单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因/羟甲基无环鸟苷系统对人卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的作用

目的观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ１ｔｋ）／羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）系统对人卵巢癌的体内治疗作用。方法先将人卵巢癌细胞ＡＯ及携有ＨＳＶ１ｔｋ基因的ＡＯ细胞（ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ）注射于裸鼠皮下,形成肿瘤后再移植于裸鼠网膜,并以病毒生产细胞（ＶＰＣ／ＨＳＶ１ｔｋｃ）的培养液对ＡＯ网膜移植瘤进行体内转染,然后以ＧＣＶ对体外ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ转移的肿瘤及经体内转染的ＡＯ肿瘤进行治疗。结果ＨＳＶ１ｔｋ／ＧＣＶ基因治疗系统对ＡＯ裸鼠网膜移植瘤的抑制率为４６．８％,而ＡＯ／ＨＳＶ１ｔｋｃ裸鼠网膜移植瘤经ＧＣＶ治疗后,多数仅残留显微镜下可见的癌灶。结论ＧＣＶ在腹腔内对携有ＨＳＶ１ｔｋ基因的肿瘤具有更为显著的杀伤效应;ＨＳＶ１ｔｋ／ＧＣＶ基因治疗系统在卵巢癌的治疗上可能具有良好的应用前景。     

羟甲基无环鸟苷对携有单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用

目的：观察羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）对携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ１－ｔｋ）的人卵巢上皮癌ＡＯ细胞的体内杀伤效应。方法：于裸鼠背部左右两侧皮下分别接种ＡＯ细胞及携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的ＡＯ细胞（ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ），成瘤后每日腹腔注射ＧＣＶ。结果：经ＧＶＣ治疗后，裸鼠背部两侧肿瘤平均重量分别为：左侧ＡＯ肿瘤０．６８１ｇ；右侧ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ肿瘤０．０８７ｇ。经ＧＣＶ作用后仍然存活的多数ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ细胞胞浆呈肥大、坏死表现。但其核内染色质却多呈异染色质状态。结论：ＧＣＶ在裸鼠体内代谢后仍可高效杀伤携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的卵巢癌细胞，从而抑制肿瘤生长。但仍然存活的肿瘤细胞增殖活跃，如加用Ｓ期特异的化疗药物可能进一步提高远期疗效。     

羟甲基无环鸟苷对携有单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激…

目的：观察羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）对携有Ｉ型单纯疱疹病毒胸腺嘧淀核苷激酶基因（ＨＳＶ１－ｔｋ）的人卵巢上皮癌ＡＯ细胞的体内杀伤效应，方法；于裸级部左右两侧皮下分别接种ＡＯ细胞及携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的ＡＯ细胞（ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ），成瘤后每日腹腔注射ＧＣＶ。结果：经ＧＶＣ治疗后，裸鼠背部两侧肿瘤平均重量分别为：左侧ＡＯ肿瘤０．６８１ｇ；右侧ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ肿瘤０．０８７ｇ。经ＧＣＶ作用后     

单纯疱疹病毒胞腺嘧啶核苷激酶基因羟甲基无环岛苷系对人卵 …

观察单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激素酶基因羟甲基无环鸟苷系统对人卵巢癌的体内治疗作用。方法先将人卵巢癌细胞ＡＯ及携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的ＡＯ注射于裸鼠皮下,形成肿瘤后再移植于裸鼠网膜,并以病毒生物细胞的培养液对ＡＯ网膜移植瘤进行体风转染,然后以ＧＣＶ对体外ＡＯ／ＨＳＶ１－ｔｋｃ转移的肿瘤及经体内转染的ＡＯ肿瘤进行治疗。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢癌细胞的杀伤效应

目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因转染联合抗病毒药物羟基无环鸟苷（ＧＣＶ）对人卵巢癌细胞系的杀伤效应。方法：采用基因工程技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＤＮＡ序列插入逆转录病毒载体ｐＬＮＳＸ的ＨｉｎｄⅢ位点，构建重组体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ，并采用磷酸钙介导贴壁细胞基因转染法将重组体导入ＰＡ３１７包装细胞，建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株ＰＡ３１７／ＴＫ。并采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ系统对人类卵巢癌ＡＯ细胞系的生长抑制率。结果：重组逆转录病毒载体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ能有效地将ＨＳＶ－ＴＫ基因导入ＡＯ细胞系内并使其获得对ＧＣＶ的敏感性。当培养液内ＧＣＶ达４０μｍｏｌ时，其对转ＨＳＶ－ＴＫ基因后ＡＯ细胞的生长抑制率为９８．０％。结论：ＡＯ细胞转染ＨＳＶ－ＴＫ基因后，能有效地被ＧＣＶ杀灭。     

腺病毒/HSV_1-tk/GCV、ACV系统对卵巢上皮癌细胞旁观者效应的研究

目的：研究腺病毒／ＨＳＶ１－ｔｋ／ＧＣＶ、ＡＣＶ系统对卵巢上皮癌细胞旁观者效应。方法：常规重组腺病毒扩增纯化后,测病毒滴度。Ｘ－ｇａｌ染色法测定转染效率,ＰＣＲ检测ＨＳＶ１－ｔｋ的表达,混合细胞培养实验观察旁观者效应。结果：重组腺病毒扩增纯化后测定滴度分别为Ａｄ／ｔｋ*"６２×１０９ｐｆｕ／ｍｌ,ＡｄＬａｃＺ*"１４×１０９ｐｆｕ／ｍｌ。当感染复数为１００时,近１００％的细胞可被感染。ＰＣＲ结果显示,Ａｄｔｋ转染ＴＹＫ后,可见４０４ｂｐ的特异性条带,在同一ＭＯＩ中,有１０％的Ａｄｔｋ／ＴＹＫ细胞存在,ＧＣＶ就可杀死近５０％左右的混合细胞。ＡＣＶ的作用约为ＧＣＶ的１／１０。结论：重组腺病毒Ａｄ／ｔｋ可有效地感染人卵巢上皮癌细胞,腺病毒／ＨＳＶ１ ｔｋ／ＧＣＶ、ＡＣＶ系统存在着旁观者效应。     

逆转录病毒介导I型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因转导…

目的：探讨将Ｉ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）／丙氧鸟苷基因治疗系统应用于卵巢癌的治疗。方法，应用产病毒包装细胞（ＶＰＣ）／ＨＳＶ－ｔｋａ和ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋｃ的培养液分别感染卵巢上皮癌细胞系ＡＯ和３ＡＯ，以Ｇ＝４１８筛选转导阳性克隆，并以丙氧乌苷杀伤阳性隆。结果：ＶＰＣ／ＨＳＶ／ｔｋｅ增减液对Ａ铁感染滴度为９．３±１０００００；以１：１０００稀释度的ＶＰＣ／ＨＰＳ－ｔｋｃ增减     

白细胞介素2基因转导对卵巢癌细胞系SKOV3免疫原性的影响

目的 探讨白细胞介素２（ＩＬ－２）基因转导对卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３免疫原性的影响。方法 应用流式细胞术,测定ＳＫＯＶ３细胞组织相容性白细胞抗原（ＨＬＡ）ＨＬＡ－ＡＢＣ、ＨＬＡ－ＤＱ及ＨＬＡ－ＤＲ分子的表达,＾５１Ｃｒ－４ｈ释放实验显示ＳＫＯＶ３、ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ、ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对自然杀伤（ＮＫ）细胞和淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞杀伤的敏感性。结果 ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞中ＨＬＡ－Ａ     

逆转录病毒介导Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因转导卵巢癌细胞的研究

目的：探讨将Ⅰ型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基因（ＨＳＶ－ｔｋ）／丙氧鸟苷基因治疗系统应用于卵巢癌的治疗。方法：应用产病毒包装细胞（ＶＰＣ）／ＨＳＶ－ｔｋａ和ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋｃ的培养液分别感染卵巢上皮癌细胞系ＡＯ和３ＡＯ，以Ｇ－４１８筛选转导阳性克隆，并以丙氧乌苷杀伤阳性克隆。结果：ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋｃ培养液对ＡＯ细胞的感染滴度为９．３×１０００００；以１∶１０００稀释度的ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋｃ培养液与以１∶１０稀释度的ＶＰＣ／ＨＳＶ－ｔｋａ培养液作转导所获得的阳性克隆数相近；且所有阳性克隆在含有１０μｇ／ｍｌ丙氧鸟苷的培养液中均发生完全死亡。结论：ＨＳＶ－ｔｋ／丙氧鸟苷系统在卵巢癌治疗中具有良好的应用前景     

生长抑制DNA损伤基因45与p53对卵巢癌细胞凋亡作用的研究

目的：研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗｔｈａｒｅｓｔａｎｄＤＮＡｄａｍａｇｅ,ＧＡＤＤ）对卵巢癌细胞的作用及与ｐ５３蛋白表达的关系。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５的表达;采用ＲＴ－ＰＣＲ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白的表达。通过载体构建将目的基因ＧＡＤＤ４５重组于ｐｃＤＮＡ－Ⅲ真核质粒内。利用脂质体（ＤＯＴＡＰ）法转染ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株;Ｇ４１８抗性筛选,ＲＴ－ＰＣＲ进行表达鉴定。采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）以及ＤＮＡ梯度法对细胞凋亡现象进行检测。结果：卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５表达阴性。ＳＫＯＶ３细胞株ｐ５３蛋白表达阳性;３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白表达阴性。转染ＧＡＤＤ４５基因的ＳＫＯＶ３细胞株经化学药物足叶已甙（ＶＰ１６）和紫外线诱导后,可以使该细胞产生凋亡现象,而对转染ＧＡＤＤ４５基因的３ＡＯ细胞株经诱导后,未见细胞凋亡现象。结论：转染ＧＡＤＤ４５基因,对ｐ５３蛋白表达阳性的细胞株ＳＫＯＶ３经诱导后,可使细胞进入凋亡状态。对ｐ５３蛋白表达阴性的细胞株３ＡＯ转染ＧＡＤＤ４５基因后,经诱导细胞无凋亡现象,证实ＧＡＤ?     

c—erbB2反义核酸对卵巢癌细胞系生物学行为及药物敏感性的影响

目的：探讨ｃ－ｅｒｂＢ２反义核酸对卵巢癌细胞生物学行为及其化疗药物敏感性的影响。方法：应用ｐＵＣ－ｅｒｂＢ２和ｐＤＯＲ－ｎｅｏ质粒，构建了含反义ｅｒｂＢ２ｃＤＮＡ３．８ｋｂ的重组逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ－ｅｒｂＢ－ｎｅｏ，经脂质体转染ｅｒｂＢ２高表达的人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３，再经Ｇ４１８（一种新霉素类似物）筛选得到新霉素抗性细胞，命名为ＳＫＯＶ３－Ａ２。结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析表明，反义ｅｒｂＢ２３．８ｋｂ已完全整合到ＳＫＯＶ３细胞中，与亲本细胞及转染ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的对照组细胞相比，ＳＫＯＶ３－Ａ２的生长和ＤＮＡ合成均受到抑制，且对５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）及顺铂（ＤＤＰ）的药物敏感性明显增加。结论：ｃ－ｅｒｂＢ２反义核酸在卵巢癌基因治疗中有一定作用；ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因可能与卵巢癌细胞耐药有关。     

甲孕酮逆转卵巢癌多药耐药的研究

目的 研究甲孕酮对卵巢癌耐药细胞系ＳＫＯＶ－３多药耐药基因ＭＤＲ１的表达和功能的影响及对多药耐药的逆转作用。方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应方法,研究在不同浓度和作用时间下,甲孕酮对ＳＫＯＶ－３细胞ＭＤＲ１ｍＲＮＡ表达的影响,采用流式细胞术检测单加阿霉素、甲孕酮联合阿主异搏定联合阿霉素时,细胞内阿霉素浓度,采用裸鼠腹水瘤模型,研究甲孕酮辅助化疗对荷瘤裸鼠生存时间与生存率的影响。结果 在不同浓度和     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢癌细胞的杀伤…

目的：探讨包疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因转染联合抗病毒药物羟基无环鸟苷（ＧＣＶ）对人卵巢癌细胞系的杀伤效应。方法：采用基因工程技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＤＮＡ序列插入逆洋病毒载体ｐＬＮＳＸ的ＨｉｎｄⅢ位点，构建重组体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ＝ＴＫ，并采用磷酸钙介导贴壁细胞基因转染法将重组体导入ＰＡ３１７我装细胞，建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株ＰＡ３１７／ＴＫ。并采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测ＨＳＶ－     

野生型p53基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用

目的：探讨野生型ｐ５３(ｗｔ ｐ５３)基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用。方法：利用脂质体介导，将含有人全长ｗｔ－ｐ５３基因ｃＤＮＡ的真核表达载体质粒ｐＣＥＰ４／ｐ５３和空载体质粒ｐＣＥＰ４分别转染卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞株，分别命名为ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４／ｐ５３细胞(C组)、ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４细胞(B组)，另设ＳＫＯＶ３细胞为正常对照组（Ａ组）。观察细胞体外生长情况和凋亡变化。结果：外源性ｐ５３基因在Ｃ组细胞中获表达，细胞生长曲线显示ｐ５３的导入使ＳＫＯＶ３细胞生长受到明显抑制，Ｃ组平均细胞集落数（１８．６±１．８个）少于Ａ组（２４．３±２．２个）和Ｂ组（２２．７±２．６），差异有显著性（Ｐ（005）。ＭＴＴ法检测C组细胞活力明显低于Ａ、Ｂ组。Ｃ组细胞Ｇ０～Ｇ１期百分比（５７．７９％）及凋亡细胞百分比（13．９1％）均高于Ｂ组（４６．０２％、２．０８％）和Ａ组（４３．６２％、０）。结论：ｗｔ－ｐ５３基因可介导ＳＫＯＶ３细胞Ｇ１期停滞和细胞凋亡，抑制细胞体外生长。     

腺病毒／HSV1—tk／GCV,ACV系统对卵巢上皮癌细胞旁观者效应的研究

研究腺病毒／ＨＳＶ１－ｔｈＧＣＶ、ＡＣＶ系统对卵巢上皮癌细胞旁观者效应。方法：常规重组腺病毒扩增纯化后，测病毒滴度。Ｘ－ｇａｌ染色法测定转染效率，ＰＣＲ检测ＨＳＶ１－ｔｋ的表达，混合细胞培养实验观察旁观者效应。结果：重组腺病毒扩增纯化后测定滴度分别为Ａｄ／ｔｋ６．２＊１０＾９ｐｆｕ／ｍｌ，ＡｄＬａｃＺ１．４＊１０＾９ｐｆｕ／ｍｌ。当感染复数为１００时，近１００％的细胞可被感染。ＰＣＲ结果显示，Ａｄ     

IL-2基因转移对卵巢癌细胞系SKOV3粘附性的影响

目的：研究ＩＬ－２基因转移对卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞系粘附性的影响。方法：细胞对塑料基质、细胞基底膜成分的粘附实验,流式细胞术测定ＣＤ４４Ｈ的表达。结果：ＥＤＴＡ介导的细胞分离实验表明,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对塑料基质的粘附能力明显下降（Ｐ＜０．０１）;对基质及基底膜成分的粘附实验表明,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对Ⅳ型胶原和ｍａｔｒｉｇｅｌ的粘附能力下降,但对ＬＮ、ＦＮ的粘附能力无明显改变;粘附分子ＣＤ４４Ｈ的表达：ＳＫＯＶ３、ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ、ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组细胞粘附分子ＣＤ４４Ｈ阳性细胞百分率分别为７６．２％、６６．７％和３７．８％,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组明显降低（Ｐ＜０．００１）。结论：ＩＬ－２基因修饰可使卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３粘附能力下降。     

卵巢癌裸鼠皮下移植瘤和腹水瘤模型导向治疗的研究

采用抗卵巢癌单克隆抗体（单抗）－脂质体－阿霉素交联物（ＭＬＡ）、阿霉素、ＣＯＣ１６６－９单抗、正常鼠ＩｇＧ脂质体阿霉素交联物（ＮＭＬＡ）及生理盐水，对卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ＿３接种的２４只裸鼠皮下移植瘤模型及１６只腹水瘤模型分别进行导向及非导向治疗，观察对比疗效。皮下移植瘤模型以肿瘤生长大小、腹水瘤模型以裸鼠死亡时间为观察指标，判断治疗效果。结果：各治疗药物对肿瘤生长均有抑制作用，以ＭＬＡ导向治疗的效果最好。说明导向治疗是有价值和发展前景的疗法。     

羟甲基无环鸟苷对携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶基 …

目的 观察羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）对转导携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ１－ｔＫ）的ＡＯ、３ＡＯ细胞外杀伤作用。方法 分别在携有ＨＳＶ１ｔＫ基因的ＡＯ、３ＡＯ细胞培养液中加入不同浓度的ＧＣＶ,绘制剂量效应曲线,并以荥光细胞洲活分选仪（ＦＡＣＳ）测定凋亡细胞比例及细胞周期比例,以光镜及电镜观察细胞形态变化,以ＤＮＡ我染色观察细胞核内染色质变化。结果 ＧＣＶ在体外对于携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的Ａ     

粒细胞集落刺激因子对人卵巢癌细胞株生长的影响

了解粒细胞集落刺激因子对人卵巢癌细胞株生长的影响,方法采用ＸＴＴ比色法,检测Ｇ－ＣＳＦ对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、３ＡＯ及ＧＡＯＶ３生长的影响;对有影响的细胞株进行流式细胞仪检测和Ｇ－ＣＳＦ受体的检测,观察外源性Ｇ－ＣＳＦ对该细胞株的裸鼠皮下瘤生长的影响。结论Ｇ－ＣＳＦ对所检测的卵巢癌细胞株生长无显著影响。     

多药耐药基因表达与卵巢癌耐药关系的研究

目的：探讨多药耐药（ＭＤＲ１）基因表达与卵巢癌耐药的关系以及耐药修饰剂——环孢素Ａ（ＣｓＡ）对卵巢癌耐药性的逆转影响。方法：建立裸鼠卵巢癌模型，随机分为对照组、阿霉素（ＡＤＭ）组、ＡＤＭ＋ＣｓＡ组，观察３组的肿瘤生长情况以及生存率。利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测３２例卵巢癌患者肿瘤组织ＭＤＲ１基因的表达情况。结果：ＭＤＲ１基因表达阳性的卵巢癌细胞对阿霉素、柔红霉素、足叶乙甙、长春新碱等多种化疗药物交叉耐药，其５０％细胞抑制浓度（ＩＣ５０值）是ＭＤＲ１基因表达阴性细胞的４．１～１５．５倍。当ＡＤＭ与ＣｓＡ联合应用后，裸鼠肿瘤生长速度与单用ＡＤＭ者之间的差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。３２例卵巢癌患者ＭＤＲ１基因表达与卵巢癌的病理类型、分化程度之间没有明显的关系，而ＭＤＲ１基因表达阳性患者预后不良的机率是阴性患者的１６．０７（１．７６～１４４．７）倍。结论：ＭＤＲ１基因相关药物可以诱导ＭＤＲ１基因的过度表达，出现多药耐药的表型。ＣｓＡ可以在体外环境及动物体内环境中部分逆转卵巢癌细胞的耐药性。在卵巢癌患者中检测ＭＤＲ１基因的表达，可以作为判断临床预后的一个指标。