南疆部分居民区鼠类中汉坦病毒自然感染状况的初步调查

目的 初步了解南疆部分居民区鼠类中汉坦病毒的自然感染状况。方法 2023年春季和夏季，分别在喀什地区、克孜勒苏柯尔克孜自治州(克州)、和田地区、阿克苏地区、巴音郭楞蒙古自治州(巴州)27个县(市)居民区捕获鼠类，取其肾脏，采用流行性出血热Ⅰ型(汉坦病毒)、Ⅱ型(汉城病毒)双重荧光PCR法检测核酸。结果 春季喀什地区5个县(市)(喀什市、疏附县、巴楚县、莎车县、叶城县)均监测到流行性出血热Ⅱ型(汉城病毒)分布，鼠类总携带率为22.4%(38/170)，携带率在11.1%～37.0%，不同县(市)鼠类携带率之间差异有统计学意义(χ²=9.822,P=0.044)；夏季27个县(市)中，监测到汉城病毒分布12个、分布率44.4%，共捕鼠598只、总携带率11.9%(71/598)，携带率在0.0%～52.4%，其中喀什地区、克州、和田地区的携带率分别为19.1%(56/293)、28.3%(13/46)、1.5%(2/131)，阿克苏和巴州未监测到汉坦病毒携带，鼠类携带率喀什(χ²=23.710,P<0.001)与克州(P<0.001,...     

云南省恙虫病与肾综合征出血热混合感染的诊断及分析

目的 调查云南省不明原因发热患者中是否存在恙虫病与肾综合征出血热混合感染病例.方法 采用间接免疫荧光法和胶体金法检测不明原因发热患者血清中的恙虫病东方体(OT)抗体及肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体,用巢式PCR扩增患者血液中的OT 基因sta56片断与汉坦病毒(HV)基因L片断.结果 79例患者中,实验室确诊HFRS 5例,恙虫病3例,HFRS与恙虫病混合感染4例;巢式PCR检测到HV L片断核酸2例(DLR2和DLR6), 序列分析两者间的同源性100%,DLR2与老挝汉城病毒L0199株核苷酸序列同源性最高为94.6%, 与中国汉城病毒L99株的同源性80.5%, 与云南汉坦病毒YN06-256的同源性69.8%.结论 首次证实云南省存在恙虫病与肾综合征出血热混合感染病例,其HFRS病原体遗传进化关系与老挝汉城病毒L0199株密切相关.     

柏氏禽刺螨传播家鼠型汉坦病毒的研究

目的：研究柏氏禽刺螨在传播家鼠型肾综合征出血热病毒中的作用。方法：每罐放柏氏禽刺螨100只，于室温为23±1℃环境下饥饿4d，分别叮刺感染汉坦病毒（Hantaanvirus）或浙45株（Z45）大鼠乳小鼠2只或感染汉城病毒（Seoulvirus）UR株大鼠乳小鼠2只各12h，为感染螨，用感染后d15的螨叮刺正常大鼠乳小鼠9只，d30取感染鼠的肺和血清，用间接免疫荧光测试。于d15和d23取感染螨用聚合酶链反应测试其体内病毒RNA。结果：柏氏禽刺螨分别叮刺感染汉坦病毒Z45株和感染汉城病毒UR株大鼠乳小鼠后, 再分别叮刺正常大鼠乳小鼠5 只和4 只。IFAT 检测结果汉坦病毒Z45 株组的鼠全部阳性, 汉城病毒UR 株组的4 只鼠中3 只阳性, 其抗体滴度, 前者为10- 40, 后者为20- 40, 病毒在螨体内可保存22 d 以上。阻断试验显示, 病毒免疫血清1∶20 作用肺切片标本后, 部分阻断荧光抗体反应, 与未经稀释的血清作用后全部阻断特异性荧光反应。对照组正常鼠肺片和血清经IFA T 检测均阴性。结论: 柏氏禽刺螨可作为家鼠型肾综合征出血热的传播媒介和贮存宿主。     

RT-PCR-RFLP技术在登革病毒感染早期诊断中的应用

目的建立疑似登革病毒感染的病原快速鉴定分型方法,并对2004年我院收治的一例疑似登革感染患者进行确诊。方法用免疫层析法(ICT)检测DV-IgM抗体、免疫斑点法(DIBA)检测DV-IgG抗体对疑似登革病毒感染患者进行动态监测;用登革病毒通用引物通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增患者血清中的登革病毒核酸,用限制性内切酶BstnⅠ酶切,聚丙烯酰胺凝胶电泳分析鉴定分型。结果发病第5天患者DV-IgM抗体开始呈弱阳性,第9天DV-IgM抗体滴度达到1∶8,第13天DV-IgM抗体滴度开始下降;发病第9天患者DV-IgG抗体呈弱阳性,第12天DV-IgG抗体滴度达到1∶8。用RT-PCR-RFLP检测疑似登革病毒感染患者早期血标本,确定2004年我院收治的一例患者为登革Ⅰ型病毒感染所致。结论利用RT-PCR-RFLP技术对登革病毒进行分型鉴定具有敏感、特异、快速的优点,与登革热抗体检测结合起来应用可缩短疑似登革感染的确诊时间、降低检测成本,具有很好的社会效益和经济效益。     

一起实验动物型肾综合征出血热流行的调查研究

目的对实验动物型肾综合征出血热疫情进行流行病学调查和病毒学研究,掌握流行特点、疫源范围并控制疫情。方法收集相关流行病学资料,采集大白鼠血清、肺脏组织和接触人群血清标本,用反向被动血凝抑制(RPH I)和间接免疫荧光试验(IFA)检测汉坦病毒抗体或抗原,用RT-PCR法对阳性鼠肺进行汉坦病毒分型。结果2003年5~6月,云南省3个单位的实验动物大白鼠群中发生汉坦病毒流行并导致1人发病,接触人群的平均隐性感染率为20%(15/75);用RPH I和IFA法检测大白鼠血清,汉坦病毒总抗体和IgG抗体阳性率分别为45.99%(63/137)和37.27%(41/110),抗体滴度在1∶20~1∶1 280之间,两种方法检测结果无显著性差异(χ2=1.33,P>0.05);两个疫点单位的大白鼠肺脏组织中汉坦病毒抗原阳性率分别为56.25%(9/16)和35.00%(7/20);用RT-PCR对病毒抗原阳性的大白鼠肺组织进行汉坦病毒分型,证实为汉城型病毒感染。对调查确定的疫点鼠群及饲养场所进行了疫源处理,彻底消灭了传染源,扑灭了疫情。结论本次实验动物型肾综合征出血热流行属汉城型汉坦病毒引起,主要发生在W istar大白鼠鼠群。大白鼠对汉坦病毒高度易感,具有较高的感染率并能产生高滴度的抗体。     

流行性出血热患者唾液中特异IgG抗体检测初探

流行性出血热患者唾液中特异ＩｇＧ抗体检测初探徐冰凌,李世清,佘家辉目前国内外流行性出血热（ＥＨＦ）的实验诊断多以血清为标本,应用免疫荧光法（ＩＦＡＴ）、血凝抑制实验（ＨＩ）、酶联吸附实验（ＥＬＩＳＡ）等方法。由于该病患者病情重、血管脆性增加,采血较为...     

汉坦病毒核酸检测试剂参考品的研制

[摘要]　目的　研制汉坦病毒核酸检测试剂参考品并制定其质量评价标准。方法　收集汉坦病毒阳性和阴性临床分离株样本，制备汉坦病毒RNA噬菌体模拟样本，使用宏基因组测序方法和实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法进行核酸序列鉴定。选择合适样本组成参考品并使用不同试剂对参考品进行协作标定。根据标定结果确定汉坦病毒核酸检测试剂参考品的质量标准，并评估其稳定性。结果　汉坦病毒核酸检测试剂参考品由20份样本组成，包括阳性参考品5份（PC01～PC05）、阴性参考品11份（NC01～NC11）、精密性参考品2份（R01、R02）以及检出限参考品2份（S01、S05）。其中，检出限参考品1:10梯度稀释后，要求S02、S03为汉坦病毒汉滩型阳性，S06、S07为汉坦病毒汉城型阳性，其余样本不做要求。稳定性评价结果表明，汉坦病毒核酸检测试剂参考品经25 ℃室温放置24 h或反复冻融3次均不影响参考品性能。结论　本研究研制了汉坦病毒核酸检测试剂参考品，并制定了其质量标准，可应用于相关定性检测试剂的质量评价。     

汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的通过建立汉坦病毒实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测汉坦病毒。方法根据汉滩型和汉城型汉坦病S片段基因的序列分别设计特异性探针引物,使用含有目的基因片段的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立检测两型汉坦病毒的实时荧光定量PCR方法。结果建立的检测方法特异性良好,与其他常见病原不发生交叉反应;最低检测限为101copies/μl,灵敏度高;不同梯度定量模板的拷贝数的对数值与Ct值之间线性关系表达式分别为y=-3.4607x＋40.988（HTN）,y=-3.5307x＋39.356（SEO）,扩增效率分别为92.2%（HTN）和92.6%（SEO）,相关系数R2分别为0.9968（HTN）和0.9997（SEO）,呈良好的线性关系,且重复性好。结论建立的实时荧光定量PCR灵敏度高,重复性好,可用于汉坦病毒的快速检测,并可初步辨别汉滩型和汉城型汉坦病毒,对肾综合征出血热的病原早期诊断和流行病学调查有较好的应用价值。     

广东南海市登革热病原学及血清学检测

目的　为了明确广东省南海市１９９８ 年夏、秋季一批发烧、出疹病人的诊断。方法收集疑似登革热（ＤＦ）患者血清５２份,应用逆转录 聚合酶链反应（ＲＴ ＰＣＲ）、病毒分离和间接免疫荧光技术分别进行了病原学和血清学检测。结果　从２５ 份发病早期患者血标本中分离病毒１０ 份,经用单克隆抗体间接免疫荧光检测和ＲＴ ＰＣＲ检测证实ＤＥＮ２ 型感染。ＩｇＧ抗体检测,阳性率为４６－１５％ （２４／５２） ,最高滴度达１∶１２８０,ＩｇＭ 抗体检测阳性率为６０％ （１５／２５）。部分病人双份抗体检测,抗体滴度４ 倍升高。结论　此次南海市登革热暴发流行为登革２ 型感染所致。     

免疫-PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体方法的建立

目的　建立高灵敏性和高特异性的免疫 -PCR方法检测肾综合征出血热 (HFRS)患者血清中抗核衣壳蛋白抗体。方法　用汉坦病毒 ( 76 - 118株 )重组核衣壳蛋白为抗原包被聚苯乙烯微滴度板 ,与经ELISA法和临床均已确诊为HFRS患者的血清进行抗原抗体特异性反应 ,以链霉亲和素为桥梁将生物素标记的抗体与生物素标记的DNA指示分子相连 ,PCR扩增DNA指示分子 ,通过检测指示分子DNA来反映肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的水平 ,并与传统的ELISA法进行比较。结果　免疫 -PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的敏感性是ELISA法的 2 5 0 0 0倍 ;30例HFRS阳性患者血清免疫 -PCR检测均为阳性 ,2 0例甲型肝炎阳性血清和 2 0例正常人血清免疫 -PCR检测均为阴性。结论　免疫 -PCR方法敏感性高 ,特异性强 ,有可能作为一种高敏感性的检测方法用于HFRS的临床辅助诊断     

应重视肾综合征出血热的特殊临床表现和早期诊断线索

肾综合征出血热（HFRS）在我国又称流行性出血热,简称出血热,是由汉坦病毒引起的一种自然疫源性疾病,啮齿类动物特别是鼠类为其自然宿主和主要传染源。世界上有30多个国家发现HFRS,我国是HFRS流行最严重的国家,每年发病人数占世界汉坦病毒感染病例的90％以上。我国大陆除青海省与新疆维吾尔自治区外,各省、自治区、直辖市均有病例发生,台湾也有汉坦病毒感染病例报道。本病在我国主要分为姬鼠型和家鼠型两种类型,其中黑线姬鼠、黄颈姬鼠和大林姬鼠为姬鼠型出血热的主要宿主动物和传染源;褐家鼠为家鼠型出血热的主要宿主动物和传染源。目前我国存在姬鼠型、家鼠型和家鼠姬鼠混合型3种疫区,20世纪90年代以来,家鼠型疫区逐渐扩大,而且正在发生部分姬鼠型疫区向混合型疫区、混合型疫区向家鼠型疫区演变。     

2009年云南省肾综合征出血热监测分析

目的进一步掌握肾综合征出血热（HFRS）在云南省的流行特征,为防治提供依据。方法收集云南省本病疫情资料,采集人血清、鼠类肺脏作汉坦病毒（HV）抗体和抗原检查。结果2009年云南省共报告本病16例,死亡1例,年发病率为0．04／10万。病死率为6．25％：发病地区为大理、昆明、红河、文山、楚雄和怒江州（市）。在固定监测点泸西县、祥云县和昆明市五华区捕获鼠类8属15种559只,人血清292份,其中居民区以黄胸鼠和褐家鼠为优势鼠种,野外以大绒鼠和高山姬鼠为优势鼠种;鼠间HY带毒率为3．78％（20／529）,带毒鼠型动物为褐家鼠、黄胸鼠、小家鼠、大足鼠、大绒鼠、臭鼩鼱和灰麝鼩。健康人血清HV抗体检测,人群隐性感染率4．45％（13／292）。结论进一步证实了云南省存在着以褐家鼠和黄胸鼠为主要宿主的家鼠型HFRS疫源地,也存在着以高山姬鼠和大绒鼠为主的野鼠型疫源地;近几年发病率有所下降与鼠密度和鼠间HV感染率降低有关。     

384例性病门诊就诊者荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验结果分析

目的对384例荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验（FTA_ABs）检测结果进行分析,更好地为临床提供梅毒诊断的依据。方法对2012年确诊梅毒并经FTA—ABS检测为阳性的384例患者的血清,同时用梅毒螺旋体明胶颗粒凝集法（TPPA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）进行复核检测,并对其中的40例患者进行脑脊液FTAABS检测。结果384例FTAABS检测确诊的阳性病例中,梅毒抗体IgG、IgM同时阳性的59例（占15．4％）,抗体IgG阳性IgM阴性的325例（占84．6％）。40例脑脊液中抗体IgG阳性的12例,未见抗体IgM阳性。梅毒合并感染HIV的患者有29例（占7．6％）,其中RPR滴度〉1：8有21例（72．4％）。单纯梅毒感染的355例（92．4％）,其中RPR滴度〉1：8有97例（27．3%）。结论FTAABS试验敏感性和特异性高,值得在临床中推广。     

胶体金免疫渗滤法快速诊断肾综合征出血热的临床研究

目的 建立一种快速，敏感的检测血清中抗汉坦病毒IgM抗体的方法。方法 将抗人IgM抗体点于硝酸纤维素膜上，以捕获患者血清中特异性IgM抗体，向已包被抗体的硝酸纤维素膜上滴加患者血清后，再选后滴加汉坦病毒抗原和鼠抗汉坦病毒抗体，最后滴加金标抗鼠抗体直接显色，阳性反应为红色，整个操作过程一般不超过10分钟。结果 用该法与IgM抗体捕获法ELISA对比检测51份肾综合征出血热（HFRS）患者血清标本，两法均阳性者49份，均阴性者2份。总符合率为100%，敏感性为96%。结论 胶体金免疫渗滤法操作简便，反应迅速，敏感性较高，适于在基层医疗单位中应用，可用于HFRS的早期诊断。     

1例疑似HIV抗体阳性样本的检测分析

目的对1例艾滋病病毒（HIV）抗体确证试验疑似阳性样本进行随访检测分析,探讨最新《全国艾滋病检测技术规范》（2009年修订版）在实际工作中可能存在的问题及今后的解决思路。方法对蛋白印迹试验（WB）条带为gp160、gp120、p24的患者进行跟踪随访,按常规检测程序进行HIV抗体筛查和确证试验,采集的血液标本同时补充检测HIV核酸。结果 5次WB试验带型均为gp160、gp120、p24,4次病毒核酸随访检测均未检出HIV核糖核酸（RNA）和脱氧核糖核酸（DNA）,最终判断为无HIV感染。结论对刚符合阳性判定标准的样本应予高度警惕,切勿急于出具确证阳性报告,应补充检测病毒核酸,并继续随访检测,观察条带是否有进展     

实时荧光定量PCR在登革热病毒快速检测中的应用

目的应用实时荧光定量PCR快速检测登革热病毒感染。方法采集疑似登革热患者血清,采用实时荧光定量PCR检测登革热病毒,同时采用ELISA检测血清登革热IgM抗体。结果患者发病第7d血清登革热IgM血清抗体A值为0.236和0.237(临界值0.250),高度疑似阳性,第13d血清IgM抗体阳性。患者发病第2d,通用型核酸检测显示血清登革热病毒核酸含量较多,经过治疗,于第7d病毒拷贝下降。发病第2d,核酸检测确定感染病毒为登革热Ⅲ型;发病第13d血清登革Ⅲ型病毒核酸检测阴性。结论实时荧光定量PCR法具有准确性好、灵敏度高等优点,可用于登革热病毒感染的快速检测。     

宜春市1999-2009年肾综合征出血热流行病学分析

肾综合征出出热（HFRS）又称流行性出血热,是一种由汉坦病毒感染引起的。以发热、出血及肾损害为特征的一类全球性的自然疫源性疾病。宜春市是江西省HFRS主要流行地区。     

陕西延安地区肾综合征出血热流行情况研究报告

目的 明确陕西延安地区为肾综合征出血热疫源地及病毒基因型别。方法 择有疫情报告地,进行人群疫情调查及健康人群特异性抗体检测;用夹夜法捕鼠,调查鼠种及鼠密度,采集鼠肺、血标本。人血、鼠血分别用IFA和ELISA法检测IgG抗体;鼠肺采用RT-PCR检测汉坦病毒(HV)RNA,测定PCR产物并与HV代表株76-118和Seoul序列进行比较。结果 对延安市防疫站2001年统计的7例HFRS患者进行流行病学调查,均属在当地感染;检测延安市洛川县交口河镇245例人血标本HV特异性IgG抗体,阳性50例,人群隐性感染率为20.41％。22份鼠肺及鼠血标本,IFA抗HV IgG阳性3例,ELISA阳性5例。从一只鼠血抗体阳性的鼠肺中检测到HV RNA,序列测定符合Seoul S片段序列(94％)。结论 延安市洛川县交口河镇为HFRS疫源地及新疫区,洛川交口河镇健康人群、褐家鼠、小家鼠中有HV感染,病毒型别为SEO型。     

南京都市圈肾综合征出血热疑似病例血清学检测及基因亚型分析北大核心CSCD

目的通过检测肾综合征出血热疑似患者血清标本中特异性抗体和病毒基因组RNA,了解其基因型别及序列特征。方法采用胶体金法、荧光定量PCR法、巢式PCR法进行样本检测,对巢式PCR扩增后的阳性产物进行双向测序获得M基因部分片段序列,与各亚型代表株对应序列进行同源性分析并构建系统进化树,确定其基因亚型。结果122份标本中,IgM阳性27份,阳性率22.1%,IgG阳性57份,阳性率46.7%;荧光定量PCR法检测汉坦病毒核酸阳性13份,阳性率10.7%;15份样本经巢式PCR扩增测序后获得目的片段,其中13株分别属于汉滩病毒H5、H6、H9亚型和汉城病毒S3亚型,另有两株病毒株已形成新的亚型。结论南京都市圈存在汉滩病毒和汉城病毒流行,其中汉滩病毒存在多种亚型。     

流行性出血热病毒实验感染猕猴的初步研究

本文采用5只新生猕猴实验流行性出血热病毒（EHFV），系统观察EHFV在猕猴体内的靶器官及分布规律。在所检测的13种主要脏器中，脾、淋巴结、胸腺、肝和肺检测EHFV到抗原及分离到病毒，而在脑、脑垂体、肾、肾上腺、心、甲状腺、肠、胆囊等脏器中EHFV分离阴性。脾、淋巴结和胸腺中的病毒滴度高于肝、肺，且出现早、维持时间长。感染猕猴可产生类似于EHF患病毒血症、发热以及特异性抗体应答。