互隔交链孢霉提取物261—B_2—3诱发人羊膜FL细胞UDS的研究

本文应用互隔交链孢霉261株提取物261—B_2—3诱发人羊膜FL细胞UDS,以研究其致突变性。按余应年等的方法,在~(14)C—TdR预标记的FL细胞中由提取物引起酸不溶性组分的HU抗性非程序性~3H—TdR掺入。用液闪计数器测量。以放射比~3H/~(14)C为UDS水平的反     

各种分化诱导剂对人白血病HL-60细胞中神经节苷脂合成及唾液酸转移酶的影响

作者采用[~(14)C]-半乳糖研究佛波酯(TPA)、二甲基亚砜(DMSO)、GM3(NeuAe-Gal-Gle-cer)等诱导HL-60细胞分化过程中神经节苷酯(Sg)合成及CMP-Neu Ac:LacCer唾液酸转移酶(ST1)活性的变化。TPA、GM3促进HL-60细胞合成[~(14)C]-Gg,也促进GM3的合成。DMSO抑制HL-60细胞合成[~(14)C]-Gg,但促进GM3的合成。各种制剂处理EL-60细胞后,均能使ST1活性升高,但GM3使ST1活性增加不明显,可能是终产物对ST1的反馈抑制。结果提示Gg(GM3)的生物合成和ST1的活性变化与HL-60细胞的分化增殖有关。     

DNA修复与急性非淋巴细胞性白血病幼稚细胞的DNA修复测定

本试验应用X射线、氮芥和马法兰作DNA修复的诱导剂,通过液闪法和放射自显影测定,对24例急性非淋巴细胞性白血病进行了DNA修复观察。结果表明:在剂量X线为700拉得、氮芥为5×10~(-5)M、马法兰为10(-3)M时,液闪CPM值较高(DNA修复率较高),4例放射自显影法测定结果相似,说明急性非淋巴细胞性白血病细胞DNA修复活性与使用诱导剂剂量有关。     

~(14)C-棉酚在大鼠睾丸亚细胞组分中的定量分布及作用位点的研究

~(14)C-棉酚在大鼠睾丸五种亚细胞组分中,以线粒体中含量最高,放射活性较其他组分高2～3倍,差别显著。~(14)C-棉酚和~3H-哇巴因双标记实验也表明,双标记的放射活性高峰均集中于线粒体,其次为细胞膜。这二种细胞组分的~(14)C和~3H放射活性均分别较其他组分高,差异显著。这有力地支持线粒体蛋白质容易与解偶联物质结合的论点,并为线粒体是棉酚的敏感靶子细胞器以及棉酚通过干扰线粒体功能而中断精子发生过程的假说提供了直接证据。     

人成纤维(2BS)细胞衰老过程中表皮生长因子感受性及其受体相关基因表达的研究

人体二倍体成纤维细胞传代培养的寿命有限,最终停止分裂进入不可逆的静止状态,这个过程称为细胞衰老,该细胞对生长因子刺激反应敏感,被广泛地用于研究细胞衰老与生长调控的相互关系。我们以氚-脱氧胸苷(~3H-TdR)参入细胞DNA为指征,研究了表皮生长因子(EGF)对年轻(低代),中年(中代)及衰老(高代)细胞DNA合成的影响,发现在无EGF刺     

田单克隆抗体免疫组化技术检测人类肿瘤S期细胞

本文报道了一种研究细胞动力学的非同位素方法—5溴脱氧尿苷(BrdUrd)免疫组化方法。本文用这一技术与经典的氚胸苷(~3HdThd)放射自显影术对比研究了23例人肿瘤组织的标记指数,前者结果为10.3±4.0%,后者为9.9±4.3%,二者结果在统计学上无显著性差异(P>0.05),表明这一技术可代替经典的~3HdThd 放射自显术影应用于细胞动力学研究。     

对应用~3H-胸苷参入试验分析药物作用方式的评价

文献中常有介绍,用标记的胸苷(TdR)或尿苷(UR)参入试验判断某种药物对DNA或RNA合成的影响。当TdR或UR参入被抑制时,一般认为DNA或RNA合成受抑制。我们在研究血卟啉衍生物(HpD)对癌细胞的光动力作用时,曾观察到它对~3H-TdR参入有很强的抑制作用,但主要是阻止~3H-TdR在细胞膜的转运,并不反映对DNA合成的抑制。本文应用两种类型抗癌药物(5-FU和氮芥)与HpD对比,观察其对~3H-TdR参入过程的影响,并对HpD的光动力效应作进一步分析。     

MAPK在葡萄糖及AngⅡ致血管平滑肌细胞增殖反应中的作用

目的: 研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径在葡萄糖(GS)和/或血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导大鼠动脉平滑肌细胞促增殖中的作用及其可能的调控机制. 方法: 实验以平滑肌细胞蛋白合成速率和蛋白含量为平滑肌细胞增殖的指标,以平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率表示细胞蛋白质合成速率,通过3H-胸苷(3H-TdR)反映平滑肌细胞DNA的代谢及细胞增殖情况;并通过给予PD098059及高浓度葡萄糖(HG)预处理,观察它们对细胞蛋白合成、DNA代谢及细胞增殖的影响. 结果: ① AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-胸苷掺入率明显增高;AngⅡ HG处理平滑肌细胞3H-胸苷掺入率显著增高. ② AngⅡ增加3H-胸苷掺入的作用可明显被PD098059所抑制;AngⅡ HG增高3H-胸苷掺入的作用也可被PD098059所抑制. ③ AngⅡ(10-7 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率明显增高;HG (25×10-3 mol/L)处理平滑肌细胞,3H-亮氨酸掺入率增加;AngⅡ HG处理平滑肌细胞3H-亮氨酸掺入率显著增加. ④ AngⅡ增加3H-亮氨酸掺入的作用可部分被PD098059所抑制;AngⅡ HG增加3H-亮氨酸掺入的作用可显著被PD098059所抑制. 结论: 应用MAPK的特异性抑制剂PD098059抑制血管平滑肌细胞的增殖,证明MAPK激活在GS和/或AngⅡ导致平滑肌细胞增殖反应中有重要作用.     

一种适合于筛选化学物质DNA-损伤作用的改良UDS检测法

哺乳类细胞非程序性DNA合成(UDS)的检测是一种很成功的化学物质致突变性/致癌性筛选试验。有一些在细菌诱变试验中呈低活性或无活性的诱变剂/致癌剂,在本试验中为阳性。最近证明可诱发小鼠皮肤癌、血管肉瘤、肺、肾、肝和肠腺癌的农药杀虫脒,在一组短期试验中,只有UDS试验获得阳性。因此,UDS试验     

维甲酸影响新生大鼠皮肤上皮基底细胞DNA及蛋白质合成的体外实验

本文研究了维甲酸(RA)对体外培养的新生大鼠皮肤上皮基底细胞DNA和蛋白质合成的影响。RA(16 μmol/L)明显降低基底细胞~3H-dT掺入;显著增加~3H-亮氨酸和~3H-组氨酸掺入细胞蛋白质。经聚丙烯酰胺凝胶电泳与双相电泳辅以放射自显影术,证实有5种分子量不同的蛋白质受RA诱导合成,其中3种蛋白质为细胞表面膜蛋白。用~3H-甘露糖标记细胞糖蛋白糖链,发现RA可促进~3H-甘露糖的掺入,而且细胞表面糖蛋白中~3H-甘露糖掺入量比对照组增加43％。结果提示RA抑制上皮基底细胞增殖,诱导细胞合成蛋白质,主要为蛋白质的转换率增强,以及增加糖蛋白糖链合成。     

各种分化诱导剂对人白血病HL-60细胞内中性糖脂合成的影响

作者采用[~(14)C]-标记的半乳糖研究HL-60细胞分化过程中中性糖脂的合成,以了解佛波酯(TPA)、二甲基亚砜(DMSO]、GM3(NeuAc-Gal-Glc-Cer)、GMI[Gal-GalNAc-(NeuAc)Gal-Glc-Cer]和硫脂对其生物合成的影响。TPA、GM3不但能诱导HL-60细胞分化为单核细胞,而且明显地增加[~(14)C]-半乳糖的掺入。TPAGM3在不同程度上促进[~(14)C]-标记的中性糖脂合成,其中主要促进二己糖基神经酰胺(GL2)合成。DMSO诱导HL-60细胞分化为粒细胞,不仅显著地抑制了[~(14)C]-半乳糖掺入,而且抑制了[~(14)C]-标记的中性糖脂的合成,但是促进-已糖基神经酰胺[GL1]的合成。这些结果提示中性糖脂的生物合成与HL-60细胞的分化有关。     

先锋霉素Ⅱ对培养的癌细胞DNA合成的影响

<正> 研究化学物质对癌细胞 DNA 或 RNA 作用形式来探讨癌发生的本质及治疗癌症的途径是十分有意义的。细胞的生物合成,如DNA 分子合成过程,可用放射性同位素标记的前体分子以放射自显影或液体闪烁计数技术示踪观察。胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA 分子的特殊前体,测定氘标记的胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)掺入到 DNA 分子中的放射性,能客观、灵敏地反映 DNA 合成的情况。本文通过测定掺入到小鼠腹水型肉瘤 S_(180)细胞的~3H—TdR 放射性,初步探讨先锋霉素Ⅱ对培养的癌细胞 DNA 合成的影响。     

用~3H-TdR掺入法研究小鼠体外培养骨髓细胞DNA代谢过程

研究细胞内DNA、RNA和蛋白质的代谢过程,可利用~3H标记的化合物:~3H-TdR,~3H-Urd和~3H-leu作示踪物,它们与正常的胸腺嘧啶核苷(TdR),尿嘧啶核苷(Urd)和亮氨酸(Leu)有着相同的生物化学性质,在细胞内DNA、RNA和蛋白质合成的过程中可以无选择地被吸收,并能取代正常的前身物而掺入细胞的代谢产物。由于细胞中新合成的DNA、RNA和蛋白质被~3H标记,因此可以根据细胞的放射强度测出标记化合物的掺入率。细胞中DNA、RNA和蛋白质的合成速率与这些被标记的特异前身物的掺入率相一致。用这种方法来研究活细胞内DNA、RNA、蛋白质代谢的动态过程具有简便、迅速、直观、准确等优点,可以免除对DNA、RNA、蛋白质分离提纯及定量测定等复杂过程。这一方法在生物学、特别是药理学研究方面有很大应用价值。     

丝裂霉素C处理NIH 3T3细胞做饲养层培养表皮细胞

70年代中期用放射致死的3T3细胞作为饲养层培养表皮细胞已取得成功。但由于受钴源条件所限使有些单位无法开展这一工作,为此我们采用丝裂霉素C处理代替~(60)Co照射细胞,并分析了丝裂霉素C的剂量对细胞的生长状态、DNA、     

苏拉明对培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的 探讨苏拉明(suramin)对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,aPE)DNA合成的影响，为防治增殖性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)提供理论依据。方法 将不同浓度的苏拉明加入培养的人RPE细胞，分别于48h、96h后用氚-标脱氧胸苷(tritium—labelled thymidine deoxyri-bose，^3H—TdR)掺入法测定DNA合成抑制率；以300mg／L苏拉明作用于RPE细胞，用流式细胞仪(flowe,cytometry，FCM)分析RPE细胞周期。结果 苏拉明在100～400mg／L范围内对培养的人RPE细胞DNA合成有明显的抑制作用，且具有剂量-效应及时间-效应关系；FCM显示苏拉明将RPE细胞阻抑于G2／M期。结论 苏拉明能抑制RPE细胞DNA合成，可作为防治PVR的药物进一步研究。     

甲醛对V79细胞DNA、RNA合成影响的体外实验研究

目的　研究甲醛对V79细胞DNA和RNA的损伤作用 ,探讨甲醛遗传毒性的分子机制。方法　中国仓鼠肺细胞 (V79)分别暴露于浓度为 75 ,15 0 ,30 0 ,6 0 0 μmol/L的甲醛中 ,1h、2h、4h ,采用3 H -胸腺嘧啶核苷 ( 3 H -TdR)、14 C -尿嘧啶核苷 ( 14 C UR)掺入技术检测甲醛致V79细胞DNA和RNA损伤情况。结果　所有 4个浓度组甲醛均明显影响细胞DNA和RNA的合成 ,3 H TdR和14 C UR掺入计数每分衰变数 (dpm值 )显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,并有明显的剂量 -效应关系 (P <0 .0 1)。细胞暴露在甲醛中 4h ,各浓度组3 H TdR和14 C UR掺入dpm值显著低于暴露于 1h和 2h各浓度组的dpm值 (P <0 .0 1)。 结论　甲醛可以影响V79细胞DNA和RNA合成 ,这对进一步研究甲醛遗传毒性的分子机制有重要意义     

人脾转移因子的研究——Ⅲ、转移因子三个组份的体外活性鉴定—~3H—胸苷掺入DNA实验

转移因子(TF)已知为介导细胞免疫的一种重要的因子。它的活性鉴定与活性成分国外近来虽已有报导,但是尚未得出明确的结论。 我们曾用~3H-胸苷掺入DNA及活性玫瑰花结实验测定人脾转移因子的体外活性,并用活性玫瑰花结实验检测TF三个组份(TF_Ⅰ、TF_Ⅱ、TF_Ⅲ)的活性。但是TF各     

人大肠息肉细胞DNA含量的细胞光度法分析

将单个细胞涂片连续进行~3HTdR-放射自显术和福尔根反应,先计算银粒标记的增殖细胞(S,G_2)的比例,再用细胞光度法测量未标记细胞(GI)的福尔根光密度。虽然受PHA刺激的活性淋巴细胞的标记指数达30.17％,但幼年性息肉不能参入同位素,各种腺瘤性息肉和腺瘤中只有少数标记细胞。以前中期(4C)淋巴细胞的相对DNA含量(24.06±2.67)为衡量标准,在与二倍体值(2C,12.03)比较后算出测量细胞的DI。5例幼年性息肉细胞的DNA含量为二倍体值(平均12.06,DT=1.00),5例腺瘤性息肉和腺瘤为超二倍体值(平均14.36,DI=1.19)。两类息肉的DNA含量差异显著。鉴于前者与腺癌无关,后者易于癌变。因此,不正常DNA含量或非整倍体性可能是细胞癌变的征兆。     

~(14)C标记大肠杆菌的生物合成及提纯的简单方法

为“EB病毒特异性DNA酶在鼻咽癌患者血清的检测”研究需要[1-3]，我们生物合成纯制了14C标记大肠杆菌DNAOqE．ColtDNA[3]．获得纯度及放射活性较高的[14C]DNAS．63lllg，解决了靠国外实验室提供［’‘CIE·O0liDANt’，‘I的问题及以后大量研究工作对此DNA的需要l’，“l胸腺呼陡脱氧核着酸为DNA恃有组分，如在大肠杆菌基础培养基中加人’‘C标记的胸腺吨院或胸昔（I‘勾TdR）培养大肠杆菌胸腺店陡缺陷株，因此株的生长必须外源胸奇的存在，它能有效地吸收w］TdR令人DNA中，使DNA含有’4C标记．［flyE．coltDNA可作为E…     

叶下珠对人肝癌细胞影响的研究

为研究叶下珠对人肝癌细胞SMMC7721的影响,采用噻唑蓝(MTT)还原法和氚标胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入法观察叶下珠提取物对人肝癌细胞SMMC7721细胞活性及DNA合成的影响。结果发现,经叶下珠提取物处理后,SMMC7721活力明显减弱,~3H-TdR掺入率明显降低,DNA合成抑制率与药物剂量呈线性关系。结论:叶下珠具有杀伤人肝癌细胞SMMC7721和抑制其增殖作用。