丁型肝炎病人肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA表达及关系

目的：探讨丁型肝炎病人肝组织中ＨＤＡｇ与ＨＢｓＡｇ／ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达及关系。方法：应用免疫组化双重染色和原位杂交,检测７９例丁型肝炎病人肝组织ＨＤＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达,以５２例乙型肝炎作对照。结果：丁型肝炎ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ检出率（８１％、７１％）较乙型肝炎（９４％、９２％）低（Ｐ〈０．０５或０．０１）。ＨＤＡｇ以肝细胞核表达为主,ＨＢｓＡｇ以肝细胞浆表达     

鸭乙型肝炎病毒在天然宿主中的特异性体液及细胞免疫应答

用灭活的鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）免疫健康成年鸭，观察鸭外周血淋巴细胞的增殖，同时用间接ＥＬＩＳＡ法检测免疫鸭血清中抗ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓ和抗ＤＨＢｃ。结果发现，在２次免疫后，４只鸭均产生低滴度的抗ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓ，抗ＤＨＢｃ仅在１只鸭中一过性地出现，４只鸭中３只于第三次免疫后出现对ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓＡｇ的淋巴细胞增殖反应，２只出现对ＤＨＢｃＡｇ的增殖反应。表明鸭对ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓＡｇ的免疫应答性校对ＤＨＢｃＡｇ强，动态观察细胞和体液免疫出现的时相，多数鸭先测及抗体，用抗ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓ被动免疫幼鸭可部分阻断ＤＨＢＶ的实验感染。     

树鼩感染丁型肝炎病毒的实验研究

作者以树为对象、建立丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）／乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）实验感染动物模型，为丁型肝炎发病机理和药物筛选提供研究基础。对人工饲养的２０只健康成年树　接种ＨＢＶＤＮＡ阳性血清后ＨＢｓＡｇ的转阳率为７５％（１５只）；分别以同时感染（１３只）和重叠感染（９只）两种方式接种ＨＢＶＤＮＡ和ＨＤＶＲＮＡ阳性血清后，各有８只和６只树　的血清乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、丁肝抗原（ＨＤＡｇ）和丁肝抗体（抗ＨＤ）相继转阳，部分血清或肝内检出ＨＤＶＲＮＡ，以ＨＤＶ／ＨＢＶ阳性树　血清在树　间进行传代感染，可见第二代４只中３只、第三代５只中４只树　的血清ＨＢｓＡｇ、ＨＤＡｇ和抗ＨＤＶ相继转阳，２只第三代感染树　血清中检出ＨＤＶＲＮＡ，肝内检出ＨＢｓＡｇ和ＨＤＡｇ阳性；连续观察１６～１９个月，经重叠感染成功的４只树　血清ＨＢｓＡｇ持续阳性，２只ＨＤＡｇ和抗ＨＤ交替出现，１只抗ＨＤ持续阳性，提示可发展成慢性ＨＤＶ感染；感染ＨＤＶ的树　血清ＡＴＬ升高，肝组织有类似肝炎样病理变化，与ＨＤＶ在黑猩猩体内感染结果类似，提示树　可作为ＨＤＶ感染的动物模型。     

乙型肝炎病毒免疫耐受动物模型的建立与验证

用鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）感染１ｄ龄幼鸭建立了乙型肝炎免疫耐受动物模型，随访２２周，鸭乙型肝炎病毒表面及前表面抗原（ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓＡｇ）及ＤＨＢＶ ＤＮＡ阳性不变。在持续性感染鸭血清中未能检出抗ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓ或抗鸭乙型肝炎核心（ＤＨＢｄ）抗体。用纯化的ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓ Ａｇ及ＤＨＢｃＡｇ与鸭外周血淋巴细胞作特异性淋巴细胞增殖试验，结果也未见阳性反应。以ＤＨＢｓ／ｐｒｅｓＡｇ及ＤＨＢｃ…     

临沂市肝癌患者HBV,HCV双重感染的研究

本文报道了临沂市４５例肝癌患者ＨＢＶ、ＨＣＶ双重感染的研究。３７／４５例ＨＢｓＡｇ阳性；８／４５例ＨＢｓＡｇ阴性；４５例抗ＨＢｃ阳性；１８／４５例ＨＢｃ－ＤＮＡ阳性，１０／４５抗－ＨＣＶ阳性；其中２例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性，ＨＣＶ基因型检测结果表明：２例ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性肝癌均为ＨＣＶⅡ型感染。本文研究表明：本市ＰＨＣ患者是以ＨＢＶ感染为主，其次为ＨＢＶ、ＨＣＶ双重感染。     

乙型肝炎患者血清丁型肝炎病毒标志的研究

目的 研究ＨＤＶ重叠ＨＢＶ感染对乙型肝炎患者病情和血清学指标的影响。方法 采用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＤＶ血清标志ＨＤＡｇ、抗ＨＤ、抗ＨＤＩｇＭ和ＨＢＶ血清标志ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗ＨＢｃ、抗ＨＢｃｌｇＭ,ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ。结果 ３１６例乙型病毒性肝炎中６０例重叠ＨＤＶ感染,重叠感染率为１８．９８％;ＣＨ和ＦＨ组ＨＤＶ感染率显著高于ＡＨ,ＦＨ组ＨＤＶ复制指标阳性率显著高于ＣＨ及ＡＨ     

克隆乙型肝炎病毒DNA在肝与肾细胞中复制与表达的研究

对比研究在外细胞培养系统中乙型肝炎病毒在肝,紧名的复制与表达。方法髟克隆ＨＢＶＤＮＡ分别转染ＨｅｐＧ２与２９３细胞系;ｐ１７７ｔｎ与ｐ３．８Ⅱ还转染了原代人胚肾细胞。培养后收集转染细胞培养上清液,用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢｓＡｇ与ＨＢｅＡｇ;提取转染细胞的ＤＮＡ与ＲＮＡ,进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ与Ｎｏｒｈｅｒｎ印迹杂交检测细胞内ＨＢＶＤＮＡ与ＨＢＶＲＮＡ。结果转染ＨｅｐＧ２细胞,ＨＢｓＡｇ与ＨＢｅＡｇ均有     

慢性肝病HBVDNA,HDVRNA原位杂交及HBsAg,HBcAg研究

以特异性和敏感性较高的地高辛配基探针原位分子及免疫组化技术，对云南６８例病毒性肝炎ＣＰＨ，ＣＡＨ，肝细胞癌及癌周组织进行ＨＢＶＤＮＡ，ＨＤＶＲＮＡ，ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ研究，结果表明：ＨＢｓＡｇ作为靶抗原诱发机体免疫反应，参与炎症过程；除浆膜型ＨＢｃＡｇ，弥漫型，膜型ＨＢｓＡｇ外，ＨＢＶＤＮＡ在肝组织中表达也与肝炎活动性有关；     

71例肝细胞癌患者肝炎病毒感染状况

目的 探讨乙型,丙型,丁型和戊型肝炎病毒（ＨＢＶ,ＨＣＶ,ＨＤＶ和ＨＥＶ）感染对肝细胞癌（肝癌）发生的意义。方法 采用放射免疫法,酶联免疫法和聚合酶链反应法对７１例宁波地区肝癌患者ＨＢＶ,ＨＣＶ,ＨＤＶ和ＨＥＶ血清标志及血浆ＨＢＶ,ＤＮＡ和ＨＣＶ,ＲＮＡ进行检测。结果 ＨＢｓＡｇ和／或ＨＢＶ,ＤＮＡ总阳性率为９１．５４％,ＨＤＶ阳性率为１２．６８％,ＨＥＶ阳性率为２．８２％,而抗－ＨＣＶ和／或ＨＣ     

重组融合蛋白Fab/IFN-αA体外抗HBV作用的实验研究

目的 在体外细胞水平上观察重组融合蛋白（Ｆａｂ／ＩＦＮ－αＡ）对乙型肝为病毒（ＨＢＶ）基因表达的抑制作用。方法 应用ＨＢＶ ＤＮＡ转染细胞系（ＨｅｐＧ２．２．１５细胞）作模型,通过固相放射免疫方法检测Ｆａｂ／ＩＮＦ－αＡ作用后细胞上清液的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ水平的变化,结合细胞存活率来评价其抗ＨＢＶ作用,并与α－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）进行比较。结果 经１２ｄ作用,Ｆａｂ／ＩＮＦ－αＡ在细胞存活率     

HBV体外感染人胎肝细胞的鉴定方法研究

目的通过HBV体外感染22周龄原代培养人胎肝细胞,比较常用检测指标的敏感性和特异性.方法利用HBV阳性血清感染体外培养的原代人胎肝细胞.应用ELISA法检测培养上清中的HBsAg和HBeAg,免疫组化法检测细胞核中的HBcAg,荧光定量PCR法检测上清和细胞中HBV DNA,巢式PCR法检测细胞中cccDNA.结果胎肝细胞核中的HBcAg于感染后第2天出现阳性,培养上清和细胞中HBVDNA定量自第4天起检出,上清中HBsAg和HBeAg于第5～6天出现阳性;细胞中HBV cccDNA自第8～9天出现阳性.结论HBV在原代培养人22周龄的胎肝细胞中能够稳定复制和表达,各种检测指标的灵敏性和特异性不一,免疫组化法检测细胞核中的HBcAg敏感性好,特异性可.     

原代培养人肝细胞体外乙型肝炎病毒感染和乙型肝炎病毒表面抗原黏附模型初探

目的研究建立人肝细胞体外乙型肝炎病毒（HBV）感染模型和乙型肝炎表面抗原（HBsAg）黏附模型，为后期研究小分子抗体Fab的作用打下基础。方法体外原代培养人肝细胞，对人原代肝细胞进行HBsAg黏附实验及HBV感染实验。采用正常人胎肝细胞系（L-02）及鼠原代肝细胞进行实验对照。倒置相差显微镜下观察细胞形态，生化法检测其白蛋白分泌功能。免疫组化法检测HBsAg黏附情况和HBV感染肝细胞内HBsAg的表达。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测肝细胞感染HBV后HBsAg的持续表达。PCR检测肝细胞内HBV复制中间体-闭合环状双链DNA（cccDNA）。结果人原代肝细胞体外培养达2周以上。HBsAg黏附实验检测到HBsAg可黏附于人原代肝细胞、L-02、鼠原代肝细胞胞膜。HBV体外仅感染人原代肝细胞，从第2天起即可检测到细胞培养上清中存在HBsAg，并持续到观察结束第16天，免疫组化检测人原代肝细胞内HBsAg呈阳性；PCR检测到人原代肝细胞内存在HBV—cccDNA，而L—02及鼠原代肝细胞实验检测结果均为阴性。结论人原代肝细胞体外分离培养成功，HBsAg黏附和HBV感染模型初步建立于人原代肝细胞。     

我国不同地区各型肝病肝组织中HDV感染状态的研究

应用直接酶标法对来自全国17个地区的2346份肝组织标本进行了肝内HDAg的检测,1764份HBsAg阳性标本中有167份检出HDAg,检出率为9.47％。各大地区HDAg检出率无显著性差异。肝内HDAg的检出率与病理类型有关,慢性肝病和重症肝炎中HDAg检出率较高。提示:HDV感染与疾病的活动性及慢性化有关。对HDV与HBV复制关系的研究表明:HDV可以抑制HBV的复制,但两者也可同时复制,其机理尚不清楚。     

丁型肝炎患者肝脏的病理学变化

采用 ELISA 法检测了68例乙型肝炎病人血清中的 HBsAg,抗-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc,及 HDAg,抗-HD 和抗-HDIgM。结果发现,此受检人群的丁型肝炎病毒(HDV)感染阳性率为17.65%(12/68),HDV 与 HBV 的重叠感染部分抑制了 HBV 的复制。对其中的7例患者进行了经皮肝脏穿刺术,其肝脏的病理学变化为慢性活动性肝炎的表现,大多数患者并发肝硬化。此组织学的表现与血液中的 HBV 的复制指标不相一致。这表明,HDV 的感染影响了乙型肝炎患者的病理进程。     

A study on hepatitis D virus infection in liver tissues of patients with hepatitis B in China

Summary 2346 liver samples from 17 areas in China were investigated for intrahepatic hepatitis D antigen (HDAg) by direct enzyme-labelled technique. HDAg was detected in 167 out of 1764 samples of HBsAg positive individuals with the detection rate of 9.47%. Hepatitis D virus (HDV) infection existed in all the examined areas without any significant difference regarding HDAg detection rate. A relationship of intrahepatic HDAg to the pathologic type of the liver disease was observed. The HDAg detection rate in chronic liver diseases and severe hepatitis was higher than in other liver diseases. It suggested that HDV infection was associated with the progression and chronicity of the liver disease. Studies on the relationship between HDV infection and HBV replication showed that HBV replication might be suppressed by HDV infection. Both HDV and HBV, however, could replicate in the same hepatocyte simultaneously.     

Hepatitis D virus infection in liver tissues of patients with hepatitis B in China.

2,346 liver samples from 17 cities of China for intrahepatic hepatitis D antigen (HDAg) were studied by direct enzyme-labelled technique. HDAg was detected in 167 out of 1,764 samples of HBsAg positive individuals making a detection rate of 9.47%. Hepatitis D virus (HDV) infection existed in all the examined districts with no significant difference in the HDAg detection rate. It was found that the intrahepatic HDAg detection rate was related to the pathologic type of the liver disease. The HDAg detection rate in chronic liver diseases and severe hepatitis was higher than in other liver diseases. It suggests that HDV infection is associated with the progression and chronicity of the liver disease. Studies on the relationship between HDV infection and HBV replication showed that HBV replication might be suppressed by HDV infection. Both HDV and HBV, however, could replicate in the same hepatocyte simultaneously.

     

Fas在HDV致病机制中的作用

目的：通过研究丁型肝炎病人肝组织Ｆａｓ和ＨＤＡｇ表达及关系,了解Ｆａｓ与ＨＤＶ致病的相关性。方法：应用免疫组化单、双标记技术,检测４８例丁型肝炎病人肝组织Ｆａｓ、ＨＤＡｇ表达,以５４例乙型肝炎病人肝组织Ｆａｓ表达作对照。结果：Ｆａｓ以肝细胞浆表达为主,ＨＤＡｇ以肝细胞核表达为主,二抗原达及分布呈一致性。各临床类型肝炎中Ｆａｓ和ＨＤＡｇ表达有统计学判别意义,两种抗原的分析的表达强度与肝组织炎症活动和     

乙型肝炎病毒体外感染人绒毛膜癌JEG3细胞的实验研究

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人绒毛膜癌滋养层细胞(JEG3)模型,探讨HBV宫内感染机制。方法应用HBV阳性且高载量的血清,感染JEG3细胞。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测感染后细胞上清液和细胞内的HBV载量;应用ELISA方法检测感染后不同时间、不同代次上清液的HBsAg、HBeAg浓度;应用SP免疫组化检测感染细胞内HBsAg、HBeAg的表达。结果感染初代的JEG3细胞,随着时间增加病毒载量亦增加。传代后细胞及上清中的HBV载量随传代次数增加逐渐降低,5代后检测均为阴性;感染初代上清液HBsAg含量随时间增加,120h含量最高。传代细胞的上清液HBsAg检测1～4代为阳性,但浓度逐渐降低,5代后均为阴性。上清液的HBeAg检测,各时间点、各代均为阴性;1、2、3、4代细胞HBsAg、HBcAg染色可见阳性细胞。结论HBV可以在体外感染滋养层细胞,且能在传代细胞中有持续的表达。感染过程中参与调控的相关细胞因子及HBV复制的持续与否有待进一步探讨。     

重组腺病毒介导的1.2拷贝HBV DNA在3种肝细胞中的表达

目的 利用所构建的具复制能力的HBV重组腺病毒感染体外培养肝细胞,观察HBV的表达情况,从而初步了解该重组HBV腺病毒的生物学特性.方法 以25 pfu/细胞的重组腺病毒感染3种肝源性细胞株:人肝癌细胞株HepG2、人正常肝细胞株L02和禽肝细胞株LMH.感染3 d后以RT-PCR检测3种感染肝细胞中的HBV mRNA;HBV荧光定量PCR检测培养上清中HBV DNA;ELISA检测培养上清中HBsAg和HBeAg.结果 3种被感染肝细胞均被检测到HBV特异的mRNA;培养上清中HBV DNA、HBsAg和HBeAg的表达量随时间而增加.结论 重组腺病毒可以介导HBV在该3种不同来源的肝细胞中建立HBV的感染状态.