从树突状细胞探讨肠源性感染的成因

目的 观察创伤后肠道树突状细胞迁移和形态变化情况。初步探讨树突状细胞和肠道细菌移位之间的关系。方法 48只Wistar大鼠随机分为2组。假手术组（n=8)不放血，失血性休克组（n=40)按Wigger's法复制失血性休克模型。分别于术后3、6、12、24、48h取肠系膜淋巴结行抗S-100免疫组化染色及细菌培养，分析各时间段系膜淋巴结内细菌和树突状细胞数量之间的变化关系。结果 树突状细胞和细菌数量同时在术后12h达到高峰，两者在时间变化上密切相关（r=0.89)。结论 在创伤后肠源性感染的发生机制中，树突状细胞极有可能和巨噬细胞一样，携带活菌迁移，构成细菌淋巴途径移位的重要载体。     

大鼠急性坏死性胰腺炎肠黏膜屏障功能障碍的观察

目的: 观察急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肠黏膜屏障功能的变化。方法: SD大鼠80只随机分为假手术组(n=40)和ANP组(n=40)。胆胰管内逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液制作ANP模型。观察大鼠胰腺和回肠的病理变化,动态测定肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)、内毒素水平及肠系膜淋巴结和门静脉血细菌移位率。结果: 模型制作后2h血清IFABP明显升高,6h达到峰值(P<0.01),24h后降低。早期内毒素水平有明显升高,48h达到峰值(P<0.01)。肠系膜淋巴结细菌移位在ANP24h后明显升高,48h达到6/8只(P=0.013),门静脉血细菌移位48h达到3/8只(P=0.216)。结论: ANP早期肠黏膜屏障功能受损,引发肠道细菌和内毒素移位,IFABP可能是ANP早期肠黏膜屏障功能受损的预警指标。     

微囊化活性双歧联菌对失血性休克大鼠肠道屏障功能的保护作用

目的 观察给予双歧杆菌及其微囊化制剂预先处理对大鼠失血性休克模型肠道屏障和细菌移位的影响.方法 SD大鼠每天经口给予磷酸盐缓冲液(PBS)盐水、双歧杆菌(1×109cfu)或相同数量的微囊化双歧杆菌,喂养7 d后分别行90 min的休克或假休克,液体复苏后3 h剖腹取样行肠道菌群分析、细菌移位和回肠病理学检测.结果 3种不同处理的失血性休克大鼠组间总失血量相似.双歧杆菌预先处理可降低失血性休克大鼠盲肠内总需氧菌数量,微囊化双歧杆菌可降低更加明显.盲肠内总厌氧菌和双歧杆菌数量,双歧杆菌组增高,双歧杆菌微囊组更高.休克大鼠细菌移位到肠系膜淋巴结的发生率,双歧杆菌微囊组较PBS组降低;总需氧菌移位幅度,双歧杆菌休克大鼠的较PBS组降低,微囊组休克大鼠的细菌移位幅度较双歧杆菌组进一步降低;脾的总厌氧菌和双歧杆菌移位幅度却较PBS休克组显著性降低.双歧杆菌预先处理后休克大鼠的的绒毛损伤百分率,较PBS休克组明显减轻.结论 双歧杆菌可保护失血性休克大鼠的肠道屏障、减轻细菌移位,微囊化双歧杆菌可进一步增强这一效果.     

大鼠失血性休克后过氧化反应与肠粘膜损伤的关系

目的观察失血性休克后肠道损伤情况与过氧化反应和TNF、IL-6的变化.方法利用太鼠失血性休克模型(30mmHg、70min),在复苏后0、2、6、12、24、和48h检测血液和小肠组织的过氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)、TNF和IL-6含量,以及小肠的病理改变和肠道菌移位情况.结果大鼠血清MDA值在复苏后0～2h升高,SOD活性多数时间点均升高;小肠MDA值在0～24h升高,SOD活性0～12h降低.血清TNF含量在6～48h升高;小肠在0～12h升高.IL～6含量无明显变化.小肠粘膜在复苏后2h有明显的上皮脱落,6～12h,可见细菌侵入粘膜层,6～48h,在肠系膜淋巴结等脏器中检出肠道菌.结论大鼠失血性休克后肠粘膜SOD合成能力的降低或活性抑制可能是加重局部损伤的机制之一.在休克复苏早期TNF值的升高与肠道内该因子的大量释放有关.     

21℃海水浸泡对火器伤合并失血休克犬血液流变学和血气的影响

目的探讨21℃海水浸泡对火器伤合并失血性休克犬血气及血液流变学等指标的变化及规律.方法健康成年雄性犬21条,随机分为陆地创伤休克组(n=10),海水浸泡创伤休克组(n=11).应用滑膛枪发射钢珠弹射击动物右侧后肢,然后左侧股动脉快速放血使血压降至40mmHg(5.3kPa),维持1 h,造成创伤失血性休克模型.动物分别置于21℃人工海水和陆地观察,测定伤前、海水浸泡或陆地观察(1,3,5)h血液流变学、血气指标及动物活存时间.结果海水浸泡创伤休克组动物存活率显著低于陆地创伤休克组,血液流变学及血气指标均较陆地创伤休克组恶化.结论血液流变学和血气改变在海水浸泡火器伤合并失血性休克动物的高死亡率中起着重要的作用.     

异体皮肤移植后局部淋巴结内MIP-3β与树突状细胞的动态变化

目的观察异体皮肤移植后局部引流淋巴结内趋化因子MIP-3β含量与树突状细胞数量的动态改变。方法应用异基因大鼠皮肤移植模型,ELISA法测定移植后局部淋巴结内MIP-3β的含量变化,免疫组化及图像分析测定树突状细胞的数量改变。结果异基因皮肤移植后局部引流淋巴结MIP-3β含量与树突状细胞数量持续上升,后期显著高于正常淋巴结内的水平(P<0.01);同基因移植组术后MIP-3β含量与树突状细胞数量早期短暂性增高,以后恢复至水平(P>0.05)。结论器官移植后局部引流淋巴结内MIP-3β表达增高,促进树突状细胞向淋巴组织迁移,可能是异体移植排斥反应启动与发展的重要因素。     

胸腺五肽对重度创伤失血性休克大鼠免疫功能的影响

目的观察胸腺五肽(TP-5)对重度创伤失血性休克大鼠免疫功能的影响。方法 54只健康雄性SD大鼠随机分为3组,即对照组(n=6)、重度创伤失血性休克模型组(模型组,n=24)、TP-5复苏组(TP-5组,n=24),在复苏后12h(T_1)、24h(T_2)、48h(T_3)、72h(T_4)各时间窗抽取静脉血,应用流式细胞仪测量T淋巴细胞亚群含量,并应用ELISA法测量肠道黏液内分泌性免疫球蛋白A(SIgA)含量。结果 模型组与TP-5组病死率均为4.17%(1/24),差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,模型组T_(1⁴)的CD_44)的CD_4⁺、CD_4+、CD_4⁺/CD_8+/CD_8⁺、SIgA含量均明显下降,CD_8+、SIgA含量均明显下降,CD_8⁺明显升高(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,TP-5组随复苏时间延长,各项指标逐渐恢复,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论 早期联合应用TP-5复苏治疗对重度创伤失血性休克大鼠免疫功能有一定保护作用。     

乌司他丁对创伤失血性休克患者外周血单核细胞TOLL样受体4表达的影响

目的:观察乌司他丁对创伤失血性休克患者外周血单核细胞TOLL样受体4表达的影响,从而进一步了解乌司他丁抑制炎症反应的作用机制。方法:创伤失血性休克患者60例随机分为对照组(n=30)和乌司他丁组(n=30),乌司他丁组在麻醉诱导后切皮前静注乌司他丁30万U,对照组采用等量生理盐水。于麻醉诱导后切皮前,切皮后2h、4h,术后第1天、第2天、第3天采集动脉血,以流式细胞仪检测TLR4的表达变化,用ELISA试剂盒检测血浆TNF-α和IL-6浓度。结果:两组各时点CD14+单核细胞表面TLR4表达以及TNF-α、IL-6均较麻醉诱导后切皮前增加(P<0.05);乌司他丁组各指标值均较对照组上升幅度低(P<0.05)。结论:乌司他丁可有效抑制单核细胞表面TLR4的表达,抑制炎症因子的释放,对创伤失血性休克患者有一定的保护作用。     

灵光注射液对失血性休克大鼠胃肠粘膜的保护作用

目的　观察灵光注射液 (复方樟柳碱 )对失血性休克再灌注大鼠胃肠粘膜损伤的影响。方法　将 5 6只雄性Wistar大鼠随机分 4组 ,分别设为假休克组 (8只 )、模型组 (16只 )、灵光注射液低剂量组 (16只 )和高剂量组(16只 ) ,除假休克组外 ,大鼠均经历 4kPa ,70min的失血性休克 ,在休克复苏后 6h和 12h各组分别处死半数动物 ,观察大鼠肠道菌移位情况、病理组织学和超微结构变化。结果　灵光注射液对大鼠失血性休克再灌注引起的肠道细菌移位和胃肠粘膜形态损伤有明显的保护作用 ,其治疗机制可能与改善微循环、清除氧自由基作用有关     

创伤及休克肠道细菌移位的研究

研究大面积皮肤撕脱伤和失血性休克情况下，肠道细菌移位的发生率，设计了兔的试验模型。实验组30只兔，腹部皮肤撕脱100×90mm,并行股动脉放血成休克模型。对照组10只兔，仅放血致休克。结果：对照组术后5h取标本未发现肠道细菌移位；实验组术后lh采标本已有肠道细菌移位，3h、5h组肠道细菌移位达30％。讨论了创伤及休克肠道细菌移位的临床价值。     

基因重组碱性成纤维细胞生长因子对急性坏死性胰腺炎犬肠道细菌移位的影响

目的探讨基因重组碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对急性坏死性胰腺炎（ＡＮＰ）犬肠道细菌移位的影响。方法杂种犬２３只,分对照组（ｎ＝７）、ＡＮＰ组（ｎ＝８）和ｂＦＧＦ组（ｎ＝８）。ｂＦＧＦ组犬复制ＡＮＰ模型后,每日静脉注射ｂＦＧＦ（５μｇ／ｋｇ）。结果ｂＦＧＦ治疗后,ＡＮＰ犬肠粘膜损伤明显减轻,脏器细菌培养阳性率下降５０％,细菌移位数量减少９３．３％－９６．７％,肠粘膜蛋白质、ＤＮＡ含量显著增加（Ｐ＜０．０５）,丙二醛含量明显减少（Ｐ＜０．０５）。结论ｂＦＧＦ可显著减少ＡＮＰ时肠道细菌移位,其机制可能是通过增加肠粘膜蛋白质合成,促进肠粘膜损伤修复。     

杜克雷嗜血杆菌与人类树突状细胞和巨噬细胞体外的相互作用

为探讨抗原呈递细胞 (APCs)在软下疳发病机制中的作用 ,将树突状细胞 (DCs)和巨噬细胞 (MQs)与流感嗜血杆菌、杜克雷嗜血杆菌及其纯化抗原脂寡糖 (LOS)、细胞致死性肿胀毒素 (HdCDT)共育 ,测定它们的吞噬活性及6、2 4h时前炎症细胞因子TNF α、IL 1 β、IL 6、IL 8的分泌情况 ;将抗原作用后的细胞与自体CD4 + T淋巴细胞共育 ,测定T淋巴细胞增生及 48h细胞上清液中的细胞因子IFN γ、IL 4、IL 1 3的水平。结果 :约 6%～ 2 7%的DCs和 1 4%～ 2 6%的MQs吞噬杜克雷嗜血杆菌的不同菌株及无荚膜流感嗜血杆菌、大肠杆菌。杜克雷菌的不同菌株诱导DCs、MQs分泌大量的TNF α、IL 6、IL 8(P <0 .0 5 ) ;LOS诱导的前炎症细胞因子水平比细菌低 5 0 %～ 67% ;HdCDT不诱导任何前炎症细胞因子的产生。 2种细菌作用后的DCs、MQs能激活T淋巴细胞产生高水平IFN γ ,并诱导产生相似的T淋巴细胞增生 ,HdCDT无此作用。提示 :杜克雷菌能影响APCs活化T细胞的能力 ,并有助于Th1型反应。     

多模式行为疗法联合氟西汀治疗强迫症的临床研究

目的:探讨多模式行为疗法合并盐酸氟西汀治疗强迫症的疗效。方法:采用随机入组的方法,30例患者接受多模式行为疗法合并盐酸氟西汀治疗(治疗组),30例进入多模式行为治疗组(对照组)。行为治疗包括暴露与反应预防、认知重组和发展替代行为。结果:两组治疗后强迫症的症状均有显著的改善。两组对强迫行为的疗效比较无差异,而强迫思维的改善方面,多模式行为疗法合并盐酸氟西汀治疗明显优于单用多模式行为疗法,且具有更高的有效率。结论:当强迫症患者以强迫思维为主,其治疗策略应当采用行为疗法合并盐酸氟西汀。     

神经生长因子在诱导树突状细胞分化中的作用

目的：在体外探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)在刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DCs)分化过程中的作用。方法：首先取C57BL/6小鼠股骨、胫骨骨髓细胞,按培养过程中干预因素不同分为 磷酸盐缓冲液(phosphate buff ered saline,PBS)刺激组(PBS组,n=6)、NGF刺激组(NGF组,n=6)、粒巨噬细胞集落刺激 因子(granulocyte monocyte colony stimulating factor,GM-CSF)和IL-4共刺激组(GM-CSF+IL-4组,n=6)、NGF加GM-CSF和 IL-4共刺激组(NGF+GM-CSF+IL-4组,n=6),培养第7天采用流式细胞仪比较各组间CD11c+细胞阳性率和CD8a−亚型比 例;然后用GM-CSF+IL-4刺激培养未成熟的DCs,经CD11c免疫磁珠阳性分选得到纯化的未成熟DCs,将其分为PBS组 (n=6)、NGF组(n=6)、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(LPS组,n=6)、NGF+LPS组(n=6),分别用PBS,NGF,LPS, NGF+LPS诱导细胞成熟,24 h后酶联免疫吸附分析法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测上清液中IL-6, IL-10和IL-12的水平。结果：1) NGF组CD11c+DCs百分比高于PBS组,低于GM-CSF+IL-4组(均P<0.05);GM-CSF+IL-4 组与NGF+GM-CS F+IL-4组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),且在4组中均以CD8a−DCs为主;2)NGF可以增强 LPS诱导的DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12(均P<0.05),而单独NGF刺激对DCs分泌IL-6,IL-10和IL-12无影响(均P>0.05)。 结论：NGF可以诱导小鼠骨髓细胞向CD11c+DCs的定向分化,并且以CD8a−亚型为主;NGF能增强LPS诱导的DC分泌 IL-6,IL-10和IL-12。     

Quantitative differentiation of dendritic cells in lung tissues of smokers with and without chronic obstructive pulmonary disease

Background Chronic obstructive pulmonary disease （COPD） is thought to be an inflammatory immune response disease. In most cases, the disease is caused by cigarette smoke, but it has been demonstrated that only 10% to 20% of smokers will definitely suffer from COPD. Dendritic cells （DCs） are considered to be the promoter of immune responses.However, the underlying mechanisms involved are still unrevealed. In this study, we aimed to investigate the quantitative differentiation of pulmonary DC in smokers with or without COPD to explore the possible role of DCs in smokers suffering COPD.Methods Peripheral lung specimens from non-smokers without airflow obstruction （control group, n=7）, smokers without airflow obstruction （smoker group, n=7） and patients with COPD （COPD group, n=7） were investigated to detect the quantity of S-100 and CD1a positive cells by immunohistochemical or immunofluorescent assay.Results In smokers with COPD, the number of S-100＋ DCs was higher than in the controls and smokers without COPD （P 〈0.01 and P 〈0.05） and there was a higher number of S-100＋ DCs in smokers with COPD than in smokers without COPD, but without a significant difference （P 〉0.05）. An inverse correlation was found between the number of DCs and forced expiratory volume in the first second （FEV1）% pred （r=-0.75, P 〈0.05）, which was also found between the number of DCs and FEV1/forced vital capacity （FVC） （r=-0.72, P 〈0.05）. The mean number of CD1a＋ DCs, increased from non-smokers to non-COPD smokers to COPD patients, with significant differences between each group （P 〈0.01）.Conclusions The quantity of DCs significantly increased in smokers with COPD compared with non-smokers or smokers without COPD. The results suggest that DCs may play an important role in the pathogenesis of smoking-induced COPD, and the upregulation of DCs may be a potential maker to identify the smokers who have more liability to suffer from COPD.     

树突状细胞在大鼠单侧输尿管梗阻后肾组织中的分布与作用

目的 探讨粘附分子P-选择素与树突状细胞(DC)在大鼠单侧输尿管梗阻后肾组织中的表达和分布,以及抗P-选择素单抗的抗粘附调抑作用。方法 建立大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,随机将大鼠分为手术组和抗P-选择素单抗治疗组各18只,按不同梗阻时间(1、3、7d)再分为3组,另设假手术组(n=6)作为对照。分别采用免疫组化LSAB法和免疫双染与荧光图像分析法．观察P-选择素及DC在肾组织中表达和分布变化。结果 大鼠UUO第1d起即见P-选择素以肾小管上皮细胞为主在肾小管间质中表达上凋．伴随CD1a^ CD80^ DC在以肾间质为主部位的浸润;第3dP-选择素明显表达．且CD1a^ CD80^ DC显著增多：至第7dP-选择素表达遂下凋．而CD1a^ CD80^ DC在肾间质分布聚集达峰,出现了明显的肾小管间质病理损伤。经抗P-选择素单抗处理后,大鼠肾组织P-选择素表达受到抑制,CD1a^ CD80^ DC分布聚集减少,且肾小管间质病理损伤减轻。结论 提示树突状细胞参与了肾小管间质纤维化早期病理损伤过程,其肾组织迁移聚集可能与P-选择素早期介导有关,抗P-选择素单抗对此具有抗粘附凋抑和肾脏保护作用。     

反义bcl-2的表达诱导癌细胞凋亡致敏树突状细胞的免疫应答

目的 观察树突状细胞（DCs)对反义bcl-2的逆转录病毒表达载体诱导的凋亡胆管癌细胞获取抗原后，抗肿瘤免疫应答及对胆管癌细胞的特异性免疫杀伤效果。方法 用粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）加白介素－4（IL－4）从人外周血分化，诱导DCs，反义bcl-2的逆转录病毒表达载体在体外诱导培养的人胆管癌细胞凋亡，将DCs，T淋巴细胞和凋亡胆管癌细胞区培养，同时设计不同类型肿瘤细胞（坏死胆管癌细胞及培养胆管癌细胞）作对照，7d后，分离，富集DCs，T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验。结果 DCs高表达共刺激分子B7和CD1a，表面具有典型不规则突起，反义bcl-2表达诱导癌细胞凋亡形成的凋亡小体被DCs捕捉，吞噬，负载抗原的DCs可以有效提呈胆管癌细胞抗原，有强烈的免疫应答，刺激的细胞毒T淋巴细胞（CTLs)特异性地杀伤胆管癌细胞。结论 反义bcl-2的逆转录病毒表达载体诱导癌细胞凋亡可以致敏rhGM-CSF加rhIL-4从人外周血单核细胞诱导，扩增出的DCs并产生显著的杀伤胆管癌细胞的免疫反应，可望成为特异性免疫治疗肿瘤的一条新途径。     

复方保肝宁减轻小鼠肝纤维化的机制:抑制肝脏组织中的IDO1进而促进树突状细胞表型成熟

目的 观察中药复方保肝宁对肝纤维化模型小鼠的保护作用并探讨其作用机制。方法 本研究分为两部分,第1部分：按 0.6 mL/（kg·d）予以腹腔注射25% CCl4（CCl4∶橄榄油=1∶3）的方式诱导野生型小鼠建立肝纤维化病理模型,随机分为对照组、模型组、阳性对照组及保肝宁低、中、高浓度组,10只/组。造模给药8周后处死小鼠,取小鼠血清检测AST、ALT水平。另取肝组织做HE、天狼星红染色及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫组化染色并检测吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO1）的表达水平。流式细胞仪检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的数量和表型变化。第2部分：按3×1011 v.g/只尾静脉注射IDO1过表达腺相关病毒,取正常野生型小鼠随机分为腺相关病毒阴性对照（AAV9-NC）干预组、IDO1过表达腺相关病毒（AAV9-IDO1）干预组及高浓度保肝宁+IDO1过表达腺相关病毒联合干预组,6只/组。干预4周后,取肝组织做IDO1免疫组化染色并检测小鼠肝脏树突状细胞（DCs）及T细胞的表型变化。结果 与模型组比较,保肝宁高浓度组能有效降低肝纤维化小鼠血清中AST、ALT水平（P< 0.01）;改善肝组织病理损伤,减少肝纤维组织的形成及α-SMA和IDO1的沉淀（P<0.05）。保肝宁高浓度治疗组肝纤维化小鼠肝脏中CD11C+DCs、CD11C+CD80+DCs、CD11C+CD86+DCs、CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs细胞和CD3+T、CD3+CD4+T细胞比例与模型组相比均呈不同程度的升高（P<0.05）。高浓度保肝宁干预后可显著降低IDO1过表达腺相关病毒干预小鼠肝脏中IDO1的表达水平及上调CD11C+CD40+ DCs、CD11C+MHCII+ DCs和CD3+CD4+T细胞比例（P<0.05）。结论 保肝宁对CCl4所致小鼠肝纤维化具有一定的治疗作用,其机制可能与降低肝组织中IDO1的表达水平继而促进肝脏中DCs表型成熟使DCs刺激T细胞增殖能力增强有关。     

A COMPARATIVE STUDY OF REPAIR OF INGUINAL HERNIAS BY SHOULDICE TECHNIQUE VIS-A-VIS BASSINIS TECHNIQUE

A comparative study of repair of inguinal hernias by Shouldice technique (ST) vis-a-vis Bassinis technique (BT) was conducted on 100 patients who presented with inguinal hernia in the OPD services of our hospital. The patients were worked up and alternatively distributed to undergo repair by ST (n=50) or BT (n=50). Repair by ST required longer operating time (Avg 95 min vs 80 min), but involved lesser hospitalization (4.0 days vs 4.5 days), lesser complication rate (2 vs 4), lesser recurrence rate (0 vs 2) and higher rate of satisfaction. The study confirms the advantages of Shouldice repair in the treatment of inguinal hernia.