p21~(HBsAg/HBsAg)和p21~(HBX/HBX)转基因小鼠不同月龄血液生理指标的测定

目的检测p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠的血液生理指标,分析p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX基因引入小鼠基因组p21位点中对其血液指标的影响。方法用日本光电MEK-5126K血球计数仪(动物芯片)及配套试剂盒对四个月龄不同基因型小鼠的血液生理指标进行测定,并且与野生对照组进行比较。结果多数指标雌雄之间差异显著,并且两种基因型小鼠及野生型在不同年龄、不同指标的动态变化不同。结论p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX基因转入小鼠基因组p21位点对其血液生理指标具有一定的影响。     

不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠血清代谢产物的测定

目的测定p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠及野生型小鼠的血清代谢产物,探讨各种血清代谢产物在两种转基因小鼠及野生型小鼠的变化规律。方法对p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠不同月龄4种代谢产物血清总胆红素（TBILI）＼尿酸（UA）、肌酐（CRE）和尿素氮（BUN）进行测定并分析比较。结果p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠不同月龄、不同的指标雌雄之间t检验差异显著,并且随着年龄的变化,雌雄之间的变化规律不同。结论p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠的血清代谢产物在不同的年龄具有一定的变化规律。     

p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠的繁殖性能与生长发育

目的探讨p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠的繁殖性能与生长发育状态，分析p21^HBsAg/HBsAg基因引入小鼠基因组p21位点中对其生长繁殖的影响。方法选者繁殖种鼠40对，日常生产繁殖过程中对相关的繁殖指标及应用分析天平对其体重进行测量和记录，并且与野生对照组进行比较。结果不同日龄野生型小鼠较p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠（-/-）增重快，而且两种表型小鼠雄性个体较雌性个体增重快；不同胎次胎间隔差异显著。野生型胎间隔较p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠长；不同胎次两种表型小鼠产仔数差异不显著，说明野生型小鼠较p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠繁殖能力强。结论p21^HBsAg/HBsAg基因转入小鼠基因组p21位点对其生长繁殖具有一定的影响。     

不同月龄p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠几种血液生化指标测定

目的 测定p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠及野生型小鼠的血清生化指标,探讨几种血清生化指标在两种转基因小鼠及野生型小鼠的变化规律.方法 对p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠不同月龄11种血清生化指标进行测定并分析比较.结果 p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠不同月龄、不同的指标雌雄之间t检验差异显著,并且随着月龄的变化,雌雄之间的变化规律不同.结论 p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX基因的转入对小鼠的血清生化指标具有一定的影响.     

不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠血清酶含量的测定

目的 测定p21HBsAg/HBsAg和p 21HBX/HBX转基因小鼠纯合型及野生型小鼠的血清酶,探讨各种血清酶在两种纯合型小鼠及野生型小鼠的变化规律.方法 采用荷兰半自动生化分析仪Ⅱ对于肝功能相关的7种血清酶进行测定,应用SSPS10统计学软件进行T检验及方差分析比较.结果p21HBsAg/HBsAg和p 21HBX/HBX转基因小鼠不同年龄、不同的指标雌雄之间差异显著,并且随着年龄的变化,雌雄之间的变化规律不同.结论p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠的血清酶在不同的年龄具有一定的变化规律,说明p21HBsAg/HBsAg和p 21HBX/HBX转基因小鼠的血清酶具有一定的特征,为其功能性研究及临床检验具有重要参考价值.     

p21~(HBsAg/HBsAg)转基因小鼠的繁殖性能与生长发育

目的探讨p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠的繁殖性能与生长发育状态,分析p21HBsAg/HBsAg基因引入小鼠基因组p21位点中对其生长繁殖的影响。方法选者繁殖种鼠40对,日常生产繁殖过程中对相关的繁殖指标及应用分析天平对其体重进行测量和记录,并且与野生对照组进行比较。结果不同日龄野生型小鼠较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠(-/-)增重快,而且两种表型小鼠雄性个体较雌性个体增重快;不同胎次胎间隔差异显著。野生型胎间隔较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠长;不同胎次两种表型小鼠产仔数差异不显著,说明野生型小鼠较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠繁殖能力强。结论p21HBsAg/HBsAg基因转入小鼠基因组p21位点对其生长繁殖具有一定的影响。     

共轭亚油酸对高脂血症大鼠脂质代谢及visfatin基因表达水平的影响

目的测p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠及野生型小鼠的血清生化指标,探讨几种血清生化指标在两种转基因小鼠及野生型小鼠的变化规律。方法对p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠不同月龄11种血清生化指标进行测定并分析比较。结果p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX转基因小鼠不同月龄、不同的指标雌雄之间t检验差异显著,并且随着月龄的变化,雌雄之间的变化规律不同。结论p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBXIHBX基因的转入对小鼠的血清生化指标具有一定的影响。     

流式细胞术分析p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝细胞凋亡

目的观察p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝细胞凋亡。方法用流式细胞仪检测6、12、18、24月龄p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠和p21^＋/＋野生型小鼠新鲜肝脏组织。结果转基因小鼠肝细胞凋亡率低于同月龄野生型小鼠。结论HBsAg基因的转入和表达，抑制转基因小鼠肝细胞凋亡。     

HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻保存研究

目的研究OPS法对不同基因型的HBV转基因小鼠胚胎玻璃化冷冻的效果，为建立转基因小鼠胚胎库奠定基础。方法采用乙二醇作为冷冻保护剂，以野生型P21^ / 小鼠为对照，用OPS法对P21^HBsAg／HBsAg及P21^HBx/HBx两种HBV转基因小鼠3．5d的胚胎进行玻璃化冷冻，并比较不同基因型小鼠的超数排卵数，胚胎的复苏率及发育率。结果P21^ / 、P21^HBsAg／HBsAg及P21^HBx/HBx小鼠平均超排数分别为27．89、15．56、9．14枚；复苏率分别为88．7％、81．1％、80．3％；发育率分别为82．6％、79．4％、56．6％。结果表明HBV转基因小鼠的超排数明显低于野生型小鼠的超排数，解冻后三种小鼠的胚胎复苏率之间无显著差别，而解冻后发育率，P21^HBx／HBx小鼠要明显低于其它两种小鼠。结论超排数、胚胎复苏率及解冻后发育率受小鼠的基因型影响。     

p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏病理学研究

目的观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏病理学改变.方法分别选取2、6、12、18、24月龄的SPF级p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠和p21+/+野生型小鼠,剖检进行大体观察,取肝脏及肝脏肿瘤组织,进行组织学HE染色及电镜超微结构观察.结果 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏大体、光镜和电镜下均有明显病理改变.随着月龄的增加,肝脏色暗质硬,表面有结节和肿瘤形成;光镜下,肝细胞浊肿,炎症细胞浸润,脂肪变性,点状、灶状和碎屑状坏死,非典型增生,肝细胞癌.癌细胞分化良好,类似肝细胞,形成索状和腺泡状结构.癌细胞核深染,具核分裂像.电镜下,癌细胞核变形,核膜曲折凹陷,线粒体肿胀,数目增多,嵴减少.4例18月龄转基因小鼠发生肝细胞癌(4/10),6例24月龄的转基因小鼠发生肝细胞癌(6/10),其中2例发现远处转移.结论 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏出现明显病理损害,18月龄小鼠开始发展成高分化的肝细胞癌,高龄小鼠形成的肝细胞癌能够转移.     

p16、p21、p27基因多态性与上皮性卵巢癌易感性关联的研究

目的探讨抑癌基因p16、p21和p27的多态性与上皮性卵巢癌易感性的关联.方法选取2007年3月-2011年4月间120例卵巢癌患者作为考察对象,同时选取120例健康女性人群作为对照组.分别采集外周静脉血5ml,提取基因组DNA,分析每个样本的基因型,并做统计学分析.结果两组的p16基因C540G的C/C、C/G和G/G基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组的p16基因C580T的C/C、C/G和G/G基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组p21基因的T/T、T/C和C/C基因型频率分布无显著性差异(P>0.05);两组的p27基因的V/V、V/G和G/G基因型频率分布有显著性差异(P<0.05).结论 p16基因和p21基因型的多态性上皮性卵巢癌的易感性有关;p27基因的V/V纯合型可能会增加卵巢癌的发病风险,值得临床关注.     

透射电镜观察p21HBHBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡

目的 观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡.方法 用透射电镜观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡的形态学改变.结果 细胞凋亡早期,细胞核染色体发生边集,核形不规整,核膜表面凹凸;凋亡中期,核内染色质凝聚,趋边呈月牙状,核膜孔消失,核膜呈波纹状皱缩;凋亡晚期,核固缩,细胞膜出芽形成小泡,可见凋亡小体.结论 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡具有典型性病变特征,是研究HBV感染诱发肝癌发病机理的合适动物模型.     

p21，p27基因多态性对食管癌的发生及淋巴结转移的影响

目的:探讨p21基因外显子3'非翻译区(UTR)第20碱基对的核苷酸多态性(SNPs)以及p27基因第109密码子的SNP对食管鳞状细胞癌(ESCC)发生及淋巴结转移的影响.方法:采用聚合酶链反应(PCR)-片段长度分析和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法检测p21基因外显子的3'UTR第20碱基对SNP以及p27基因第109密码子SNP位点的基因型.结果:p21和p27的基因型分布在ESCC组及对照组中均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),在ESCC组和对照组中,ESCC患者P21基因3'UTR和p27基因第109密码子的多态性基因型和等位基因型分布与对照组无统计学差异.吸烟状况分层分析发现,吸烟患者p21的TT基因型频率(26.0%)显著高于健康吸烟组(12.0%)(x2=8.60,P=0.014).与CC基因型相比,携带TT基因型可显著增加吸烟者的ESCC发病风险.经性别和年龄校正的比值比(OR)及其95%的可信区间(CI)分别为3.36(95%,CI=1.45～7.75),而在非吸烟的患者和健康个体中,p21基因型及等位基因型频率差异均无统计学意义;p27基因型及等位基因型频率在吸烟及非吸烟患者和健康个体中差异均无统计学意义.有无淋巴结转移分层分析结果表明,有淋巴结转移组的p21的TT基因型频率(26.4%)显著高于无淋巴结转移组(15.3%)(x2=6.128,P=0.013).与常见单体型C/C相比,携带TT基因型与TT T/C基因型可明显增加ESCC患者淋巴结转移的风险,其性别、年龄校正的OR值及其95%的CI分别为3.11(95%,CI=1.28～7.52)和1.98(95%,CI=1.03～3.80),而p27基因多态性在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组之间差异无统计学意义,p27基因多态性与淋巴结转移的风险性无关.结论:p21基因3'UTR和p27基因第109密码子的多态性基因型和等位基因型不单独影响ESCC的发生和发展;p21 3'UTR的TT等位基因可能增加吸烟人群ESCC易感性,并可能增加淋巴结转移的风险性.     

p21 codon31 基因多态性与宫颈癌的关系

目的 探讨p21 codon31 基因单核苷酸多态性与中国汉族人群宫颈癌统计学、发病风险及临床 病理学参数的关系。方法 选取2014 年1 月—2016 年6 月陕西西安及湖南地区汉族宫颈癌患者178 例作 为研究组,并选取相同时间和地点的237 例健康群众作为对照组。采用限制性片段长度多态性分析（PCRRFLP） 对p21 codon31 基因多态性基因分型。对两组基因型和临床病理学参数进行分析。结果 对照组中 p21 codon31 基因Ser 等位基因频率高于研究组（P <0.05）,研究组中p21 codon31 基因Ser/Ser 基因型频率高 于对照组（P <0.05）,p21 codon31 基因Ser 等位基因携带者患宫颈癌风险是Arg 等位基因携带者的1.345 倍 （P <0.05）,p21 codon31 基因Ser/Ser 基因型携带者患宫颈癌风险是Arg/Arg 基因型携带者的2.01 倍（P <0.05）。 结论 p21 codon31 基因多态性与中国汉族人群宫颈癌的发病风险有关系,其中携带p21 codon31 基因Ser/Ser 基因型人群有更高的宫颈癌的患病风险。     

骨肉瘤p21^WAF1／CIP1基因DNA序列分析及其mRNA、p21蛋白表达

【目的】通过检测骨肉瘤组织中p21^WAF1/CIP1基因的表达及其DNA序列变化，探讨它们与骨肉瘤生物学特性之间的关系及其对预后的评价。【方法】采用原位杂交及免疫组化法检测45例人骨肉瘤p21^WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达。采用PCR-SSCP方法检测骨肉瘤p21^WAF1/CIP1基因DNA变化。采用双脱氧核苷酸末端终止法进行DNA的直接测序。【结果】①p21蛋白表达阳性率在骨肉瘤中为18％(8／45)；②p21^WAF1/CIP1基因mRNA表达阳性率在骨肉瘤中为42％(19／45)；③DNA序列分析结果显示，骨肉瘤中p21^WAF1/CIP1基因第三外显子(exon3)的cDNA全长序列的609位碱基处发生C→T改变，发生率为47％(17／36)。exon2a的cDNA全长序列的187位、303位碱基处发生p T改变，发生率为6％(2／36)。exon2b的cDNA全长序列的522位碱基处发生G→A改变，发生率为2．7％(1／36)。【结论】①随着骨肿瘤恶性度的升高，p21^WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达下降。②p21^WAF1/CIP1基因mRNA在骨肉瘤中的表达对预后有影响。③本实验对中国人群骨肉瘤p21^WAF1/CIP1基因DNA多态性位点进行了新的定位，这些位点可能会对今后对该基因的研究提供有意义的参考。     

骨肉瘤p21 WAF1/CIP1基因DNA序列分析及其mRNA、p21蛋白表达

[目的]通过检测骨肉瘤组织中p21 WAF1/CIP1基因的表达及其DNA序列变化,探讨它们与骨肉瘤生物学特性之间的关系及其对预后的评价.[方法]采用原位杂交及免疫组化法检测45例人骨肉瘤p21 WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达.采用PCR-SSCP方法检测骨肉瘤p21 WAF1/CIP1基因DNA变化.采用双脱氧核苷酸末端终止法进行DNA的直接测序.[结果]①p21蛋白表达阳性率在骨肉瘤中为18%(8/45);②p21 WAF1/CIP1基因mRNA表达阳性率在骨肉瘤中为42%(19/45);③DNA序列分析结果显示,骨肉瘤中p21 WAF1/CIP1基因第三外显子(exon3)的cDNA全长序列的609位碱基处发生C→T改变,发生率为47%(17/36).exon2a的cDNA全长序列的187位、303位碱基处发生G→T改变,发生率为6%(2/36).exon2b的cDNA全长序列的522位碱基处发生G→A改变,发生率为2.7%(1/36).[结论]①随着骨肿瘤恶性度的升高,p21 WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达下降.②p21 WAF1/CIP1基因mRNA在骨肉瘤中的表达对预后有影响.③本实验对中国人群骨肉瘤p21 WAF1/CIP1基因DNA多态性位点进行了新的定位,这些位点可能会对今后对该基因的研究提供有意义的参考.     

miR-125a-5p基因敲除C57BL/6J小鼠的构建

目的：构建miR-125a-5p基因敲除小鼠并进行基因鉴定,并探讨基因敲除小鼠体内miR-125a-5p对靶基因Foxp3的调控。方法：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以C57BL/6J小鼠为背景,对miR-125a-5p基因位点进行基因敲除,培育纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠。采用裂解法提取鼠尾组织基因组DNA,进行PCR反应检测亲代纯合miR-125a-5p基因敲除小鼠基因型,并选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠作为亲代种鼠进行配种繁殖。通过全自动蛋白表达分析系统检测小鼠脾脏组织Foxp3的蛋白表达。结果：成功构建miR-125a-5p基因敲除小鼠,琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物为240 bp或0 bp单条带的为纯合型基因敲除（KO）小鼠,鉴定获得668 bp或428 bp单条带的为野生型（WT）小鼠,与预期的目的基因片段分子量大小一致,成功鉴定了miR-125a-5p基因敲除小鼠的基因型。选用雌、雄均为纯合子的基因敲除鼠进行配种繁育,获得了一批miR-125a-5p敲除纯合子基因型小鼠。与WT小鼠相比,miR-125a-5p基因敲除小鼠的脾脏组织中Foxp3表达降低（...     

p21、p53基因表达及其单核苷酸多态性与肝细胞肝癌的关系

目的探讨肝细胞肝癌患者p21和p53基因的表达及其单核苷酸的多态性，分析其与肝细胞肝癌的关系。方法选择50例肝细胞肝癌患者和50名健康志愿者，采用PCR技术检测两组外周血白细胞中的p21和p53基因的表达情况，采用PCR—RFLP方法检测p213’UTR位点以及p53intron6位点的基因多态性。结果肝癌组p21和p53mRNA表达显著高于对照组（P〈0．01）。饮酒能够增加p53mRNA的表达。p21基因3’UTRC／T位点C／T＋T／T型与60岁以上人群肝癌患病率升高有关。结论p21基因以及p53基因的高表达可能与肝细胞肝癌有一定的相关性，饮酒能够使肝癌患者1353基因的表达升高。     

SGT基因杂合缺失小鼠血液生理生化指标分析

目的分析SGT基因杂合缺失对不同年龄小鼠血液指标和代谢的影响。方法分别采集10周龄、26周龄SGT基因杂合缺失(SGT~(+/-))小鼠和野生型小鼠眼眶血液,用全自动血细胞分析仪和生化分析仪检测常用血液生理指标和生化指标,进行不同年龄和基因型间统计比较。结果与同基因型低龄小鼠对比,高龄小鼠多项血液生理生化指标均发生增龄性改变。与同龄野生型对照相比,10周龄SGT~(+/-)小鼠大血小板比率降低,未结合型胆红素浓度降低(P0.05),其余指标均未见统计学差异;26周龄SGT~(+/-)小鼠血小板计数、血小板比容和中性粒细胞计数降低,碱性磷酸酶、未结合型胆红素、胆固醇及甘油三酯等指标改变有统计学意义(P0.05)。结论SGT基因杂合缺失能够诱发高龄小鼠部分血液、血清生化指标的改变。     

染色体9p21遗传变异与中国汉族人群冠心病的关联性

目的：分析染色体9p21区域rs2383206和rs2383207位点遗传变异与中国汉族人群冠心病的关联性,探讨染色体9p21区域是否为冠心病的易感区域。方法：采用病例-对照方法,选择580例冠心病患者为病例组,选择性别、年龄与其匹配的非心血管病患者或正常人539例为对照组。采用Sequenom MassARRAY飞行时间质谱法对受试者rs2383206和rs2383207位点进行基因分型。结果：2组受试者吸烟史、腰臀比（WHR）、高血压病史、糖尿病史、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）和总胆固醇（TC）水平比较差异均有统计学意义（P<0.05）,病例组冠心病患者吸烟史、高血压病史和糖尿病史所占比例明显高于对照组（P<0.01）,WHR、SBP、DBP和TC水平也明显高于对照组（P<0.05或P<0.01）。rs2383206位点的基因型在病例组和对照组人群中频数比较差异无统计学意义（χ²=4.623,P>0.05）;rs2383207位点基因型在病例组和对照组人群中频数比较差异有统计学意义（χ²=8.936,P<0.05）,其中AA基因型在病例组频数（8.3%）分布明显低于对照组（13.6%）（P<0.05）。结论：吸烟、WHR、高血压病史、糖尿病史、SBP、DBP和TC可能是冠心病的危险因素;9p21区域rs2383207位点AA基因型可能是冠心病的保护基因型。