IL-2基因转移对卵巢癌细胞系SKOV3粘附性的影响

目的：研究ＩＬ－２基因转移对卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞系粘附性的影响。方法：细胞对塑料基质、细胞基底膜成分的粘附实验,流式细胞术测定ＣＤ４４Ｈ的表达。结果：ＥＤＴＡ介导的细胞分离实验表明,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对塑料基质的粘附能力明显下降（Ｐ＜０．０１）;对基质及基底膜成分的粘附实验表明,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞对Ⅳ型胶原和ｍａｔｒｉｇｅｌ的粘附能力下降,但对ＬＮ、ＦＮ的粘附能力无明显改变;粘附分子ＣＤ４４Ｈ的表达：ＳＫＯＶ３、ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ、ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组细胞粘附分子ＣＤ４４Ｈ阳性细胞百分率分别为７６．２％、６６．７％和３７．８％,ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组明显降低（Ｐ＜０．００１）。结论：ＩＬ－２基因修饰可使卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３粘附能力下降。     

低浓度化学药物配合淋巴因子激活的杀伤细胞对人卵巢癌细胞体外杀伤敏感性的研究

目的探讨低浓度化学药物配合淋巴因子激活的杀伤（ＬＡＫ）细胞能否增强对卵巢癌细胞的体外杀伤敏感性。方法应用１．５μｇ／ｍｌ泰素、４μｇ／ｍｌ顺铂、２５μｇ／ｍｌ氟尿嘧啶,与人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３作用１８小时后,采用５１Ｃｒ释放法,观察ＳＫＯＶ３对被白细胞介素２（ＩＬ２）激活的ＬＡＫ细胞的杀伤敏感性;应用Ｇｒｉｍｍ的方法,测定ＳＫＯＶ３细胞与ＬＡＫ结合率的变化;应用流式细胞仪,检测ＳＫＯＶ３细胞表面粘附分子（ＩＣＡＭ１）表达的变化,并与未经药物作用的ＳＫＯＶ３细胞进行对照。结果经泰素、顺铂、氟尿嘧啶作用及未经药物作用的ＳＫＯＶ３细胞对ＬＡＫ细胞的杀伤敏感性分别为２９．７％、４５．９％、３７．２％及２８．５％;与ＬＡＫ细胞的结合率分别为２０．１％、２６．１％、２４．９％及１８．７％;ＳＫＯＶ３细胞表面ＩＣＡＭ１表达率分别为５２．５％、６５．５％、６８．１％及４９．７％。结论经低浓度化疗药物作用后的卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞对被ＩＬ２激活的ＬＡＫ细胞的杀伤敏感性增强,其机理可能与ＩＣＡＭ－１表达的增加有关。     

应用肿瘤引流区淋巴结细胞诱导淋巴因子激活杀伤细胞的特性

对７例妇科恶性肿瘤患者肿瘤引流区域淋巴结的淋巴细胞，在体外进行短期淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞的诱导培养。结果表明，ＬＡＫ细胞对肺癌细胞系、卵巢癌ＣＡＯＶ＿３细胞系及新分离的卵巢癌细胞杀伤能力不同，且效应细胞与靶细胞比例在４０：１以上时，ＬＡＫ细胞活性维持在一定水平；该ＬＡＫ细胞对同种分离卵巢癌细胞杀伤能力更强。白细胞介素。２（ＩＬ－２）和ＯＫＴ＿３联合应用诱导ＬＡＫ细胞，随着培养时间的延长，其杀伤靶细胞的能力强于单独使用ＩＬ－２诱导的ＬＡＫ细胞。肿瘤引流区域淋巴结经分离可获得大量的淋巴细胞。     

IL-2基因转移对卵巢癌细胞系SKOV3致瘤性的影响

目的：探讨ＩＬ－２基因转移对卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３致瘤性的影响。方法：通过贴壁集落形成检查、软琼脂集落形成检查和裸鼠皮下成瘤试验，测定ＩＬ－２基因转移对卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３致瘤性的影响。结果：ＳＫＯＶ３、ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ和ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞贴壁集落形成率、软琼脂集落形成率分别为５２％、４５％、０．７％和３１．４％、２８．５％、２．４％，ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞所形成的集落内细胞少，结构松散；裸鼠皮下成瘤实验显示，３组细胞皮下成瘤率分别为１００％（１２／１２）、９１．７％（１１／１２）及５６．３％（９／１６）；成瘤潜伏期平均分别为６．７±０．９ｄ、１１．４±４．０ｄ、１５．１±６．４ｄ，肿瘤终体积平均分别为１６０４．３±１４６９．４ｍｍ３、１１３０．３±１１５９．７ｍｍ３及２３３．３±１２６．４ｍｍ３；ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２细胞皮下瘤增殖较ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ和ＳＫＯＶ３细胞明显缓慢（Ｐ＜０．００１）。镜下见ＳＫＯＶ３及ＳＫＯＶ３／Ｎｅｏ组肿瘤呈浸润性生长，并于皮下和肌肉间形成转移病灶，ＳＫＯＶ３／ＩＬ－２组肿瘤呈假包膜状生长，瘤内见大量单个核细胞浸润。结论：ＩＬ－２基因转移可降低细胞系ＳＫＯＶ３的致瘤?     

c—erbB2反义核酸对卵巢癌细胞系生物学行为及药物敏感性的影响

目的：探讨ｃ－ｅｒｂＢ２反义核酸对卵巢癌细胞生物学行为及其化疗药物敏感性的影响。方法：应用ｐＵＣ－ｅｒｂＢ２和ｐＤＯＲ－ｎｅｏ质粒，构建了含反义ｅｒｂＢ２ｃＤＮＡ３．８ｋｂ的重组逆转录病毒表达载体ｐＤＯＲ－ｅｒｂＢ－ｎｅｏ，经脂质体转染ｅｒｂＢ２高表达的人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３，再经Ｇ４１８（一种新霉素类似物）筛选得到新霉素抗性细胞，命名为ＳＫＯＶ３－Ａ２。结果：Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析表明，反义ｅｒｂＢ２３．８ｋｂ已完全整合到ＳＫＯＶ３细胞中，与亲本细胞及转染ｐＤＯＲ－ｎｅｏ的对照组细胞相比，ＳＫＯＶ３－Ａ２的生长和ＤＮＡ合成均受到抑制，且对５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）及顺铂（ＤＤＰ）的药物敏感性明显增加。结论：ｃ－ｅｒｂＢ２反义核酸在卵巢癌基因治疗中有一定作用；ｃ－ｅｒｂＢ２癌基因可能与卵巢癌细胞耐药有关。     

低浓度化学药物配合淋巴因子激活的杀伤细胞对人卵巢癌细胞体外 …

探讨低浓度化学药物配合淋巴因子激活的杀伤细胞能否增强对卵巢癌细胞的体外杀伤敏感性。方法应用１．５μｇ／ｍｌ泰素４μｇ／ｍｌ顺铂、２５μ／ｍｌ氟尿嘧啶,与人卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ３作用１８小时后,采用＾５１Ｃｒ释放法,观察ＳＫＯＶ３对被白细胞介素２激活的ＬＡＫ细胞的杀伤敏感性;     

野生型p53基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用

目的：探讨野生型ｐ５３(ｗｔ ｐ５３)基因对人卵巢癌细胞株的生长抑制作用。方法：利用脂质体介导，将含有人全长ｗｔ－ｐ５３基因ｃＤＮＡ的真核表达载体质粒ｐＣＥＰ４／ｐ５３和空载体质粒ｐＣＥＰ４分别转染卵巢癌ＳＫＯＶ３细胞株，分别命名为ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４／ｐ５３细胞(C组)、ＳＫＯＶ３－ｐＣＥＰ４细胞(B组)，另设ＳＫＯＶ３细胞为正常对照组（Ａ组）。观察细胞体外生长情况和凋亡变化。结果：外源性ｐ５３基因在Ｃ组细胞中获表达，细胞生长曲线显示ｐ５３的导入使ＳＫＯＶ３细胞生长受到明显抑制，Ｃ组平均细胞集落数（１８．６±１．８个）少于Ａ组（２４．３±２．２个）和Ｂ组（２２．７±２．６），差异有显著性（Ｐ（005）。ＭＴＴ法检测C组细胞活力明显低于Ａ、Ｂ组。Ｃ组细胞Ｇ０～Ｇ１期百分比（５７．７９％）及凋亡细胞百分比（13．９1％）均高于Ｂ组（４６．０２％、２．０８％）和Ａ组（４３．６２％、０）。结论：ｗｔ－ｐ５３基因可介导ＳＫＯＶ３细胞Ｇ１期停滞和细胞凋亡，抑制细胞体外生长。     

羟甲基无环鸟苷对携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶基 …

目的 观察羟甲基无环鸟苷（ＧＣＶ）对转导携有Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ１－ｔＫ）的ＡＯ、３ＡＯ细胞外杀伤作用。方法 分别在携有ＨＳＶ１ｔＫ基因的ＡＯ、３ＡＯ细胞培养液中加入不同浓度的ＧＣＶ,绘制剂量效应曲线,并以荥光细胞洲活分选仪（ＦＡＣＳ）测定凋亡细胞比例及细胞周期比例,以光镜及电镜观察细胞形态变化,以ＤＮＡ我染色观察细胞核内染色质变化。结果 ＧＣＶ在体外对于携有ＨＳＶ１－ｔｋ基因的Ａ     

野生型p53基因cDNA转染对卵巢癌细胞系SKOV-3生物学行为的影响

目的：研究野生型ｐ５３基因ｃＤＮＡ转染对卵巢癌细胞系ＳＫＯＶ－３生物学行为的影响。方法：用脂质体介导的转染技术，将含有全长人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ的真核表达重组质粒和空载体质粒，分别导入不表达ｐ５３的ＳＫＯＶ－３细胞，观察细胞生物学行为的改变。结果：（１）共获２个ｐ５３ｃＤＮＡ转染克隆（ｐＣ５３）和２个空载体转染克隆（ｐＮｅｏ）；（２）ｐＣ５３和ｐＮｅｏ细胞形态学与ＳＫＯＶ－３无显著差别；（３）ｐＣ５３细胞生长明显比ＳＫＯＶ－３慢，而ｐＮｅｏ细胞生长与ＳＫＯＶ－３相当；（４）ｐＣ５３在软琼脂中形成集落数显著少于ＳＫＯＶ－３细胞和ｐＮｅｏ细胞；（５）ｐＣ５３Ｇ１／Ｇ０期细胞百分比高于ＳＫＯＶ－３和ｐＮｅｏ。结论：野生型ｐ５３ｃＤＮＡ可作为卵巢癌基因治疗的目的基因之一。     

生长抑制DNA损伤基因45与p53对卵巢癌细胞凋亡作用的研究

目的：研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗｔｈａｒｅｓｔａｎｄＤＮＡｄａｍａｇｅ,ＧＡＤＤ）对卵巢癌细胞的作用及与ｐ５３蛋白表达的关系。方法：利用ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５的表达;采用ＲＴ－ＰＣＲ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白的表达。通过载体构建将目的基因ＧＡＤＤ４５重组于ｐｃＤＮＡ－Ⅲ真核质粒内。利用脂质体（ＤＯＴＡＰ）法转染ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株;Ｇ４１８抗性筛选,ＲＴ－ＰＣＲ进行表达鉴定。采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）以及ＤＮＡ梯度法对细胞凋亡现象进行检测。结果：卵巢癌ＳＫＯＶ３和３ＡＯ细胞株ＧＡＤＤ４５表达阴性。ＳＫＯＶ３细胞株ｐ５３蛋白表达阳性;３ＡＯ细胞株ｐ５３蛋白表达阴性。转染ＧＡＤＤ４５基因的ＳＫＯＶ３细胞株经化学药物足叶已甙（ＶＰ１６）和紫外线诱导后,可以使该细胞产生凋亡现象,而对转染ＧＡＤＤ４５基因的３ＡＯ细胞株经诱导后,未见细胞凋亡现象。结论：转染ＧＡＤＤ４５基因,对ｐ５３蛋白表达阳性的细胞株ＳＫＯＶ３经诱导后,可使细胞进入凋亡状态。对ｐ５３蛋白表达阴性的细胞株３ＡＯ转染ＧＡＤＤ４５基因后,经诱导细胞无凋亡现象,证实ＧＡＤ?     

白细胞介素7基因转染卵巢癌细胞的体外研究

目的　观察白细胞介素 (IL) 7基因体外转染卵巢癌细胞后 ,细胞的增殖特性 ,表面抗原表达和细胞因子分泌的变化 ,及对淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK细胞 )杀伤敏感性的影响。方法　对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3进行体外培养 ,将重组质粒pBK CMVIL 7导入SKOV3建立SKOV3 IL 7,将双相表达载体pBK CMV导入SKOV3建立SKOV3 Neo ,应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝比色试验及流式细胞术 ,观察IL 7基因转染前后 ,SKOV3的增殖特性变化 ;间接标记异硫氰酸荧光素 流式细胞术 ,测定细胞表面抗原表达 ;酶联免疫吸附试验测定细胞因子分泌 ;应用乳酸脱氢酶释放法观察细胞对LAK细胞杀伤敏感性的影响。结果　IL 7基因转染前后 ,SKOV3细胞基本形态、增殖特性及细胞周期分布无明显变化 ;细胞表面人类白细胞抗原ABC(HLA ABC)表达阳性率为 91 8%～99 9% ;人类白细胞抗原DR(HLA DR)未能检测到 ;IL 7基因转染后SKOV3细胞间粘附分子I(ICAM I)表达显著提高 ,SKOV3 IL 7为 (4 0 6± 3 7) % ,SKOV3 Neo为 (2 3 2± 2 7) % ,SKOV3为 (18 9± 7 2 ) % ;转化生长因子 β1 (TGF β1 )表达显著降低 ,SKOV3 IL 7为每 2 4h、10 6 细胞中 (下同 ) 15 8ng L ,SKOV3 Neo为 72 6 μg L ,SKOV3为 396ng L ;IL 7基因转染后 ,SKOV3细胞对LAK细胞     

白细胞介素-2基因转导对卵巢癌细胞SKOV3形态及增殖的影响

OBJECTIVE: To study the effect of interleukin-2 (IL-2) gene transfer on the proliferation and morphology of ovarian cancer cell line SKOV3. METHOD: IL-2 gene was introduced into ovarian cancer cell line SKOV3. The morphologic changes, mitosis, proliferation curve, 3H-uptaking and cell cycle were studied. RESULTS: IL-2 cDNA, 490 bp, was transduced. IL-2 gene expression was detected. IL-2 activity was 30-318 U/10(6) cells/24hr. IL-2 gene modified cell is squamas like with smaller nucleus/cytoplasm ratio, larger cell area and more homogeneous. The ultrastructural study showed that the cytoplasma of IL-2 gene modified cells is markedly vacuolized and the chromatin is condensed. There was less mitosis found in SKOV3/IL-2 cells. SKOV3/IL-2 cell proliferate more slowly, the doubling time prolonged from 38.40 hr to 65.36 hr, 3H-uptaking decreased 52.3% of the parent cell. The cell cycle study showed that SKOV3/IL-2 cell was blocked to phase G1/G0. CONCLUSIONS: The retrovirous vector can transduce Il-2 gene into ovarian cancer cell line SKOV3 effectly. IL-2 gene transfer can induce morphologic changes of SKOV3 cells, which may indicate the biologic behavior changes of the targets. IL-2 gene transfer can induce the proliferation inhibition of SKOV3 cells.     

IL-2基因转导对卵巢癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的:探讨IL-2基因转导能否改变卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。方法:用MTT法测定导入人IL-2基因的卵巢癌细胞对化学治疗药物顺铂、阿霉素、泰素及足叶乙甙治疗的敏感性及IC_50,以导入新霉素基因的卵巢癌细胞系及野生型卵巢癌细胞系为对照。结果:IL-2基因转移使SKOV3细胞对上述化疗药物治疗的敏感性有所提高,但仅对VP-16治疗敏感性的提高差异有显著性（P<0.05）。结论:IL-2基因导入SKOV3细胞没有降低其对实验药物治疗的敏感性。     

脂质体转染白介素-12基因至卵巢癌SKOV3细胞检测VEGF表达及抗肿瘤作用探讨

目的:观察含mIL-12基因的质粒转染至SKOV3卵巢癌细胞,效应细胞存在情况下对卵巢癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用脂质体转染技术将基因质粒及空质粒转染至SKOV3卵巢癌细胞(SKOV3/IL-12)及SKOV3/neo;用ELISA法检测IL-12及INF-γ的表达;用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)半定量法测定SKOV3/IL-12+S(脾细胞)0,12,24,36,48,60hVEGFmRNA含量;用ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF蛋白含量及其抑制率。结果:基因转染至SKOV3可检测到IL-12蛋白表达;分泌的IL-12蛋白具有活性,使脾细胞产生INF-γ,12h时迅速出现,作用后24h表达量最高;SKOV3/IL-12细胞与脾细胞作用12h后即出现VEGFmRNA表达抑制,24h达到高峰,与对照组有显著差异(P0.05);培养24h后上清中VEGF蛋白含量减少,与对照组有显著差异(P0.05)。结论:将IL-12基因转染至SKOV3卵巢癌细胞并表达IL-12;分泌的IL-12蛋白具有活性,使脾细胞产生INF-γ;SKOV3/IL-12与效应细胞脾细胞作用后产生INF-γ能在核酸水平下调VEGF并能抑制VEGF蛋白的表达。     

Studies on the influence of interleukin 2 (IL-2) on antitumor effector mechanisms in patients with cervical cancer

Changes in DNA synthesis, lymphocyte subsets and various killer activities in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) after IL-2 incubation were studied to analyze the influence of IL-2 on the antitumor effector mechanisms in cervical cancer patients. The results were as follows. DNA synthesis was advanced. Decrease in the OKT4/OKT8 ratio and diminished decrease in Leu7 were observed. NK activity was significantly lower than that in the control. LAK activity was almost equal to that in the control. Both activities and the killer action on autologous tumor significantly rose after IL-2 incubation. After operation, NK activity tended to be reduced for one or two weeks, but returned to the normal range by the 4th week in almost all cases. LAK activity was nearly within the normal range. Both activities after IL-2 incubation were at the same levels as before operation. A tendency to a fall in NK and LAK activities was observed under radiation therapy. Both activities after IL-2 incubation were lower than those before radiation therapy. These results suggest that IL-2 may be applied as an adjuvant immunotherapy following surgical operation and, though more difficulties are anticipated, applied to radiation therapy of cervical cancer.     

S1P/S1PR对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的研究

目的：探究鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受体（S1P/S1PR）对人卵巢癌SKOV3细胞促血管生成作用的影响和机制。方法：管腔形成实验探究S1P对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的影响；实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测S1P处理后的人卵巢癌SKOV3细胞中血管生成因子白细胞介素8（IL-8）、IL-6、血管内皮生长因子（VEGF）的变化情况；设计合成小干扰RNA（siRNA）干扰序列基因沉默SKOV3细胞中S1PR1、S1PR2和S1PR3的表达，蛋白质印迹（Western-blot）和qRT-PCR检测SKOV3细胞中S1PR的下调结果；qRT-PCR检测S1PR对SKOV3细胞IL-8、IL-6、VEGF表达的影响。结果：管腔形成实验结果显示，S1P处理后的SKOV3细胞培养上清液重悬人脐静脉内皮细胞融合细胞（EA.hy926），其管腔形成的数量多于对照组（t=3.667，P=0.021），表明S1P促进了人卵巢癌细胞SKOV3的促血管形成能力。S1P处理后的SKOV3细胞中血管生成因子IL-8、IL-6、VEGF mRNA的表达水平较对照组升高，差异有统计学意义（均P＜0.05）。S1PR1和S1PR3基因沉默可显著降低SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的mRNA表达水平，差异有统计学意义（均P＜0.05），而S1PR2基因沉默后IL-8、IL-6、VEGF的mRNA变化不明显。结论：S1P通过S1PR1/3上调人卵巢癌SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的表达，从而增强了SKOV3细胞的促血管生成作用，S1P/S1PR通路有望成为抑制卵巢癌生长的治疗新靶点。     

Anti-apoptotic seminal vesicle protein IV inhibits cell-mediated immunity

The in vitro effect of seminal vesicle protein IV (SV-IV) on the cytotoxic activity of human natural or acquired cellular immunity has been investigated by standard immunological procedures, a (51)Cr-release cytotoxicity assay, and labeled-ligand binding experiments. The data obtained demonstrate that: (1) fluoresceinated or [(125)I]-labeled SV-IV binds specifically to the surface of human purified non-adherent mononuclear cells (NA-MNC); (2) SV-IV suppresses the cytotoxicity of natural killer (NK) cells against K562 target cells, that of IL-2-stimulated NK (LAK) cells against DAUDI target cells, and that of VEL antigen-sensitized cytotoxic T lymphocytes (CTLs) against VEL target cells; (3) treatment of K562 target cells alone with SV-IV decreases their susceptibility to NK-induced lysis. These findings indicate that the protein SV-IV has a marked in vitro inhibitory effect on NK, LAK and CTL cytotoxicity, providing a better understanding of its immune regulatory functions.