Cad11高和低表达肾癌细胞分选与Cad11对肾癌细胞迁移作用的影响

目的分选Ⅱ型成骨细胞型钙黏附蛋白(cadherin-11,Cad11)高和低表达的肾癌细胞786-O细胞群,并证实Cad11在肾癌细胞786-O中的迁移作用。方法将质粒pBMN-Ⅰ-GFP-Cad11转染于Phoenix细胞进行包装,之后感染786-O细胞,流式细胞仪分选后扩大培养建立786-LG细胞。将786-LG细胞经Cad11抗体2C7孵育后用BSA封闭,洗涤后加入标记APC的二抗,同时以786-LG细胞(未经任何处理)和786-LG细胞(只加入标记APC的二抗处理)作为阴性对照确定分选门,绿色荧光通道和红色荧光通道进行双参数分析,流式细胞仪分选技术筛选Cad11高和低表达的786-O肾癌细胞群,蛋白质印迹法检测分选细胞Cad11的表达。786-Cad11+和786-Cad11-细胞血清饥饿24h后接种于内室(细胞数为1×104),每组设3个复孔,Transwell细胞迁移实验和细胞结晶紫染色计数穿过小室的细胞数目,以穿过膜的细胞数目评估Cad11对其肾癌细胞786-O的迁移作用。结果成功构建786-LG细胞。流式细胞仪检测结果显示,786-LG细胞中Cad11阳性细胞亚群占细胞总数的75.98%。Cad11细胞群分选后,GFP+/APC+双阳性细胞和GFP+/APC-单阳性细胞分别占细胞总数的28.0%和20.1%。蛋白质印迹法检测结果表明,Cad11相对表达量786-LG细胞为0.25±0.02,786-Cad11+细胞为0.60±0.03,786-Cad11-细胞为0.10±0.01,差异有统计学意义,F=132.32,P<0.001。与786-LG细胞相比,两个细胞亚群786-Cad11+和786-Cad11-中Cad11蛋白的表达量均有明显变化,前者蛋白表达量升高至2.41倍(P=0.007),后者蛋白表达量降低至0.41倍(P=0.004),差异均有统计学意义。Transwell迁移实验结果表明,786-LG细胞迁移数目为114.33±4.09,786-Cad11+细胞迁移数目为139.00±5.19,786-Cad11-细胞迁移数目为77.67±3.71,差异有统计学意义,F=49.65,P=0.000 2。结论成功建立了高和低表达Cad11的786-O细胞模型,并证实Cad11的表达与肾癌细胞的迁移密切相关。     

留学生医学微生物教学的几点体会

本文针对多年的留学生教学中取得的经验、存在的一些问题及应对措施进行了总结和探讨。     

临床分离革兰阴性菌脂多糖脂质体的制备及免疫保护效应研究

目的制备临床分离的大肠埃希菌,铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌混合脂多糖脂质体并观察其免疫保护作用。方法采用逆向蒸发法制备细菌LPS脂质体,通过电镜观察其形状,粒径测定仪分析其粒径分布,鲎试验(LAL)测定其活性。用大肠埃希菌TH1菌株、铜绿假单胞菌P7菌株、肺炎克雷伯菌K11菌株混合脂质体免疫小鼠,以脂多糖(LPS)2倍完全致死量(LD100)和100倍半数致死量(LD50)活菌攻击小鼠,观察各组小鼠的存活情况。结果细菌LPS脂质体混悬液常温下呈乳白色,透射电镜下可见LPS脂质体颗粒呈规则的球形,粒径分布均匀,为300～464nm。LAL试验推算包封率为99.0%～99.9%。经TH1、P7、K11混合LPS脂质体免疫的小鼠接受TH1-LPS、P7-LPS、K11-LPS及其活菌攻击后显示具有免疫保护作用,其中TH1-LPS、P7-LPS及活菌攻击组小鼠存活率显著高于对照组(P<0.05)。结论多菌混合脂多糖脂质体对其相应菌种及LPS攻击具有免疫保护作用。     

医学微生物学实验教学体系改革

针对不同教学对象的特性,建立新型医学微生物学实验教学体系,以利于实现培养新世纪创新性人才目标。在新型实验教学体系下,通过制定个性化教学大纲,体现学生的学制和专业特色;通过丰富教学层次,增加综合性和设计性实验比重,提高学生的创新思维和逻辑分析能力;通过转变传统“上对下”的教学方式,体现学生的自主地位、调动学生的学习主动性。     

天津市军团菌病二例

自1976年美国费城爆发流行军团菌病并于1977年 Frases 等首次描述了军团菌病以来,至今已有30多个国家发现有军团菌病的存在。该病是由嗜肺军团菌引起,属需氧革兰氏阴性杆菌,该属已有43     

人大肠息肉细胞DNA含量的细胞光度法分析

将单个细胞涂片连续进行~3HTdR-放射自显术和福尔根反应,先计算银粒标记的增殖细胞(S,G_2)的比例,再用细胞光度法测量未标记细胞(GI)的福尔根光密度。虽然受PHA刺激的活性淋巴细胞的标记指数达30.17％,但幼年性息肉不能参入同位素,各种腺瘤性息肉和腺瘤中只有少数标记细胞。以前中期(4C)淋巴细胞的相对DNA含量(24.06±2.67)为衡量标准,在与二倍体值(2C,12.03)比较后算出测量细胞的DI。5例幼年性息肉细胞的DNA含量为二倍体值(平均12.06,DT=1.00),5例腺瘤性息肉和腺瘤为超二倍体值(平均14.36,DI=1.19)。两类息肉的DNA含量差异显著。鉴于前者与腺癌无关,后者易于癌变。因此,不正常DNA含量或非整倍体性可能是细胞癌变的征兆。     

酸解——凝胶色谱法制备志贺菌O抗原多糖

本法在去除蛋白与核酸的条件下以 2 5 4nm作为脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)凝胶色谱检出波长 ,得到较高纯度志贺菌LPS。LPS经乙酸水解后 ,仍以 2 5 4nm作为O抗原多糖 (O -polysaccharide ,OPS)凝胶色谱的检出波长 ,可获得纯度优于常规方法且具较好免疫反应性的OPS ,该OPS与牛血清白蛋白 (bovineserumalbumin ,BSA)结合后具有较好免疫原性。     

实体肿瘤中的细菌

目前怀疑发热的癌症病人有细菌感染,它是恶性肿瘤病人治疗中的主要困难之一。虽然在发热的中性粒细胞减少症病人中,其细菌感染往往是全身性的,难以发现显著的感染源,而在实体肿瘤中的感染则可解释为发热的一个     

青年教师在医学微生物学留学生教学中的优势

就英语、计算机、年龄三个方面阐述了青年教师在医学微生物学留学生教学中的优势，提出大力提倡青年教师从事留学生教学的观点。