亚硝基铁氰化钠来源的外源性NO体外杀伤旋毛虫肌幼虫作用研究

目的探讨亚硝基铁氰化钠(SNP)来源的NO体外杀伤旋毛虫肌幼虫的作用及其相关机制。方法制作浓度为1 000条/ml的旋毛虫肌幼虫悬液。培养板每孔加入0.1 ml肌幼虫悬液,再加入SNP,使其终浓度分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 mmol/L和1.00 mmol/L,并设空白对照组,37℃5%CO2培养箱中孵育4 d后收集各孔肌幼虫,镜检计数,计算并比较各组肌幼虫死亡率。另于培养板中每孔加入0.1 ml肌幼虫悬液,分别设A组(对照组,1.00 mmol/L SNP)、B组(0.15 mmol/L Fe SO4+1.00 mmol/L SNP)、C组(1.00 mmol/L L-半胱氨酸+1.00 mmol/L SNP)、D组(0.15 mmol/L Fe SO4+1.00mmol/L L-半胱氨酸+1.00 mmol/L SNP)、E组(0.15 mmol/L Hb+1.00 mmol/L SNP),培养、检测方法同前,计算并比较各组肌幼虫死亡率。结果 0.02 mmol/L SNP组与空白对照组的旋毛虫肌幼虫死亡率分别为(5.50±1.80)%和(4.93±0.25)%(P0.05)。0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mmol/L SNP组虫体死亡率分别为(20.19±2.71)%、(29.21±2.12)%、(41.81±2.03)%、(47.85±3.79)%和(60.98±5.19)%,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P均0.05)。旋毛虫肌幼虫死亡率与SNP浓度呈正相关(rs=0.875,P0.05)。B、C、D、E组肌幼虫死亡率分别为(49.48±1.34)%、(47.29±2.79)%、(26.28±1.37)%和(17.93±3.49)%,均较A组(60.98±5.19)%有所下降(P均0.05)。结论 SNP来源NO对体外培养的旋毛虫肌幼虫具有杀伤作用,而血红蛋白、硫酸亚铁、L-半胱氨酸对该杀伤具有抑制作用,以血红蛋白抑制效果最显著。     

外源性一氧化氮体外杀伤红内期间日疟原虫的实验研究

目的 探讨外源性一氧化氮（NO）对红内期间日疟原虫的杀伤作用。 方法 采集以早期滋养体期为主,原虫密度＞0.5%的患者血样,配成含2%红细胞的虫血混悬液。96孔板中每孔加100 μl虫血混悬液,再加入各组试剂,亚硝基铁氰化钠（SNP,分别为0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mmol/L）,SNP + 血红蛋白（Hb）0.15 mmol/L,SNP + 硫酸亚铁（FeSO₄）0.15 mmol/L,SNP + L-半胱氨酸（L-cyst）1.00 mmol/L,SNP + FeSO₄ 0.15 mmol/L+ L-cyst 1.00 mmol/L,后4组SNP浓度均为1.00 mmol/L,设对照组,每组重复3次,置37 ℃ 5% CO2培养箱中培养。根据虫龄,估计发育至裂殖体时间,提前3 h取空白对照孔涂片镜检,确定终止培养时间,培养终止后吉氏染色,镜检计数成熟裂殖体,计算NO对红内期间日疟原虫的抑制率,统计分析各组对间日疟原虫抑制率的差异。 结果 SNP 0.02 mmol/L组,间日疟原虫抑制率为（0.84±1.69）%,对培养的红内期间日疟原虫无杀伤作用（P＞0.05）;SNP 0.05 mmol/L组,间日疟原虫抑制率为（12.26±3.04）%,对培养的红内期间日疟原虫存在杀伤作用（P＜0.01）。且抑制率随SNP浓度上升而升高。在含有1.00 mmol/L SNP的孔中分别加入Hb、L-cyst、FeSO4和FeSO4+L-cyst与只添加SNP 1.00 mmol/L孔相比,红内期间日疟原虫抑制率自（85.40±2.90）%下降为（5.90±2.90）%、 （25.86±4.02）%、 （30.16±2.75）%和（16.71±2.30）%。结论 外源性NO对体外培养的红内期间日疟原虫有杀伤作用,而Hb、L-cyst和FeSO₄可以逆转这种杀伤作用。     

丝裂原蛋白激酶抑制剂U0126对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响

目的观察丝裂原蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinases,MAPK)抑制剂对刚地弓形虫侵入宿主细胞的影响。方法以丝裂原蛋白激酶抑制剂U0126分别以不同浓度加入分孔培养的细胞中,于不同时间分别用吉氏染色和流式细胞仪(FCM)检测其宿主细胞感染速殖子的差异。结果吉氏染色检测在以U01261μM,10μM和100μM作用3小时下其感染率分别比对照组下降了20.22%(,P<0.01),52.91%(P<0.01)和75.27%(P<0.01);在作用6小时及9小时其感染率分别比对照组下降了32.88%(P<0.01),57.24%(P<0.01),79.21%(P<0.01)和41.26%(P<0.01),54.73%(P<0.01),80.80%(P<0.01)。FCM检测结果与之相似。结论U0126通过作用于MAPK信号传导途径而明显抑制弓形虫速殖子侵入宿主细胞。     

聚合酶链反应用于现症间日疟和恶性疟病人的检测

本文选择种特异性引物MPV、PF检测采自云南混合流行区门诊病人的滤纸干滴血119例,并与传统镜检法比较。MPV引物根据P.v.线粒体细胞色素C氧化酶基因序列设计,扩增产物片断为374bp,PF引物根据p.f.中度重复序列PBK1-14基因序列设计,扩增产物片段为206bp。MPV引物系国内首次应用。血样本处理采用1％Tritonx-100裂解煮沸法,并作了改进。其研究结果显示:PCR法与镜检法符合率为86.6％。PCR法:P.v.阳性率为64.7％,P.f.阳性率为29.4％,混合感染率为7.6％,误诊为0,漏诊率为2.5％;镜检法:P.v.阳性率为58.8％,P.f.阳性率为2.7％,混合感染率为3.4％,误诊为2.5％,漏诊率为8.4％。本PCR诊断疟疾方法具有准确、敏感、快速、简易等特点,有潜在的现场应用价值。     

猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA 3.1-TSO45W在小鼠体内诱导的体液免疫效应

目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TSO45W诱导的小鼠体液免疫应答。方法碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3.1-TSO45W及对照质粒pcDNA3.1。将45只雌性昆明小鼠(4~6周)随机分为3组,每组15只。A组(生理盐水组):每只小鼠肌肉注射生理盐水100μl;B组(空质粒pcDNA3.1对照组):每只小鼠肌肉注射空质粒100μg;C组(重组质粒pcDNA3.1-TSO45W组):每只小鼠肌肉注射重组质粒100μg。分别于免疫后2、4、6、8、10周以ELISA方法检测小鼠血清免疫球蛋白IgG,IgM及IgA含量。结果 pcDNA3.1-TSO45-4B免疫组小鼠血清IgG、IgM、IgA均于第4周开始升高,分别为(17.36±1.85)μg/ml、(9.25±1.78)μg/ml和(9.41±0.88)μg/ml,并分别于第8、第6、第8周达到最高,含量分别为(24.26±2.52)μg/ml、(10.69±0.52)μg/ml和(11.22±1.23)μg/ml,与空质粒对照组(B组)和生理盐水对照组(A组)比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论猪囊尾蚴保护性抗原TSO45WDNA疫苗能在小鼠体内诱导体液免疫效应。     

抗猪带绦虫六钩蚴兔血清的制备及重组质粒pcDNA3.1/TSO45-4B在小鼠骨骼肌的表达

目的:制备抗六钩蚴全虫可溶性抗原的兔血清,观察本室制备的猪带绦虫六钩蚴期特异性抗原基因TSO45-4B的重组核酸疫苗pcDNA3.1/TSO45-4B经肌肉接种后在宿主体内的表达.方法:用次氯酸钠法孵化六钩蚴,Dot-B1ot、ELISA检测兔血清中特异性抗体及滴度;以pcDNA3.1/TS045-4B进行体内转染,继之免疫组化法观察其在鼠体骨骼肌的表达.结果:抗六钩蚴兔血清多克隆抗体制备成功,抗体效价为1:20 100;免疫组化染色后在重组质粒注射部位肌肉组织的肌纤维内显示阳性的棕黄色分泌颗粒.结论:重组质粒在小鼠骨骼肌内成功地表达为猪囊尾蚴病多基因DNA疫苗的研制提供了体内表达的依据之一.     

对不同医学专业学生人体寄生虫学课程的教学探讨

为了适应新的医学教育的发展、培养出具有各专业特色的医学人才,人体寄生虫学教学应建立以学生培养目标为中心的教育模式。根据不同专业制定相应的培养方案,在教学过程中不断改革和完善教学方法,这样才能培养出高素质医学人才以满足医学发展的需要。     

高浓度葡萄糖对人树突状细胞CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体的影响

目的：观察高浓度葡萄糖对人树突状细胞（DC）受体CD83、CD86、CD36、CCR7和μ-阿片受体（MOR）表达的影响,探讨高血糖在动脉粥样硬化免疫炎症反应中的作用。方法：从人外周血中提取和分离单个核细胞,在含重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白介素4的RPMI1640完全培养基中培养。7d后未成熟DC分3组,分别在含有D-葡萄糖5mmol／L（NG组）、10mmol／L（TG组）和25mmool／L（HG组）的RPMI1640完全培养基中继续培养48h后,采用流式细胞术检测DC表面CD83、CD86、CD36、MOR和CCR7的变化。结果：TG组和HG组DC表面分子CD36、CCR7、CD83和CD86的阳性率均高于NG组（P〈0．05-P〈0．01）,HG组DC表面分子MOR的阳性率高于NG组（P〈0．05）,而HG组CD36、CD83和CD86的阳性率亦均明显高于TG组（P〈0．01）。结论：高浓度葡萄糖能促进DC表面分子CD36、CD86、CD83和CCR7的表达。     

不同结核杆菌抗原刺激外周血T细胞亚群产生干扰素的比较

目的：比较磷酸化抗原（HDMAPP）、结核杆菌耐热抗原（Mtb-HAg）和结核杆菌低分子耐热抗原Mtb-HAg（10 k）刺激外周血T细胞产生γ-干扰素（IFN-γ）的反应能力方面的特点及差异.方法：采集正常人外周血,分别用HDMAPP、Mtb-HAg和Mtb-HAg（10 k）刺激培养14 h,再加入莫能霉素继续培养6h,收集细胞,加入荧光标记单抗进行表面分子和胞内染色,然后在流式细胞仪上检测各实验组中CD3＋ αβ细胞和CD3＋ γδ细胞胞内IFN-γ的表达.结果：正常人各抗原实验组CD3＋ αβ细胞和CD3＋γδ细胞胞内产生IFN-γ＋细胞比率较阴性组对照组升高（P＜0.01）.各抗原刺激组CD3＋γδ细胞产生IFN-γ＋细胞比率明显高于CD3＋αβ细胞（P ＜0.05 ～P＜0.01）.3种抗原刺激组间CD3＋αβ细胞和CD3＋γδ细胞无明显不同（P＞0.05）.结论：HDMAPP、Mtb-HAg和Mtb-HAg（10 k）均可以刺激外周血中T细胞中αβ和γδ细胞群产生IFN-γ,均可特异性诱导刺激CD3＋γδ细胞产生IFN-γ,HDMAPP、Mtb-HAg（10 k）对CD3＋γδ细胞产生IFN-γ的表达量高于Mtb-HAg.     

急性期间日疟患者血浆γ-干扰素和白细胞介素-17水平分析

目的：分析急性期间日疟患者血浆中γ-干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-17（IL-17）水平。方法：用酶联免疫吸附方法检测19名急性期间日疟患者（间日疟组）和20名健康志愿者（对照组）血浆中IFN-γ IL-17水平。结果：间日疟组患者血浆中IFN-γ和IL-17水平分别为（18．86±6．77）pg／ml和（41．46±21．03）pg／ml,均明显高于对照组的（9．99±8．78）pg／ml和（25.23±11．83）pg／ml（P〈0．01）。结论：间日疟患者血浆中IFN-γ和IL-17的水平均升高。