粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对人卵巢细胞株生长的影响

目的Ｌ：了解粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对人卵巢癌细胞株生长的影响。方法：采用ＸＴＴ比色法及流式细胞仪检测ＧＭ－ＣＳＦ对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、３ＡＯ及ＣＡＯＶ３细胞生长的影响。结果：用ＸＴＴ法检测ＧＭ－ＣＳＦ对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ及ＣＡＯＶ３细胞的生长均无明显影响;流式细胞仪检测也未发现ＧＭ－ＣＳＦ对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ及ＣＡＯＶ３的增殖指数有明显影响。结论：在卵巢癌化疗过程中应用ＧＭ     

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对人卵巢癌细胞株生长的影响

目的：了解粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ ＣＳＦ）对人卵巢癌细胞株生长的影响。方法：采用ＸＴＴ比色法及流式细胞仪检测ＧＭ ＣＳＦ对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、３ＡＯ及ＣＡＯＶ３ 细胞生长的影响。结果：用ＸＴＴ法检测ＧＭ ＣＳＦ对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ 及ＣＡＯＶ３ 细胞的生长均无明显影响;流式细胞仪检测也未发现ＧＭ ＣＳＦ对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ及ＣＡＯＶ３细胞的增殖指数有明显影响。结论：在卵巢癌化疗过程中应用ＧＭ ＣＳＦ是比较安全的,对其潜在的促进肿瘤细胞增殖的顾虑也许是不必要的。     

生长抑制DNA损伤基因45与p53对卵巢癌细胞凋亡作用的研究

目的：研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗｔｈａｒｅｓｔａｎｄＤＮＡｄａｍａｇｅ,ＧＡＤＤ）对卵巢癌细胞的作用及与ｐ５３蛋白表达的关系。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５的表达;采用ＲＴ－ＰＣＲ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白的表达。通过载体构建将目的基因ＧＡＤＤ４５重组于ｐｃＤＮＡ－Ⅲ真核质粒内。利用脂质体（ＤＯＴＡＰ）法转染ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株;Ｇ４１８抗性筛选,ＲＴ－ＰＣＲ进行表达鉴定。采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）以及ＤＮＡ梯度法对细胞凋亡现象进行检测。结果：卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５表达阴性。ＳＫＯＶ３细胞株ｐ５３蛋白表达阳性;３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白表达阴性。转染ＧＡＤＤ４５基因的ＳＫＯＶ３细胞株经化学药物足叶已甙（ＶＰ１６）和紫外线诱导后,可以使该细胞产生凋亡现象,而对转染ＧＡＤＤ４５基因的３ＡＯ细胞株经诱导后,未见细胞凋亡现象。结论：转染ＧＡＤＤ４５基因,对ｐ５３蛋白表达阳性的细胞株ＳＫＯＶ３经诱导后,可使细胞进入凋亡状态。对ｐ５３蛋白表达阴性的细胞株３ＡＯ转染ＧＡＤＤ４５基因后,经诱导细胞无凋亡现象,证实ＧＡＤ?     

促卵泡激素结合片段对卵巢癌细胞株的作用

目的 研究促卵泡激素９ＦＳＨ）结合片段对卵巢癌细胞株的作用了解ＦＳＨ结合片段作为卵巢靶向治疗的导向材料的应用价值。方法 应用不同类型的卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、ＯＶＣＡＲ、ＡＯ、３ＡＯ作为实验对象,分别加入ＦＳＨ、ＦＳＨ结合片段、ＦＳＨ＝ＦＳＨ结合片段。培养５天后用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法检测卵巢癌细胞的生长状况。结果 ＦＳＨ对卵巢癌细胞的生长有明显的促进作用,细胞平均增殖率为２８．０％;ＦＳＨ结     

羟基喜树碱和topotecan对人卵巢癌细胞株体外作用的研究

目的 观察１０－羟基喜树碱（羟基喜树缄）和９－二甲基氨基－１０羟基喜树缄（ｔｏｐｏｔｅｃａｎ）对卵巢癌细胞株体外生长的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法,测定羟基喜树碱和ｔｏｐｏｔｅｃａｎ对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３和ＣＡＯＶ３生长的抑制作用,并绘制浓度－抑制率曲线,观察这两种药物对ＳＫＯＶ３和ＣＡＯＶ３的生长及集落形成的抑制作用,并与顺铂进行对比;用末端脱氧核酰转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸     

肿瘤坏死因子与干扰素协同抗卵巢癌作用的研究

应用肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和γ干扰素（ＩＦＮγ）对靶细胞３ＡＯ和ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３卵巢癌细胞株进行抗肿瘤治疗的实验研究。结果：３ＡＯ和ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３卵巢癌细胞株对各种浓度的ＴＮＦ和ＩＦＮγ均呈现抵抗作用。ＴＮＦ和ＩＦＮγ协同用药时对靶细胞有杀伤作用，当ＴＮＦ和ＩＦＮγ的浓度均为１×１０￣４Ｕ／Ｌ时，出现对３ＡＯ和ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３卵巢癌细胞的明显杀伤作用（Ｐ＜０．０５）；当ＴＮＦ和ＩＦＮγ均为１×１０￣６Ｕ／Ｌ时，杀伤５５％的３ＡＯ和７５％的ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３卵巢癌细胞（Ｐ＜０．０１）。提示：ＩＦＮγ可增加３ＡＯ和ＮＩＨ：ＯＶＣＡＲ－３卵巢癌细胞对ＴＮＦ的敏感性，ＴＮＦ与ＩＦＮγ联合用药时有很好的协同抗卵巢癌作用。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因转染联合药物对卵巢癌细胞的杀伤效应

目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶（ＨＳＶ－ＴＫ）基因转染联合抗病毒药物羟基无环鸟苷（ＧＣＶ）对人卵巢癌细胞系的杀伤效应。方法：采用基因工程技术，将ＨＳＶ－ＴＫ基因的ＤＮＡ序列插入逆转录病毒载体ｐＬＮＳＸ的ＨｉｎｄⅢ位点，构建重组体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ，并采用磷酸钙介导贴壁细胞基因转染法将重组体导入ＰＡ３１７包装细胞，建立重组逆转录病毒载体分泌细胞株ＰＡ３１７／ＴＫ。并采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测ＨＳＶ－ＴＫ／ＧＣＶ系统对人类卵巢癌ＡＯ细胞系的生长抑制率。结果：重组逆转录病毒载体ｐＬＮＳ／ＨＳＶ－ＴＫ能有效地将ＨＳＶ－ＴＫ基因导入ＡＯ细胞系内并使其获得对ＧＣＶ的敏感性。当培养液内ＧＣＶ达４０μｍｏｌ时，其对转ＨＳＶ－ＴＫ基因后ＡＯ细胞的生长抑制率为９８．０％。结论：ＡＯ细胞转染ＨＳＶ－ＴＫ基因后，能有效地被ＧＣＶ杀灭。     

野生型p53基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用

目的：探讨野生型ｐ５３(ｗｔ ｐ５３)基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用。方法：利用脂质体介导，将含有人全长ｗｔ－ｐ５３基因ｃＤＮＡ的真核表达载体质粒ｐＣＥＰ４／ｐ５３和空载体质粒ｐＣＥＰ４分别转染卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞株，分别命名为ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４／ｐ５３细胞(C组)、ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４细胞(B组)，另设ＳＫＯＶ３细胞为正常对照组（Ａ组）。观察细胞体外生长情况和凋亡变化。结果：外源性ｐ５３基因在Ｃ组细胞中获表达，细胞生长曲线显示ｐ５３的导入使ＳＫＯＶ３细胞生长受到明显抑制，Ｃ组平均细胞集落数（１８．６±１．８个）少于Ａ组（２４．３±２．２个）和Ｂ组（２２．７±２．６），差异有显著性（Ｐ（005）。ＭＴＴ法检测C组细胞活力明显低于Ａ、Ｂ组。Ｃ组细胞Ｇ０～Ｇ１期百分比（５７．７９％）及凋亡细胞百分比（13．９1％）均高于Ｂ组（４６．０２％、２．０８％）和Ａ组（４３．６２％、０）。结论：ｗｔ－ｐ５３基因可介导ＳＫＯＶ３细胞Ｇ１期停滞和细胞凋亡，抑制细胞体外生长。     

雌激素对卵巢癌细胞株体外生长的影响

目的 探讨１７－β雌二醇（Ｅ２）对卵巢癌细胞株体外生长和细胞周期的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和流式细胞术（ＦＣＭ）的方法,观察了卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ３和ＯＣＶＡＲ３在加入含有不同浓度１７－β Ｅ２培养液后细胞活性和细胞周期的变化;同时采用免疫组化方法,测定癌细胞在加入１７－β Ｅ２前后雌激素受体表面的影响。结果 （１）浓度为０．２５～５．００ｎｍｏｌ／Ｌ的１７－β Ｅ２,可轻度     

外源性Rb基因对卵巢癌细胞株生长的抑制作用

目的 探讨外源性Ｒｂ基因对卵巢细胞生长的抑制作用，为卵巢癌的基因治疗提供实验依据，方法 通过腺病毒介导的Ｒｂ基因，于体外转染卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ３。应用免疫组织化学，ＤＮＡ琼脂糖电泳等方法，检测外源性Ｒｂ基因的导入及其表达。通过四甲基偶氮唑蓝比色法及流式细胞术等，观察转染Ｒｂ基因的ＣＡＯＶ３细胞的生长情况。结果 重组腺病毒载体有可效于体外转染卵巢癌细胞株ＣＡＯＶ３；转染外源性Ｒｂ基因后，ＣＡＯＶ３     

人端粒酶催化亚基基因反义寡核苷酸对卵巢癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

目的：探讨人端粒酶催化亚基（hEST2)基因反义寡核苷酸（AODN）对卵巢 癌细胞系SKOV3、COC1细胞端粒酶活性及细胞生长的影响。方法：分别采用逆转录聚酶链反应技术、端粒重复扩增法、四甲基偶氮唑蓝法、 绘制细胞生长曲线的方法检测hEST2基因AODN转染前后SKOV3、COC1细胞hEST2 mRNA表达、端粒酶活性的变化,以及对细胞增殖能力及细胞生长的影响。结果：hEST2基因AODN能够下调SKOV3、COC1细胞hEST2 mRNA的表达,降低端粒酶活性,抑制细胞的生长,作用具有明显的时效性。以浓度为30μmol／L的AODN治疗48h的作用最显著,SKOVE、COC1细胞hEST2 mRNA的表达分别下降54．6％、44．6％,对两 株细胞的端粒酶活性抑制率分别达到47．9％、42．7％,与相同浓度的随机寡核苷酸（RODN）、正义寡核苷酸（SODN） 相比,差异有显著性（P＜0．05)。结论：hEST2基因的反义治疗能够抑制卵巢癌细胞的增殖能力,该基因有望成为卵巢治疗的新方向。     

siltuximab单克隆抗体对卵巢上皮性癌中白细胞介素6/Stat3信号传导通路的影响

目的 探讨白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体--siltuximab对卵巢上皮性癌(卵巢癌)中IL-6/信号传导及转录活化因子3(Stat3)信号传导通路的影响.方法 (1)选取美国哈佛大学麻省总医院近20年来确诊为卵巢癌的26例患者的癌组织标本,每例患者的标本均包含原发性、转移性和复发性癌组织,免疫组化法检测26例卵巢癌患者癌组织中IL-6蛋白的表达;(2)蛋白印迹法检测IL-6、siltuximab联合IL-6处理后卵巢癌细胞株SKOV3细胞中磷酸化Stat3(pStat3)蛋白的表达,以及siltuximab处理后卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TR和CAOV3/TR细胞中Stat3介导的抗凋亡蛋白--bcl-XL、MCL-1、survivin蛋白的表达;(3)实时细胞技术检测siltuximab联合IL-6处理后SKOV3-pEGFP-Stat3细胞中pEGFP-Stat3融合蛋白的核转移情况;(4)四甲基偶氮唑蓝比色法检测siltuximab处理后SKOV3/TR和CAOV3/TR细胞对紫杉醇的敏感性,以50%抑制浓度(IC50)表示.结果 (1)卵巢癌患者转移性和复发性癌组织中IL-6蛋白的染色强度明显高于原发性癌组织;且转移性和复发性癌组织中IL-6蛋白的阳性表达率[分别为69%(18/26)和77%(20/26)]明显高于原发性癌组织[23%(6/26),P＜0.05].(2)IL-6处理的SKOV3细胞中pStat3蛋白的表达强度明显高于未经IL-6处理者;siltuximab(浓度分别为0.01、0.1、1和10μg/ml)联合IL-6处理后,SKOV3细胞中pStat3蛋白的表达强度随siltuximab浓度的增加明显减弱;经不同浓度(0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml)的siltuximab处理后,SKOV3/TR和CAOV3/TR细胞中bcl-XL、MCL-1、survivin蛋白的表达强度均明显低于未经siltuximab处理者.(3)IL-6处理后,pEGFP-Stat3融合蛋白迅速转移到SKOV3-pEGFP-Stat3细胞的细胞核中;siltuximab(浓度分别为0.001、0.01、0.1、1、10μg/ml)联合IL-6处理后,pEGFP-Stat3融合蛋白的核转移随siltuximab浓度的增加逐渐减少.(4)不同浓度的siltuximab(分别为1、10 μg/ml)处理后,SKOV3/TR细胞对紫杉醇的IC50(分别为0.49和0.19μg/ml)明显低于未经siltuximab处理者(0.71μg/ml;P＜0.05);CAOV3/TR细胞对紫杉醇的IC50(分别为0.0010和0.0008μg/ml)明显低于未经siltuximab处理者(0.0021 μg/ml;P＜0.01).结论 siltuximab能有效阻断卵巢癌中IL-6/Stat3信号传导通路,可能对卵巢癌的治疗有重要作用.     

Bcl-2 decreases cell proliferation and promotes accumulation of cells in S phase without affecting the rate of apoptosis in human ovarian carcinoma cells

OBJECTIVES: The Bcl-2 protein is an important regulator of the apoptotic cascade and promotes cell survival. Bcl-2 can also delay entry into the cell cycle from quiescence. In the present study, we used two isogenic human ovarian carcinoma cell lines, which expressed differential levels of Bcl-2 proteins, to demonstrate that Bcl-2 may regulate the growth rates of adenocarcinoma cells. METHODS: The growth rates of two isogenic ovarian cancer cell lines were determined by XTT assays and flow cytometry combined with PI staining. Bcl-2-overexpressing SKOV3 cells were modified to express a doxycycline-inducible anti-Bcl-2 single-chain antibody and the effects of Bcl-2 protein inhibition on cell proliferation and apoptosis were assessed. RESULTS: We demonstrate that Bcl-2 promotes the accumulation of proliferating carcinoma cells in S phase. The Bcl-2-overexpressing SKOV3 cell line proliferates markedly faster and shows delayed progression to G2M phase compared to its low Bcl-2-expressing counterpart SKOV3.ip1 cell line. Single-chain antibody-mediated inhibition of Bcl-2 in SKOV3 cells was associated with increased growth rates and more rapid cell cycle progression. Treatment with cisplatin resulted in more cells accumulating in S phase in Bcl-2-overexpressing SKOV3 cells, while the inhibition of Bcl-2 abolished delayed entry into G2M phase without affecting cisplatin-induced apoptosis. CONCLUSIONS: Our results suggest that, in ovarian cancer cells, Bcl-2 delays cell cycle progression by promoting accumulation of cells in S phase without affecting the rate of apoptosis. Thus, in addition to its known role at the G0/G1 checkpoint, we demonstrate for the first time that Bcl-2 also regulates the S phase.     

卵巢癌SKOV3细胞培养液对脐血树突细胞前体细胞亚群的影响

目的:研究卵巢癌细胞培养上清能否诱导树突细胞前体细胞亚群比例发生变化。方法:以脐血来源的CD34+干细胞通过细胞因子FLT3-L(100ng/ml)、SCF(50ng/ml)的诱导在体外扩增分化为DC前体细胞(pre-DC)。培养并收集卵巢癌细胞株SKOV3上清,经透析法浓缩。将上清培养的pre-DC,经不同浓度上清(0%、25%、50%、75%、100%、150%)作用后,用流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测pre-DC表面抗原CD123、CD11c、HLA-DR、CD80、CD86的表达。结果:上清促进CD11c和HLA-DR抗原的表达,不促进CD123、CD80、CD86抗原的表达。结论:卵巢癌细胞株上清影响两类DC前体细胞亚群的比例变化,可能通过此途径参与形成腹腔免疫缺陷。     

γ-干扰素对卵巢癌细胞株血管内皮生长因子表达的影响

目的　研究γ 干扰素 (IFN γ)对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　将IFN γ以不同浓度 (1、10、10 0、10 0 0、10 0 0 0U/ml)、不同作用时间 (12、2 4、3 6、48、60h)作用于SKOV3细胞 ,在相差显微镜下观察细胞形态的变化 ;用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖 ;用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)半定量法测定细胞VEGFmRNA含量 ;用双抗体夹心酶联免疫吸附试验 (ELISA)和免疫细胞化学方法测定细胞培养上清液和细胞浆中VEGF蛋白含量。结果　 (1) 10 0 0U/mlIFN γ作用后SKOV3细胞形态无明显变化。 (2 )不同浓度 (1、10、10 0、10 0 0、10 0 0 0U/ml)IFN γ作用不同时间 (12、2 4、3 6、48、60h)后 ,SKOV3细胞增殖活性比较 ,差异无显著性 (P>0 0 5 )。 (3 )IFN γ作用后 ,SKOV3细胞VEGFmRNA和蛋白含量明显减少 (P <0 0 1)。IFN γ浓度达到 10U/ml后起作用 [抑制率为 (5 2± 0 6) % ],其后随着浓度的增高 ,IFN γ对VEGFmRNA的抑制作用增强 ,在浓度达到 10 0 0U/ml时 ,抑制作用达到高峰 [抑制率为 (2 1 6± 2 6) % ]。但IFN γ的抑制作用并不存在时间依赖关系 ,用药 2 4h后出现抑制作用 ,并立即达到高峰 [抑制率为 (2 2 4± 1 7) % ],其后抑制作用不随时间的延长而     

RNA干扰技术沉默survivin基因逆转卵巢癌细胞株SKOV3/ADM耐药性的研究

目的检测survivin基因在卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞株SKOV3/ADM及其亲本细胞株SKOV3中的表达水平,探讨以survivin基因为靶向的RNA干扰(RNA i)能否有效沉默survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达,并能否有效逆转SKOV3/ADM细胞对化疗药物的耐药性。方法半定量RT-PCR、免疫荧光法检测survivin mRNA、蛋白在SKOV3/ADM及SKOV3细胞中的表达。以survivin基因为靶向的重组质粒pshRNA-survivin及紫杉醇作用于SKOV3/ADM细胞,将SKOV3/ADM细胞分为4组,即对照组、RNA i组、紫杉醇组、RNA i+紫杉醇组,RT-PCR技术检测各组细胞的survivinmRNA表达水平,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)荧光染色法及末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL)检测各组细胞的凋亡情况。结果survivin mRNA在SKOV3/ADM、SKOV3细胞中的表达水平分别为99.1%、75.3%,SKOV3/ADM、SKOV3细胞的荧光细胞数分别为(59±5)、(42±3)个,两种细胞间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RNA i后SKOV3/ADM细胞中mRNA的表达水平由99.1%降低至7.9%。AO/EB荧光染色法、TUNEL法检测各组细胞凋亡数,紫杉醇组为(10.2±1.0)、(9.8±0.8)个,RNA i组为(48.5±4.9)、(49.5±4.3)个,RNA i+紫杉醇组为(71.5±6.8)、(68.3±5.7)个,RNA i+紫杉醇组与RNA i组比较,差异有统计学意义(P<0.05),RNA i+紫杉醇组与紫杉醇组比较,差异也有统计学意义(P<0.05)。结论survivin基因在SKOV3/ADM细胞中的表达显著高于SKOV3细胞。以survivin基因为靶向的RNA i可有效抑制SKOV3/ADM细胞中survivin基因的表达,有效增加了SKOV3/ADM细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性,显著上调了SKOV3/ADM细胞的凋亡活性。