基于Hedgehog信号通路的野黄芩苷抑制HT-29细胞源性结肠肿瘤干细胞体外自我更新的研究

目的:研究半枝莲中主要成分野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞(CSC)自我更新的影响,并从Hedgehog信号通路阐明其作用机制。方法:从HT-29人结肠腺癌上皮细胞株中分拣出结肠肿瘤干细胞(HT-29CSC),并对其进行无血清悬浮培养。用CCK-8试验研究野黄芩苷对HT-29CSC活性的影响;用干细胞球形成试验研究野黄芩苷对HT-29CSC体外自我更新的影响;用qRT-PCR研究野黄芩苷对结肠肿瘤干细胞标记物基因CD133和增殖基因ki-67表达的影响,和对结肠肿瘤干细胞中Hedgehog信号通路基因Ptch1和Gli1表达的影响。结果:终浓度为40μg/ml、80μg/ml和160μg/ml的野黄芩苷可以浓度依赖性地抑制HT-29CSC体外活性,抑制HT-29CSC体外自我更新,下调结肠肿瘤干细胞标记物基因CD133和增殖基因ki-67 mRNA水平,抑制结肠肿瘤干细胞中Hedgehog信号通路基因Ptch1和Gli1 mRNA转录。结论:野黄芩苷可以抑制结肠肿瘤干细胞活性和自我更新,其机制在于抑制Hedgehog信号通路的活性。     

半枝莲通过Hedgehog信号通路抑制结肠肿瘤干细胞自我更新

目的:研究半枝莲对结肠肿瘤干细胞(CSC)自我更新的影响,从Hedgehog信号通路阐明其作用机制。方法:制备半枝莲乙醇提取物,从HT-29人结肠腺癌上皮细胞中分拣出结肠CSC,用Aqueous法,研究半枝莲对结肠CSC体外活性的影响,用干细胞球形成试验研究半枝莲对结肠CSC自我更新的影响。用qRT-PCR研究半枝莲对结肠CSC标记物基因CD133和Lgr5表达的影响,和对结肠CSC中Hedgehog信号通路基因Ptch1和Gli1表达的影响。结果:终浓度为125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml的半枝莲乙醇提取物可以剂量依赖性地抑制结肠CSC体外活性,抑制结肠CSC自我更新,下调结肠CSC标记物基因CD133和Lgr5 mRNA水平,降低结肠CSC中Hedgehog信号通路基因Ptch1和Gli1 mRNA转录。结论:半枝莲可以抑制结肠CSC自我更新,其机制在于抑制Hedgehog信号通路的活性。     

白花蛇舌草通过Wnt信号通路抑制结肠肿瘤干细胞分化

目的:研究白花蛇舌草对结肠肿瘤干细胞(CSC)分化的影响,从Wnt信号通路阐明其作用机制。方法:制备白花蛇舌草乙醇提取物,从人结肠肿瘤组织中消化、分拣出结肠CSC。用干细胞球形成试验研究白花蛇舌草对结肠CSC活性的影响,用含胎牛血清的DMEM/F-12培养基诱导CSC分化,并研究白花蛇舌草对结肠CSC分化的影响,以及对结肠CSC中CK20和CD133 mRNA水平的影响,用软琼脂克隆形成试验研究白花蛇舌草对结肠CSC体外转化的影响,用qRT-PCR研究白花蛇舌草对结肠CSC中Wnt信号通路基因β-catenin和TCF4表达的影响。结果:终浓度为125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml的白花蛇舌草乙醇提取物可以剂量依赖性地抑制结肠CSC球形成,抑制结肠CSC分化,下调结肠CSC中CK20和CD133 mRNA水平,抑制结肠CSC体外转化,并降低结肠CSC中β-catenin和TCF4 mRNA水平。结论:白花蛇舌草可以抑制结肠CSC分化,其机制在于抑制Wnt信号通路的活性。     

甘草酸对骨髓间充质细胞诱导为多潜能干细胞重编程关键基因表达的影响

目的:观察甘草酸作用于骨髓间充质干细胞(BMSCs)后对成体细胞向诱导多潜能干细胞(inducedpluripotent stem cells,iPS)转化的关键基因Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog mRNA表达的影响,探索将BMSCs等成体细胞藉由中药提取物诱导为iPS的无病毒载体、无基因整合的方法.方法:培养BMSCs,分别加入6.25 μmol/L、12.5 μmol/L甘草酸,并设置空白对照组,培养15 d、30 d后检测Oct4,Sox2,c-Myc,Klf4,NanogmRNA的表达.结果:甘草酸6.25μmol/L培养15 d,能升高BMSCs细胞Nanog、c-Myc、Oct4、Sox2mRNA表达,且Nanog与正常组比较差异有统计学意义;培养30 d,Nanog、Sox2、c-Myc,虽与正常组比较差异均无统计学意义,但仍高于正常;甘草酸12.5μmol/L培养15 d对BMSCs Klf4、Sox2、c-Myc、Nanog、Oct4 mRNA表达无明显影响,培养30 d可促进BM-SCs、c-Myc、Nanog mRNA的表达,与正常组比较差异有统计学意义.结论:甘草酸能增加对骨髓间充质细胞表达iPS诱导的关键性基因Nanog等的表达,而Nanog阳性的iPS细胞在基因表达谱上很难与胚胎干细胞区分出来,因此我们认为甘草酸可能对BMSCs向iPS转化具有促进作用.     

去甲斑蝥素诱导肿瘤干细胞凋亡作用研究

目的探究去甲斑蝥素(NCTD)对肿瘤干细胞促凋亡作用。方法分别以UMUC-3膀胱癌和Hep G2肝癌细胞为研究对象,通过无血清、低吸附、单克隆的方法筛选肿瘤干细胞(CSC),实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测CSC干性标志物表达变化,MTS法检测NCTD及紫杉醇(PTX)对CSC的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 2种细胞经筛选获得成球生长细胞克隆,其干性基因NANOG、OCT4、ABCG2、CD133、CD34表达明显升高,释放入含血清培养基后干性基因表达下调。经筛选所得的CSC对PTX高度耐药,但对NCTD耐药性低。NCTD可诱导CSC凋亡,但对干性基因表达没有显著影响。结论 NCTD诱导凋亡杀伤CSC,但对CSC分化没有显著影响。     

黄芩素在伊立替康抑制结肠癌细胞增殖中的作用研究

目的:研究黄芩素在伊立替康抑制结肠癌细胞增殖中的作用及相关机制。方法:用结肠癌HT-29细胞作为研究对象。以50、100、200 μmol/L黄芩素、5 μmol/L伊立替康分别处理结肠癌HT-29细胞。MTT实验和平板克隆实验检测细胞增殖和克隆形成能力; Western blotting法实验检测Src激酶、Yes相关蛋白(YAP)及大肿瘤抑制因子激酶1(LATS1)磷酸化蛋白表达; 免疫荧光实验检测细胞YAP表达分布。结果:50 μmol/L黄芩素组、100 μmol/L黄芩素组、200 μmol/L黄芩素组均能增加伊立替康对HT-29细胞的增殖和克隆抑制作用。50 μmol/L黄芩素组、100 μmol/L黄芩素组、200 μmol/L黄芩素组均可下调结肠癌HT-29细胞p-Src蛋白表达,上调p-YAP、p-LATS1蛋白表达。200 μmol/L黄芩素组能增加结肠癌HT-29细胞的细胞质YAP分布。结论:黄芩素通过抑制Src-YAP信号通路增强伊立替康对结肠癌细胞的抑制作用。     

黄芩苷对结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠IL-6/STAT3信号转导通路的影响

目的:探讨黄芩苷对结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠IL-6/STAT3信号转导通路的影响。方法:选取SPF级健康雄性昆明种小鼠96只,采用人结肠癌HT-29细胞悬液右前肢腋窝处皮下注射建立结肠癌移植瘤模型。将小鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷低剂量组、黄芩苷中剂量组、黄芩苷高剂量组及阳性对照组,各16只,均腹腔注射给药10 ml/kg、1次/d,连续14 d。检测比较各组肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率,肿瘤组织细胞凋亡指数(AI),血清IL-6、IL-10水平,以及肿瘤组织IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与模型组比较,各组小鼠抑瘤率、肿瘤组织AI较高,且黄芩苷低剂量组<黄芩苷中剂量组<黄芩苷高剂量组<阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,各组小鼠肿瘤体积和质量、血清IL-6、IL-10水平、肿瘤组织IL-6、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达水平较低,且黄芩苷低剂量组>黄芩苷中剂量组>黄芩苷高剂量组>阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:黄芩苷能剂量依赖性的抑制结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡,其作用可能与抑制IL-6/STAT3信号转导通路活性有关。     

基于AQP3介导结肠水液代谢探讨便塞通合剂通便作用的实验研究

目的:探讨BST含药血清对体外培养的人结肠上皮细胞系HT-29细胞中的AQP3表达的调节效应。方法:36只成年健康SD大鼠,雌雄各半,随机分为超纯水组、BST低剂量组、BST中剂量组、BST高剂量组。低、中、高剂量组用药量分别为11.67、23.34和35.00 g/kg。连续灌胃7 d后麻醉SD大鼠,经腹主动脉采血制备含药血清。体外培养HT-29细胞并给予不同浓度BST含药血清培养液24 h,采用Western Blot及RT-PCR检测AQP3蛋白及mRNA的表达。结果:低、中、高剂量BST含药血清均能下调HT-29细胞AQP3蛋白及mRNA表达水平(P0.01),且呈量效关系。结论:BST含药血清通过影响HT-29细胞AQP3的基因转录与翻译过程,下调AQP3基因mRNA与蛋白表达水平。提示BST可能作用于AQP3的调控通路从而调节肠道的水液代谢,起到抑制结肠水分吸收、增加结肠内容物水分含量的作用,这可能是BST的通便机制之一。     

片仔癀对人结肠癌HT-29细胞Pim-1和Pim-2mRNA表达的影响

目的 探讨片仔癀对人结肠癌HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA表达的影响.方法 分别用不同剂量的片仔癀干预体外培养人结肠癌HT-29细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响:RT-PcR检测药物作用后HT-29细胞Pim-1和Pim-2 mRNA的表达.结...     

不同治则中药单体对体外培养神经干细胞分化的影响

[目的]研究不同治则中药对体外培养大鼠神经干细胞分化及成熟的影响。[方法]体外培养胎鼠神经干细胞，按适当浓度接种于24孔板，以β-tublin代表非成熟神经元marker，以tau代表成熟神经元marker，RT-PCR方法检测β-tublin、tau的表达，观察黄芩苷、栀子苷，黄芪甲苷、三七总皂苷对神经干细胞分化及成熟的影响。[结果]结果表明，黄芩苷、栀子苷能诱导神经干细胞特异性分化成神经元，而联合应用黄芪甲苷、三七总皂苷能进一步促进分化神经元的成熟。[结论]不同治则中药，针对神经再生的增殖、分化过程，联合用药，具有促进神经再生的作用。     

基于Hedgehog信号通路的熊果酸诱导结直肠癌SW480细胞凋亡的机制研究

目的研究熊果酸通过经典Hedgehog信号通路影响人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法通过显微镜观察熊果酸对SW480细胞形态的影响;采用MTT比色法检测熊果酸对细胞活力的影响;细胞划痕实验检测熊果酸对细胞迁移的影响;Hoechest/PI染色法观察熊果酸对细胞凋亡的影响;荧光探针法检测熊果酸对细胞线粒体膜电位的影响;Caspase活性检测试剂盒检测熊果酸对细胞凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9的影响;蛋白免疫印迹法检测Hedgehog信号通路相关蛋白SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc、Su Fu及细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果 SW480细胞经熊果酸给药后形态发生改变;细胞迁移能力显著下降;线粒体膜电位降低;细胞核出现致密浓染;Caspase-3、Caspase-9活性升高;SW480细胞发生凋亡;Hedgehog信号通路相关蛋白Su Fu的表达水平升高,SHh、Gli1、Ptch1、Smo、c-Myc的表达水平下降;细胞凋亡相关蛋白Bax的表达水平升高,Bcl-2的表达水平下降。结论熊果酸对SW480细胞的生长、增殖具有抑制作用,通过抑制Hedgehog信号通路的激活促进SW480细胞凋亡。     

Curcumin Suppresses Lung Cancer Stem Cells via Inhibiting Wnt/β‐catenin and Sonic Hedgehog Pathways

Cancer stem cells (CSCs) are highly implicated in the progression of human cancers. Thus, targeting CSCs may be a promising strategy for cancer therapy. Wnt/β‐catenin and Sonic Hedgehog pathways play an important regulatory role in maintaining CSC characteristics. Natural compounds, such as curcumin, possess chemopreventive properties. However, the interventional effect of curcumin on lung CSCs has not been clarified. In the present study, tumorsphere formation assay was used to enrich lung CSCs from A549 and H1299 cells. We showed that the levels of lung CSC markers (CD133, CD44, ALDHA1, Nanog and Oct4) and the number of CD133‐positive cells were significantly elevated in the sphere‐forming cells. We further illustrated that curcumin efficiently abolished lung CSC traits, as evidenced by reduced tumorsphere formation, reduced number of CD133‐positive cells, decreased expression levels of lung CSC markers, as well as proliferation inhibition and apoptosis induction. Moreover, we demonstrated that curcumin suppressed the activation of both Wnt/β‐catenin and Sonic Hedgehog pathways. Taken together, our data suggested that curcumin exhibited its interventional effect on lung CSCs via inhibition of Wnt/β‐catenin and Sonic Hedgehog pathways. These novel findings could provide new insights into the potential therapeutic application of curcumin in lung CSC elimination and cancer intervention. Copyright © 2017 John Wiley & Sons, Ltd.     

益气活血方对胃癌前病变大鼠胃黏膜Sonic Hedgehog信号通路的影响

目的:研究益气活血方对1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)诱导的新生大鼠胃癌前病变胃黏膜组织Sonic Hedgehog(Shh)信号通路的影响。方法:48只雄性乳鼠随机分为正常组8只,造模组40只。造模组灌服800mg/L的MNNG 0.1mL/只,正常组灌服等量0.9%氯化钠溶液,共10d。23周后将造模组随机均分为模型组,中药高、中、低剂量组,环耙明组。正常组、模型组灌服0.9%氯化钠溶液10mL/kg,中药高、中、低剂量组分别灌服38.4、19.2、9.6g/kg的益气活血方流浸膏,环耙明组腹腔注射0.2mg/kg环靶明,均每日1次,12周后HE染色观察胃黏膜组织病理学变化,免疫组化检测胃黏膜PCNA的表达,qRT-PCR法检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc mRNA的表达,Western Blot检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc、p-c-Myc蛋白表达。结果:与模型组比较,益气活血方高、中、低剂量组和环耙明组大鼠胃黏膜炎症及异型增生程度均显著减轻,PCNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Ptch1及SUFU mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),Shh、Smo、Gli-1、CyclinD1及p-c-Myc蛋白的相对表达量显著降低而Ptch1及SUFU蛋白的表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:益气活血方可能通过下调Shh信号通路的表达起到对胃癌前病变的防治作用。     

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

Scutellarin attenuates human-neutrophil-elastase-induced mucus production by inhibiting the PKC-ERK signaling pathway in vitro and in vivo

The aim of this study was to investigate the influence of scutellarin on mucus production induced by human neutrophil elastase (HNE) and the possible in vitro and in vivo mechanisms. To this purpose, cells were incubated with saline, scutellarin or gefitinib for 60 min and exposed to 0.1 μM HNE for 24 h. After being pretreated respectively with saline, scutellarin or gefitinib, rats were challenged intratracheally with HNE by means of nebulization for 30 days. The expression of mucin (MUC) 5AC, protein kinase C (PKC), and extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) was assessed by ELISA, RT-PCR or Western blotting. The results showed that scutellarin inhibited MUC5AC mRNA and protein expressions induced by HNE in a concentration-dependent manner in vitro. In the in vivo model, scutellarin significantly attenuated MUC5AC mRNA expression and goblet cell hyperplasia in rats treated with HNE for 30 days, as well as decreased the phosporylation of PKC and ERK1/2 compared to the HNE control group. Therefore, our study showed that scutellarin could prevent mucus hypersecretion by inhibiting the PKC-ERK signaling pathway. Inhalation scutellarin may be valuable in the treatment of chronic inflammatory lung disease.     

伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响

目的研究伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞的增殖及细胞周期的影响。方法通过MTT法比较在31.25μmol/L、62.50μmol/L、125μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1000μmol/L共6个浓度的伪士的宁培养24小时、48小时、72小时后对HT-29细胞增殖的抑制作用;通过显微镜细胞观察法检测细胞生长状态;利用流式细胞术检测250μmol/L伪士的宁对HT-29细胞周期的影响。结果伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,1000μmol/L培养72小时作用最显著,抑制率为97.47%;随着伪士的宁浓度增加,作用时间增大,HT-29细胞密度逐渐变小,局部可见固缩细胞或死亡细胞。伪士的宁(250μmol/L)作用于HT-29细胞后,与空白组相比,G1期细胞数量明显增加,S期细胞数量不变,G2期细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05),表明伪士的宁可诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,诱导细胞凋亡。结论伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞增殖具有显著抑制作用,且其作用呈现时间依赖和剂量依赖关系,其抑制作用机制可能与阻滞细胞周期有关。     

Cox-2和Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达和意义

目的探讨环氧化酶-2(Cox-2)和Ki-67的表达与子宫内膜癌的关系。方法应用免疫组织化学Envision法检测37例增生期子宫内膜、16例非典型增生子宫内膜、58例子宫内膜癌中Cox-2和Ki-67的表达。结果Cox-2、Ki-67表达阳性率在子宫内膜癌组明显高于非典型增生子宫内膜组和增生期子宫内膜组(P<0.01)。在高中分化组,Cox-2、Ki-67表达率明显低于低分化组(P<0.05)。Cox-2表达与内膜癌的临床分型以及肌层浸润深度无关(P>0.05),Ki-67表达随临床分期以及分化程度的增加而增强(P<0.05)。结论Cox-2和Ki-67可作为判断子宫内膜癌的分化程度以及预后的较好指标。     

食管鳞癌中Livin及相关蛋白的表达及意义

目的探讨食管鳞癌组织中Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA的表达及其与临床病理指标和预后的关系。方法采用原位杂交方法和微波EliVisionTM免疫组织化学法检测78例食管鳞癌组织中Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA蛋白的表达情况,并与38例癌旁正常食管黏膜组织进行比较。结果在食管鳞癌组织中Livin和Ki-67分别表达定位于细胞浆和细胞核,Livin mRNA阳性反应主要定位于细胞浆,其表达明显高于正常食管黏膜组织(P<0.05)。Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA的表达与淋巴结转移、分化程度及病理分期有关(P均<0.05),三者之间表达呈正相关(P均<0.05)。结论 Livin、Ki-67蛋白和Livin mRNA在食管鳞癌呈高表达,且与食管鳞癌的发生、发展及浸润转移有关,可作为判断食管鳞癌生物学行为和预后的重要指标。