逆转录—多聚酶链反应检测丙型肝炎病毒RNA方法的建立及实…

对逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）的方法学进行了探讨，逆转录与多聚酶反应是否在同一反应管内进行，对ＨＣＶＲＮＡ检测结果没有明显影响，但在操作难易程度，ＴａｑＤＮＡ聚合酶的选择等方面有差别，在防止污染的前提下，套式ＰＣＲ可提高ＨＣＶＲＮＡ检出率（７．８３％）这对于极低水平ＨＣＶ感染的诊断十分重要，本文对受检标本的贮存方法也进行了初步探讨。     

原发性肝癌78例血清HCVRNA和抗HCV的观察

用逆转录－聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测了７８例原发性肝癌患者清丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ、抗ＨＣＶ和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）免疫学标物。     

血清丙肝病毒RNA二种提取方法的比较

２４例抗－ＨＣＶ阳性的血清标本，同时以硫氰胍半字符热酚变性方法和蛋白酶ＫＩ肖化法裂解提取丙肝病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ），并应用反转录半字符多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和套式多聚酶链反应（Ｎｅｓｔ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ。结果表明，硫氰胍半字符热酚法明显优于蛋白酶Ｋ消化法。前者处理标本的阳性检出率为５８．３％，后者处理标本的阳性检出率为３３．３％（Ｐ＜０．０５）；前者操作步骤简便，在试剂的保存等方面优于后者，故前者更适于临床ＨＣＶＲＮＡ的检测     

应用RT—PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５’端非编码（５’ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶ ＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测定－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），和ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶ ＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶ ＲＮＡ，更早地确诊丙型肝     

热变性法处理HCVRNA模板直接扩增

采用低浓度２－巯基乙醇作为裂解剂，配合高热变性处理血清等标本中丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶＲＮＡ）模板，将裂解上清直接逆转录，使ＨＣＶＲＮＡ转变为ｃＤＮＡ，再行套式多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增．５８份抗－ＨＣＶ阳性血清标本中，可检出３２份（５５．２％）ＨＣＶＲＮＡ，虽与常规的酸胍酚抽提方法所检出相当（即３０份被检出ＨＣＶＲＮＡ阳性，５１．７％），由于这种直接法省去了用酚及氯仿抽提和醇类沉淀等步骤，具有明显的实用价值。     

RT－PCR检测HCV RNA假阳性结果分析

ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ假阳性结果分析宋燕斌，崔晓红，潘卫，王锦红，戚中田丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是新近认识的一种单股正链ＲＮＡ病毒，在感染者外周血中的含量低［１］，目前认为逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＣＶＲＮＡ是诊断ＨＣＶ感染的最敏...     

慢性丙型肝炎患者混合感染庚型肝炎病毒的临床研究

目的 研究庚型肝炎病毒（HGV）混合感染对慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）临床、病毒复制及干扰素抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）疗效的影响及ＨＧＶ对干扰素治疗的反应。方法 以逆转录套式降合酶链反应（ＲＴ－nested PCR）检测９０例ＣＨＣ患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ，比较ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组９０例ＣＨＣ患者的临床资料和对干扰素治疗的反应。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性１８例，阳性率２０％，ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组ＣＨＣ患者在性别、年龄、病程、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）水平、ＨＣＶ ＲＮＡ水平和对干扰素治疗的反应等方面无明显差异。５例ＨＧＶ ＲＮＡ阳性ＣＨＣ患者接受干扰素治疗过程中，ＨＧＶ ＲＮＡ均转为阴性，停止治疗后１年，３例ＨＧＶ ＲＮＡ恢复治疗前水平。结论 混合感染ＨＧＶ对ＣＨＣ的临床、病毒复制及干扰素抗ＨＣＶ疗效无明显影响。ＨＧＶ对干扰素敏感，但停药后易复发。     

血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒检测比较

目的；了解慢性丙型肝炎患的血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒的存在及存在形式。方法：反转录多聚酶链反应技术检测１２４例慢性丙型肝炎患的血浆及ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ。结果：在７０例抗－ＨＣＶ及血浆ＨＣＶ ＲＮＡ阳性的患中有２１例（３０％）的患其ＰＢＭＣ内存在ＨＣＶ ＲＮＡ正链，仅１例存在ＨＣＶ ＲＮＡ负链，在５４例抗－ＨＣＶ阳性，血浆ＨＣＶ ＲＮＡ阴性的患中，仅有２例（３．７％）检出ＨＣＶ     

应用RT－PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５′端非编码（５′ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测抗－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶＲＮＡ，更早地确诊丙型肝炎。     

肝癌患者肝组织中丙型肝炎病毒的基因分型

肝癌患者肝组织中丙型肝炎病毒的基因分型［崔晓红等．中华医学杂志，１９９５；７５（２）：９２］用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌患者肝组织中的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，对其中１８例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用ＨＣＶ非结构区－５（Ｎ...     

维持性血液透析患者经血液传播嗜肝病毒感染状况

目的：探讨血液透析（血透）患者乙型（ＨＢＶ）、丙型（ＨＣＶ）、丁型（ＨＤＶ）、庚型（ＨＧＶ）和ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｔｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ）等经血液传播性病毒性肝炎感染状况。方法：对８０例血透患者和１２例血透工作人员应用酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）法检测ＨＢＶ两对半及ＨＣＶ、ＨＤＶ抗体;逆转录—套式聚合酶链反应（ＲＴｎＰＣＲ）检测血清ＨＧＶＲＮＡ;巢式ＰＣＲ检测ＴＴＶＤＮＡ。结果：８０例长期维持性血透患者中,经血液传播肝炎病毒感染５１例（６３８％）,其中ＨＢＶ阳性２１例（２６２…     

逆转录聚合酶链反应检测HCV RNA血标本保存条件分析

目的 确定用于丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ逆转录聚合酶链反应测定的血清（浆）标本的最佳收集和保存条件。方法 按的不同条件处理,用逆转录聚合酶链反应测定ＨＣＶ ＲＮＡ。和高压消毒的离心管与未用高压消毒的离心管收集、保存ＨＣＶ ＲＮＡ血清,其阳性检出率有差异（Ｐ〈０．０５）。血凝固后４ｈ离心分离血清对ＨＣＶ ＲＮＡ阳性检出率不造成明显改变（阳性率为８５％）;１２ｈ后检测则变化明显（阳性率降至７５％）。     

血液制品检测抗HCV阳性现象的初步探讨

丙型肝炎病毒抗体（抗ＨＣＶ）阴性的血浆，加工制成的丙种球蛋白、白蛋白、组织胺球蛋白成品，抗ＨＣＶ呈阳性反应，但用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测成品中丙型肝炎病毒核糖核酸（ＨＣＶ一ＲＮＡ）则全部阴性；部分抗ＨＣＶ阳性的血液制品经透析４８小时后，抗ＨＣＶ又转为阴性，提示所出现的抗ＨＣＶ，属于一种假阳性现象。     

肝炎病人血清、外周血单核细胞及肝脏中GBV-C/HGV负链RNA的检测

目的：研究２７例肝炎病人血清、外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）及肝脏中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正链及负链ＲＮＡ（复制中间体）的存在状况。方法：应用逆转录－巢式多聚酶链反应技术检测ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正、负链ＲＮＡ。结果：２７例病人中２１例病人血清、７例ＰＢＭＣ、１０例肝组织中检测到ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ正链ＲＮＡ,其中２例单一ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染者肝组织中检测到负链ＲＮＡ,在２７例病人血清及ＰＢＭＣ中均未检测到负     

肝癌患者肝组织中丙型肝炎病毒的基因分型

用逆转录－聚合酶链反应检测了４２例肝细胞癌患者肝组织中的丙型肝炎病毒ＲＮＡ，对１８例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用ＨＣＶ非结构区－５（ＮＳ５区）型特异性引物进一步做了ＰＣＲ分型。     

丙型肝炎病人外周血单个核细胞中HCVRNA的检测及临床意义

为了解感染丙型肝炎病毒后的外周血单个核细胞中是有丙肝病毒的存在及其意义。采用逆转录套式聚合酶链反应对２８例丙型肝炎病毒感染血清、外周血单个核细胞及其末次洗液中的ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果表明：２８例血清的ＨＣＶＲＮＡ全部阳性；２６例外血单个核的ＨＣＶＲＮＡ为阳性；２８例末次洗液的ＨＣＶＲＮＡ全部为阴性。ＨＣＶ可以感染外周血单个核细胞。提示外周血单个细胞中存在的ＨＣＶＲＮＡ在丙肝传播、复发、慢性化     

血清HCV RNA与抗—HCV关系研究

目的 研究血清ＨＣＶ ＲＮＡ与抗－ＨＣＶ之间的关系。方法 对５０例抗－ＨＣＶ阳性的丙型肝炎病人，用酶标仪测血清抗－ＨＣＶ ＯＤ值，同时用逆转录－套式－聚合酶链反应检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ。结果 ５０例抗－ＨＣＶ阳性丙型肝炎（ＨＣ）患者中３０例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性，即６０％的ＨＣ病人存在病毒血症；在不同的抗－ＨＣＶ ＯＤ值范围内ＨＣＶ ＲＮ检出率不等，ＨＣＶ ＲＮＡ检出率随抗－ＨＣＶ ＯＤ值增高而增加（     

逆转录巢式多聚酶链反应对输血后肝炎HCV核酸检测及临床意义

本文采用逆转录巢式多聚酶链反应（ＲＴ一ｎＰＣＲ）等法，对４９例输血后肝炎（ＰＴＨ）患者同时检测ＨＣＶＲＮＡ、ＨＢＶＤＮＡ及其有关血清学标志，结果显示：ＨＣＶ与ＨＢＶ感染率分别为８１．６％、３４．６％，其中双重感染者占２２．４％。抗一ＨＣＶ与ＨＣＶＲＮＡ符合率为７９．４％，抗一ＨＣＶ阴性患者中，４０％可检出ＨＣＶＲＮＡ，表明检测抗一ＨＣＶ对诊断排除ＨＣＶ感染有一定意义，但抗一ＨＣＶ阴性并不能排除ＨＣＶ感染。     

丙型肝炎病人外周血单个核细胞中HCV RNA的检测及临床意义

为了解感染丙型肝炎病毒后的外周血单个核细胞中是否有丙肝病毒的存在及其意义。采用逆转录套式聚合酶链反应对２８例丙型肝炎病毒感染者血清、外周血单个核细胞及其末次洗液中的ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果表明：２８例血清的ＨＣＶＲＮＡ全部阳性；２６例外周血单个核细胞的ＨＣＶＲＮＡ为阳性；２８例末次洗液的ＨＣＶＲＮＡ全部为阴性。ＨＣＶ可以感染外周血单个核细胞。提示外周血单个核细胞中存在的ＨＣＶＲＮＡ在丙肝传播、复发、慢性化及抗病毒治疗方面有重大意义。     

广西原发性肝癌与丙型肝炎病毒感染关系探讨

应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）法检测３０例原发性肝癌（ＰＨＣ）患者和３０例非肝病患者血清中的丙型肝炎病毒（Ｈｃｖ）ＲＮＡ和乙型肝炎病毒标志物（ＨＢＶ－Ｍ）。结果：ＰＨＣ组Ｈｃｖ－ＲＮＡ（＋）为２７％明显高于对照组（７％）（Ｐ＜０．０５），而ＰＨＣ组ＨＢｖＭ（＋）为８７％，明显高于对照组（２３％）（Ｐ＜０．０１）；ＰＨＣ组ＨＢＶ－Ｍ（＋）和ＨＢＶＭ（一）时ＨＣＶ－ＲＮＡ结果无差异（Ｐ＞０．０５）．提示广西ＰＨＣ发病与ＨＣＶ感染有一定关系。