加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型气道重塑及转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的:观察加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型气道重塑及转化生长因子(TGF)-β1/Smad信号通路的影响。方法:选取30只雄性SD大鼠并随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组、布地奈德组及中药组,除正常组外其余组以卵蛋白致敏、雾化激发方法建立哮喘大鼠模型,除正常组和哮喘组外其余均予地塞米松干预并逐步撤减,布地奈德组予以普米克令舒雾化,中药组予以加减乌梅丸颗粒灌胃。光镜下观察各组大鼠肺组织病理形态学改变,测定气道壁面积百分比(Wat%)、气道平滑肌面积百分比(Wam%),免疫组织化学法比较各组Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)表达水平,蛋白质印迹法和荧光定量PCR法比较TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7蛋白及基因表达水平。结果:与正常组比较,哮喘组大鼠气道壁及平滑肌层明显增厚,管腔变窄,Wat%、Wam%升高,差异有统计学意义(P<0.05),CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白及基因表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05),Smad7表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与哮喘组比较,地塞米松组Wat%降低,差异有统计学意义(P<0.05),CollagenⅠ、CollagenⅢ表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1、Smad3蛋白及基因表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与地塞米松组比较,中药组Wat%降低,差异有统计学意义(P<0.05),CollagenⅠ、CollagenⅢ表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05),TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白及基因表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加减乌梅丸颗粒可通过调控TGF-β1/Smad信号通路从而减少气道平滑肌增生以及CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白沉积,抑制气道壁增厚,延缓气道重塑的发展。     

基于TGF-β1/Smad2/3信号通路研究芪参六味方对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的:采用芪参六味方干预自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化(MF)模型,观察其对大鼠MF的影响并探讨其作用机制。方法:SHR大鼠15只,分为模型组、中药组和氯沙坦钾组,每组5只。另魏-凯二氏大鼠(WKY)5只作为对照组。干预12周后检测各组大鼠超声心动图,处死后取左室心肌组织进行相关检测。采用Masson染色及苦味酸-天狼猩红染色,观察心肌组织胶原含量与分布;采用Western blot法测定各组大鼠心肌组织中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1、转化生长因子(TGF)-β1、Smad2、Smad3蛋白的表达;采用RT-PCR法检测TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA的表达。结果:干预12周后,与模型组比较,中药组镜下胶原纤维明显减少,排列较均匀,E/E’、心肌组织胶原纤维面积百分比、CollagenⅠ/CollagenⅢ明显降低(P<0.05),CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-9、TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达量均降低(P<0.05),T...     

虎杖苷对TGF-β1诱导的人类肺泡上皮A549细胞EMT的影响

目的探讨虎杖苷对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人类肺泡上皮A549细胞生长及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的作用机制。方法体外培养A549细胞,随机分成5组:空白组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别加入普通培养液、含5ng/mL TGF-β1的培养液、含浓度为50μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液、含浓度为100μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液、含浓度为150μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液进行干预,观察并记录不同时间段细胞形态变化;MTT法检测虎杖苷最佳药物浓度;蛋白质印迹法(Western blot)、实时PCR(Real-time PCR)检测上皮标志物E-cad、间质标志物Vimentin蛋白及mRNA表达水平。结果倒置相差显微镜观察到虎杖苷和TGF-β1干预后A549细胞由原来的鹅卵石状上皮形态转变成梭形,且细胞间隙变大,细胞间的连接变得松散,对照组较为明显,低、中、高剂量组比对照组细胞形态稍饱满;48h中剂量组虎杖苷对TGF-β1诱导的A549细胞EMT抑制作用最明显。在虎杖苷和TGF-β1作用下,E-cad蛋白及mRNA表达总体呈下调趋势(P0.05),与对照组比较,各药物组E-cad蛋白及mRNA表达下调幅度较小,且48h比24h明显。而Vimentin蛋白及mRNA表达总体呈上调趋势,与对照组比较,各药物组Vimentin蛋白及mRNA表达上调的幅度较小,且48h比24h明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论虎杖苷能抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程,并存在时间和剂量依赖性,具有抑制肺纤维化的作用。     

抗纤灵方药物血清对骨髓来源成纤维细胞表型转化的影响

目的探讨抗纤灵方对肾间质纤维化(RIF)的作用机制。方法将抗纤灵方煎至含生药3.2g/ml、福辛普利0.33mg/ml给大鼠灌胃,正常组给予等量蒸馏水灌胃,分别制备抗纤灵方血清、福辛普利血清和正常血清。用DMEM培养基稀释血清,分为正常血清组、福辛普利组、抗纤灵组、转化生长因子-β1(TGF-β1)组、TGF-β1+福辛普利组和TGF-β1+抗纤灵组。体外培养大鼠肾组织骨髓来源的成纤维细胞(FBS),采用酶联免疫吸附法和双重荧光定量法检测骨髓来源的FBS表型转化标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)及其mRNA表达。结果 TGF-β1组α-SMA、CollagenⅠ及α-SMAmRNA、CollagenⅠmRNA表达水平较正常血清组明显增强(P<0.05或P<0.01),TGF-β1+福辛普利组和TGF-β1+抗纤灵组α-SMA、CollagenⅠ及α-SMAmRNA、CollagenⅠmRNA表达水平均低于TGF-β1组(P<0.05或P<0.01)。结论抗纤灵方药物血清可以通过抑制骨髓来源的FBS的表型转化拮抗RIF。     

针灸对去卵巢大鼠骨组织TGF-β1 mRNA、VEGF mRNA表达及凋亡基因Fas的影响

目的:探讨针灸对去卵巢大鼠骨质疏松症的作用机制和环节。方法:骨组织TGF-β_1 mRNA、VEGF mRNA采用原位杂交,凋亡基因Fas采用免疫组织化学检测。结果:模型组TGF-β_1、VEGF光度低于假手术组(P<0.05),针刺组、艾灸组、雌二醇组TGF-β_1、VEGF光度高于模型组(P<0.05);骨组织FAS蛋白光度,模型组高于假手术组(P<0.01),针刺组、艾灸组和雌二醇组低于模型组(P<0.05～0.01);成骨细胞内FAS蛋白阳性表达率模型组高于假手术组(P<0.01),雌二醇组低于模型组(P<0.01);破骨细胞内FAS蛋白阳性表达率针刺组、艾灸组和雌二醇组高于假手术组(P<0.05～0.01)。结论:针灸能有效调节破骨细胞内Fas基因的表达;能激活TGF-β_1、VEGF活性,使TGF-β_1 mRNA、VEGF mRNA表达增加。     

丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1及Smad4表达的影响

目的:研究丹皮酚对氧应激致肝星状细胞HSC-LX2增殖及TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA表达的影响。方法:在建立体外过氧化氢(H2O2)致HSC-LX2细胞氧应激模型基础上,MTT法检测丹皮酚对HSC-LX2细胞增殖的影响,生化检测HSC-LX2细胞内MDA含量及SOD活性,荧光定量PCR检测丹皮酚对氧应激致HSC-LX2细胞TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA表达的影响。结果:与DMSO组比较,丹皮酚呈剂量依赖性抑制H2O2诱导HSC-LX2增殖,降低细胞MDA含量并提高SOD活性,以50μmol/L浓度时最为明显(P<0.01);丹皮酚各剂量作用24 h后,HSC-LX2细胞中TGF-β1、Smad4和CollagenⅠmRNA的水平降低(P<0.01),并作用呈剂量依赖性。结论:丹皮酚预处理可下调肝星状细胞TGF-β1、Smad4 mRNA的表达,进而抑制肝星状细胞CollagenⅠ的合成,发挥抗肝纤维化作用。     

人参-三七-川芎提取物对糖尿病小鼠心肌纤维化的保护作用

目的:从心肌纤维化程度及心肌组织中胶原蛋白Ⅰ型(CollagenⅠ),胶原蛋白Ⅲ型(CollagenⅢ)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)蛋白表达,探讨人参-三七-川芎提取物(GNC)对糖尿病小鼠心肌纤维化的保护作用。方法:建立链脲佐菌素(STZ)联合高脂饲料诱导糖尿病小鼠模型,另设正常组,糖尿病小鼠按照随机数字表法分为模型组,GNC低、高剂量组(0. 819,1. 638 g·kg~(-1))及二甲双胍组(150 mg·kg~(-1))。各组均灌胃给药,正常组给与等剂量的去离子水,1次/d,连续9周。胶原纤维染色(Masson三色染色法)观察小鼠心肌间质纤维化程度,并用Image-pro plus 6. 0分析软件计算胶原密度比值;免疫组化检测小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ及TGF-β_1蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠心肌组织内CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1的蛋白表达电泳及灰度值水平。结果:Masson实验结果显示,与正常组比较,模型组小鼠心肌细胞肥大、变形,心肌间质尤其是在微血管周围,有大量蓝染的胶原纤维沉积,相互连接交织成网状(P 0. 01);与模型组比较,GNC低、高剂量组和二甲双胍组小鼠心肌细胞排列紊乱明显改善,心肌间质蓝染的胶原纤维也较模型组明显减少(P 0. 05)。免疫组化和Western blot结果显示:与正常组比较,模型组小鼠心肌组织CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1阳性表达,蛋白表达含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,各给药组蛋白阳性表达均降低,蛋白表达含量趋于正常(P 0. 05,P 0. 01)。结论:STZ联合高脂饲料能够诱导糖尿病小鼠心肌纤维化,诱导CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1蛋白高表达。人参-三七-川芎提取物可通过调节CollagenⅠ,CollagenⅢ和TGF-β_1蛋白表达,改善糖尿病小鼠心肌纤维化。     

补骨脂素抗增生性瘢痕作用机制研究

目的探讨补骨脂素抗增生性瘢痕的作用机制。方法体外培养成纤维细胞,按随机数字表法分为正常组(培养正常成纤维细胞)、瘢痕组(培养增生性瘢痕成纤维细胞)、TGF-β1组(10 ng/ml TGF-β1处理增生性瘢痕成纤维细胞5 min^12 h)、Smurf2 RNA干扰组[Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor2,Smurf2)siRNA转染增生性瘢痕成纤维细胞72 h]、补骨脂素组(10μmol/L补骨脂素处理增生性瘢痕成纤维细胞继续培养72 h)、补骨脂素+TGF-β1组(增生性瘢痕成纤维细胞加入补骨脂素培养72 h后加入TGF-β1培养6 h)。采用Western blot法检测Smurf2、α-平滑肌肌动蛋白(α-actin SMA,α-SMA)蛋白表达;RT-PCR法检测Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达;ELISA法检测TGF-β1蛋白分泌。结果与正常组比较,瘢痕组Smurf2蛋白[(0.83±0.08)比(0.38±0.07)]表达增加(P<0.05);与瘢痕组比较,Smurf2 RNA干扰组TGF-β1[(2.2±0.18)比(4.2±0.47)]表达降低(P<0.05);TGF-β1组Smurf2[(0.71±0.06)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(1.42±0.12)比(0.91±0.09)]蛋白表达增加(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA[(0.72±0.09)比(0.41±0.07)]表达增加(P<0.05);补骨脂素组Smurf2[(0.05±0.01)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(0.71±0.07)比(0.91±0.09)]蛋白表达降低(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达[(0.12±0.04)比(0.41±0.07)]降低(P<0.05)。结论补骨脂素可能通过TGF-β1/Smurf2信号通路抑制α-SMA蛋白表达,从而降低Ⅰ型胶原蛋白表达,起到抑制瘢痕形成的作用。     

肝乐颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的调控作用

目的:明确肝乐颗粒对转化生长因子(TGF)-β_1/Smad信号通路的干预作用,探讨其防治肝纤维化的分子学机制。方法:SD大鼠随机分为正常组,模型组,肝乐颗粒(1.5,3.0,6.0 g·kg~(-1))和秋水仙碱(1.0×10~(-4)g·kg~(-1))。采用50%四氯化碳每周2次,连续12周皮下注射的方法,诱导肝纤维化大鼠模型。造模第7周起,给药组分别灌胃给予相应剂量的肝乐颗粒和秋水仙碱,每天1次,连续6周。末次给药8 h后,处置大鼠,取固定部位肝脏组织,苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察肝脏病理组织学损伤程度,免疫组化和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测肝组织中Ⅰ型胶原(CollagenⅠ),Smad2,TGF-β_1或TGF-βI型受体(TβRⅠ)蛋白的表达,实时定量荧光PCR(Real-time PCR)检测肝组织中CollagenⅠ,Smad2,TGF-β_1mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝纤维化损伤程度,肝组织中CollagenⅠ,TGF-β_1,Smad2,TβRⅠ蛋白及mRNA的表达明显增加(P0.01);与模型组比较,肝乐颗粒中、高剂量组不仅可减轻肝组织病理损伤程度,减少胶原沉积,还可显著降低CollagenⅠ,TGF-β_1,Smad2,TβRⅠ蛋白及mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:肝乐颗粒对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与调控TGF-β_1/Smad信号通路,从而抑制HSC活化,减少细胞外基质过度沉积有关。     

大黄虫丸对转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-间充质转化的影响

目的：基于“IPF患者存在肺络干血”假说,观察大黄虫丸含药血清对TGF-β1诱导后A549细胞上皮-间充质转化(EMT)及Smad3,Collagen Ⅲ表达的影响,探讨其防治特发性肺纤维化(IPF)的作用机制。方法：正常培养并取对数生长期A549细胞,TGF-β1对其诱导48 h,电子显微镜下观察A549细胞的形态学变化;选择吡非尼酮（PFD）为阳性对照药,RT-PCR法检测EMT相关基因及Smad3 mRNA的表达;Western Blottingting法检测Smad3,p-Smad3,Collagen Ⅲ蛋白表达。结果：成功获取发生EMT的A549细胞;以α-SMA mRNA表达情况判断EMT程度由高到低依次为:模型组(M),大黄虫丸含药血清大剂量组(D),西药组(P),大黄虫丸含药血清中剂量组(Z),大黄虫丸含药血清小剂量组(X),空白对照组(K);与M组比较,Z组,X组,P组中Collagen Ⅲ表达不同程度降低(P<0.05),且其在Z组与K组中表达差异无统计学意义(P>0.05);与M组及K组比较,各观察组Smad3表达差异无统计学意义(P>0.05),但对其基因及磷酸化,即Smad3 mRNA及p-Smad3的表达有影响,且与M组比较,Z组,X组,P组中均不同程度降低(P<0.05),D组中表达虽低于M组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论：大黄虫丸对TGF-β1诱导后A549细胞发生EMT程度与Smad3 mRNA及Collagen Ⅲ的表达有影响,推测大黄虫丸对IPF的保护机制可能与不同程度阻断或逆转了TGF-β1/Smad3介导的EMT有关。     

象皮生肌膏对糖尿病足溃疡大鼠创面组织内上皮-间质转化过程的影响

目的:观察象皮生肌膏对糖尿病足溃疡大鼠创面组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、纤维结合蛋白(FN)表达的影响,以及在愈合过程中上皮-间质转化(EMT)过程。方法:选择SPF级雄性SD大鼠40只,建立溃疡大鼠模型,其中10只作为空白组,其余30只大鼠建立糖尿病大鼠模型,造模成功后分为模型组、对照组、实验组。比较各组大鼠第7、14天创面愈合情况; 实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测各组第7、14天TGF-β1、IGF-1、FN的mRNA表达情况; Western blotting检测各组第7、14天EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、纤连蛋白( Fibronectin)蛋白表达情况; 酶联免疫反应法测定组织中血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:干预第7天,空白组、实验组的创面愈合率均高于模型组; 与模型组相比,空白组、实验组E-cadherin表达降低,Fibronectin表达升高,而TGF-β1、IGF-1、FN的mRNA表达均高; 与对照组相比,实验组E-cadherin蛋白表达降低,Fibronectin蛋白表达升高; 与模型组相比,空白组、对照组、实验组的VEGF含量均高,差异有统计学意义(均P<0.05)。干预第14天,模型组的创面愈合率低于其他组; 与模型组相比,空白组、实验组E-cadherin蛋白表达较低,Fibronectin蛋白表达较高,空白组、对照组、实验组FN mRNA表达均高,空白组、实验组TGF-β1的mRNA表达均高。与模型组相比,空白组、对照组、实验组的VEGF含量均高,差异有统计学意义(均P<0.05)。干预第14天,模型组、对照组、实验组的IGF-1的mRNA表达比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:象皮生肌膏能促进EMT过程,加快愈合速度,其途径可能是通过促进TGF-β1表达,介导IGF-1,调控FN实现。     

人参皂苷Rg1对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与该细胞血红细胞生成素受体(EPOR)表达变化的关系。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组、5μg/L TGF-β1刺激组,人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5μg/L TGF-β1的基础上分别加入10,20,40 mg/L的人参皂苷Rg1)。每组细胞干预72 h后,在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定细胞培养上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的含量。实时荧光定量PCR方法检测EPOR mRNA转录水平,免疫细胞化学法检测各组表达EPOR细胞的阳性率。结果 TGF-β1诱导NRK52E细胞形态变化,从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞形态,并抑制细胞增殖(P<0.05),增加细胞表达Col-Ⅰ和FN,抑制EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05);人参皂苷Rg1以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态的改变,减少Col-Ⅰ和FN的表达,上调EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT具有一定的抑制作用;该作用可能与人参皂苷Rg1上调肾小管上皮细胞EPOR的表达有关。     

五味子乙素对AngⅡ诱导心肌纤维化中AkT、mTOR、TGF-β1表达的影响

目的探讨五味子乙素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌纤维化中AkT、mTOR、TGF-β1表达的影响。方法胶原酶与差速贴壁法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞后,将细胞随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+五味子乙素低剂量组(2.5×10~(-5) mol/L)、AngⅡ+五味子乙素高剂量组(7.5×10~(-5) mol/L)、AngⅡ+雷帕霉素组。然后,Western blot检测蛋白激酶B(AkT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)蛋白表达。结果与对照组比较,AngⅡ显著刺激心肌成纤维细胞下调p-AkT蛋白表达,上调p-mTOR、TGF-β1、CollagenⅠ蛋白表达(P0.05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+五味子乙素组显著下调p-mTOR、TGF-β1、CollagenⅠ蛋白表达,上调p-AkT蛋白表达(P0.05)。结论五味子乙素可通过促进AkT磷酸化,抑制p-mTOR、TGF-β1蛋白表达,减少CollagenⅠ合成来改善AngⅡ诱导心肌纤维化。     

基于自噬途径探讨加味麻杏石甘汤干预放射性肺损伤的分子机制

目的:从自噬相关因子的表达研究加味麻杏石甘汤干预放射性肺损伤的发生机制。方法:将肺泡细胞A549分为空白组、模型组及麻杏石甘汤低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组)。除空白组外,其余各组细胞进行X线照射,建立放射性肺损伤细胞模型。模型组细胞用10%正常大鼠血清培养,低、中、高剂量组分别用10%低、中、高剂量的含药血清培养。分别采用Western-blot及RT-PCR检测肺泡细胞A549中转化生长因子-β1 (TGF-β1)、Beclin-1、LC3蛋白及mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组细胞中TGF-β1、Beclin-1、LC3蛋白及mRNA表达均升高(P0.05)。与模型组比较,低、中、高剂量组细胞中TGF-β1、Beclin-1、LC3 mRNA表达均下降(P0.05),且随着剂量的升高而下降(P0.05);低、中、高剂量组TGF-β1蛋白表达下降(P0.05),中、高剂量组Beclin-1、LC3蛋白表达下降(P0.05),且TGF-β1、Beclin-1、LC3蛋白表达随着剂量的升高而下降(P0.05)。结论:加味麻杏石甘汤可通过下调肺泡细胞A549内TGF-β1、LC3、Beclin-1水平,调控自噬过程,减轻放射性肺损伤。     

高三尖杉酯对成纤维细胞增殖、凋亡及TGF-β1/Smad信号通路的影响北大核心

目的:探讨高三尖杉酯碱通过TGF-β1/Smad信号通路对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)增殖及凋亡的影响.方法:取第4代对数生长期的HKF细胞,随机分为空白对照组、高三尖杉酯碱组、TGF-β1组、高三尖杉酯碱+TGF-β1组,各组细胞给予相应药物孵育后,CCK-8检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,qRT-PCR检测Col Ⅰ、Col Ⅲ mRNA表达,蛋白印迹法检测TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:与对照组比较,高三尖杉酯碱组细胞存活率、侵袭细胞数、划痕愈合百分比显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达显著升高,ColⅠ、Col Ⅲ、TGF-β1 mRNA及p-Smad2、p-Smad3、Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0.05).TGF-β1组上述指标变化趋势与高三尖杉酯碱组相反,除存活率外与对照组比较差异均有统计意义(P＜0.05).高三尖杉酯碱+TGF-β1组上述指标介于高三尖杉酯碱组和TGF-β1组之间,与高三尖杉酯碱组及TGF-β1组比较差异均有统计意义(P＜0.05).结论:高三尖杉酯碱可抑制HKF细胞增殖,诱导凋亡,降低细胞迁移和侵袭能力,其机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关.     

复方丹参滴丸通过miR-200b调控VEGF/TGF-β1影响糖尿病心肌病大鼠心脏的作用机制

目的:研究复方丹参滴丸对2型糖尿病心肌病大鼠心脏的保护作用及机制。方法:将75只雄性SD大鼠随机分为正常组(15只),和造模组(60只),造模组用高糖高脂饲料+高糖高脂乳制+蔗糖水三联法喂养,6周后选择符合食源性肥胖(体质量≥正常组体质量均值+2倍标准差)的大鼠,予以单次腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ) 28 mg·kg~(-1),12周后将空腹血糖≥11.1 mmol·L-1,且有多饮、多尿、多食、体质量减轻等现象的大鼠随机分为模型组、复方丹参滴丸组(0.5 g·kg~(-1))和二甲双胍组(0.5 g·kg~(-1)),连续干预12周。实验末采用超声心动图评价心功能。取血测定大鼠相应生化指标。苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理变化。电镜下观察心肌组织超微结构。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测血管内皮生长因子(VEGF),转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)蛋白的表达。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测miR-200b mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠心脏质量指数(HMI),空腹血糖(FBG),糖化血红蛋白(HbA1c),空腹胰岛素(FINS),总胆固醇(TC),甘油三脂(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显升高(P0.05,P0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低(P0.01);心功能受损,心肌胶原纤维沉积增加(P0.01),心肌组织破坏程度明显;心肌组织中miR-200b mRNA表达显著降低(P0.01),VEGF,TGF-β1和CollagenⅠ蛋白表达显著升高(P0.01)。与模型组比较,复方丹参滴丸组大鼠HMI,TC,TG,LDL-C水平明显下降(P0.05,P0.01),HDL-C水平显著升高(P0.01);心功能得到改善,心肌胶原纤维沉积明显减少(P0.05),心肌组织破坏程度减轻;心肌组织中miR-200b mRNA表达明显升高(P0.05),VEGF,TGF-β1和CollagenⅠ蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论:复方丹参滴丸可能是通过降脂,上调miR-200b的表达并抑制VEGF,TGF-β1,CollagenⅠ的表达水平,对2型糖尿病心肌病大鼠的心脏起保护作用。     

丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠TGF-β1/p38MAPK信号通路的影响研究

目的:观察丹参提取物对系膜增生性肾小球肾炎(Mesangial proliferative glomerulonephritis,MsPGN)大鼠肾组织转化因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)的影响。方法:将46只SD大鼠分为正常组、缬沙坦组、模型组、丹参提取物组,除正常组外,其余各组大鼠建立MsPGN模型。丹参提取物组按丹参5 g/(kg·d)的剂量灌胃给药;缬沙坦组按缬沙坦0.01 g/(kg·d)的剂量溶于温水灌胃,模型组和正常组每天给予等量温水灌胃,连续灌胃12周后处死大鼠。Western blot检测大鼠肾组织TGF-β1和p38 MAPK蛋白的表达,RT-PCR检测TGF-β1和p38MAPK的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白水平、TGF-β1和p38MAPK蛋白相对表达量及mRNA表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,给药6周和12周缬沙坦组、丹参提取物组24 h尿蛋白水平显著降低(P<0.05);TGF-β1和p38MAPK蛋白相对表达量及mRNA表达均显著下降(P<0.05);与缬沙坦组比较,丹参提取物组TGF-β1和p38MAPK mRNA表达均下降(P<0.05)。结论:丹参提取物的肾保护作用可能是通过下调TGF-β1、p38MAPK蛋白和mRNA水平,抑制TGF-β1/p38MAPK信号通路激活来实现的。     

黄芩苷对转化生长因子β1 诱导的A549 细胞自噬作用的影响

目的探讨黄芩苷对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的A549 细胞自噬作用的影响。方法采用不同浓 度TGF-β1（2.5、5、10 ng·mL-1）诱导A549 细胞48 h后,检测其Collagen I基因与自噬相关基因表达水平,以 确定模型复制的最佳条件。在高、中、低剂量（200、100、50 μg·mL-1）黄芩苷对TGF-β1 诱导的A549 细胞模 型干预后,采用RT-qPCR 法检测细胞的肺纤维化标志基因CollagenⅠ及自噬相关基因（ATG3、ATG5、ATG7、 ATG12）的表达;Western Blot 法检测自噬调节标志蛋白p62、LC3B Ⅱ/Ⅰ的表达;通过转染Ad-mCherry-GFPLC3B 双荧光标记腺病毒检测细胞中自噬流的情况。结果使用10 ng·mL-1 TGF-β1 诱导A549 细胞48 h 后, CollagenⅠ基因表达显著上调,ATG3、ATG5、ATG7、ATG12 基因表达明显下调,差异均有统计学意义（P＜ 0.05,P＜0.01）。经黄芩苷干预后,与模型组相比,黄芩苷高剂量组（200 μg·mL-1）A549 细胞的CollagenⅠ基因 表达显著下调（P＜0.01）,ATG3、ATG5、ATG7、ATG12 基因表达明显上调（P＜0.05）;黄芩苷各给药组A549 细胞的p62 蛋白表达显著下调（P＜0.05,P＜0.01）,LC3B Ⅱ/Ⅰ蛋白表达显著上调（P＜0.05,P＜0.01）;黄芩 苷高剂量组的细胞自噬能力明显激活。结论黄芩苷可能在减少TGF-β1 诱导的A549 细胞外基质沉积的同 时,能够增强细胞的自噬水平,可能是治疗肺纤维化的有效成分。     

金欣口服液对RSV感染BALB/c小鼠TLR3信号转导通路负调控因子SOCS1表达的调控作用

目的研究金欣口服液对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的BALB/c小鼠肺组织中TLR3信号转导通路负调控因子SOCS1不同时间点的表达趋势的调控作用。方法 75只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、金欣高剂量组和金欣等效剂量组,每组15只。每组分干预方式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ,每种干预方式5只小鼠。RSV滴鼻感染BALB/c小鼠制备动物模型,予相应干预方式处理后处死取肺组织。Real time PCR分别检测RSV-M、SOCS1和IFN-β在mRNA水平的表达情况,并采用Western blotting检测SOCS1在蛋白水平上的表达情况。结果与正常组比较,模型组干预方式Ⅰ、ⅡSOCS1、IFN-βmRNA表达及SOCS1蛋白表达升高(P<0.01),干预方式Ⅲ时IFN-βmRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较,金欣高、等效剂量组3种干预方式RSV-M mRNA表达均降低(均P<0.01),金欣高剂量组干预方式Ⅰ、Ⅲ及金欣等效剂量3种干预方式SOCS1 mRNA表达降低(P<0.01);金欣高剂量组干预方式Ⅰ、Ⅱ及金欣等效剂量组干预方式ⅠIFN-βmRNA的表达降低(P<0.01),而金欣高剂量组和等效剂量组干预方式ⅢIFN-βmRNA的表达升高(P<0.01);金欣高剂量组干预方式Ⅰ及金欣等效剂量组的3种干预方式SOCS1蛋白表达明显降低,金欣高剂量组干预方式ⅢSOCS1蛋白表达升高。与金欣高剂量组比较,金欣等效剂量组干预方式Ⅰ、ⅡRSVM mRNA表达降低(P<0.01);金欣等效剂量组干预方式ⅠSOCS1 mRNA表达降低(P<0.01);金欣等效剂量组干预方式ⅠIFN-βmRNA的表达降低(P<0.01),但干预方式Ⅱ、ⅢIFN-βmRNA的表达升高(均P<0.01);金欣等效剂量组3种干预方式SOCS1蛋白表达降低。结论金欣口服液等效剂量组在不同时间点均能抑制RSV感染BALB/c小鼠肺组织中SOCS1的表达,该调控作用可能与促进Ⅰ型干扰素表达从而发挥抗RSV作用有一定关系。     

桂枝茯苓丸抗大鼠肝纤维化作用及其机制研究

目的:观察桂枝茯苓丸对大鼠肝纤维化的拮抗作用,并探讨可能的作用机制。方法:按照随机数字表将60只Wistar大鼠分为正常组8只(A组)和造模组52只,正常组sc予生理盐水3 mL.kg-1,造模组采用等量40%四氯化碳(carbontetrachloride,CCl4)复制肝纤维化模型,共6周。再随机将造模组大鼠分为模型组(B组)、桂枝茯苓丸低、中、高剂量组(C,D,E组)每组7只大鼠。A组与B组大鼠均予生理盐水9.0 mL.kg-1ig,C,D,E组分别给予桂枝茯苓丸0.45,0.9,1.8 g.kg-1.d-1 ig治疗,共4周,并在治疗期间继续使用CCl4维持。采用免疫组化(immunohistochemistry,IH)法及实时定量PCR(real-timequantitative PCR,Real-time PCR)法检测各组大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growing factorβ1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue grower factor,CTGF)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ,C-Ⅰ)及Ⅲ型胶原(CollagenⅢ,C-Ⅲ)的蛋白及基因表达量。结果:模型组大鼠肝组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,C-Ⅰ,C-Ⅲ蛋白和mRNA的表达较正常组显著增多(P<0.01),治疗组均能下调大鼠肝组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,C-Ⅰ以及C-Ⅲ蛋白和mRNA的表达,其中以D组,E组减少α-SMA,C-Ⅰ,C-Ⅲ蛋白的表达明显(P<0.05或P<0.01),以E组降低TGF-β1,CTGF蛋白表达最为显著(P<0.05),以D组,E组降低α-SMA,TGF-β1,CTGF mRNA的表达显著(P<0.01),以E组减少C-Ⅰ,C-ⅢmRNA的表达最明显(P<0.01)。结论:桂枝茯苓丸混悬液可有效减少肝组织α-SMA,TGF-β1,CTGF,C-Ⅰ,C-Ⅲ蛋白和mRNA表达量,有良好的抗肝纤维化作用。