葛根素对高糖诱导HUVEC-12细胞氧化损伤的保护作用

目的研究葛根素对高糖诱导人脐静脉内皮细胞HUVEC-12氧化损伤的保护作用。方法用含100 mmoL/L葡萄糖和10、25、50μmo L/L葛根素的培养基共同孵育HUVEC-12细胞36 h后,测定细胞存活率,细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性,细胞内活性氧(ROS)水平及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)水平。qPCR检测细胞中SIRT1、PGC-1α mRNA表达,酶联免疫吸附法检测培养液中SIRT1、PGC-1α蛋白含有量。结果葛根素可增加HUVEC-12细胞存活率,抑制细胞LDH释放,清除ROS,降低MDA含有量与Caspase-3活性,增加SOD、CAT活性和GSH含有量。同时,葛根素还能提高SIRT1、PGC-1α mRNA表达及蛋白含有量。结论葛根素能通过激活SIRT1/PGC-1α通路来保护高糖诱导HUVEC-12细胞氧化损伤。     

益气养阴活血汤调控SIRT1/AMPK通路改善短暂高糖所致肾损伤作用机制研究

目的:研究益气养阴活血汤通过调控HK-2细胞沉默信息调节因子1(Sirt1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路缓解短暂高糖所致细胞持续性氧化应激损伤的作用机制。方法:对低糖组、高糖组、短暂高糖组、短暂高糖+益气养阴活血汤组的HK-2细胞,蛋白质印迹法(Western blot)测Sirt1、腺嘌呤二核苷酸(NADPH)氧化酶亚基p67~(phox)蛋白表达水平及AMPK活性,DCF法测活性氧(ROS)水平,观察各组上述因子的表达差异。结果:相较低糖组,高糖组、短暂高糖组的Sirt1蛋白表达及p AMPK-α2/AMPK-α2比例均下降,p67~(phox)蛋白表达、ROS水平均上升(P0.05);相较短暂高糖组,短暂高糖+益气养阴活血汤组SIRT1蛋白表达、p AMPK-α2/AMPK-α2比例均上升,p67~(phox)蛋白表达、ROS水平下降(P0.05)。结论:益气养阴活血汤可通过缓解短暂高糖引起HK-2细胞Sirt1表达下降及AMPK活性下降,抑制NADPH氧化酶活性增加、减少短暂高糖所致的持续性氧化应激反应,从而减轻短暂高糖导致的肾损伤。     

D159687减轻神经元氧化应激损伤的作用机制研究

目的研究D159687对过氧化氢(H_2O_2)所致的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法实验分为正常对照组、模型组、D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组。将HT22细胞株接种于96孔板,对照组采用10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养,其他组加入不同浓度的D159687进行干预培养,后经H_2O_2损伤。CCK-8法测定各组细胞存活率,Western blot法检测Caspase-3和NADPH氧化酶亚基gp91phox、p47phox表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并测定各组细活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果模型组细胞存活率、SOD活性均显著低于正常对照组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著高于正常对照组(P均0.05);D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组细胞存活率、SOD活性显著高于模型组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著低于模型组(P均0.05)。结论在0.5～4μmol/L浓度范围内,D159687浓度依赖性地拮抗H_2O_2所致HT22细胞损伤,同时抑制HT22细胞凋亡,这种作用可能与其抑制NADPH氧化酶关键亚基gp91phox和p47phox蛋白表达有关。     

海藻糖抑制短暂缺氧性神经损伤的体外研究

目的:探讨海藻糖对糖氧剥夺所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及可能机制。方法:体外培养人SH-SY5Y细胞,建立糖氧剥夺损伤模型。通过乳酸脱氢酶(LDH)释放、锥虫蓝染色来检测细胞存活情况;采用DCFH-DA染色检测细胞内活性氧含量。结果:与对照组相比,海藻糖不仅能够明显抑制缺氧缺糖(OGD)条件下的神经细胞死亡(P0.05),还能抑制过氧化氢所致SH-SY5Y细胞死亡。结论:海藻糖对糖氧剥夺所致SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,其机制可能与其抑制氧化应激反应有关。     

芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:培养H9C2大鼠心肌细胞,与芝麻素含药血清或空白血清预孵12 h后,加入AngⅡ孵育24 h。MTT法检测心肌细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测BCL-2、BAX、Caspase-3、SOD和p47phox蛋白表达水平,比色法测定细胞总抗氧化能力、细胞内活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量。结果:芝麻素含药血清预孵可显著改善AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡和活力损伤(P0.05或P0.01),下调BAX、Caspase-3及p47phox蛋白表达,上调BCL-2、SOD蛋白表达水平(P0.05或P0.01)。此外,芝麻素含药血清可显著提高心肌细胞总抗氧化能力降低细胞内ROS和培养上清MDA含量(P0.05或P0.01)。空白血清对上述指标均无显著影响。结论:芝麻素可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡和活力损伤,其机制与改善氧化应激状态、调节BCL-2/BAX蛋白表达水平,进而下调Caspase-3蛋白表达有关。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对Ang Ⅱ诱导的心肌细胞氧化应激的影响

 目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinone ⅡA sulfonate, STS)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞氧化应激反应的影响及其机制。方法 培养新生大鼠心肌细胞,建立Ang Ⅱ诱导的心肌细胞氧化应激反应模型。用活性氧(reactive oxygen species, ROS)敏感的二氮荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）探针测定胞内ROS水平。酶联免疫分析法测定细胞培养物上清中8-羟脱氧鸟苷（8-OHdG）含量。以细胞存活率、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性作为反应心肌细胞损伤的指标。比色法测定还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶(NADPH oxidase, NOX)活性。蛋白质印迹法（Western-blot）测定NOX亚单位p47 ^phox表达。结果 Ang Ⅱ能显著提高心肌细胞内DCF荧光信号强度,降低细胞存活率及SOD活性,同时上调培养上清液LDH活性及MDA含量。以上氧化应激相关指标能被各浓度STS抑制。进一步研究发现,STS能抑制Ang Ⅱ上调的NADPH氧化酶活性及亚单位p47 ^phox表达。结论 STS可以抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞氧化应激损伤反应,机制可能与下调NADPH氧化酶活性及亚单位p47 ^phox表达有关。
     

黄精地龙方对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤中的保护作用研究

目的探讨黄精地龙方(RPEWM)对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导分化,再经Aβ25-35造成细胞老年痴呆(AD)损伤,观察不同浓度RPEWM提取液对损伤后的细胞形态学、细胞增殖情况及培养液中MDA、LDH含量,细胞中SOD、GSH-Px活性和细胞内游离钙含量、Caspase-3酶活性的影响。结果 RPEWM提取液在10~125 mg/L浓度范围内能明显抗细胞AD损伤,促进细胞增殖;RPEWM提取液30,60,90 mg/L均能明显降低MDA、LDH含量及细胞内钙离子、Caspase-3酶活性,升高细胞内SOD、GSH-Px酶活性,且呈剂量依赖性。结论 RPEWM对分化的SHSY5Y细胞Aβ25-35损伤有良好的保护作用,对AD有一定治疗作用。     

连二亚硫酸钠诱导SY5Y细胞缺糖缺氧模型及泽泻白术药对的作用观察

目的：建立连二亚硫酸钠（Na₂S₂O₄）诱导SH-SY5Y神经细胞缺氧缺糖损伤模型,进行提取物筛选,对筛选出的有活性提取物初步探讨其对神经细胞的保护作用。方法：CCK-8检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放,超氧化歧化酶活性（SOD）,丙二醛含量（MDA）,荧光探针负载法检测细胞内活性氧（ROS）和细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）荧光强度。结果：连二亚硫酸钠诱导SH-SY5Y细胞损伤模型上进行提取物初筛,发现泽泻白术药对提取物有一定活性。与模型组比较,提取物组细胞的LDH 释放降低,SOD活性升高,MDA含量降低,细胞内ROS水平和[Ca²⁺]i荧光强度均减弱。结论：泽泻白术药对提取物对连二亚硫酸钠致SH-SY5Y神经细胞损伤有一定的脑保护作用。     

异甘草素对氢过氧化枯烯所致神经母细胞瘤损伤的影响

目的 研究异甘草素(ISL)对氢过氧化枯烯(cumenehydroperoxide,CHP)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y氧化损伤的影响.方法 ISL处理体外培养的SH-SY5Y细胞24 h后,添加不同浓度的CHP继续培养24 h,进行细胞形态观察、细胞活力和细胞凋亡检测、细胞内活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量测定.结果 CHP引起并促进人神经母细胞瘤SH-SY5Y氧化损伤,ISL可拮抗CHP所致的细胞的凋亡,降低CHP所致的ROS水平和MDA含量的增高.结论 ISL抑制脂质过氧化物的产生并降低细胞凋亡率,对人神经母细胞瘤SH-SY5Y氧化损伤有保护作用.     

柔筋止颤片通过抑制ROS通路减轻M PP+诱导S H-SY5Y细胞凋亡实验研究

目的:研究柔筋止颤片保护由MPP⁺诱导的SH-SY5Y 细胞损伤的影响及其机制。方法: MTT检测细胞活性,DHE检测O₂^-,DCFH-DA检测ROS,Western blot检测Caspases蛋白表达水平。结果:SH-SY5Y细胞经MPP⁺(500 μmol/L)处理24 h后细胞活性降低(P<0.05),O₂^-和ROS水平均升高(P<0.05),Clevaed Caspase-3、Clevaed Caspase-8和Clevaed Caspase-9蛋白水平均增高(P<0.05)。柔筋止颤片(25 nmol/L)预处理24 h可以显著维持细胞活性降低(P<0.05),降低O₂^-和ROS的水平(P<0.05),Clevaed Caspase-3、Clevaed Caspase-8和Clevaed Caspase-9蛋白水平下降(P<0.05)。结论: 体外实验证实柔筋止颤片可减少MPP⁺诱导的O₂^-和ROS水平升高以减少线粒体的损伤,并减少Caspases蛋白的活化以抑制细胞凋亡程序的启动,进而保护MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞活性降低,为进一步优化柔筋止颤片的研究提供了实验依据。