羌活水提物对迟发型变态反应及炎症反应的影响及其机制

目的：探讨羌活水提物对迟发型变态反应及炎症反应的影响及其机理。方法：考察羌活水提物对2，4，6－三硝基氯苯（PC1）致迟发型变态反应（PC1－DTH）机制诱导的肝损伤、二甲苯诱导的耳肿胀及酵母多糖诱导的腹腔炎症等的影响；考虑羌活水提物对人Jurkat T淋巴瘤细胞分泌基质金属蛋白酶及迁移功能的影响。结果：羌活水提物诱导相和效应相给药均显著地抑制了PC1－DTH诱导的肝损伤。对二甲苯诱导的耳肿胀无影响，但可显著抑制酵母多糖诱导腹腔白细胞游出。羌活水提物对胶原诱导的Jurkat细胞分泌基质金属蛋白酶及迁移功能亦有显著的抑制作用。结论：羌活水提物抑制迟发型变态反应及炎症反应的作用可能与下调基质金属蛋白酶从而抑制白细胞的迁移功能有关。     

蒸馏白酒对二乙基亚硝胺引发小鼠肝细胞超微结构及金属硫蛋白表达的影响

目的：了解长期、适量饮用蒸馏白酒对二乙基亚硝胺（ DEN）引发小鼠肝细胞超微结构的影响及金属硫蛋白家族（MTs）表达的变化,探讨该酒对肝细胞癌发生的影响机制。方法125只雄性C57BL／6J小鼠,随机分为正常对照组、蒸馏白酒组、乙醇组、蒸馏白酒＋DEN组、乙醇＋DEN组及DEN组。分别于实验13、35周末处死小鼠,收集肝组织样本进行超微结构观察;提取肝组织总RNA,运用Super－Array实时PCR芯片检测金属硫蛋白1（MT1）和金属硫蛋白2（MT2）基因表达水平;运用原子吸收光谱石墨法检测肝组织样本中金属硫蛋白（MT）的含量。结果35周后,乙醇＋DEN组小鼠肝细胞结构及细胞器发生显著改变,而蒸馏白酒＋DEN组少见。 PCR芯片检测发现,无论13周末还是35周末,蒸馏白酒＋DEN组具有比正常对照组和乙醇＋DEN组显著增加的MT1转录水平（ P＜0.01）,其MT1的转录水平分别是正常对照组的14倍、148倍,而乙醇＋DEN组MT1转录水平分别是正常对照组的3倍、5倍（ P＜0.05）;35周末时,蒸馏白酒＋DEN组、乙醇＋DEN组分别能够比正常对照组31倍、4倍地增加MT2的转录水平。 MT含量检测结果也显示蒸馏白酒＋DEN组具有比乙醇组、乙醇＋DEN组及DEN组显著高的MT含量（ P＜0.05）。结论适量饮用蒸馏白酒与单纯的乙醇不同,不会与DEN协同引起肝细胞的明显损伤,其影响机制可能与MT转录表达的显著激活有关。     

Nrf2基因敲除对小鼠蛛网膜下腔出血后小胶质细胞／巨噬细胞活化的影响

目的：脑内小胶质细胞／巨噬细胞（ microglia／macrophage, M／M）在蛛网膜下腔出血（ subarachnoid hemor-rhage, SAH）脑组织损伤和修复中具有重要作用。文中研究小鼠 SAH后 M／M活化及Nrf2基因敲除对M／M活化的影响。方法野生型ICR小鼠70只,来源于ICR的Nrf2基因敲除小鼠35只,采用小鼠视交叉注射自体血建立SAH模型。假手术组行同样抽血、钻孔及置针,但不行注血。实验分为4组,野生型假手术组、野生型SAH组、基因敲除假手术组、基因敲除SAH组。 SAH术后第1、3、5天取标本,用Western blot法和免疫组化法检测M／M特异性蛋白Iba1的表达;同时Western blot检测SAH后第3天Iba1蛋白表达,免疫荧光染色检测SAH后第3天CD16／32＋Iba1＋细胞数量。结果 Western blot检测结果显示野生型假手术组、野生型SAH 组第1、3、5天 Iba1蛋白表达灰度值分别为0．491±0．039、0．657±0．069、0．930±0．046和0．926±0．046,而 Iba1蛋白免疫组织化学染色平均光密度值为0．412±0．122、0．625±0．135、0．963±0．213和0．978±0．224,野生型SAH组第1、3、5天Iba1蛋白表达均较野生型假手术组明显增加（P＜0．05）,但野生型SAH组第3天与第5天Iba1表达差异无统计学意义（P＞0．05）;Western blot结果示野生型假手术组、基因敲除假手术组、野生型 SAH 组、基因敲除 SAH 组 SAH 后第3天 Iba1蛋白表达灰度值分别为1．157±0．080、1．162±0．073、1．580±0．171和1．913±0．220,CD16／32＋Iba1＋细胞数量分别为0、0、30．200±6．300和42．800±6．260（个／HP）, SAH后第3天基因敲除SAH组Iba1蛋白表达较野生型SAH组增加（P＜0．05）,且基因敲除SAH组CD16／32＋Iba1＋细胞数较野生型SAH组明显增多（P＜0．05）。结论小鼠SAH后M／M活化增加,Nrf2基因敲除促进了SAH后M／M的活化和M1极化。     

苦参碱对鼠实验性皮炎的抗炎止痒作用

目的探讨口服苦参碱及外用苦参碱霜对鼠实验性皮炎的抗炎止痒作用。方法采用二甲苯致小鼠耳肿胀，醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高，角叉菜胶致大鼠足肿胀，棉球引起小鼠肉芽组织增生，2，4-二硝基氯苯致小鼠变应性接触性皮炎，4-氨基吡啶（4-AP）诱发小鼠舔体反应等动物模型。结果口服苦参碱对二甲苯所致的小鼠耳肿胀及角叉菜胶所致的大鼠足肿胀均有明显的抑制作用，也能对抗由醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增高，但对由棉球引起的小鼠肉芽组织增生无明显作用；苦参碱霜剂能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀，明显减少4-AP诱发的小鼠舔体反应次数，明显抑制2，4-二硝基氯苯所致的小鼠变应性接触性皮炎。结论苦参碱具有止痒及抗急性炎症的作用。     

番茄红素对环磷酰胺治疗小鼠肉瘤H22的影响

目的：观察番茄红素（Ly）对环磷酰胺（CY）治疗小鼠肉瘤H22的影响。方法：建立小鼠肉瘤H22移植实体型及腹水型模型后,将昆明种小鼠40只随机分为对照组、CY组、Ly组和Ly＋CY组,每组10只。观察Ly对CY治疗小鼠肉瘤H22抑瘤率及生命延长率的影响;同时检测各组小鼠的骨髓细胞数、碳粒廓清吞噬指数、迟发型变态反应耳肿胀度、血清凝集素抗体积数和IL-2及IFN-γ水平的变化。结果：Ly＋CY组腹水型肉瘤小鼠的生命延长率增高,实体型肉瘤的抑瘤率升高,与其他各组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;与CY组比较,Ly＋CY组小鼠骨髓细胞数、碳粒廓清吞噬指数、迟发型变态反应耳肿胀、血清凝集素抗体积数、IL-2及IFN-γ水平均升高（P〈0.05或0.01）。结论：Ly对CY治疗小鼠肉瘤H22有增强疗效的作用,可以降低CY对机体的毒性。     

ASIC1基因敲除对佐剂性关节炎小鼠关节软骨损伤的影响

目的 利用ASIC1基因敲除小鼠构建佐剂性关节炎(AA)模型，探讨敲除ASIC1对关节炎发病程度及关节软骨损伤的影响。方法 将野生型小鼠和基因敲除小鼠分别分为：正常组、模型组。通过观察足爪炎症情况进行关节炎评分，并测定继发侧足爪肿胀度；通过HE染色、免疫组化、TUNEL法、ELISA法检测关节软骨损伤及关节炎炎症情况。结果 基因敲除小鼠模型组的关节炎评分及足爪肿胀度低于野生型小鼠模型组；HE结果显示敲除ASIC1可减轻AA小鼠关节软骨的破坏情况；免疫组化结果显示敲除ASIC1可提高AA小鼠关节软骨中Ⅱ型胶原的表达；TUNEL法结果显示基因敲除小鼠模型组中软骨细胞的凋亡水平低于野生型小鼠模型组；ELISA法结果表明，敲除ASIC1可下调AA小鼠血清中高表达的促炎细胞因子IL-1β、TNF-α的水平。结论 敲除ASIC1可降低佐剂性关节炎发病程度及关节软骨的破坏水平。     

左旋门冬氨酸钙对小鼠迟发型变态反应和大鼠皮肤炎症性渗出的影响

运用小鼠迟发型变态反应（ＤＴＨ）模型和组织胺（Ｈ）、５－羟色胺（５－ＨＴ）诱发大鼠皮肤炎症性渗出的方法，观察了左旋门冬氨酸钙（Ｌ－Ｃａ－Ａｓｐ）对小鼠耳肿胀和大鼠皮肤炎症反应的影响，并与葡萄糖酸钙（Ｃａ－Ｇｌｕ）作比较。结果表明，Ｌ－Ｃａ－Ａｓｐｉｐ１６５ｍｇ·ｋｇ－１和３３０ｍｇ·ｋｇ－１对小鼠ＤＴＨ有明显的抑制作用；Ｌ－Ｃａ－Ａｓｐｉｐ２５０ｍｇ·ｋｇ－１和５００ｍｇ·ｋｇ－１对Ｈ、５－ＨＴ分别诱导的大鼠皮肤炎症性渗出亦有较明显的抑制作用，其抑制效应不亚于Ｃａ－Ｇｌｕ，提示Ｌ－Ｃａ－Ａｓｐ对动物过敏和（或）炎症反应具有一定的抑制作用。     

丝瓜藤醇提取物抗炎和抗过敏作用的研究

目的 观察丝瓜藤醇提物（Luf-ext)对过敏反应及急性炎症的影响,为其临床治疗过敏性鼻炎提供药理学依据。方法 采用大鼠同种被动皮肤过敏反应（PCA）和小鼠耳异种PCA作为1型变态反应模型,小鼠Arthus反应和绵羊红细胞所致迟发型变态反应（SRBC－DTH）分别作为Ⅲ,Ⅳ变态反应模型,并应用磷酸组胺及二甲苯诱导急性炎症模型。结果 Luf-ext 100,300mg/kg连续ig给药3d,显著抑制大鼠PCA;300,500mg/kg连续ig给药3d,明显抑制小鼠耳异种PCA;同时Luf-ext 100mg/kg对小鼠Arthus反应也呈显著抑制作用;100,300,500mg/kg可明显抑制SRBC－DTH,并对抗组胺引起的小鼠皮肤毛细血管通透性的升高及二甲苯所致的耳廓肿胀。结论 Luf-ext具有明显抗炎和抗过敏作用。     

CyclinD(-/-)/Patched(+/-)双基因敲除鼠的构建

目的构建CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠以验证Hh传导系统与Rb系统的关系。方法应用已有的杂合子CycD基因敲除鼠CycD（＋／-）与杂合子Ptc基因敲除鼠Ptc（＋／-）进行交配繁殖,得到双基因杂合子敲除鼠CycD（＋／-）／Ptc（＋／-）,再利用该双基因杂合子敲除鼠进行二次交配繁殖,得到实验组CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠。结果实验得到了双基因敲除鼠CycD（-／-）／Ptc（＋／-）、双基因杂合子基因敲除鼠CycD（＋／-）／Ptc（＋／-）、CycD单基因敲除鼠CycD（-／-）／Ptc（＋／＋）。结论通过本实验方法得到CycD（-／-）／Ptc（＋／-）双基因敲除鼠,可用于进一步揭示Ptc基因与CycD基因相互影响调控的作用及Hedgehog与Rb信号传导通路在哺乳动物中的相关性。     

三叶青对迟发型变态反应的影响

目的观察三叶青对迟发型变态反应的影响。方法以2,4,6-三硝基氯苯诱导小鼠接触性皮炎及二甲苯诱导耳肿胀,测量诱导相和效应相小鼠的耳廓厚度;以绵羊红细胞诱导小鼠足肿胀,测量诱导相和效应相小鼠足肿厚度。结果三叶青可抑制2,4,6-三硝基氯苯及绵羊红细胞诱导相肿胀反应,对二甲苯所致的耳廓肿胀无抑制作用。结论三叶青主要作用于T淋巴细胞的活化、增殖、分化及效应细胞形成的过程等,而对抗原特异性T细胞的效应过程及其以后的炎症过程影响较小,      

苯并(a)芘对金属硫蛋白基因敲除小鼠免疫功能的抑制

目的:观察苯并(a)芘[benzo(a)pyrene, B(a)P] 对金属硫蛋白(metallothionei n, MT)基因敲除的转基因小鼠[MT(-/-)]免疫功能的影响 .方法:选用MT(-/-)小鼠和野生型小鼠[MT(+/+)]进行对照,50 mg·kg -1体重的B(a)P 一次腹腔注射染毒后,检测动物对绵羊红细胞(sheep red blood ce lls, SRBC)的体液和细胞免疫功能变化.体液免疫指标为抗体形成细胞(plaque formation cells, PFC)数量.细胞免疫功能指标为迟发型变态反应(delayed-type hypersensitivi ty, DTH)的动物足跖厚度变化 .结果:MT(-/-)小鼠的脾脏重量在S RBC刺激后有明显增加,但在B(a)P染毒后被抑制.B(a)P染毒使MT(-/-)小鼠脾脏的的PFC 数明显减少,PFC抑制率达40.4%;而MT(+/+)小鼠没有观察到上述改变.B(a)P染毒对MT (-/-) 小鼠和MT(+/+)小鼠的细胞免疫反应的DTH未见明显影响.MT(-/-)小鼠和MT(+/+)小鼠的胸腺重量在B(a)P 染毒后都有减轻.结论:MT(-/-)小鼠的体液免疫功能更易被B(a)P抑制.提示MT具有保护小鼠不受B(a)P体液免疫损伤的功能.     

低氧诱导因子-1α在骨形成过程中对成骨细胞功能的调控

目的探讨低氧诱导因子（HIF）-1α对成骨细胞功能的调控及其在骨形成过程中的作用。方法应用Cre-Loxp重组酶技术,在体内外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因及其上游调控VHL基因,在体外将成骨细胞在2％氧浓度培养48h后检测血管内皮生长因子（VEGF）、核结合因子a1（RunX2）、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）的表达,在体内取3个月龄小鼠股骨远端骨组织,应用组织切片和Micro-CT方法检测骨组织形态计量学指标和骨矿密度（BMD）。结果体外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因后,由于HIF-1α的表达下降导致VEGF、RunX2、ALP、OC的表达水平降低,而敲除VHL基因后由于HIF-1α的表达上调导致上述基因的表达升高。体内条件性敲除HIF-1α基因小鼠骨组织形态计量学指标和BMD均劣于野生型小鼠,而体内条件性敲除VHL基因小鼠以上指标均优于野生型小鼠。结论在生理和病理条件下,由于低氧环境的存在,HIF-1α能够通过促进成骨细胞的功能而调控骨形成过程。     

盐酸奥芬米洛对二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应的影响

[目的]观察盐酸奥芬米洛对小鼠迟发型变态反应的影响。[方法]取体重为18~22g的ICR小鼠120只,雌雄各半,按体重随机分6组,即空白对照组、模型对照组、盐酸奥芬米洛高(10·0mg/kg)、中(5·0mg/kg)、低(2·5mg/kg)剂量组和阳性对照(CsA15mg/kg)组,每组20只,各给药组分别给予相应浓度的相应药物,空白与模型对照组给予蒸馏水10ml/kg,每日1次,连续给药1周后,除空白对照组外,每鼠腹部用1%DNFB溶液均匀涂抹进行致敏,致敏后第5天,将1%DNFB溶液均匀涂抹于小鼠右耳进行攻击,空白对照组同样涂耳但未致敏,攻击后24h,测定右耳的肿胀度和小鼠的脾指数和胸腺指数。[结果]不同剂量的盐酸奥芬米洛能不同程度地降低DNFB致敏ICR小鼠耳廓肿胀度、降低脾脏系数和胸腺指数,[结论]盐酸奥芬米洛可抑制DNFB诱导小鼠迟发型变态反应(DTH),具有抑制小鼠的特异性细胞免疫功能的作用。     

Temporal effect of local hyperthermia on murine contact hypersensitivity

Background The sensitization and elicitation phases are involved in the immunopathogenesis of contact hypersensitivity (CHS).Langerhans cells (LCs) are believed to play pivotal roles in the sensitization stage of CHS.Local hyperthermia on skin induces the migration as well as maturation of epidermal LCs.Although fever-range whole body hyperthermia and local hyperthermia at 43℃ prior to sensitization were reported to suppress CHS,the effects of different temperatures and the timing sequence of local hyperthermia on CHS have not been tackled.Methods Local hyperthermia was applied to murine dorsal skin 3 days prior to,concurrent with,or 2 days post sensitization with fluorescein isothiocyanate (FITC) in BALB/c mice.Local hyperthermia temperatures at 37℃,39℃,41℃ and 43℃ were applied to mouse dorsal skin and the severity of CHS was calculated by measuring the swelling response of the challenged ears.Results Local hyperthermia at 39℃,41℃ and 43℃ prior to sensitization reduced the severity of CHS,as compared with that at 37℃.The suppression of CHS was temperature dependant in that higher temperature had a stronger effect.On the contrary,the hyperthermia treatments,either concurrent with or post-sensitization,resulted in an enhanced temperature-dependant ear swelling response.Conclusions The severity of murine CHS could be influenced by local hyperthermia at the sensitization stage in a temperature dependant manner.The temporal effect of local hyperthermia suggested a novel factor in interpreting the severity of allergic contact dermatitis.     

一种免疫抑制药物体外筛选模型的建立及评价

【目的】建立-种可靠的体外筛选模型评价药物的免疫抑制活性。【方法】在以二硝基氟苯（2,4-dinitrofluorobenzene,DNFB）诱导小鼠耳廓接触性超敏反应（contacthypersensitivity,CHS）模型的基础上,体外培养模型小鼠脾脏T细胞,首先分析细胞增殖活性,进而采用RT—PCR分析核因子IFN-γ、IL-4、T—bet、GATA-3的mRNA表达,最后通过三种临床上常用的免疫抑制药物进行验证。【结果】模型小鼠T淋巴细胞在体外能维持-定时程的高反应性,IFN-γ／IL-4与T—bet／GATA-3比值均明显增加,T细胞向Th1方向分化偏移,同时,环孢素、地塞米松、霉酚酸酯均能显著抑制T细胞的体外增殖。【结论】本研究初步建立了-种简单的可用于筛选免疫制剂的体外细胞模型。     

复方黄柏液促进伤口愈合的实验研究

目的观察复方黄柏液对兔混合感染伤口的局部治疗作用及对小鼠非特异性免疫功能的影响。方法采用兔背部伤口疮疡模型 ,观察用药后伤口红、肿、分泌物及坏死组织情况 ;利用二甲苯所致小鼠耳廓肿胀实验和碳粒廓清实验 ,探讨药物的抗炎作用和对免疫机能的影响。结果复方黄柏液 2 0 %和 10 %分别于给药后 4d和7d ,感染伤口得分显著低于对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,红肿面积亦显著缩小 (P <0 .0 1) ;复方黄柏液皮下注射3g/(kg·d) ,对二甲苯诱发的小鼠耳廓炎症有明显的抑制作用 (P <0 .0 5 ) ;复方黄柏液皮下注射 3g/(kg·d) ,连续10d ,可显著提高吞噬细胞的吞噬功能 (P <0 .0 5 )。结论复方黄柏液对兔混合感染伤口有促进愈合的作用 ,并可增强小鼠的非特异性免疫功能 ,具有抗炎作用     

2-(E)-取代苯亚甲基-5-二甲氨甲基环戊酮抗炎作用及胃肠道刺激性观察

目的:观察2-(E)-取代苯亚甲基-5-二甲氨甲基环戊酮(MB4)的抗炎镇痛及对胃黏膜的刺激作用.方法:对小鼠分别局部涂搽二甲苯致鼠耳肿胀,腹腔注射醋酸致扭体反应,灌胃给药致胃黏膜的刺激作用.结果:MB4 20 mg/kg、40 mg/kg对鼠耳肿胀度均有抑制作用(P＜0.05和P＜0.01),明显提高小鼠痛阈(P＜0.01),但未见明显的胃刺激作用.结论:MB4具有较好的抗炎镇痛作用,且对胃黏膜刺激性小.     

柴葛口服液抗炎药效学研究

目的：研究柴葛口服液的抗炎效果。方法：用角叉莱胶和二甲苯诱发小鼠耳和足炎性水肿，观察柴葛口服液的抗炎效果。结果：柴葛口服液能明显抑制小鼠耳和足部的炎症，ED50为0．41ml／kg。结论：柴葛口服液具有抗炎药理作用。     

儿茶提取物对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

用流感病毒鼠肺适应株A/FM /1 /47(H1N1 )感染的小鼠肺炎为模型 ,研究儿茶提取物对流感病毒感染机体免疫功能的影响 ,包括对迟发型超敏反应 (DTH)及中和抗体产生的影响。结果显示 :儿茶提取物可显著增强 2 ,4 二硝基氟苯 (DNFB)诱发的小鼠DTH反应 ,即儿茶素 +病毒感染组和儿茶素对照组小鼠的耳肿胀度和脾指数都明显增加 ,与正常对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;提示 :儿茶提取物具有增强小鼠T细胞免疫功能的作用。儿茶提取物实验组的中和抗体平均效价为 1∶2 0 3 ,与病毒感染对照组 (平均效价为 1∶1 0 4.2 )相比具有非常显著性差异 (P <0 .0 1 ) ;说明儿茶提取物可增强流感病毒感染小鼠中和抗体的水平 ,提示其对小鼠体液免疫功能亦有增强作用。研究表明 :儿茶提取物具有增强病毒感染机体的细胞免疫和体液免疫功能的作用。     

广谱半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂抗小鼠变应性接触性皮炎的研究

目的 研究广谱半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)抑制剂Z-VAD-FMK对小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用.方法 以Franz垂直扩散池进行Z-VAD-FMK的体外透皮实验,高效液相色谱方法 检测其透皮量.建立ACD小鼠模型;实验组分别以0.1、0.5、2.5及5 mmol/L 4种浓度的Z-VAD-FMK溶液外涂于ACD模型小鼠一侧耳背部;阴性对照组以磷酸盐缓冲液(PBS)或含二甲基亚砜(DMSO)的PBS外涂,每组6只小鼠.以耳肿度、双侧耳重量之差及组织切片中双侧耳双面距离之差为指标,观察Z-VAD-FMK对小鼠ACD的抑制作用;以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组小鼠耳皮损中自细胞介素2(IL-2)及γ-干扰素(INF-γ)的含量.结果 在供给池为5 mmol/L Z-VAD-FMK 200μl、接收池容积为4 ml、有效扩散面积为1 cm2的条件下,Z-VAD-FMK6、12及24 h的透皮率分别为2.15%、9.62%及12.85%.2.5 mmol/L Z-VAD-FMK组小鼠耳肿度为(12.5±1.4)×10-2mm,重量差为(3.2±0.3)mg,镜下距离差为(11.8±1.3)×10-2mm,均低于阴性对照组[(19.1±2.0)×10-2mm,(4.3±0.4)mg,(16.8±1.7)×10-2mm,q=4.76,4.34,4.87,均P<0.05].2.5mmol/L Z-VAD-FMK组小鼠耳皮损中IL-2及INF-γ的表达均低于阴性对照组[IL-2:(148±10)pg/mlvs(205±18)pg/ml,t=2.205,P<0.05;INF-γ:(650±45)pg/ml vs(1030±58)pg/ml,t=2.375,P<0.05].结论 广谱caspase抑制剂Z-VAD-FMK能够透过皮肤,并抑制T细胞的活化与增殖,抑制ACD.