miR-4465调控EZH2的表达抑制胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨miR-4465通过调控EZH2的表达对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法:qRT-PCR检测胃癌组织和细胞系中miR-4465的表达水平;在MKN45细胞中过表达miR-4465或沉默EZH2,采用CCK-8和Transwell检测MKN45细胞增殖活力、迁移和侵袭能力;Western blotting检...     

曲妥珠单抗对HER-2高表达胃癌细胞珠抑制作用观察

目的:观察曲妥珠单抗对HER-2高表达人胃癌NCI-N87细胞株的抑制作用.方法:免疫组化法检测HER-2蛋白在NCI-N87细胞中的表达.荧光免疫杂交法(FISH)检测HER-2基因在NCI-N87细胞中的扩增情况.根据是否应用曲妥珠单抗分为对照组与药物组,其中药物组浓度分别为0.1、1、10和100 μg/mL,作用72 h后以CCK8法测定曲妥珠单抗对NCI-N87细胞的生长抑制作用.结果:免疫组化法检测显示,HER-2蛋白在NCI-N87细胞中的表达以细胞膜分布为主,呈棕褐色颗粒状,HER-2蛋白为可疑阳性表达(++).荧光免疫杂交法检测显示,NCI-N87细胞HER-2/CEP17＞2,存在HER-2基因扩增.CCK8实验显示,曲妥珠单抗浓度为0.1、1、10和100 μg/mL时细胞存活率分别为(84.17±1.70)％、(81.21±3.94)％、(83.65±2.48)％和(80.59±4.25)％,四组间比较差异无统计学意义,P＞0.05;与对照组(100％)相比,差异有统计学意义,P=0.000.结论:曲妥珠单抗对HER-2高表达人胃癌NCI-N87细胞具有一定的生长抑制作用;曲妥珠单抗浓度在0.1～100 μg/mL对NCI-N87细胞的抑制作用相似.     

胃癌细胞中Caveolin-1 对表皮生长因子受体2 活化的影响

目的:检测Caveolin-1 蛋白（Cav-1）对胃癌（gastric cancer,GC）细胞株NCI-N87 恶性生物学行为的影响及其可能的作用机制。方法：构建Cav-1 过表达稳转染细胞系N87/Cav-1,应用MTT、克隆形成、划痕修复实验检测Cav-1 对胃癌细胞株NCIN87恶性生物学行为的影响,应用Western blotting 检测在EGF配体诱导下Cav-1 蛋白对Her-2 活化及ERK、Akt 信号通路的影响。结果：Cav-1 过表达可明显抑制胃癌细胞NCI-N87 的增殖及迁移能力;在配体EGF刺激下,Cav-1 过表达明显抑制了Her-2 酪氨酸磷酸化水平以及P-ERK/ERK、P-AKT/AKT的比率（P<0.01）。结论：Cav-1 过表达可明显抑制EGF诱导的Her-2 酪氨酸磷酸化水平,并可能通过下游MAPK及PI3K/Akt 信号通路的作用抑制了胃癌细胞株NCI-N87 的增殖及迁移能力。     

阿帕替尼联合曲妥珠单抗对胃癌细胞的协同增敏作用

目的观察阿帕替尼联合曲妥珠单抗杀伤胃癌NCI-N87细胞的协同增敏作用并探讨可能作用机制。方法CCK-8法检测空白对照组、曲妥珠单抗组(0.1、1、10μg/ml)、阿帕替尼组(1μmol/L)及曲妥珠单抗(0.1、1、10μg/ml)+阿帕替尼(1μmol/L)组对NCI-N87细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测NCI-N87细胞凋亡,Western blotting检测HER-2、VEGFR2、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果CCK-8检测提示曲妥珠单抗、阿帕替尼能够抑制NCI-N87细胞增殖,在一定浓度范围内作用呈浓度依赖性和时间依赖性(P<0.01);q值计算提示曲妥珠单抗与阿帕替尼具有协同抑制NCI-N87细胞增殖的作用。流式细胞术检测显示联合组NCI-N87胃癌细胞凋亡较单药组明显升高(P<0.05),其中空白对照组、阿帕替尼组(1μmol/L)、曲妥珠单抗(0.1μg/ml)组及曲妥珠单抗(0.1μg/ml)+阿帕替尼(1μmol/L)组的凋亡率分别为(3.0±1.28)%、(5.8±1.63)%、(8.0±3.92)%和(21.6±6.85)%。曲妥珠单抗+阿帕替尼组与空白对照组、曲妥珠单抗及阿帕替尼单药组比较,HER-2蛋白表达显著下调(P<0.05);曲妥珠单抗+阿帕替尼组与空白对照组比较,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01)。结论阿帕替尼联合曲妥珠单抗可能通过下调HER-2蛋白及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达,协同抑制NCI-N87细胞增殖和促进细胞凋亡。     

AMD3100抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力及其机制研究

目的:探讨CXCR4特异性非肽类受体拮抗剂AMD3100对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其可能的分子机制。方法:Western blot方法检测不同转移潜能胃癌细胞系中CXCR4蛋白的表达水平。以不同浓度的AMD3100处理MKN28-M和MKN28-NM细胞后,采用CCK-8检测胃癌细胞的增殖情况,Transwell实验观察胃癌细胞侵袭能力的变化。Western blot检测AMD3100处理后MKN28-M细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:Western blot实验结果显示,高转移胃癌细胞MKN28-M中CXCR4的蛋白表达水平明显高于低转移胃癌细胞MKN28-NM,亲本细胞MKN28的CXCR4蛋白表达量很低。CCK-8和Transwell实验检测结果表明,AMD3100通过特异性阻断CXCR4的作用,显著抑制MKN28-M和MKN28-NM细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01),且其抑制均呈剂量依赖性。经AMD3100处理后,MKN28-M细胞中MMP-9和VEGF的蛋白表达水平降低。结论:AMD3100可能通过下调MMP-9、VEGF等分子的表达抑制胃癌细胞的增殖,减弱胃癌细胞的侵袭及转移能力。     

HER-2对胃癌细胞生物学行为及EMT、Wnt通路的影响

目的 探讨人表皮生长因子受体-2(HER-2)的表达对胃癌细胞粘附、迁移等生物学行为的影响，并探讨其表达与上皮间质转化(EMT)及Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 利用小干扰RNA技术，在SGC-7901胃癌细胞中沉默HER-2表达；采用实时荧光定量PCR (qPCR)及Western blotting法验证HER-2的沉默效果，并将实验分为空白组、空载体组和HER-2沉默组；采用MTT比色法检测细胞粘附能力，Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力；qPCR和Western blotting法检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail及Wnt/β-catenin信号通路GSK-3β、β-catenin、c-Myc的mRNA和蛋白表达情况。结果 HER-2沉默组中HER-2 mRNA和蛋白表达水平低于空白组和空载体组(P<0.001),而空白组和空载体组的差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组和空载体组比较，HER-2沉默组胃癌细胞的粘附能力、迁移能力和侵袭能力均显著下降(P<0.001)。HER-2沉默组胃癌细胞Vi...     

下调IKKα表达能够抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力

目的:研究降低IKKα的表达对人胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法:利用Western blot 检测胃癌细胞系中IKKα蛋白的表达水平,选择IKKα表达较高的细胞系MKN28,转染下调IKKα的慢病毒,建立稳定转染细胞株(标记为MKN28-LV-shcontrol和MKN28-LV-shIKKα),并利用Western blot、RT-PCR验证病毒转染效果。采用Transwell实验和划痕实验检测低表达IKKα对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:Western blot结果显示胃癌细胞系中MKN28细胞IKKα蛋白表达水平相对较高,转染慢病毒干扰载体成功后利用Western blot 及RT-PCR实验证实实验组MKN28-LV-shIKKα较对照组MKN28-LV-shcontrol中IKKα蛋白及mRNA水平明显降低。利用Transwell及划痕实验证实实验组MKN28-LV-shIKKα较对照组MKN28-LV-shcontrol细胞迁移及侵袭能力明显降低。结论:IKKα 与胃癌的迁移及侵袭密切相关,降低IKKα的表达水平能显著抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力,提示IKKα在胃癌的转移中可能发挥着重要作用。     

PTEN低表达增加胃癌曲妥珠单抗的耐药性

目的:明确PTEN活性和胃癌曲妥珠单抗耐药性的关系。方法:用Western blot方法检测胃腺癌细胞株中HER2蛋白、PTEN蛋白、PI3K蛋白、AKT蛋白的表达;用CCK-8方法检测曲妥珠单抗对HER2阳性/PTEN野生型NCI-N87细胞的生长抑制作用;构建PTEN siRNA载体并将其PTEN siRNA载体感染HER2阳性/PTEN野生型NCI-N87细胞,建立稳定表达PTEN siRNA的细胞株N87-PD和阴性对照N87-NC,用Western blot验证其表达水平;同时用CCK-8验证曲妥珠单抗对各组细胞生长的影响。结果:Western blot结果显示,NCI-N87细胞的HER2表达水平高于MNK-7细胞。CCK-8检测表明,随着药物浓度的增加,细胞存活率持续呈下降趋势。三种siRNA中以siRNA-1对PTEN mRNA的干扰效果最优,选择siRNA-1进行后续实验。实时定量PCR法测定最终病毒滴度为1.56×109/ml（siRNA-1）和1.62×109/ml（NC）。PTEN siRNA对NCI-N87细胞的PTEN蛋白表达有明显的下调作用且N87-PD细胞中磷酸化AKT蛋白水平显著高于对照组细胞N87-NC;曲妥珠单抗作用72h后,CCK-8测定N87-NC细胞存活率显著下降,而N87-PD细胞存活率与阴性对照组细胞无显著差异。结论:PTEN低表达增加胃癌曲妥珠单抗的耐药性。     

珠子参多糖通过靶向let-7a/CDK6分子轴调控胃癌MKN45细胞的增殖 与凋亡

目的：探讨珠子参多糖（panax japlcus var polysaccharide，PJPS）对胃癌MKN45细胞增殖和凋亡的影响及其调控机 制。方法：选用人胃癌细胞系HGC27、MGC803、MKN45和胃黏膜上皮细胞株GES-1，分别将let-7a mimics、let-7a inhibitor转染 进MKN45细胞； 以100 μg/ml PJPS处理胃癌细胞系并挑选后续实验细胞株为MKN45细胞；分别添加0、10、50、100、120 μg/ml PJPS处理转染后各组MKN45细胞， 用CCK-8法、流式细胞术分别检测MKN45细胞增殖活力和细胞凋亡率， 用Western blotting 检测MKN45细胞中细胞周期依赖性激酶6（cycle dependent kinase 6，CDK6）和凋亡相关蛋白的表达， 用qPCR法检测调控胃癌细 胞增殖的miRNAs表达水平。用双荧光素酶报告基因实验验证let-7a和CDK6的靶向关系。结果：与其他胃癌细胞比较，100 μg/ml PJPS可显著抑制 MKN45 细胞的增殖活力（P<0.01）；同时，100 μg/ml PJPS 处理后，可显著上调MKN45细胞中let-7a的表达 （P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实CDK6是let-7a的靶基因。进一步实验显示，PJPS通过上调let-7a靶向抑制CDK6的表 达，从而抑制MKN45细胞的增殖并诱导其凋亡（均P<0.01）。结论：PJPS通过调控let-7a/CDK6分子轴抑制胃癌MKN45细胞的 增殖并诱导其凋亡。     

锌指蛋白883在胃癌组织中的表达及生物学功能

目的:探讨锌指蛋白883（ZNF883）在胃癌组织中的表达及预后意义,并观察其对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:基于TCGA数据,通过GEPIA网络平台分析ZNF883 mRNA在胃癌组织和正常胃组织中的表达差异及其与患者生存率的相关性。通过蛋白免疫印记（Western blotting,WB）检测ZNF883蛋白在胃癌组织及对应癌旁组织中的表达水平。ZNF883 shRNA转染人胃癌细胞AGS和NCI-N87,WB检测敲低效率,CCK-8和Transwell小室检测细胞增殖、迁移和侵袭,并通过WB检测细胞周期蛋白D1（CCND1）、细胞周期依赖性激酶4（CDK4）和基质金属蛋白酶2/9（MMP2/9）蛋白表达。结果:TCGA数据分析发现ZNF883 mRNA在胃癌组织中的表达显著高于正常胃组织,其蛋白表达在胃癌组织中亦显著上调。生存分析证实ZNF883 mRNA高表达胃癌患者的无病生存率和总生存率均明显降低。敲低ZNF883显著抑制AGS和NCI-N87细胞增殖、迁移和侵袭。另外,敲低ZNF883显著减少胃癌细胞中CCND1、CDK4和MMP2/9蛋白水平。结论:ZNF883是一个新的胃癌驱动基因,胃癌组织中其高表达提示患者预后不良,ZNF883可能通过促进CCND1、CDK4和MMP2/9表达增强胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

胃癌转移相关miRNA的差异表达谱及miR-218的生物学分析

目的 探讨胃癌转移相关微小RNA（miRNA）的差异表达情况并进行miR-218的生物学分析。方法 采用实时荧光定量PCR（qPCR）及miRNA芯片法检测低转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-NM、MKN28-NM）与高转移潜能的胃癌细胞亚系（SGC7901-M、MKN28-M）间miRNA的差异表达。提取不同转移潜能胃癌细胞系和10例胃癌冰冻组织及相应的转移淋巴结中的总RNA,利用qPCR检测miR-218在不同细胞及组织中的表达情况。结果 对不同转移潜能的胃癌细胞亚系进行芯片检测发现,与SGC7901-NM细胞比较,SGC7901-M 细胞有47个分子表达下调,15个分子表达上调。与MKN28-NM细胞比较,MKN28-M细胞有41个分子表达下调,83个分子表达上调。在SGC7901-M及MKN28-M细胞中,34个分子表达均出现下降,11个分子表达均出现上升。对不同转移潜能的胃癌细胞亚系以及人永生化正常胃黏膜细胞系GES进行检测可以发现,4种不同转移潜能的胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于正常胃黏膜细胞系GES,差异有统计学意义（P＜0.05）,且在高转移潜能胃癌细胞亚系中miR-218的表达均低于低转移潜能胃癌细胞系,差异有统计学意义（P＜0.05）。胃癌转移淋巴结中miR-218的表达水平为0.23±0.02,低于胃癌原发灶的1.09±0.05,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 胃癌转移相关miRNA会出现差异表达情况,高转移潜能胃癌细胞中的miR-218表达水平上调可能与胃癌转移存在一定关系。     

ATM在人胃癌细胞系的表达及其在细胞DNA损伤中的作用

目的：研究DNA损伤剂对ATM基因缺陷和正常的胃癌细胞系的作用机制。方法：Western—blot方法检测6株胃癌细胞系ATM蛋白的表达情况,并用DNA损伤剂顺铂作用于ATM基因缺陷的MKN28细胞系和ATM基因正常的BGC823细胞系,采用Western—blot、DNAladder、Hoechest33258／PI双荧光染色等方法观察凋亡相关激酶的表达和细胞的应答反应。结果：Western—blot显示,ATM蛋白在胃癌细胞系MGC803、MKN28、MKN45、SGC7901的表达水平显著低于BGC823和AGS细胞系,BGC823细胞在CDDP作用后,ATM蛋白表达水平升高,磷酸化chkl和chk2活性24小时后增强,而Cdc25C表达减少;MKN28细胞中G2期检测点蛋白ATM、P—chkl、P—chk2表达较低,Cdc25C表达较高,但在CDDP作用前后无明显变化。MKN28细胞在DNA损伤剂作用后出现显著凋亡,而BGC823细胞在DNA损伤剂作用48小时后未见显著凋亡。结论：ATM在细胞周期的多个环节均有凋控作用,特别是在细胞周期检测点和DNA损伤的修复中有重要的监视和启动作用。     

HER-2通过影响EMT增强胃癌细胞的侵袭、迁移及黏附能力

目的:研究HER-2表达对胃癌细胞侵袭、迁移及黏附的影响,并探讨HER-2表达与EMT相关蛋白的关系。方法:利用小干扰RNA技术,在MKN-45胃癌细胞中沉默HER-2表达;采用实时荧光定量PCR法及Western blot法验证HER-2沉默效果,并将实验分为空白对照组、阴性对照组和HER-2沉默组;采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测各组细胞EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Snail的mRNA和蛋白表达情况。采用Transwell小室技术检测细胞侵袭及迁移能力;MTT实验检测细胞黏附能力。结果:沉默MKN-45胃癌细胞株中HER-2表达后,HER-2沉默组Vimentin、Snail表达水平以及侵袭、迁移及黏附能力明显低于空白对照组和阴性对照组;HER-2沉默组E-cadherin表达水平明显高于空白对照组和阴性对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:在胃癌细胞中,HER-2可能通过影响EMT相关蛋白表达从而增强胃癌细胞的侵袭、迁移及黏附能力。     

KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药中的作用

目的:探讨KLF8（Kruppel-like factor 8）在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药表型中的作用。方法:利用Western blot和实时定量PCR的方法检测三株胃癌细胞系MKN28、MKN45、SGC7901在常氧及缺氧条件下KLF8的表达水平。Western blot和实时定量PCR检测胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR、SGC7901/ADR和亲本细胞系SGC7901中KLF8的表达水平。构建KLF8正义表达载体及KLF8小干扰RNA的慢病毒载体,将其转染入实验细胞中,用Western blot和实时定量PCR的方法检测KLF8表达量的变化。MTT、Annexin V/PI染色法及阿霉素蓄积量与潴留实验检测KLF8在缺氧诱导胃癌细胞多药耐药表型中的作用。结果:缺氧可诱导胃癌细胞系MKN28、MKN45、SGC7901中KLF8的表达升高。与胃癌亲本细胞系相比,KLF8在胃癌耐药细胞系中的表达升高,并且在SGC7901/VCR细胞中表达升高的更为明显。外源性转染KLF8后可显著增加胃癌细胞中KLF8的表达量,KLF8小干扰RNA可有效降低常氧及缺氧条件下胃癌细胞中KLF8的表达。常氧条件下,外源性转染KLF8的正义表达载体可增加胃癌细胞对不同化疗药物的耐受性,降低化疗药物诱导的胃癌细胞凋亡指数,同时可增加细胞内阿霉素的泵出率。缺氧条件下,KLF8小干扰RNA能够逆转胃癌细胞中上述现象的发生。结论:初步实验结果发现了一个新的缺氧反应分子-KLF8。表型试验证实该分子在缺氧诱导胃癌多药耐药中发挥作用。     

MEMO1共结合IGF-IR介导胃癌细胞侵袭转移

目的:探讨MEMO1（mediator of ErbB2-driven cell motility 1）调控IGF-IR（insulin-like growth factor-I receptor）介导胃癌侵袭转移的分子机制，为临床治疗提供潜在靶点。方法:选取五种不同分化程度胃癌细胞系（MKN-7、NCI-N87、MGC-803、BGC-823、MKN-74），Western blot检测MEMO1、IGF-IR和E-cad表达差异；Transwell比较五种胃癌细胞系迁移能力；选取MEMO1/IGF-IR高表达细胞系MGC-803，瞬时敲除MEMO1或IGF-IR基因，Western blot检测EMT标志物表达差异；IP实验检测MEMO1与IGF-IR间相互作用；TCGA数据库分析胃癌组织MEMO1和IGF-IR mRNA表达水平与患者预后的关系。结果:基础状态下五种胃癌细胞IGF-IR与MEMO1的表达呈显著正相关，并且两种蛋白的表达强度与胃癌细胞EMT相关；五种胃癌细胞迁移能力MKN-7相似文献   

异黏蛋白调控鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的研究

 目的 探讨异黏蛋白（Metadherin, MTDH）对鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的影响。方法 采用慢病毒介导的MTDH cDNA和MTDH-shRNA转染鼻咽癌细胞，分别上调和抑制MTDH的表达。CCK-8法、流式细胞实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期及凋亡改变。CCK-8法确定紫杉醇对鼻咽癌细胞的IC₃₀、IC₅₀、IIC₇₀，并检测IC₃₀、IC₅₀、IC₇₀浓度下MTDH过表达组与沉默组细胞生存率改变。结果 MTDH上调后5-8F、HNE-1细胞的增殖能力均增强，而沉默MTDH后细胞的增殖能力均降低。MTDH沉默组的G1期细胞比例明显增加。MTDH过表达组细胞凋亡率降低，MTDH沉默组细胞凋亡率增加。MTDH表达上调之后，鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度降低，在IC₇₀、IC₅₀浓度下，MTDH过表达组细胞的生存率高于对照组细胞。沉默MTDH之后，鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度升高，在IC₅₀、IC₃₀浓度下，MTDH沉默组细胞的生存率低于对照组细胞。结论 MTDH在促进鼻咽癌细胞增殖中起重要作用，其高表达可促进鼻咽癌细胞紫杉醇耐药性的产生。     

高表达磷酸丝氨酸转氨酶1抑制胃癌细胞增殖的实验研究

  目的  代谢重塑是肿瘤重要特征之一,多种关键代谢酶在肿瘤发生、发展过程中功能异常。磷酸丝氨酸转氨酶1（phosphoserine aminotransferase 1,PSAT1）催化磷酸丝氨酸生成,促进了肺腺癌、胶质瘤、乳腺癌、结肠癌等肿瘤的恶性发展。本研究分析PSAT1在胃癌中的生物功能。  方法  利用Kaplan-Meier plotter数据库分析PSAT1与胃癌患者预后的关系;利用RT-qPCR检测PSAT1在胃癌细胞株中的mRNA表达水平;构建PSAT1慢病毒高表达载体,在胃癌BGC823和NCI-N87细胞中高表达PSAT1;通过CCK-8、克隆形成和裸鼠皮下成瘤试验分析PSAT1对胃癌细胞增殖能力的影响。  结果  Kaplan-Meier plotter数据库分析显示PSAT1高表达的胃癌患者有更好的总生存期（P=1.7e-6,HR=0.52）。在胃癌KATOⅢ、AGS、SNU16、NCI-N87、MKN45、BGC823、MGC803和SGC7901细胞中,PSAT1的表达水平低于永生化的胃上皮细胞GES1。CCK8试验结果显示PSAT1高表达后可以显著抑制胃癌BGC823（120 h,P<0.000 1）和NCI-N87（96 h,P<0.000 1）细胞的体外增殖能力。克隆形成试验同样证实PSAT1可以抑制胃癌BGC823（P=0.029 6）和NCI-N87（P=0.036 5）细胞的克隆形成能力。进一步动物实验表明PSAT1抑制了BGC823细胞在裸鼠体内的增殖（n=7,P=0.009 1）。  结论  PSAT1高表达提示胃癌患者有更好的预后;PSAT1在多数胃癌细胞株中的表达低于GES1细胞;PSAT1高表达可显著抑制胃癌细胞体外、体内的增殖。      

胃癌细胞MKN28(p53-/-)对NSAIDs诱导凋亡敏感性的研究

目的1.明确非甾体消炎药(NSAIDs)能否诱导p53基因突变的胃癌细胞MKN28凋亡.2.明确NSAIDs对MKN28细胞凋亡相关基因bcl-2、bax表达的调控.方法1.通过MTT比色法检测NSAIDs对细胞生长活力的影响.2.应用丫啶橙染色、Annexin-Ⅴ/PI双染色、共聚焦显微镜、流式细胞术检测细胞凋亡.3.应用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)方法检测bcl-2、bax基因水平的改变.结果1.NSAIDs药物吲哚美辛(Indo)和阿斯匹林(Asp)对胃癌细胞株MKN28均有生长抑制作用,且呈时间/浓度依赖性增强.2.在Indo 800μmol/L、Asp8 mmol/L作用48～96 h后,MKN28细胞凋亡数量稍有增多,但不具有统计学意义.3.随着药物作用时间的延长,MKN28细胞的bcl-2基因mRNA表达逐渐减弱,bax基因表达逐渐增强.结论1.NSAIDs可抑制MKN28胃癌细胞株增殖.2.NSAIDs不能诱导p53基因突变的MKN28胃癌细胞株发生显著的凋亡,提示p53基因突变可能阻断了NSAIDs诱导的细胞凋亡.3.NSAIDs可使MKN28细胞凋亡相关基因bcl-2和bax的水平呈现促进凋亡倾向的改变.     

胃癌细胞uPA表达与腹膜种植潜能的相关性研究

目的探讨不同胃癌细胞系尿激酶型血浆纤溶酶原激活因子(uPA)的表达及其与腹膜种植能力的关系。方法采用半定量RT-PCR、Western blot和ELISA方法,比较不同胃癌细胞系(AGS、SGC7901、MKN45和MKN28)uPA表达和uPA活性的差异。将胃癌细胞直接注入裸鼠腹腔,建立腹膜种植模型,通过观察裸鼠生存时间等方法,比较不同胃癌细胞系的腹膜种植潜能。结果uPA表达以SGC7901细胞最高,uPA活性以MKN45细胞最高,AGS细胞uPA表达和活性均最低。AGS未发生腹膜种植肿瘤;SGC7901和MKN45均出现大小不等的腹膜种植肿瘤;MKN28出现伴有血性腹水且大小相似的腹膜种植肿瘤;但MKN45最早形成腹膜种植肿瘤,并且该组裸鼠的生存时间最短。结论各株胃癌细胞的uPA表达在转录和翻译水平相一致,但uPA的表达量和uPA活性大小有明显差异,并且这二者与腹膜种植能力呈正相关。     

紫杉醇顺铂对HCC1937人乳腺癌细胞MAPK信号通路影响

目的:研究紫杉醇、顺铂对BRCA1基因缺陷型三阴性乳腺癌细胞HCC1937的增殖抑制作用及与MAPK信号通路的关系。方法:采用CCK-8试剂盒检测紫杉醇、顺铂分别对HCC1937细胞、MCF-7细胞的50%抑制浓度(IC₅₀);采用流式细胞仪和Western blot分别检测两药作用HCC1937细胞48 h后的细胞周期和MAPK通路蛋白表达状况。结果:HCC1937细胞(IC₅₀ 6～9μg/mL)对顺铂敏感性显著高于MCF-7细胞(IC₅₀ 18～20μg/mL)（P<0.01）;而HCC1937细胞(IC₅₀ 3～4.6μg/mL)对紫杉醇的敏感性则明显低于MCF-7细胞(IC₅₀ 0.12～0.3μg/mL)（P<0.01）。紫杉醇使HCC1937细胞阻断在G₂～M期,呈剂量-效应趋势,顺铂使其阻断在G₀/G₁期;紫杉醇、顺铂作用HCC1937细胞48 h后,P-JNK和P-P38蛋白表达显著增加,顺铂组P-ERK蛋白表达较对照组明显降低。结论:1)三阴性乳腺癌细胞HCC1937对顺铂的敏感性明显优于紫杉醇;2)紫杉醇、顺铂皆可激活HCC1937细胞JNK/SAPK、P38通路,同时不同浓度的顺铂可以抑制ERK通路激活。