仪检测显示:THC能抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,并具有剂量依赖性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肺癌细胞的增殖,并诱导肺癌细胞凋亡,此效应可能与大麻受体CB1、CB2作用有关。     

全反式维甲酸对A549细胞株增殖和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对A549肺腺癌细胞增殖和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响.方法:①取对数生长期的人肺腺癌细胞株A549细胞,消化后于96孔板上按1×10-5 mol/L,1×10-6 mol/L,1×10-7 mol/L 3组ATRA药物浓度组和空白对照组培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ATRA作用2 d,4 d,6 d对A549细胞增殖的影响.②用Hoechest33258荧光染色观察1×10-5 moL/LATRA培养24 h后A549细胞胞核形态变化.③利用免疫印迹法(Western blot)检测经1×10-7 mol/L,1×10-6 mol/L,1×10-5 mol/L ATRA作用12 h,24 h后A549细胞中Caspase-3蛋白表达的变化.结果:ATRA处理组与空白对照组相比细胞的增殖活性明显受到抑制(P＜0.05);经1×10-5 mol/L ATRA处理后的细胞呈典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光.ATRA处理组的Caspase-3蛋白表达与空白对照组相比明显增高.结论:ATRA可抑制人肺癌细胞株A549的增殖,并通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞的凋亡.     

LncRNA PTCSC3过表达诱导非小细胞肺癌A549凋亡和氧化损伤并抑制细胞增殖和迁移

目的:探究LncRNA PTCSC3过表达对非小细胞肺癌A549的影响。方法 :将A549细胞分为对照组、pcDNA组和pcDNA-lncRNA PTCSC3组,采用聚合酶链反应检测lnc PTCSC3、Ki67和p21mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测活性氧簇含量,克隆形成检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞侵袭,蛋白印迹法检测凋亡（caspase-3和caspase-9）和侵袭（E-cadherin和N-cadherin）相关蛋白的表达。结果:与pcDNA组相比,pcDNA-lncRNA PTCSC3组PTCSC3基因、细胞凋亡率、cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-9/caspase-9、p21 mRNA及E-cadherin蛋白水平均显著升高（t=14.758、12.188、9.905、7.320、13.975、7.443,均P<0.05）,活性氧簇含量、克隆形成率、Ki67 mRNA、单位面积侵袭细胞数目及N-cadherin蛋白水平均显著降低（t=10.276、9.615、20.444、6.576、14.992,均P<0.05）。结论:过表达lncRNA PTCSC3通过调控氧化应激和相关蛋白表达水平,抑制非小细胞肺癌A549的增殖和迁移并促进其凋亡。     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。     

全反式维甲酸通过内质网应激诱导N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V受阻的人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的初步探讨全反式维甲酸（all-trans-retinoic acid，ATRA）诱导N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V（N—acetylglucosaminyltransferase V，GnT—V）表达受阻的人肝癌SMMC-7721细胞（AsGnT—V／SMMC-7721）发生凋亡与细胞中内质网应激的关系。方法利用RT-PCR检测ATRA处理前后AsGnT-V／SMMC-7721细胞中内质网应激关键分子GRP78（glucose regulated protein 78）、XBP1（X box binding protein 1）等的变化。并用Western blot检测ATRA处理前后AsGnT—V／SMMC-7721细胞中内质网应激相关凋亡途径中的重要分子CHOP（C／EBP homologus protein）、caspase-9、caspase-12以及caspase-3的变化。结果GRP78和XBP1的变化表明经ATRA处理后AsGnT-V／SMMC-7721细胞的内质网应激加剧了，而与内质网应激相关的凋亡分子CHOP、caspase-9、caspase-12以及caspase-3都发生了激活。结论ATRA诱导AsGnT—V／SMMC-7721细胞发生的凋亡与内质网应激有关。     

Inhibition of survivin expression and mechanisms of reversing drug-resistance of human lung adenocarcinoma cells by siRNA

Background Survivin, a member of the inhibitor of apoptosis protein （IAP） family, overexpresses in tumor cells and not expresses in terminally differentiated adult tissues. This study aimed to investigate the effects of survivin-specific siRNA on cell proliferation, apoptosis and chemosensitivity to cisplatin in vitro and in vivo and explore the mechanisms about decreasing expression of survivin in reversing cancer cells resistance to chemotherapeutic drug.Methods Survivin-specific siRNA was transfected into A549/DDP cells. The expression of survivin and lung resistance-related protein （LRP） mRNA levels were determined by RT-PCR, chemosensitivity of A549/DDP （cisplatin）cells to cisplatin was determined by MTT assay, and apoptosis and cell cycle were determined by flow cytometry （FCM）.The protein expression levels of survivin, LRP, cyclin-D1, caspase-3 and bcl-2 were determined by Western blotting analyses. The effect of survivin siRNA inhibition on tumor growth was studied in athymic nude mice in vivo.Results Survivin-specific siRNA efficiently down-regulated survivin expression. The cell cycle was arrested at G2/M phase, and apoptosis was obviously found. Inhibition of survivin expression could make the IC50 and drug-resistant index of cisplatin decrease, and enhance the cancer cells sensitivity to cisplatin. After transfection by survivin-specific siRNA, expression of LRP and cyclin-D1 were downregulated, caspase-3 expression was upregulated, bcl-2 expression had no obvious change. The animal experiment confirmed knockdown of survivin could inhibit the tumor growth.Conclusions Survivin-specific siRNA can efficiently suppress the expression of survivin, increase apoptosis, inhibit cells proliferation and enhance the chemosensitivity to cisplatin in vitro and in vivo. Suppression of survivin expression helping to reverse drug-resistance may have relationship with downregulation of LRP and upregulation of caspase-3.Anti-tumor strategies based on the inhibition of survivin may be useful in targeting lung adenocarcinomas.     

肿瘤坏死因子-α对人肺癌A549细胞的放疗增敏作用

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在人肺癌A549细胞放射治疗中的增敏作用。方法单独γ射线辐照细胞或联合应用TNF-α处理细胞,通过MTT法检测人肺癌A549细胞存活生长曲线,采用流式细胞术分别检测细胞凋亡和细胞周期的变化,并利用Western blot法分析细胞中Caspase-3蛋白表达的变化。结果与单独γ射线作用相比,TNF-α和γ射线联合应用能明显抑制人肺癌A549细胞的生长,同时诱导和促进A549细胞的凋亡发生,调整细胞周期的变化,这一过程与细胞中Caspase-3蛋白表达的增加相关。结论 TNF-α可以增加人肺癌A549细胞的放疗敏感性,提高γ射线对人肺癌A549细胞的放射治疗效果。     

N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺对人肺腺癌A549细胞分化和骨桥蛋白表达的影响

目的 分析新合成的全反式维甲酸(ATRA)衍生物N-(3-三氟甲基苯基)维甲酰胺(NTFMP)对人肺腺癌细胞株A549体外增殖、分化及骨桥蛋白表达的影响.方法 以人肺腺癌细胞株A549为研究对象,分别给予不同浓度的ATRA及NTFMP进行干预,应用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法测定A549细胞的增殖情况;酶动力学法检测...