绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响

目的:探讨绿原酸对TGF-β_1刺激人肝星形细胞凋亡的影响。方法:取指数生长期细胞,随机分为空白对照组、TGF-β_1组及绿原酸高、中、低浓度组,以MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测α-SMA、Bax、Bcl-2 mRNA的表达,免疫细胞化学检测α-SMA蛋白的表达,Western-blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:10μg/L TGF-β_1刺激HSC细胞后,HSC-LX2细胞中α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著升高,Bax mRNA及蛋白表达显著降低(P0.05)。与模型组比较,绿原酸高、中剂量组细胞活力、α-SMA、Bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、Bax mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05或P0.01)。结论:绿原酸通过调控Bax、Bcl-2的表达,诱导活化的HSC-LX2凋亡,清除活化的肝星形细胞,抗肝纤维化。     

青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株MV4-11增殖凋亡的调控作用

【目的】 探讨青蒿琥酯抗急性髓系白血病（AML）的作用。【方法】 取对数生长期AML细胞株MV4-11,用不同浓度青蒿琥酯分别处理24、48、72 h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞增殖抑制率,选择青蒿琥酯处理48 h对MV4-11细胞的半数抑制浓度（IC50）进行后续实验。将细胞随机分为对照组、青蒿琥酯组、复合物C组与青蒿琥酯+复合物C组,MTT法测定细胞存活率,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡情况,定量聚合酶链反应（qPCR）法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）的mRNA水平,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路相关蛋白的表达水平。【结果】 青蒿琥酯可以抑制 MV4-11 细胞增殖,呈时间、剂量依赖性,处理 48、72 h 对 MV4-11 细胞的 IC50分别为1.58、1.39 μg/mL。与对照组比较,青蒿琥酯组细胞存活率降低,凋亡率升高,G0/G1 期细胞增加,S 期、G2/M 期细胞减少,Bax mRNA相对表达量升高,Bcl-2 mRNA相对表达量降低,p-AMPK、Bax蛋白表达水平上调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平下调（均P＜0.05）;与对照组比较,复合物C组细胞存活率升高,凋亡率降低,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,Bax mRNA相对表达量降低,Bcl-2 mRNA相对表达量升高,p-AMPK、Bax蛋白表达水平下调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平上调（均P＜0.05）;与对照组比较,青蒿琥酯+复合物C组p-AMPK蛋白表达水平上调,p-mTOR蛋白表达水平下调（均P＜0.05）。与青蒿琥酯组比较,复合物C组与青蒿琥酯+复合物C组细胞存活率升高,凋亡率降低,G0/G1期细胞减少,S期、G2/M期细胞增加,Bax mRNA 相对表达量降低,Bcl-2 mRNA相对表达量升高,p-AMPK、Bax蛋白表达水平下调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平上调（均P＜0.05）。与复合物C组比较,青蒿琥酯+复合物C组细胞存活率降低,凋亡率升高,G0/G1 期细胞增加,S 期、G2/M 期细胞减少,Bax mRNA 相对表达量升高,Bcl-2 mRNA 相对表达量降低,p-AMPK、Bax蛋白表达水平上调,p-mTOR、Bcl-2蛋白表达水平下调（均P＜0.05）。【结论】 青蒿琥酯对MV4-11细胞具有抑制增殖、诱导凋亡的作用,其机制可能与激活AMPK信号通路有关。     

益气除痰方干预TGF-β信号途径逆转A549细胞上皮间质转化研究

目的:观察益气除痰方是否能通过干预TGF-β信号途径,逆转肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)。方法:通过暴露于TGF-β_1环境中,诱导肺腺癌细胞株A549发生EMT,并以益气除痰方含药血清进行干预,相差显微镜下观察各组细胞形态变化;划痕实验、Transwell实验检测各组细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测各组细胞EMT相关蛋白及TGF-β信号通路蛋白Smad2/3的表达。结果:镜下可见经TGF-β_1孵育的A549细胞呈现明显的间质细胞形态,益气除痰方含药血清作用24 h后细胞A549细胞出现凋亡且间质化程度较低;划痕实验结果显示:与空白血清组比较,TGF-β_1+空白血清组A549细胞迁移及侵袭能力显著升高,益气除痰方可降低TGF-β_1所升高的细胞迁移及侵袭能力;Western-blot检测显示TGF-β_1可以激活Smad2/3通路下调E-cadherin的表达,上调Vimentin的表达,而益气除痰方含药血清可抑制该过程。结论:益气除痰方可能通过干预TGF-β/Smad信号通路上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,从而逆转肺癌A549细胞上皮间质转化,抑制肿瘤细胞的侵袭迁移。     

建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化的作用机制的研究

目的通过体外细胞实验探讨建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中TGF-β/Smad信号通路的调控作用。方法采用PCR、Western Blot方法观察建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中Smad-2、Smad-3、Smad-7 mRNA及蛋白表达的影响;通过Western Blot方法检测5.5μg/L的TGF-β1诱导HBZY-1细胞不同时间p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达影响;Western Blot检测建中理劳汤大鼠含药血清对TGF-β1诱导30min后的HBZY-1细胞p-Smad2、p-Smad3蛋白的表达影响。结果与正常组相比,TGF-β1组中p-Smad2、p-Smad3蛋白表达显著升高,Smad-7表达明显降低(P0.05);而与TGF-β1组相比,加入建中理劳汤含药血清后,p-Smad2、p-Smad3蛋白表达显著降低,Smad-7表达明显升高(P0.05)。结论建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞HBZY-1纤维化过程中TGF-β/Smad信号通路起调控作用,可能是其抗纤维化形成的机制之一。     

毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制研究

目的观察毛蕊异黄酮对TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨毛蕊异黄酮抗肝星状细胞活化的作用机制。方法以人肝星状细胞株(LX-2)为研究对象,采用高内涵系统观察细胞增殖(Ed U)及细胞内F-actin骨架的聚合情况,RT-PCR法检测细胞I型胶原(Col-Ⅰ)、α-SMA、TGF-β1mRNA表达水平,Wstern-blot法检测细胞内p-Smad2、Smad2及Smad7蛋白表达水平。结果 TGF-β1可显著促进LX-2细胞增殖、活化,Ed U阳染细胞明显增加,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2及Col-ⅠmRNA或蛋白表达显著增加(P均0.05),Smad7表达显著下降;毛蕊异黄酮可显著降低TGF-β1诱导的LX-2中Ed U阳染细胞率以及α-SMA、p-Smad2与Col-Ⅰ的mRNA或蛋白表达(P均0.05),显著提高Smad7蛋白表达,且作用与TβRI激酶抑制剂SB-431542相当。结论毛蕊异黄酮可显著抑制肝星状细胞活化,其机制与抑制TGF-β1、p-Smad2的表达,提高Smad7蛋白表达,进而抑制TGF-β1/Smads信号转导有关。     

基于lncRNA MALAT1/Slug/Smad通路调控上皮间质转化探讨白花蛇舌草抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭

目的 研究白花蛇舌草（HDW）通过lncRNA MALAT1/Slug/Smad通路调控上皮间质转化（EMT）对结肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用。方法 取对数生长期人结肠癌HCT-116细胞,分为空白组、药物组、病毒组和药物联合病毒组。空白组和药物组加入不含lncRNA MALAT1的空载慢病毒液,病毒组和药物联合病毒组加入含lncRNA MALAT1过表达慢病毒液,获得稳定转染的细胞系。空白组和病毒组用0 mg/mL HDW药液干预,药物组和药物联合病毒组用0.5 mg/mL HDW药液干预,均干预24 h。RT-qPCR法检测细胞lncRNA MALAT1mRNA相对表达水平;MTT法检测细胞活力;划痕实验检测细胞划痕愈合能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞锌指转录因子Slug、锌指转录因子Snail、转化生长因子-β(TGF-β)、Smad2/3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达量以及p-Smad/Smad。结...     

启膈散乙酸乙酯部位提取物通过抑制TGF-β1信号通路干预食管癌细胞的迁移和侵袭

目的：探讨启膈散(QGS)对食管癌细胞TE-1迁移和侵袭能力的影响机制。方法：利用基因芯片技术筛选正常组和启膈散组差异表达基因,分析差异基因的本体功能和信号通路。噻唑蓝(MTT)比色法检测QGS对TE-1细胞活性的影响。后续验证实验分为空白组、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)组、TGF-β₁+QGS组、TGF-β₁+SB431542组。显微镜观察各实验组细胞形态,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、果蝇母本抗生存因子2(Smad2)和果蝇母本抗生存因子7(Smad7) m RNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞E-Cadherin、Vimentin、p-Smad2/3、Smad2/3和Smad7蛋白的表达。结果：QGS组与空白组之间有1 487个差异基因,其中1 080个下调,407个上调,下调基因占差异基因的72.63...     

半夏泻心汤人含药血清对HP感染GES-1细胞TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨半夏泻心汤人含药血清对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染人胃黏膜上皮GES-1细胞转化生长因子-β(TGF-β)/信号转导蛋白(Smad)信号通路的影响,以揭示该方治疗消化性溃疡可能的作用机制。方法:GES-1细胞分为空白组,HP感染模型组,健康人血清组,雷贝拉唑血清组,用药前血清组,10%半夏泻心汤血清组,20%半夏泻心汤血清组。除空白组外,其余各组均接种HP造成幽门螺杆菌感染模型,采用雷贝拉唑、半夏泻心汤含药血清及用药前、健康人血清进行干预,24 h后收集细胞及其上清液,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测Smad2/3,Smad7,TGF-β1及磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3),磷酸化Smad7(p-Smad7)蛋白的表达。结果:与空白组比较,HP可明显抑制GES-1细胞的增殖,降低GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1及p-Smad2/3蛋白表达,增加Smad7及p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01);与HP感染模型组比较,雷贝拉唑血清组及10%,20%半夏泻心汤血清组可明显降低HP对GES-1细胞增殖的抑制,增加GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达,并明显降低Smad7,p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01);与用药前血清组比较,加入雷贝拉唑、半夏泻心汤含药血清后均可降低HP对GES-1细胞增殖的抑制,其中雷贝拉唑血清组及20%半夏泻心汤血清组可增加GES-1细胞内Smad2/3,TGF-β1,p-Smad2/3蛋白表达,降低Smad7,p-Smad7蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:半夏泻心汤能够减轻HP诱导GES-1细胞的损伤,促进GES-1细胞增殖,治疗HP相关性消化性溃疡,提高溃疡愈合质量,其机制可能与其调控TGF-β/Smad信号通路有关。     

活血消癥益气方对转化生长因子β1 诱导的AML12 细胞凋亡的影响及其机制研究

目的研究活血消癥益气方对体外转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的小鼠肝实质细胞AML12 凋亡的影 响及其可能的机制。方法利用TGF-β1（5 ng·mL-1）诱导AML12 细胞建立凋亡模型（诱导24 h）及氧化应激模 型（诱导4 h）,设置空白对照组、模型对照组、不同剂量活血消癥益气方（0.1、0.2、0.5 g·L-1）组。采用CCK-8 法检测药物对细胞活力的影响,Hoechst 33342 法及Annexin V-FITC 法检测药物对凋亡的影响,DCFH-DA 法检测 药物对细胞内活性氧含量的影响,蛋白印迹法检测药物对Bcl-2、Bax、Caspase-3 及Nrf2 蛋白表达量的影 响。结果与空白对照组比较,凋亡模型对照组细胞活力下降,凋亡细胞占比及出现核固缩细胞比例等明显 增加（P＜0.05）,抗凋亡蛋白Bcl-2 明显下调,同时Bax 及Capase-3 等凋亡蛋白明显上调（P＜0.05）;且氧化应 激模型对照组细胞内活性氧含量明显升高（P＜0.05）,细胞内Nrf2 表达增加但核转位减少（P＜0.05）。与凋亡模 型组比较,活血消癥益气方各剂量组可明显恢复细胞活力,减少凋亡细胞占比及核固缩细胞比例（P＜0.05）; 同时上调Bcl-2 表达,下调Bax 及Capase-3 的表达（P＜0.05）。与氧化应激模型组比较,活血消癥益气方各剂 量组可明显减少细胞内活性氧的含量（P＜0.05）,增加Nrf2 蛋白的表达及促进其核转位（P＜0.05）。结论活血 消癥益气方可逆转TGF-β1 诱导的肝细胞凋亡,其机制可能与调控线粒体凋亡途径及Nrf2 通路功能有关。     

大黄酚调控Wnt/β-catenin 通路对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡、侵袭能力及EMT 的影响

目的：探讨大黄酚调控Wnt/β-catenin 信号通路抑制胶质瘤细胞的作用机制。方法：体外培养人脑 胶质瘤细胞U87,用不同浓度（0、50、100、200 μmol/L） 的大黄酚处理后,采用CCK-8 法检测U87 细胞增 殖能力;划痕法检测细胞迁移能力;Transwell 法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质 印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2 以及Wnt 通路上皮细胞-间充质转化（EMT） 相关蛋白β-catenin、 E-cadherin、vimentin、MMP-9 蛋白表达。结果：大黄酚能抑制U87 细胞增殖、迁移及侵袭,诱导凋亡（P＜ 0.05）,下调Bcl-2、β-catenin、vimentin 与MMP-9 的表达水平,上调Bax 与E-cadherin 的表达水平（P＜ 0.05）,并呈浓度依赖关系。结论：大黄酚能抑制胶质瘤细胞U87 增殖、迁移及侵袭能力,其机制可能与抑制 Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

通幽汤含药血清对食管鳞癌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨通幽汤含药血清对食管鳞癌细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:将28例食管鳞癌患者随机分为对照组和治疗组,每组14例,空白组于治疗前制备血清。对照组予化疗,治疗组在化疗基础上予口服通幽汤汤剂,治疗2个月制备含药血清。将各组血清加入食管鳞癌细胞培养体系中,qRT-PCR的方法检测TGF-β1 RⅠ、TGF-β1 RⅡ、p-Smad2/3、Smad4及Smad7 mRNA在食管癌细胞系中的表达;Western-blot检测以上蛋白在不同处理组细胞中的表达;ELISA法测定培养上清液中MMP-2、MMP-9及TIMP-1的含量。结果:与对照组比较,治疗组TGF-β1 RⅠ、TGF-β1 RⅡ、p-Smad2/3、Smad4表达明显降低,Smad7蛋白水平明显升高;MMP-2、MMP-9明显下降,而TIMP-1水平明显升高。结论:通幽汤含药血清可能通过调控食管鳞癌细胞TGF-β1/Smad信号通路中关键分子的表达,抑制TGF-β1/Smad信号通路传导,进一步减少MMP-2、MMP-9的表达,增加TIMP-1的表达,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。     

莲子心新碱对转化生长因子β1 诱导的H1299 细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制

目的构建转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC） H1299 细胞上皮-间充质转化（EMT）模型,并探讨莲子心新碱（Neoliensine,NeoL）对其侵袭和迁移能力的抑制 作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·mL-1 的TGF-β1 诱导H1299 细胞构建EMT 模型;以15 ng·mL-1 的 TGF-β1 诱导H1299 细胞作为EMT 模型组,以法舒地尔（Fas）为阳性药,设置1、2、3 μmol·L-1 的莲子心新碱 实验组。采用倒置荧光显微镜观察诱导后的细胞形态;用CCK-8 法检测莲子心新碱对H1299 细胞的抑制率; Western Blot 法检测细胞黏附因子E-钙黏蛋白（E-cadherin）以及间充质标记物N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形 蛋白（Vimentin）以及ROCK 1 与P-Smad 2/3 蛋白的表达;Transwell 法检测莲子心新碱对TGF-β1 诱导的H1299 细胞侵袭、迁移的抑制作用;免疫荧光法检测H1299 细胞内ROCK 1 蛋白的表达及分布。结果TGF-β1 诱导 后H1299 细胞形态呈现间充质特性。与对照组比较,随着TGF-β1 浓度的升高,E-cadherin 表达明显降 低（P＜0.05,P＜0.01）,N-cadherin 与Vimentin 表达明显升高（P＜0.01,P＜0.001）,并且ROCK 1 蛋白的表达 也在这一过程中升高（P < 0.05）。莲子心新碱可以抑制H1299 细胞的活力,IC50 为5.04 μmol·L-1;同时与模型 组比较,莲子心新碱抑制了TGF-β1 促进的H1299 细胞EMT 过程及侵袭迁移作用（P＜0.001）,中、高剂 量组明显增加E-cadherin 蛋白的表达（P＜0.05）,明显减少N-cadherin 和Vimentin 蛋白的表达（P＜0.001）,还 明显降低了H1299 细胞内因TGF-β1 诱导而升高的ROCK 1（P＜0.001）和P-Smad2/3（P＜0.001）蛋白的水平。 免疫荧光结果显示莲子心新碱可以抑制TGF-β1 诱导的H1299 细胞胞质中ROCK 1 蛋白的表达及分布。 结论TGF-β1 可以诱导H1299 细胞发生EMT,莲子心新碱可以有效抑制这一过程,其机制可能是抑制了 TGF-β1/Smad/RhoA/ROCK 通路。     

小檗碱通过下调miR-1290缓解高糖诱导的足细胞损伤研究

目的探究小檗碱对高糖诱导的足细胞损伤的影响及其对miR-1290的调控作用。方法采用高糖诱导小鼠肾足细胞MPC5建立细胞损伤模型,给予不同浓度(1.0、2.5、5.0μmol/L)小檗碱进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)蛋白表达情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用qRT-PCR法检测miR-1290 mRNA表达情况。将阴性对照(mi R-NC)和mi R-1290模拟物(miR-1290mimics)分别转染至MPC5细胞,给予5μmol/L小檗碱进行干预,考察miR-1290对小檗碱抑制高糖诱导的细胞凋亡及炎性因子分泌的影响。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著升高(P0.05)。与模型组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著降低(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.05),Bax蛋白表达水平显著降低(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著降低(P0.05),miR-1290mRNA表达水平显著降低(P0.05)。与小檗碱+miR-NC组比较,小檗碱+miR-1290 mimics组细胞凋亡率显著升高(P0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P0.05),Bax蛋白表达水平显著升高(P0.05),上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著升高(P0.05)。结论小檗碱能够通过下调mi R-1290表达抑制高糖诱导的足细胞凋亡及炎性反应,从而减轻细胞损伤。     

毛钩藤碱对人宫颈癌Ca Ski细胞增殖、凋亡、转移及侵袭的影响

目的:探讨毛钩藤碱对人宫颈癌Ca Ski细胞增殖、凋亡、转移、侵袭的影响及机制.方法:细胞活性与增殖检测(CCK-8)法检测细胞增殖活性,Hoechst33258染色及流式细胞术检测细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),p53 mRNA表达,划痕实验检测...     

降压通络方对缺氧诱导的大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨降压通络方对缺氧诱导的大鼠肾小管上皮（NRK-52E）细胞凋亡的相关分子机制。方法制备降压通络方（1.42g/mL灌胃大鼠）含药血清和缬沙坦（0.83mg/mL灌胃大鼠）含药血清，采用缺氧诱导大鼠NRK-52E细胞凋亡模型，分为4组：正常组、模型组、降压通络方组和缬沙坦组。采用CCK-8试剂盒检测细胞活力值，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，ELISA法检测细胞上清液转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白表达，免疫荧光法检测TGF-βRⅠ、Smad2/3蛋白定位，WesternBlot法检测TGF-βRⅠ、Smad2/3蛋白表达。结果TGF-βRⅠ、Smad2/3在NRK-52E细胞上广泛表达。与正常组比较，模型组细胞活力值降低（P<0.01），凋亡率升高（P<0.01），TGF-β1、TGF-βRⅠ、Smad2/3表达升高（P<0.01）。与模型组比较，降压通络方组和缬沙坦组细胞活力值升高（P<0.01），凋亡率降低（P<0.05，P<0.01），TGF-β1、TGF-βRⅠ、Smad2/3表达降低（P<0.01，P<0.05）。与缬沙坦组比较，降压通络方组TGF-β1表达升高（P<0.05），细胞活力值、凋亡率、TGF-βRⅠ和Smad2/3表达比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论降压通络方能抑制缺氧诱导的NRK-52E细胞凋亡，其作用机制可能是通过抑制TGF-β1/TGF-βRⅠ/Samd2/3信号通路而实现。     

丹参对H2O2诱导的大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨丹参对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响及其可能机制.方法:选用体外培养的第3～5代大鼠VSMCs,以H2O2作为外源性活性氧(ROS)诱导VSMC凋亡,用丹参进行干预,以MTT比色法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,同时用免疫细胞化学法检测VSMCs中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果:1 mmol/L H2O2诱导VSMCs凋亡,细胞存活率明显低于对照组,细胞凋亡率、Bax/Bcl-2蛋白表达的阳性指数(PI)明显高于对照组(P＜0.01);丹参干预后,和H2O2组相比,细胞存活率明显升高,而细胞凋亡率、Bax/Bcl-2蛋白表达的PI显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:丹参可通过下调Bax/Bcl-2蛋白表达而对抗H2O2诱导的VSMCs凋亡.     

淫羊藿-女贞子抗维甲酸致大鼠骨质疏松症的作用机制探讨

目的:研究淫羊藿女贞子水煎剂及其有效成分提取物防治维甲酸(RA)致大鼠骨质疏松症(OP)的作用机制。方法:SPF级雄性Wistar大鼠36只,随机分为6组,即正常组、模型组、淫羊藿-女贞子水煎剂组、淫羊藿-女贞子提取物低、中、高剂量组,RA(70 mg·kg-1)ig造模,造模的同时给药,给药组分别给予淫羊藿-女贞子水煎剂(9.5 g·kg-1)及药对有效成分提取物低、中、高3个剂量(50,100,200 mg·kg-1)ig治疗2周,免疫组化法检测骨组织中凋亡相关因子B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),p53的蛋白表达;实时RT-q PCR法检测骨组织中转化生长因子-β1(TGF-β1),果蝇MAD类似基因2(Smad2),Smad3,Smad7 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠骨组织Bcl-2蛋白表达明显降低,而p53蛋白表达显著升高,骨组织TGF-β1及Smad2,Smad3 mRNA相对表达量均明显下降,Smad7 mRNA相对表达量明显升高,均具有统计学差异(P0.05,P0.01);与模型组比较,各给药组可不同程度上调Bcl-2以及TGF-β1,Smad2,Smad3的表达水平,下调p53,Smad7的表达水平,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:淫羊藿-女贞子抗OP的作用机制可能与其维持凋亡与抗凋亡间的平衡,抑制骨组织细胞凋亡以及调控TGF-β/Smads通路信号转导有关。     

基于TGF-β1/Smad3信号探讨红景天苷对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用机制

目的 探讨红景天苷对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用机制及在TGF-β1/Smad3信号通路的调节机制。方法 将48只12～15周龄的SPF级SD雄性大鼠随机分为4组（n=12）：假手术组、模型组、红景天苷组（治疗组）、信号通路强化干预组（TGF-β1组）。模型组、治疗组、TGF-β1组采用线栓法建立永久性局灶脑缺血大鼠模型，假手术组不插尼龙线。造模手术前48 h，治疗组、TGF-β1组大鼠每天上午固定时间进行药物干预：治疗组以10 mg/kg红景天苷icv给药，TGF-β1组以20 mg/kg TGF-β1 icv给药，假手术组、模型组给予等体积的生理盐水，连续给药14 d后，将各组大鼠施以断头处死。分别采用TTC染色、尼氏染色、TUNEL染色、免疫荧光、Western blotting法检测各组大鼠脑梗死体积、完整神经元数目、细胞凋亡，以及Bax、Bcl-2、TGF-β1、p-Smad3的蛋白表达水平；电镜观察各组大鼠脑组织的超微结构的改变。结果 与假手术组相比，模型组大鼠脑梗死体积明显增大，脑组织中完整的神经元数量明显减少，神经细胞凋亡率明显升高，Bax的表达明显升高，Bcl-2的表达明显降低，TGF-β1、p-Smad3的表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；电镜下观察模型组大鼠大脑超微结构破坏严重，缺血性脑卒中病理症状明显。与模型组相比，治疗组、TGF-β1组大鼠脑梗死体积明显减少，脑组织中完整的神经元数量明显增多，神经细胞凋亡率明显降低，Bax的表达明显降低，Bcl-2的表达明显升高，TGF-β1、p-Smad3的表达明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；电镜下观察治疗组大鼠大脑超微结构缺血性脑卒中病理症状明显减轻；治疗组和TGF-β1组相比，观察指标差异不显著（P>0.05）。结论 红景天苷可以激活缺血性脑卒中后的TGF-β1/Smad3信号通路，从而减轻神经功能损害，发挥对神经细胞的保护作用。     

柴胡疏肝散对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的:探讨柴胡疏肝散对肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用机制。方法:60只Wistar大鼠被随机均分为6组:正常组、模型组、柴胡疏肝散高、中、低剂量组、柴胡疏肝散预防组。除正常组外,其余各组均采用猪血清ip诱发HF,0.5 m L/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成HF。预防组于造模同时给药(以柴胡疏肝散6.3 g·kg-1),柴胡疏肝散高、中、低剂量组[(12.6,6.3,3.15)g·kg-1]于造模第6周给药,连续10周。采用RT-PCR法检测各组肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad2,Smad3,Smad4和Smad7的mRNA表达,免疫组化法分别检测肝组织TGF-β1,磷酸化Smad 2/3(p-Smad 2/3)和Smad7蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β1,Smad2,Smad3的mRNA和TGF-β1,p-Smad 2/3蛋白表达均显著增加(均P0.01),Smad7基因表达显著降低(均P0.01);与模型组比较,柴胡疏肝散中剂量组TGF-β1和Smad3 mRNA表达均显著降低,p-Smad 2/3和TGF-β1蛋白表达显著减弱(P0.05,P0.01),Smad7基因表达显著增加(P0.01)。结论:柴胡疏肝散有明显的抗HF作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。     

益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨益心泰含药血浆对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFs）增殖、凋亡的影响及 相关机制。方法将分化完全的CFs 随机分为空白血浆组、模型组、益心泰含药血浆组,每组6 个复孔。除 空白血浆组外,其余各组以AngⅡ（10-7 mol·L-1）诱导构建细胞增殖及纤维化模型。空白血浆组及模型组以15% 空白血浆培养,益心泰含药血浆组以15%益心泰含药血浆培养,干预24 h。采用CCK-8 法检测CFs 细胞增殖 情况;ELISA 法测定细胞中Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）及转化生长因子（TGF-β1）含量;流 式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western Blot 法检测细胞中TGF-β1、B 细胞白血病/淋巴瘤-2（Bcl-2）及 Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）的蛋白表达水平;RT-qPCR 法检测CFs 的增殖细胞核抗原（PCNA）、α-平滑肌肌动蛋 白（α-SMA）、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平。结果15%益心泰含药血浆对CFs 无明显的促细胞增殖或抑制作 用。与空白血浆组比较,模型组细胞G0/G1 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率 明显升高（P＜0.01）;细胞凋亡率有所下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;Ⅰ/Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平 均显著升高（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显上调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显下调（P＜0.01）; PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显升高（P＜0.01）。与模型组比较,益心泰含药血浆组细胞 的G0/G1 期细胞百分率明显升高（P＜0.01）,S 期和G2/M 期的细胞百分率明显降低（P＜0.01）,细胞凋亡率明 显升高（P＜0.01）;Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及TGF-β1 水平明显降低（P＜0.01）;TGF-β1、Bcl-2 蛋白表达明显下 调（P＜0.01）,Bax 蛋白表达明显上调（P＜0.01）;PCNA、α-SMA、CollagenⅠ/Ⅲ mRNA 表达水平均明显降 低（P＜0.01）。结论益心泰含药血浆能够抑制CFs 细胞增殖分化及纤维化,可能与其调控Bax/Bcl-2 平衡及 下调纤维化相关因子表达有关。