禽冠状病毒的分离鉴定及膜蛋白基因的克隆

目的分离鉴定禽冠状病毒,对该病毒的M基因序列进行分析。方法采用鸡胚传代分离培养病毒,用血凝特性、鸡胚半数感染量(EID50)、鸡胚矮小化、动物回归试验等方法鉴定病毒,用RT-PCR克隆病毒的膜蛋白基因并对其测序。结果分离病毒的生物学特性符合禽冠状病毒,膜蛋白基因与标准毒株膜蛋白基因为核苷酸序列同源性为91.9%,氨基酸的同源性为92.5%。结论本研究分离到1株禽冠状病毒,命名为IBV-HN05,该毒株可能是疫苗株的变异株。     

流感病毒两种鸡胚接种方法的比较

流感病毒属正黏病毒在鸡胚羊膜腔及尿囊腔中均生长良好,故常应用羊膜腔接种.鸡胚分离病毒是一种经典的病毒分离方法[1,2],但传统壳外接种鸡胚的方法成功率低,常常影响实验教学.2003年以来采用打开鸡胚气室卵壳接种流感病毒的方法,接种成功率高,满足了教学的需要,有利于学生观察操作,收到良好效果.     

3种流感病毒检测方法的比较

目的对病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法3种检测流感病毒的方法和结果进行比较研究,筛选快速准确的检测方法,为流感监测与防控工作提供及时可靠的病原学依据。方法同时采用病毒分离培养法、实时荧光PCR法和鸡胚培养法对2014年10月~2015年3月牡丹江市流感监测哨点医院采集的流感样病例咽拭子样本进行检测,比较检测结果。结果实时荧光PCR法的流感病毒核酸检测阳性率为15.52%,其中169份为季节性H3N2流感病毒,73份为B型Yamagata株;病毒分离培养法的阳性率为6.29%,分离出63株季节性H3N2流感病毒,35株B型Yamagata株;鸡胚分离培养法检出率为0.64%。3种方法中,实时荧光PCR法的阳性率最高,病毒分离培养法次之,鸡胚分离培养法阳性率最低。结论实时荧光PCR法比病毒分离培养法和鸡胚培养法灵敏快捷、特异性强、敏感度高,适用于流感病毒的快速检测。     

杭M_(13)株麻疹病毒对鸡胚細胞的适应及其減毒活疫苗的試制

Enders与Katz等首先以人胚腎細胞分离出麻疹病毒,他们最初将分离的5株病毒(包括Ed株)經人胚腎細胞传2～23代时試图适应于鸡胚及鸡胚細胞,但未获成功,以后将Ed株再經人羊膜細胞28代、鸡胚6代始成功地适应于鸡胚细胞,这为麻疹疫苗的研究奠定了良好基础。1958年Smorodintsev等分离的列_4株及1950年上海生物制品研究所分离的沪191株亦大致是遵循上述一系列传代过程并适应于鸡胚細胞而制备活疫苗     

鸡胚致死孤儿病毒（CELO）和鸡减蛋综合症病毒（EDS） 多重PCR检测方法的建立及初步应用

【摘要】目的 建立鸡胚致死孤儿病毒（CELO）和鸡减蛋综合症病毒（EDS）的多重PCR检测方法并进行初步应用。方法 参照GenBank提供的基因序列,设计了2对特异性引物分别扩增CELO长纤突蛋白和EDS六邻体蛋白的基因序列,建立检测CELO和EDS的多重PCR方法,考察该方法的特异性和敏感性,并使用该方法检测流感疫苗主种子批病毒是否存在外源性禽腺病毒的污染。结果 该多重PCR方法成功扩增得到了两条特异性目的条带,并经测序验证。该方法特异性好,灵敏度显示核酸最低检测量可达10-4ug/ml。使用该方法检测12批次流感疫苗主种子批病毒,外源性禽腺病毒的检测结果均为阴性。结论 成功建立鸡胚致死孤儿病毒和鸡减蛋综合症病毒的多重PCR检测方法,灵敏度高,特异性好。在流感疫苗主种子批病毒的外源性禽腺病毒的检测中具有很高的使用价值和应用前景。     

从小鼠肺中分离仙台病毒和检出仙台病毒抗原的研究

我们用鸡胚，鸡胚细胞和猴肾细胞成功地从自然和人工感染仙台病毒的小鼠肺中分离出仙台病毒。其中分离率以鸡胚尿囊腔接种法最高，猴肾细胞次之．鸡胚细胞较低。比较了病毒分离法．免疫酶法及间接免疫荧光法共检查了自然和人工感染仙台病毒的小鼠肺标本45份．检出率依次为37．78％，33．33％和26.67％，各方法间的符合率均达到80％以上。仙台病毒抗原检出方法简单，快速，可供实际应用。     

可疑病鼠的鼠痘病毒分离和鉴定

用可疑病鼠的肝脏及病变组织经接种鸡胚绒毛尿囊膜及ＨｅＬａ细胞分离出一株病毒，该毒株可使鸡胚颈毛尿囊膜上产生典型痘斑，通过细胞病形态、病变组织嗜酸包涵体、电镜观察及特展览因清学鉴定，证实所分离病毒符合鼠病病毒的特征。     

Real-Time PCR与流感病毒分离关系研究

目的研究提高流感病毒分离率的方法。方法 Real-Time PCR检测500份流感监测病例,选择甲型流感H1N1、H3N2和乙型流感阳性及阴性样品各10份共计40份,分别接种MDCK细胞和鸡胚,用红血球凝集试验测定病毒滴度,以血凝抑制试验鉴定毒株型别。结果阳性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型8份、H3N2型7份、乙型流感8份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型0份、乙型流感5份。阴性样品中,MDCK细胞分离出季节性甲型流感H1N1型3份、H3N2型3份;鸡胚分离出季节性甲型流感H1N1型2份、H3N2型0份。结论 MDCK细胞分离流感病毒时,Ct值已经在阴性范围之内的样品也应进行病毒分离,以提高病毒分离率;鸡胚分离流感病毒时,应选择MDCK细胞接毒一代且滴度达到1∶128的强毒株进行分离。     

3种分离流感病毒方法的比较分析

目的：为了比较流感病毒3种分离方法的敏感性及确定流感优势病毒株,1996年5月～9月,对江西南昌地区流感病毒进行了分离和鉴定研究。方法：采用细胞接种培养法、鸡胚羊膜腔接种培养法、鸡胚尿囊腔接种培养法。结果：细胞接种法分离的流感病毒株14株、鸡胚羊膜腔法得12株、鸡胚尿囊腔法得2株,共28株,其中甲1型18株、甲3型4株、乙型6株。结论：流感病毒分离中,细胞接种法与鸡胚羊膜腔接种法同样敏感。鸡胚分离培养中,应高度重视羊膜腔接种法。1996年南昌地区的优势而行珠是甲1型。     

鸡胚致死孤儿病毒和鸡减蛋综合症病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立鸡胚致死孤儿病毒(CELO)和鸡减蛋综合症病毒(EDS)的多重PCR检测方法并进行初步应用.方法 参照GenBank提供的基因序列,设计了2对特异性引物分别扩增CELO长纤突蛋白和EDS六邻体蛋白的基因序列,建立检测CELO和EDS的多重PCR方法,考察该方法的特异性和敏感性,并使用该方法检测流感疫苗主种子批病毒是否存在外源性禽腺病毒的污染.结果 该多重PCR方法成功扩增得到了两条特异性目的条带,并经测序验证.该方法特异性好,灵敏度显示核酸最低检测量可达10^-4μg/mL.使用该方法检测12批次流感疫苗主种子批病毒,外源性禽腺病毒的检测结果均为阴性.结论 成功建立鸡胚致死孤儿病毒和鸡减蛋综合症病毒的多重PCR检测方法,灵敏度高,特异性好.在流感疫苗主种子批病毒的外源性禽腺病毒的检测中具有很高的使用价值和应用前景.     

M76—1等麻疹疫苗株的分离鉴定与免疫原性研究

6例麻疹患儿血液接种原代人胚肾细胞分离出4株病毒(M76-1、M76-5、M76-6、M76-7)。经鉴定其抗原性与沪191株及列4株麻疹病毒一致。采用低温(31±1℃)培养及大剂量病毒(约3×10~(6)TCID_(50))感染法将这4株病毒从原代人胚肾细胞适应于鸡胚细胞获得成功。其中2株制成鸡胚细胞减毒活疫苗接种159名易感儿童,其临床反应轻而免疫原性良好。     

一种兔圆小囊抗菌肽对新城疫病毒抑制作用

目的观察兔圆小囊抗菌肽对鸡新城疫病毒强毒株有无抑制作用。方法将NDV用圆小囊抗菌肽处理后再接种9日龄鸡胚，测定鸡胚尿囊液中的NDV血凝效价，并观察鸡胚病变。结果与对照组比较，兔圆小囊抗菌肽使鸡胚尿囊液中新城疫病毒的血凝效价降低，同时还能抑制因以上新城疫病毒所引起的鸡胚病变。结论兔圆小囊抗菌肽在体外对鸡新城疫病毒强毒株具有抑制作用。     

流行性出血热病毒形态学电子显微镜研究

流行性出血热,是一种自然疫源性疾病。目前流行性出血热的病原分离、传代及其性质仍处于深入研究阶段,因此对病原的超微结构和形态仍不清楚。本文观察了从流行性出血热发热早期病人血液样品用鸡胚分离,传代的鸡胚各脏器组织细胞,发现一种特殊的病毒颗粒。现就其形态报告如下。     

仙台病毒黑龙江省地方株的分离与鉴定

目的自本省普通级实验动物中分离并鉴定出仙台病毒地方毒株,为建立仙台病毒血清抗体检测方法奠定基础。方法通过鸡胚尿囊腔传代自普通级小鼠肺脏分离病毒,经血凝实验、血凝阻断实验和结构基因序列测定对分离得到的病毒进行鉴定;大量繁殖病毒并通过蔗糖密度梯度离心纯化,免疫动物制备阳性血清,用标准试剂盒检测阳性血清效价。结果自150份小鼠肺脏分离到2株有血凝性的病毒,经形态学、血清学和结构基因序列测定鉴定为仙台病毒,命名为SV-HLJ。SV-HLJ与标准毒株Fushimi核蛋白基因(N)的核苷酸、氨基酸同源性分别为99·6%和99·0%。结论分离并鉴定出了仙台病毒黑龙江省地方毒株,为检测试剂盒的研制奠定了基础。     

正常鷄胚肝臟及接種傳染性肝炎患者血液之鷄胚肝臟的電子顯微鏡觀察

(一)前言国内外广泛利用鸡胚进行肝炎病毒的分离,肝脏形态的改变被作为病毒分离的阳性指标。吉林医科大学病理解剖及微生物教研室曾对几千个接种肝炎患者血液及其他材料之鸡胚肝脏进行了光学显微镜的检查,发现能引起一定的病理变化。为了对肝细胞     

肉鸡鹦鹉热衣原体的分离和鉴定

目的 确定鹦鹉热衣原体是否为导致肉鸡发生严重呼吸道疾病的主要病原。方法 对2001～2002间北京、天津地区肉鸡流行的严重呼吸道疾病的鸡群进行血清学测定。取发病鸡的心、肺、肾脏组织固定、切片、染色：发病鸡肺脏组织液接种7dSPF鸡胚，收集4～9d死亡鸡胚的卵黄囊膜，分别用碘染色、衣原体荧光染色；青霉素、磺胺嘧啶钠抑制分离的病原，观察SPF鸡胚发育。分离病原注射15d商品肉鸡，复制病变。结果发病肉鸡血清抗体出现10％-30％阳性，分离病原荧光染色阳性，人工感染肉鸡后可以复制病变。结论 从肉鸡分离的病原可能是鹦鹉热衣原体，与大肠埃希菌混合感染是造成肉鸡呼吸困难、死亡升高的主要因素。     

经卵白给药研究利巴韦林在鸡胚内抗甲型流感病毒的作用

目的建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型。方法设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度。结果在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P<0.05)。结论在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制。     

鸡新城疫爆发的诊断

对某鸡场发病的依莎产蛋鸡群抽样后，测得其新城疫（ND）血凝抑制抗体效价高达1：（128～1028）。将病死鸡脑组织通过鸡胚接种，收获致死胚的尿囊液能凝集鸡红细胞，血细胞凝集价在1：128以上，能抑制ND阳性血清，不能抑制EDS76阳性血清；经毒力测定，其平均死亡时间为45．4h，静脉致病指数为2．42，脑内致病指数为1．85，说明该分离病毒为1株强毒力型NDV，从而确诊该鸡场爆发ND。     

The Effect of Ribvirin Against Influenza Virus A by Injected Into Albumen in Improved Chick Egg Model

目的 建立抗甲型流感病毒作用新的鸡胚模型.方法 设计尿囊腔中接种流感病毒(甲型流感病毒鼠肺适应的FM1株及流感病毒A3),鸡胚卵白注射利巴韦林,35℃培养72 h后,观察尿囊液流感病毒血凝素滴度.结果 在新的模型下,利巴韦林100、50、25 mg/kg剂量组对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P＜0.05).感染前2 h及感染后0 h、2 h、4 h注射利巴韦林,对流感病毒FM1及流感病毒A3在鸡胚体内有明显的抑制作用,具有统计学意义(P＜0.05).结论 在新的鸡胚模型中,利巴韦林可明显地抑制流感病毒的复制.     

紫贻贝多糖抑制流感病毒在鸡胚中增殖的研究

目的:研究紫贻贝多糖(MEPS)对流感病毒在鸡胚中增殖的抑制作用。方法:采用血凝滴度测定研究MEPS对鸡胚培养甲型流感病毒的抑制作用。结果:与病毒对照组比较,MEPS各剂量组的血凝滴度降低差异有非常显著性(P<0.01)。结论:MEPS能明显抑制鸡胚培养流感病毒的增殖,具有开发成抗流感病毒生物制剂的前景。