曲妥珠单抗对HER-2高表达胃癌细胞珠抑制作用观察

目的:观察曲妥珠单抗对HER-2高表达人胃癌NCI-N87细胞株的抑制作用.方法:免疫组化法检测HER-2蛋白在NCI-N87细胞中的表达.荧光免疫杂交法(FISH)检测HER-2基因在NCI-N87细胞中的扩增情况.根据是否应用曲妥珠单抗分为对照组与药物组,其中药物组浓度分别为0.1、1、10和100 μg/mL,作用72 h后以CCK8法测定曲妥珠单抗对NCI-N87细胞的生长抑制作用.结果:免疫组化法检测显示,HER-2蛋白在NCI-N87细胞中的表达以细胞膜分布为主,呈棕褐色颗粒状,HER-2蛋白为可疑阳性表达(++).荧光免疫杂交法检测显示,NCI-N87细胞HER-2/CEP17＞2,存在HER-2基因扩增.CCK8实验显示,曲妥珠单抗浓度为0.1、1、10和100 μg/mL时细胞存活率分别为(84.17±1.70)％、(81.21±3.94)％、(83.65±2.48)％和(80.59±4.25)％,四组间比较差异无统计学意义,P＞0.05;与对照组(100％)相比,差异有统计学意义,P=0.000.结论:曲妥珠单抗对HER-2高表达人胃癌NCI-N87细胞具有一定的生长抑制作用;曲妥珠单抗浓度在0.1～100 μg/mL对NCI-N87细胞的抑制作用相似.     

曲妥珠单抗联合放疗对HER2高表达胃癌细胞的协同杀伤作用

目的:研究曲妥珠单抗联合放疗对人类表皮生长因子受体2（HER2）高表达胃癌细胞NCI-N87的协同杀伤作用。方法:应用细胞增殖与毒性检测（CCK-8）法筛选曲妥珠单抗杀伤胃癌细胞的IC20浓度;将NCI-N87分为对照组与加药组,两组依次给予照射剂量不同的X线（0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy）,应用克隆形成实验分析两者的杀伤作用;凋亡实验分4组:对照、曲妥珠单抗、2 Gy照射、2 Gy照射+曲妥珠单抗,流式细胞仪用于测定凋亡率。结果:IC20为10 μg/ml。与单纯放疗相比,曲妥珠单抗与放疗同时作用可明显降低细胞存活率,差异具有统计学意义（P＜0.05）。凋亡率为对照（3.80±0.26）%、曲妥珠单抗（4.84±0.14）%、2 Gy照射（6.83±0.17）%、联合组（13.60±0.35）%,曲妥珠单抗或照射组均可增加NCI-N87细胞凋亡率,其中凋亡率在联合组中最高（P＜0.05）。结论:曲妥珠单抗和放疗可协同杀伤HER2高表达的胃癌细胞。     

PTEN低表达增加胃癌曲妥珠单抗的耐药性

目的:明确PTEN活性和胃癌曲妥珠单抗耐药性的关系。方法:用Western blot方法检测胃腺癌细胞株中HER2蛋白、PTEN蛋白、PI3K蛋白、AKT蛋白的表达;用CCK-8方法检测曲妥珠单抗对HER2阳性/PTEN野生型NCI-N87细胞的生长抑制作用;构建PTEN siRNA载体并将其PTEN siRNA载体感染HER2阳性/PTEN野生型NCI-N87细胞,建立稳定表达PTEN siRNA的细胞株N87-PD和阴性对照N87-NC,用Western blot验证其表达水平;同时用CCK-8验证曲妥珠单抗对各组细胞生长的影响。结果:Western blot结果显示,NCI-N87细胞的HER2表达水平高于MNK-7细胞。CCK-8检测表明,随着药物浓度的增加,细胞存活率持续呈下降趋势。三种siRNA中以siRNA-1对PTEN mRNA的干扰效果最优,选择siRNA-1进行后续实验。实时定量PCR法测定最终病毒滴度为1.56×109/ml（siRNA-1）和1.62×109/ml（NC）。PTEN siRNA对NCI-N87细胞的PTEN蛋白表达有明显的下调作用且N87-PD细胞中磷酸化AKT蛋白水平显著高于对照组细胞N87-NC;曲妥珠单抗作用72h后,CCK-8测定N87-NC细胞存活率显著下降,而N87-PD细胞存活率与阴性对照组细胞无显著差异。结论:PTEN低表达增加胃癌曲妥珠单抗的耐药性。     

曲妥珠单抗对HER-2胞外域水平不同的肿瘤细胞系的影响

目的探讨曲妥珠单抗(trastuzumab)对细胞膜p185人表皮生长因子受体2(HER-2)强阳性表达,以及HER-2胞外域(ECD)水平不同的肿瘤细胞系SKBR3和SKOV3细胞的生长、克隆形成及细胞内HER-2蛋白水平的影响。方法SKBR3和SKOV3细胞经曲妥珠单抗处理后,统计细胞数目及克隆形成率。双抗夹心ELISA法检测细胞培养上清中HER-2 ECD水平,Western blot检测细胞HER-2蛋白水平。结果高HER-2 ECD水平的SKBR3细胞生长及克隆形成率明显被曲妥珠单抗抑制,在相对分子质量为90 000和40 000左右分别有1条未知磷酸化蛋白明显降低或基本消失,而细胞生长及克隆形成率未受影响的SKOV3细胞中此蛋白无明显变化。SKBR3和SKOV3细胞中p185 HER-2蛋白、磷酸化-p185蛋白、磷酸化-p95蛋白水平并未见明显降低。曲妥珠单抗不仅与SKOV3细胞培养上清中的HER-2 ECD反应,也与p68/ECDⅢa蛋白反应。经曲妥珠单抗处理后,SKBR3细胞HER-2 ECD水平明显降低,但将曲妥珠单抗处理前、后的细胞数目调整到基本一致时,HER-2 ECD水平未发生明显变化。结论曲妥珠单抗抑制肿瘤细胞生长可能与阻止相对分子质量为90 000和40 000左右的未知磷酸化蛋白表达有关;p68/ECDⅢa蛋白也可能存在曲妥珠单抗识别位点;HER-2 ECD水平降低可能与SKBR3细胞数目减少有关。     

芹菜素与曲妥珠单抗联用对HER2阳性乳腺癌协同抗肿瘤作用

目的 探讨芹菜素与曲妥珠单抗联合应用对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌细胞系BT474及SK-BR-3的抗肿瘤作用及其机制。方法 采用流式细胞术检测曲妥珠单抗与人乳腺癌细胞的结合活性;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测芹菜素、曲妥珠单抗单药及联合应用对BT474和SK-BR-3细胞的生长抑制活性;EdU染色法检测芹菜素、曲妥珠单抗单药及联合应用对BT474和SK-BR-3细胞DNA复制的影响;蛋白质印迹法检测芹菜素、曲妥珠单抗单药及联合应用对BT474和SK-BR-3细胞中表皮生长因子受体(EGFR)、HER2、HER3、Akt等蛋白及其各自磷酸化蛋白表达水平的影响。设置芹菜素组、曲妥珠单抗组、芹菜素+曲妥珠单抗联合用药组、对照组和空白对照组。结果 生长抑制实验结果显示,芹菜素抑制BT474和SK-BR-3细胞生长的半数抑制浓度值分别为25.70和29.34μmol/L。EdU染色实验结果表明,不同浓度芹菜素(16、32、64μmol/L)单药作用于SK-BR-3和BT474细胞后,与对照组比较差异均有统计学意义,F值分别为99.25和309.10,均P<0.001。芹菜...     

尼妥珠单抗不同给药时序对人肺癌细胞系的放射增敏作用

探讨尼妥珠单抗不同加药时间对A549、Calu-6人肺癌细胞系的放射增敏作用及发生机制。方法:采用人肺癌细胞系A549、Calu-6体外培养作为研究对象。Western blot法检测细胞系EGFR表达。尼妥珠单抗不同给药分组:尼妥珠单抗放疗前24 h组，放疗同时加药组，放疗后24 h加药组。MTT法及克隆形成法检测尼妥珠单抗对两种细胞系的细胞毒性作用和放射增敏作用；流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡和细胞周期分布；Western blot法检测P21、Bax、Bcl-2、phospho-DNA-PK、Akt和pAkt相关蛋白的表达。结果:尼妥珠单抗作用于A549细胞24h后的IC20值、IC50值分别为（1.13±0.37）、（24.78±1.25） μg/mL，放疗前、放疗中和放疗后给药的放射增敏比分别为2.02、1.77、1.39。放疗前加药组观察到更高的凋亡率和G2/M期的阻滞。同时，本组P21、Bax、Bcl-2、phospho-DNA-PK和pAkt表达的改变也较其它组明显。尼妥珠单抗作用于Calu-6细胞24 h后的IC20值、IC50值分别为（2.42±1.26）、（51.15±2.41） μg/mL。放疗前，放疗中和放疗后给药的放射增敏比分别为1.23、0.99、0.91。放疗前加药组凋亡率和G2/M期的阻滞比例最高。放疗前给药组P21、Bax、Bcl-2、phospho-DNA-PK和pAkt表达改变较其它组明显。结论:尼妥珠单抗对A549、Calu-6细胞均有抑制增殖作用。不同加药时序影响放射增敏效应，其中放疗前加药放射增敏效应最强。      

西妥昔单抗诱导人鼻咽癌细胞株CNE凋亡实验研究

目的观察西妥昔单抗诱导人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的效果,并初步探讨其可能机制。方法CNE细胞经10μg/mL西妥昔单抗处理48 h后,以Hochest33258荧光染色显微法、透射电镜观察其凋亡形态学变化,流式细胞术检测凋亡率,Western Blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 CNE细胞经西妥昔单抗处理后,荧光显微镜及透射电镜下均可见典型的凋亡形态学及超微结构改变;流式细胞术显示凋亡率为(15.30±0.95)%,显著高于对照组(P0.05);Western Blot检测显示Bax蛋白表达上调、Bcl-2蛋白表达下调、Bax/Bcl-2比值增加。结论西妥昔单抗对人鼻咽癌细胞株CNE有显著的凋亡诱导作用,这可能通过上调Bax并下调Bcl-2而实现,其确切机制仍有待进一步探讨。     

曲妥珠单抗在HER-2阳性乳腺癌患者新辅助治疗中的应用研究进展

曲妥珠单抗是人表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor-2,HER-2）的特异性抑制剂,在HER-2阳性乳腺癌患者新辅助治疗中的应用日益广泛。大规模的随机、对照临床试验证实,新辅助化疗联合曲妥珠单抗与单纯化疗比较能显著提高病理完全缓解（pathologic complete response,pCR）率。在曲妥珠单抗联合化疗的基础上加用拉帕替尼较单用曲妥珠单抗可大大提高pCR率。蒽环与非蒽环类化疗药物均可作为曲妥珠单抗的联合用药,内分泌治疗也可作为雌激素受体阳性患者的联合用药。pCR是曲妥珠单抗新辅助治疗后生存获益的独立预后因素,HER-2转阴而未达到pCR的患者为不良预后因素。本文将对曲妥珠单抗在HER-2阳性乳腺癌患者新辅助治疗中的研究进展进行综述。      

利妥昔单抗与依鲁替尼对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡协同作用研究

目的 近年来发现依鲁替尼是B细胞恶性肿瘤的新型靶向药物,利妥昔单抗联合新药依鲁替尼对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)的研究逐步展开,本研究探讨利妥昔单抗与依鲁替尼对DLBCL细胞系Farage增殖及凋亡影响的协同作用.方法 不同浓度的单药利妥昔单抗和单药依鲁替尼处理Farage细胞24、48和72 h后,采用CCK8法检测细胞增殖抑制率.15 μmol/L依鲁替尼处理Farage细胞48 h后,采用RT-PCR法检测凋亡相关因子mRNA的表达变化.含人补体的培养条件下,1 μg/mL利妥昔单抗联合10 μmol/L依鲁替尼同时处理Farage细胞48 h后,采用CCK8法检测增殖抑制率,采用流式细胞术检测凋亡率.结果 利妥昔单抗在不含人补体的培养基中对Farage细胞增殖抑制作用不明显,在含人补体的培养基中有明显增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性.依鲁替尼在含或不含人补体的培养条件下对Farage细胞均有明显增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性,2种条件下的增殖抑制率差异无统计学意义(F=0.978,P=0.329),15 μmol/L依鲁替尼作用Farage细胞48 h时,Fas(1.63±0.09)、Caspase-8(1.90±0.11)和Caspase-3(2.20±0.11)mRNA相对表达量均高于空白组(1.00±0.00).在含人补体的培养基中,1 μg/mL利妥昔单抗联合10 μmol/L依鲁替尼同时处理Farage细胞48 h后,联合组增殖抑制率为(57.06±1.48)%,高于依鲁替尼单药组(33.83±3.39)%和利妥昔单抗单药组(26.92±2.74)%,差异有统计学意义,F=87.403,P<0.001.联合组的凋亡和坏死率(44.30±2.20)%高于利妥昔单抗单药组(21.73±2.00)%和依鲁替尼单药组(17.44±1.60)%,且利妥昔单抗单药组和依鲁替尼单药组均高于空白组(2.32±0.21)%, 差异均有统计学意义,F=327.205,P<0.001.结论 利妥昔单抗可通过CDC效应引起DLBCL细胞凋亡坏死及增殖抑制,依鲁替尼可能通过上调Fas、Caspase-3和Caspase-8基因的表达,促使DLBCL细胞凋亡和增殖抑制,利妥昔单抗联合依鲁替尼对DLBCL细胞的增殖抑制和凋亡坏死作用明显强于单药利妥昔单抗或依鲁替尼.     

抗体偶联药物维迪西妥单抗对HER-2不同表达水平胃癌细胞抑制效应的体外研究

目的 评估抗体偶联药物维迪西妥单抗(RC48)对不同HER-2蛋白表达水平胃癌细胞的体外抑制效应。方法 使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting技术结合细胞免疫荧光共聚焦显微镜，检测胃癌细胞系(NCI-N87、MKN45、MKN7、HGC27、MGC803)HER-2表达情况及细胞定位。随后对上述不同HER-2表达程度的细胞系分别经不同浓度RC48处理，CCK-8技术检测杀伤效应并计算半数抑制浓度(IC₅₀),采用qRT-PCR和Western blotting技术检测胃癌细胞经RC48处理后，不同胃癌细胞株的HER-2 mRNA及蛋白质表达情况。结果 所检测的胃癌细胞系中，NCI-N87细胞的HER-2表达量最高，其余细胞系均呈HER-2低表达，荧光共聚焦显示HER-2蛋白主要为细胞膜定位。RC48在体外可明显抑制HER-2强阳性胃癌细胞(NCI-N87)增殖，48 h及72 h的IC₅₀分别为0.32μg/ml及2.359e^-010μg/ml,该效应呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性；...     

NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及作用机制

目的 探讨NKX6.3对食管癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及可能的作用机制。方法 人食管癌EC9706细胞分别转染NKX6.3（NKX6.3组）和空白质粒（miR-NC组），设空白对照组（Control组）。CCK-8法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞内活性氧、线粒体膜电位及细胞凋亡情况，Transwell 法检测细胞侵袭能力，Western blot检测增殖相关蛋白Ki67、侵袭相关蛋白（Vimentin、E-cadherin及N-cadherin），凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax及Caspase-3）的表达。结果 Control组、miR-NC组和NKX6.3组食管癌EC9706细胞中NKX6.3表达、细胞增殖能力、细胞内活性氧、线粒体膜电位、细胞凋亡及侵袭能力，以及Ki67、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达差异均有统计学意义（P＜0.01）。其中，NKX6.3组NKX6.3表达量、细胞内活性氧，细胞凋亡率，Vimentin、E-cadherin、Bax及Caspase-3蛋白表达水平较miR-NC组升高；而线粒体膜电位、细胞增殖率、细胞侵袭数目、N-cadherin及Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论 NKX6.3可抑制食管癌细胞增殖和侵袭，促进细胞凋亡，该作用可能通过调控食管癌细胞中的增殖凋亡相关蛋白表达及活性氧水平实现。     

西黄浸提液抑制胃癌SGC-7901 细胞增殖的可能机制

[摘要] 目的：探讨西黄浸提液对胃癌SGC-7901 细胞增殖的影响及其可能机制。方法：常规培养胃癌细胞株SGC-7901,用CCK-8 法和细胞流式细胞术检测不同质量浓度（3.2、6.4、12.8 和25.6 mg/ml）的西黄浸提液在不同时间点（24、48 和72 h）对SGC-7901 细胞增殖和凋亡的影响,用qPCR法检测不同质量浓度西黄浸提液对SGC-7901 细胞凋亡相关基因Bax 和Bcl-2 mRNA表达的影响,用Western blotting 检测西黄浸提液对凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 9、Bax和Bcl-2 表达的影响。结果：3.2~25.6 mg/ml的西黄浸提液均能有效地抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）,并且随浓度增加SGC-7901 细胞凋亡率增加（P<0.01）。西黄浸提液能够显著上调SGC-7901 细胞Bax mRNA和下调Bcl-2 mRNA表达水平（P<0.05 或P<0.01）,并可增加caspase3、caspase 9 和Bax 蛋白表达、降低Bcl-2 蛋白表达（P<0.05 或P<0.01）。结论：西黄浸提液通过触发细胞凋亡抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,此可成为一个潜在的胃癌辅助治疗的方法。     

伏立诺他对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨伏立诺他对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响及机制研究。方法 以人卵巢癌SKOV3细胞为研究对象,随机分为空白组、伏立诺他高剂量组、中剂量组和低剂量组共4组,采用CCK-8法测定SKOV3细胞增殖情况,Western blot检测SKOV3细胞H3K4ac和H3K27ac蛋白表达情况,Real-time PCR检测SKOV3细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、p53 mRNA、CyclinD1 mRNA表达。结果 CCK-8法测定结果显示,与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组增殖明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05)。RT-PCR结果显示,与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组SKOV3细胞中Bcl-2 mRNA和CyclinD1mRNA表达明显降低,Bax mRNA和p53 mRNA表达明显升高。Western blot结果显示与空白组比较,伏立诺他低、中、高剂量组SKOV3细胞中H3K4ac和H3K27ac蛋白表达明显增加。结论 伏立诺他抑制SKOV3细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与抑制组蛋白去乙酰化酶活性,激活p53凋亡通路有关。     

盐酸罗哌卡因对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨盐酸罗哌卡因对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞计数试剂盒（CCK-8）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞增殖能力的影响，并确定盐酸罗哌卡因的用药浓度，流式细胞术检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞周期的影响，Annexin V-FITC/PI法检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞凋亡的影响，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果:随着盐酸罗哌卡因用药浓度的升高，MGC-803细胞增殖能力逐渐降低，根据CCK-8实验结果分别筛选出浓度为10、50 μg/ml和100 μg/ml的盐酸罗哌卡因用于后续实验。盐酸罗哌卡因能够明显阻滞细胞周期于G2期，诱导细胞凋亡，抑制Bcl-2蛋白表达，促进Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:盐酸罗哌卡因能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖，阻碍MGC-803细胞周期进程，诱导细胞凋亡，该过程可能与下调Bcl-2蛋白表达，上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的:探究siRNA靶向沉默MALAT-1对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:分别以10、20、30、40、50 nmol/L浓度的siRNA靶向沉默体外培养的人鼻咽癌细胞株CNE的基因MALAT-1，以实时荧光定量（qRT-PCR）分别在24、48 h后检测MALAT-1 mRNA表达水平，筛选合适的siRNA作用浓度和时间。将CNE细胞分为三组:空白对照组、siRNA阴性对照组和siRNA组，siRNA处理细胞后，采用CCK-8法检测细胞增殖情况，采用流式细胞技术检测细胞凋亡情况，Western blot 检测各组细胞凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、caspase-3）及PI3K/AKT通路蛋白（PI3K、ATK、p-AKT）表达情况。结果:选定30 nmol/L浓度的siRNA作用于CNE细胞48 h；siRNA处理细胞后，与空白对照组相比，siRNA组细胞增殖率明显降低，凋亡率明显升高，Bax、caspase-3蛋白表达明显升高，Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）；AKT蛋白表达无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。siRNA阴性对照组各指标均无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:siRNA可靶向沉默MALAT-1，抑制鼻咽癌细胞增殖，促进其凋亡，可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的。     

绿原酸对人胶质瘤细胞U251的抗肿瘤活性及其促凋亡机制

 目的 研究绿原酸对人胶质瘤细胞U251细胞株增殖、凋亡的作用及其机制。方法 培养人胶质瘤U251细胞，不同浓度绿原酸处理细胞48 h后，CCK-8法检测细胞生长抑制率，观察细胞形态学变化；Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡，RT-PCR及Western blot检测p53、Livin、Bcl-2、Bax mRNA和蛋白的表达，Western blot检测Caspase-3蛋白的表达。结果 不同浓度绿原酸干预U251细胞48 h后显著抑制细胞的增殖活性，促进细胞凋亡，并且能够上调p53和Bax基因，下调Livin、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达，促进Caspase-3蛋白的表达。结论 绿原酸可能是通过上调p53和Bax的表达，下调Livin和Bcl-2的表达，激活Caspase-3蛋白，最终诱导U251细胞凋亡。     

Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响研究

目的 探讨Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及对AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响.方法 采用RT-PCR及Western Blot检测胃癌组织和癌旁组织中Gab2的表达.培养人胃癌细胞株SGC-7901,分别用Gab2小干扰RNA(Gab2-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,各组细胞培养48 h.应用Western Blot检测细胞中Gab2、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达的变化,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移能力.结果 胃癌组织中Gab2的mRNA及蛋白表达水平均明显高于癌旁组织(P﹤0.01);Gab2-siRNA组Gab2蛋白表达水平明显低于对照组(P﹤0.01);siRNA-NC组细胞的存活率、凋亡率、迁移数及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);Gab2-siRNA组细胞的AKT蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05),细胞的存活率、迁移数及p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(P﹤0.01),细胞凋亡率及Bax蛋白表达明显高于对照组(P﹤0.01).结论 Gab2在胃癌组织高表达,沉默Gab2的表达能显著抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖和迁移,并通过调节Bax、Bcl-2蛋白表达促进细胞凋亡,其可能的机制与AKT信号通路的调控有关.     

大蒜素联合5-FU对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨大蒜素与5-FU联合应用治疗结肠癌的作用机制。方法 利用HT-29细胞模拟结肠癌,设置空白对照组、大蒜素组(15 μg/mL)、5-FU组(15 μg/mL)和大蒜素+5-FU组(各15 μg/mL)共4组,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术观察细胞凋亡情况,Real-time PCR检测mTOR、PTEN、Bcl-2与Bax mRNA表达情况。结果 CCK-8检测结果显示,与空白对照组比较,各用药组均可以抑制HT-29细胞的增殖(P＜0.05)。其中大蒜素+5-FU组的抑制作用最为显著;流式细胞术检测结果显示,各用药组凋亡细胞显著多于空白对照组,大蒜素+5-FU组凋亡细胞最为显著;Real-time PCR结果显示,与空白对照组比较,各用药组Bcl-2、mTOR的mRNA表达量显著降低而Bax、PTEN的mRNA表达量显著升高,大蒜素+5-FU组变化最为显著。结论 大蒜素与5-FU联合应用可以抑制HT29细胞的增殖,促进凋亡,并且大蒜素具有增强5-FU诱导结肠癌细胞凋亡的能力。