山奈酚和芒柄花黄素对H9c2细胞缺氧损伤的保护作用

目的探讨山奈酚和芒柄花黄素对缺氧损伤的H9c2心肌细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量和肌酸激西酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响。方法将H9c2细胞分为对照组、缺氧模型组、阳性药夹竹桃组、山奈酚组、芒柄花黄素组,采用CCK8法检测细胞活力,采用试剂盒检测上清液中CK、LDH活性和细胞内SOD活性,MDA含量。结果与正常组相比,模型组细胞活力显著降低(P 0. 01);山奈酚、夹竹桃和芒柄花黄素能升高模型组细胞活力(P 0. 01,P 0. 01,P 0. 05)。与正常组相比,模型组CK、LDH释放量和MDA活性显著升高(P 0. 01),SOD活性下降(P 0. 05)。山奈酚组CK、LDH释放量均明显低于模型组(P 0. 01),芒柄花黄素组CK、LDH释放量低于模型组(P 0. 01,P 0. 05)。山奈酚与芒柄花黄素均能显著降低模型组MDA活性(P 0. 01),升高模型组SOD活性(P 0. 05)。结论山奈酚和芒柄花黄素能通过降低CK、LDH活性和MDA含量,升高SOD活性对缺氧损伤心肌细胞发挥保护作用。     

罗格列酮对2型糖尿病大鼠心肌NADPH氧化酶亚单位表达的影响

目的：探讨罗格列酮对2型糖尿病大鼠心肌p22phox和NOX4 mRNA表达的影响,分析罗格列酮保护心脏的可能机制。方法：36只雄性Wistar大鼠,随机分为3组：健康对照组（A组,10只）,糖尿病组（B组,13只）和罗格列酮治疗组（c组,13只）,采用高糖高脂饮食小剂量链脲佐菌素（STZ）的方法诱导糖尿病模型。用免疫组织化学法检测心脏组织中CTGF和Cu-Zn-SOD的表达,用实时荧光定量PCR法测定心肌p22phox和NOX4rnRNA的表达。结果：糖尿病组（B组）大鼠大鼠心肌CTGF和NADPH氧化酶亚单位p22phox和NOX4mRNA表达水平均较正常对照组（A组）显著升高（P〈0．05）,心肌Cu-Zn—SOD显著低于A组。罗格列酮治疗后,糖尿病大鼠（c组）心肌CTGF和NADPH氧化酶亚单位p22phox和NOX4mRNA表达水平显著降低（P〈0．05）,心肌Cu-Zn—SOD显著高于B组。结论：罗格列酮抑制2型糖尿病大鼠心肌NADPH氧化酶亚单位p22phox和NOX4mRNA的过度表达,升高心肌Cu—Zn-SOD的表达水平,降低心重,体重（心脏肥大指数）和心肌CTGF表达,延缓糖尿病心肌病的进展,可能是其心脏保护作用机制之一。     

芝麻素对高糖损伤SH-SY5Y细胞的保护效果及机制

目的研究芝麻素(sesamin)对高糖所致人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用及其机制。方法SH-SY5Y细胞接种于含100 mmol/L葡萄糖的培养基并与10、20、40μmol/L芝麻素共同孵育36 h,MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平,ELISA检测DNA片段及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性。2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的水平,试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)活性。光度法检测细胞烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶活性,实时荧光定量检测NADPH氧化酶亚基p47phox mRNA表达。Western blot法检测p47phox蛋白表达。结果芝麻素可增加高糖作用下SH-SY5Y细胞的存活率,抑制细胞LDH释放,阻止高糖诱导的DNA断裂,降低Caspase-3活性。同时芝麻素能够增加高糖作用下SH-SY5Y细胞内SOD、CAT和GSH的活性,清除细胞内的ROS,抑制NADPH氧化酶活性及p47phox mRNA和蛋白的表达。结论芝麻素对高糖诱导SY5Y细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抗氧化和抑制NADPH氧化酶活性有关。     

金匮肾气汤对单侧输尿管梗阻大鼠氧化应激和自噬的影响

目的探讨金匮肾气汤对单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾间质纤维化中氧化应激和自噬的影响。方法将24只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金匮肾气汤组(1.8 g·kg~(-1))、依那普利组(10 mg·kg~(-1));左侧输尿管结扎术后第1天开始灌胃给药(10 mL·kg~(-1)),每日1次,第21天处死大鼠。取梗阻肾组织,采用Masson染色法观察肾组织病理改变;化学荧光法检测梗阻肾组织活性氧(ROS)含量;Western Blot法检测NOX4、p22~(phox)、p47~(phox)、LC3II/I、p62、p-mTOR/mTOR及p-AMPK/AMPK等蛋白在梗阻肾组织中的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠梗阻肾组织间质胶原沉积增多,ROS含量显著增高(P0.01),NOX4、p22~(phox)和p47~(phox)蛋白表达显著上调(P0.01),LC3II/LC3I蛋白表达比例显著下调、p62蛋白表达显著上调(P0.01),AMPK磷酸化显著减少、mTOR磷酸化明显增加(P0.01)。与模型组比较,金匮肾气汤组大鼠梗阻肾组织间质胶原沉积减少,ROS含量显著降低(P 0.05),NOX4、p22~(phox)和p47~(phox)蛋白表达显著下调(P 0.05),LC3II/LC3I蛋白表达比例上调、p62蛋白表达下调(P 0.05),AMPK磷酸化增加、mTOR磷酸化减少(P 0.05)。结论金匮肾气汤可能通过抑制NOX4激活,进而通过AMPK-mTOR途径促进梗阻肾组织自噬,从而改善UUO导致的肾间质纤维化。     

基于TGF-β1信号通路研究小檗碱联合芒柄花黄素抑制鼻咽癌细胞迁移的作用机制

目的 研究小檗碱联合芒柄花黄素对鼻咽癌细胞迁移的影响,探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信号通路在其效应中的作用。方法 采用实时无标记细胞功能分析仪监测小檗碱和芒柄花黄素单用及联合使用对鼻咽癌5-8F、6-10B细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell实验检测TGF-β1信号通路激活后,小檗碱联合芒柄花黄素抑制细胞迁移效应的变化;采用Western blotting检测TGF-β1信号通路关键蛋白和迁移相关蛋白的表达。结果 与对照组比较,小檗碱和芒柄花黄素单用可抑制5-8F和6-10B细胞增殖,小檗碱(5、10μmol/L)和芒柄花黄素(5、10μmol/L)联合作用于5-8F和6-10B细胞后,显示小檗碱联合芒柄花黄素抑制鼻咽癌细胞增殖以协同效应为主;小檗碱联合芒柄花黄素显著降低鼻咽癌细胞TGF-β1和Smad3蛋白表达水平(P<0.05、0.01)。采用TGF-β1激活TGF-β1信号通路后,小檗碱联合芒柄花黄素抑制鼻咽癌细胞迁移的效应显著降低(P<0.01);与小檗碱10μmol/L+芒柄花黄素1...     

芒柄花素的植物雌激素作用研究

目的:探讨芒柄花素的雌激素样作用及其可能机制。方法:选取当归、黄芪、红三叶草中含有的黄酮类物质之一——芒柄花素,利用ER阳性T47D细胞,检测其对细胞增殖速率、分裂增殖指数以及ER亚型表达的影响,评价芒柄花素的植物雌激素活性。结果:MTT增殖试验结果显示,1×10-7~1×10-6mol.L-1芒柄花素不能促进人乳腺癌细胞T47D的体外增殖;在ICI182,780抑制试验中,芒柄花素可能能够与ICI182,780协同作用抑制T47D细胞体外增殖;流式细胞术测定细胞周期结果显示,1×10-7~1×10-6mol.L-1芒柄花素对T47D细胞的分裂增殖指数没有影响;芒柄花素有增强T47D细胞ERα表达的作用(P0.05)。结论:芒柄花素能够在体外条件下增强T47D细胞ERα表达,具有植物雌激素样作用,但该物质不能促进T47D细胞的体外增殖。     

大黄虫丸对H2O2诱导大鼠肝星状细胞氧化应激的影响

目的研究大黄■虫丸对H_2O_2诱导大鼠肝星状细胞氧化应激的影响,并探讨其分子机制。方法制备大鼠大黄■虫丸血清和正常血清;将肝星状细胞(HSCs)分为正常血清低浓度H_2O_2(50 nmol/L)组、大黄■虫丸血清低浓度H_2O_2组、正常血清高浓度H_2O_2(100μmol/L)组和大黄■虫丸血清高浓度H_2O_2组,应用化学荧光和流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平。蛋白质免疫印迹实验中,将HSCs分为正常血清组、大黄■虫丸血清组、正常血清低浓度H_2O_2(50 nmol/L)组和大黄■虫丸血清低浓度H_2O_2组,以检测ROS生成相关分子RAC1、p67~(phox)、p22~(phox)和p-ERK的表达。结果正常血清高浓度H_2O_2组和大黄■虫丸血清高浓度H_2O_2组细胞内均有较强ROS荧光,但两组之间差异无统计学意义(P0.05);大黄■虫丸血清低浓度H_2O_2组细胞的ROS荧光强度明显弱于正常血清低浓度H_2O_2组(P0.01);与正常血清组比较,正常血清低浓度H_2O_2组RAC1、p67~(phox)、p22~(phox)和p-ERK蛋白表达水平均显著升高(P0.01);与正常血清低浓度H_2O_2组比较,大黄■虫丸血清低浓度H_2O_2组RAC1、p67~(phox)、p22~(phox)和p-ERK蛋白表达下调(P0.01)。结论大黄■虫丸可能通过调控RAC1、p67~(phox)、p22~(phox)和p-ERK等分子,参与拮抗H_2O_2诱导的氧化应激,阻止ROS的生成,并最终抑制HSCs活化、增殖,防治肝纤维化。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对Ang Ⅱ诱导的心肌细胞氧化应激的影响

 目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone ⅡA sulfonate, STS)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞氧化应激反应的影响及其机制。方法 培养新生大鼠心肌细胞,建立Ang Ⅱ诱导的心肌细胞氧化应激反应模型。用活性氧(reactive oxygen species, ROS)敏感的二氮荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）探针测定胞内ROS水平。酶联免疫分析法测定细胞培养物上清中8-羟脱氧鸟苷（8-OHdG）含量。以细胞存活率、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性作为反应心肌细胞损伤的指标。比色法测定还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶(NADPH oxidase, NOX)活性。蛋白质印迹法（Western-blot）测定NOX亚单位p47 ^phox表达。结果 Ang Ⅱ能显著提高心肌细胞内DCF荧光信号强度,降低细胞存活率及SOD活性,同时上调培养上清液LDH活性及MDA含量。以上氧化应激相关指标能被各浓度STS抑制。进一步研究发现,STS能抑制Ang Ⅱ上调的NADPH氧化酶活性及亚单位p47 ^phox表达。结论 STS可以抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞氧化应激损伤反应,机制可能与下调NADPH氧化酶活性及亚单位p47 ^phox表达有关。
     

槲皮素保护H2O2诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤的作用机制

目的:探讨在H_2O_2诱导的氧化应激损伤中槲皮素对H9C2心肌细胞存活率、活性氧分子(ROS)、还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶、细胞凋亡等关键因子的影响,初步阐明槲皮素对心肌细胞的保护机制。方法:H_2O_2刺激H9C2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,分为正常组、模型组、槲皮素组,采用噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞活力,活性氧检测试剂盒检测槲皮素处理后ROS变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测细胞氧化应激反应、细胞凋亡机制相关分子[NADPH氧化酶-4(NOX-4),NADPH氧化酶亚单位p22phox,B淋巴细胞瘤-2原瘤基因(Bcl-2),Bcl-2相关X基因(Bax),半胱胺酸蛋白酶-8(Caspase-8)]基因和蛋白表达水平。结果:10μmol·L-1槲皮素具有显著的抗氧化、抗凋亡作用。与模型组比较,槲皮素组细胞存活率明显提高(P0.05),ROS水平与细胞凋亡率明显降低(P0.05,P0.01)。此外,槲皮素组中Bcl-2,NOX-4基因表达上调(P0.05);p22phox,Bax,Caspase-8基因表达明显下调(P0.05)。同时槲皮素能够抑制Bax,p22phox蛋白的表达(P0.05),上调磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),Bcl-2蛋白的表达(P0.05)。结论:10μmol·L-1槲皮素能有效减少H_2O_2介导的心肌细胞氧化损伤,进而抑制心肌细胞凋亡。该机制可能是通过调节NADPH氧化酶亚型NOX-4与p22phox,减少ROS生成,激活PI3K表达,升高Bcl-2实现。     

山奈酚和芒柄花黄素对缺氧/复氧条件下H9C2心肌细胞活性氧水平的影响

目的:分析中药单体山奈酚和芒柄花素对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响。方法:采用缺氧复氧的造模方法对H9C2心肌细胞进行造模,选用夹竹桃作为阳性药组,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验阐明含药培养基对实验体系的影响,并初步确定中药单体的给药浓度;通过倒置荧光显微镜观察经乙酰乙酸双氯荧光素(DCFH-DA)染色的H9C2心肌细胞的荧光强弱,即细胞内活性氧的变化;通过流式细胞仪进一步测定细胞内活性氧的定量变化。结果:通过MTT实验确定各组给药浓度为10-6mol/L,用DCFH-DA法染色后经倒置荧光显微镜观察各组细胞内绿色荧光有显著变化,即正常组镜下观察细胞内的荧光很暗,模型组细胞内的绿色荧光很强,发光细胞数量也相对很多,给药组细胞内绿色荧光介于两组之间,与阳性药组相似;流式细胞仪测定结果显示除山奈酚组外,各给药组与模型组相比都有统计学差异,其中以芒柄花素组、混合组、夹竹桃组最为显著。结论:山奈酚和芒柄花素对心肌细胞有一定的保护作用,能够改善细胞贴壁的状态,增加细胞存活率,降低心肌细胞内ROS水平。     

益气养阴活血汤调控SIRT1/AMPK通路改善短暂高糖所致肾损伤作用机制研究

目的:研究益气养阴活血汤通过调控HK-2细胞沉默信息调节因子1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路缓解短暂高糖所致细胞持续性氧化应激损伤的作用机制。方法:对低糖组、高糖组、短暂高糖组、短暂高糖+益气养阴活血汤组的HK-2细胞,蛋白质印迹法(Western blot)测Sirt1、腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶亚基p67~(phox)蛋白表达水平及AMPK活性,DCF法测活性氧(ROS)水平,观察各组上述因子的表达差异。结果:相较低糖组,高糖组、短暂高糖组的Sirt1蛋白表达及p AMPK-α2/AMPK-α2比例均下降,p67~(phox)蛋白表达、ROS水平均上升(P0.05);相较短暂高糖组,短暂高糖+益气养阴活血汤组SIRT1蛋白表达、p AMPK-α2/AMPK-α2比例均上升,p67~(phox)蛋白表达、ROS水平下降(P0.05)。结论:益气养阴活血汤可通过缓解短暂高糖引起HK-2细胞Sirt1表达下降及AMPK活性下降,抑制NADPH氧化酶活性增加、减少短暂高糖所致的持续性氧化应激反应,从而减轻短暂高糖导致的肾损伤。     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏P47phox基因mRNA表达影响的实验研究

目的:探讨灯盏花素对SD大鼠糖尿病模型肾组织中p47phox基因mRNA表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为糖尿病模型(A)组、糖尿病灯盏花素治疗(B)组和正常对照(C)组,取其肾组织采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法检测各组SD大鼠肾组织中p47phox基因的mRNA表达,并进行比较分析.结果:(1)对A组、B组和C组样本实时荧光定量PCRCT(cycle time)均数进行方差分析,差别有统计学意义(P＜0.05).2周时A组和B组肾组织中p47phox基因的mRNA表达分别是C组的1.92倍及1.87倍,6周时分别是C组的5.69倍及4.08倍.(2)与C组比,A组和B组的血肌酐、尿素氮和肾重/体重有升高.A组和B组相比,B组下降,相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:(1)糖尿病时肾脏p47phox基因的mRNA表达水平升高,氧化应激增强.(2)灯盏花素治疗降低肾脏p47phox基因的mRNA表达水平,抑制氧化应激.(3)灯盏花素治疗后糖尿病SD大鼠的血肌酐,尿素氮水平降低,肾重/体重降低.提示灯盏花素治疗能改善糖尿病SD大鼠肾脏功能,抑制肾脏肥大.     

益心解毒方对AngⅡ诱导的H9c2细胞NADPH氧化酶表达作用机制的研究

目的:采用H9c2心肌细胞系,研究益心解毒方含药血清抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞Nox2、Nox4型NADPH氧化酶表达的影响。方法:取对数生长期的H9c2心肌细胞,同步化后进行实验,实验分为正常组、模型组、益心解毒方组、二亚苯基碘(DPI)对照组。采用乙酰乙酸双氯荧光素(DCFH-DA)法测定H9c2心肌细胞内活性氧(ROS)水平;RT-PCR法和Western-blot法测定Nox2亚基和Nox4亚基的表达量。结果:研究发现,与模型组比较,益心解毒方含药血清能抑制ROS和Nox2、Nox4亚基表达的增高,其中益心解毒方低剂量组作用最为显著(P<0.01,P<0.05)。结论:结合课题组前期的动物实验研究表明,益心解毒方在改善心功能、减缓心室重构等方面药效显著,而抑制NADPH氧化酶活性,降低心肌ROS水平可能是其发挥药效的重要机制。     

三维同步荧光光谱法测定黄芪中芒柄花素的含量

目的建立三维同步荧光光谱法测定黄芪中芒柄花素含量的方法。方法通过扫描三维同步荧光光谱,确定同步荧光光谱的最佳波长间隔,用同步荧光测定不同产地的黄芪中芒柄花素含量。结果同步荧光光谱的最佳波长间隔为130 nm,芒柄花素在0.005~1.28μg·m L~(-1)范围内同步荧光强度与发射波长具有良好的线性关系,标准曲线的回归方程为:IF=252.554 62c+4.953 09,r=0.999 6。结论该方法重复性良好,准确度高,检测限低,结果可靠,可用于黄芪中微量芒柄花素的测定。     

人参三七川芎提取物延缓内皮细胞复制性衰老的机制研究

目的:探讨人参三七川芎提取物对内皮细胞复制性衰老(humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs)的影响.方法:体外培养的HUVEC-2C传代至第8代,造成内皮细胞复制性衰老模型.细胞分为4组,8代衰老模型组、维生素E(Vit E)组(50 mg·L~(-1))、中药高、低(50,20 mg·L~(-1))剂量组,采用衰老相关卢β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法观察细胞衰老改变,流式细胞仪分析细胞周期,激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)含量,硝酸还原酶法检测培养液一氧化氮(NO)和抗超氧阴离子水平,Western-blot法检测各组细胞AngII1型和2型受体(AT_1R和AT_2R),NAD(P)H氧化酶p47phox的蛋白表达.结果:8代衰老模型组β-gal染色阳性细胞数明显增多,细胞停滞在G_0/G_1期,激光共聚焦显微镜下ROS荧光强度明显增强,培养液中抗超氧阴离子、NO含量减少,p47phox,AT_1R,AT_2R蛋白表达上调.给予高、低剂量中药处理后,可明显改善细胞的衰老状态,β-gal染色阳性细胞数减少,G_0/G_1期细胞减少,G_2/M期细胞增加,ROS荧光强度减弱,抗超氧阴离子、NO含量较8代衰老模型组增加,p47phox,AT_1R,AT_2R蛋白表达下调,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论:人参三七川芎提取物能够延缓内皮细胞复制性衰老,通过活性氧途径下调NADPH氧化酶p47phox的表达,最终使ROS产生减少;同时,中药提取物还能降低衰老内皮细胞AT_1R,AT_2R的表达,改善内皮功能,这可能是益气活血中药延缓内皮细胞衰老的主要原因之一.     

D159687减轻神经元氧化应激损伤的作用机制研究

目的研究D159687对过氧化氢(H_2O_2)所致的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法实验分为正常对照组、模型组、D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组。将HT22细胞株接种于96孔板,对照组采用10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养,其他组加入不同浓度的D159687进行干预培养,后经H_2O_2损伤。CCK-8法测定各组细胞存活率,Western blot法检测Caspase-3和NADPH氧化酶亚基gp91phox、p47phox表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并测定各组细活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果模型组细胞存活率、SOD活性均显著低于正常对照组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著高于正常对照组(P均0.05);D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组细胞存活率、SOD活性显著高于模型组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著低于模型组(P均0.05)。结论在0.5～4μmol/L浓度范围内,D159687浓度依赖性地拮抗H_2O_2所致HT22细胞损伤,同时抑制HT22细胞凋亡,这种作用可能与其抑制NADPH氧化酶关键亚基gp91phox和p47phox蛋白表达有关。     

基于氧化应激探讨通脉降脂丸对2型糖尿病大血管病变影响的实验研究

目的:观察通脉降脂丸对糖尿病模型大鼠2型糖尿病大血管病变氧化应激的影响。方法:采用对4个月龄雄性Wistar大鼠一次性腹腔注射STZ结合饮水添加Nω-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)0.1 mg·m L-1·d-1及高脂饲料喂饲的方法复制2型糖尿病大血管病变模型。成模后大鼠随机分成模型组、阿托伐他汀钙组、通脉降脂丸组,另设15只正常Wistar大鼠为正常对照组。给药时间30 d。实验结束后测定大鼠血检测血清F2-异前列烷、血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MAD)、总抗氧化能力(T-AOC)等活性水平;检测醛糖还原酶AR、NADPH氧化酶亚基的活性;RT-PCR法测定主动脉NADPH氧化酶亚基p22phox m RNA及p47phox m RNA表达。结果:通脉降脂丸组大鼠血清SOD、GSH-Px、T-AOC等活性较模型组升高(P0.05),阿托伐他汀和通脉降脂丸均能降低主动脉p47phox m RNA、p22phox m RNA的表达水平(P0.05)。结论:通脉降脂丸可提高糖尿病GK大鼠血清SOD、GSH-Px、T-AOC活性,下调主动脉p47phox m RNA、p22phox m RNA表达,可能因此减轻糖尿病大血管病变机体的氧化应激水平,这可能是通脉降脂丸治疗T2DM大血管病变的可能机制之一。     

红花黄素A调控核受体TR3胞内移位抑制氧化应激对心肌细胞的损伤

目的探究红花黄素A调控核受体TR3胞内移位抑制氧化应激对心肌细胞的损伤。方法利用H_2O_2诱导H9c2心肌细胞建立心肌氧化应激模型,不同浓度红花黄素A处理H_2O_2诱导H9c2心肌细胞24 h,CCK-8法检测心肌细胞存活率,流式细胞法检测心肌细胞凋亡率,比色法检测SOD、MDA水平,免疫荧光法观察TR3在细胞内的定位,Western blot法检测TR3在细胞核和线粒体表达以及凋亡通路蛋白Bcl-2、Bax、cl caspase-9表达。结果与模型组相比,红花黄素A增加H9c2心肌细胞存活率,降低细胞凋亡率,升高SOD水平,降低MDA水平,促进Bcl-2蛋白表达,抑制Bax、cl caspase-9蛋白表达(P0.05,P0.01),呈浓度依赖性。随着红花黄色素A的浓度增加,TR3核受体的移位逐渐减小并聚集在细胞核附近。结论红花黄素A能够调控核受体TR3从细胞核向线粒体的转移,并通过抑制线粒体凋亡通路,从而减轻氧化应激对心肌细胞的损伤。     

交趾黄檀异黄酮类化学成分研究

目的研究交趾黄檀Dalbergia cochinchinensis中异黄酮类化学成分。方法采用正、反相以及凝胶柱色谱等方法进行分离纯化,通过理化性质及波谱分析进行结构鉴定。结果从交趾黄檀心材70%乙醇提取物中分离得到14个异黄酮类成分,分别鉴定为紫苜蓿酮(1)、7-羟基-2′,4′-二甲氧基异黄烷(2)、4,7,2′-三羟基-4′-甲氧基异黄烷醇(3)、5,7-二羟基-2′,3′,4′-三甲氧基二氢异黄酮(4)、芒柄花黄素(5)、2′-羟基芒柄花黄素(6)、2′,5,7-三羟基-4′-甲氧基异黄酮(7)、染料木黄酮(8)、3′-O-methylviolanone(9)、3-hydroxyvestitone(10)、鹰嘴豆芽素A(11)、后莫弗里素(12)、美迪紫檀素(13)、isodarparvinol B(14)。结论化合物3、4、12为首次从该属植物分离得到,化合物1~2、6~11、13~14首次从该植物分离得到。     

黄连生物碱对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞的影响

该文主要研究4种黄连生物碱对小鼠腹腔巨噬细胞的影响,初步探讨其调节机制。MTT法检测黄连生物碱对巨噬细胞活力的影响;采用中性红实验和NBT法分别测定生物碱对巨噬细胞吞噬和呼吸爆发活性的影响;通过实时荧光定量PCR检测黄连生物碱处理后巨噬细胞呼吸爆发相关基因的表达量;用荧光分光光度计检测生物碱对巨噬细胞膜蛋白构象的影响。结果显示,4种黄连生物碱对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能都有不同程度的提高,小檗碱效果最好;小檗碱、黄连碱和巴马汀对佛波酯(PMA)刺激的小鼠腹腔巨噬细胞呼吸爆发活性具有正向调节的作用,并且能够在一定程度上增加巨噬细胞中PKC,p40phox或p47phox mRNA的表达量,而表小檗碱对呼吸爆发没有显著性影响;黄连生物碱能够改变巨噬细胞膜蛋白的构象,其中小檗碱作用最强。结果表明黄连生物碱可能通过改变巨噬细胞膜蛋白构象从而激活巨噬细胞,增强其吞噬和呼吸爆发功能,而且,生物碱对巨噬细胞呼吸爆发的调节机制还可能与相关基因PKC,p40phox和p47phox mRNA的表达有关。