金雀异黄素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的 探讨金雀异黄素（genistein,GEN）诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的分子机制.方法 用0、5、10、20 μmol/L GEN处理MDA-MB-231 细胞24 h.采用CCK-8、Hoechst 33342染色和流式细胞仪测定不同浓度GEN对 MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.采用Western blotting检测不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas相关死亡域蛋白（FADD）、活性半胱天冬酶8（cleaved caspase-8）、Fas、FasL蛋白表达水平.采用实时RT-PCR分析不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas、FasL基因表达水平.多组均数比较采用方差齐性检验后进行单因素方差分析.结果 在GEN作用24 h后,0、5、10和20 μmol/L组对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率分别为（3.00±1.41）%、（14.02±1.57）%、（27.5±1.52）%、（48.90±1.44）%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加（F=528.119,P=0.000）.两两比较显示：各浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）.0、5、10和20 μmol/L组诱导MDA-MB-231细胞的早期凋亡率分别为（3.40±0.40）%、（9.34±1.34）%、（19.26±0.93）%、（27.41±1.12）%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加（F=379.573,P=0.000）.两两比较显示：各浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）.Western blotting结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FADD、cleaved caspase-8、FasL蛋白表达升高（F=368.621、456.744、419.129,P均=0.000）,Fas蛋白表达差异无统计学意义（F=0.800,P=0.528）;与10（μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL蛋白表达降低有统计学意义（F=92.235,P=0.001）.实时RT-PCR结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FasL mRNA表达升高（F=646.983,P=0.000）,Fas mRNA表达差异无统计学意义（F=1.556,P=0.274）;与10 μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL mRNA表达降低有统计学意义（F=52.562,P=0.020）.结论 GEN通过上调Fas/FasL途径中FasL基因表达诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.     

盐霉素通过靶向调控ALDH影响三阴性乳腺癌细胞MDA-MB- 231增殖和凋亡

目的 探讨盐霉素（salinomycin，Sal）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用流式细胞术筛选ALDH高表达乳腺癌细胞系；采用MTT法检测不同浓度Sal（1~32 μmol/L）对细胞增殖的影响；采用流式细胞仪检测Sal对细胞凋亡以及肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达的影响；采用qRT-PCR、Western blot检测凋亡相关分子Caspase-3、Bax、Bcl-2、PARP mRNA和蛋白表达；TCGA（the Cancer Genome Atlas）数据库下载乳腺癌患者数据集（n=1 218），采用Pearson法分析ALDH与凋亡相关分子表达的相关性。结果 Sal在24 h、48 h、72 h均可以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231细胞增殖（均P<0.001）；Sal作用MDA-MB-231细胞48 h后，与对照组比较，2 μmol/L组、4 μmol/L组、8 μmol/L组的细胞凋亡率均升高（均P<0.05）；Bcl-2、PARP、Caspase-3 mRNA表达下降（均P<0.05），Bax mRNA表达升高（均P<0.05）；Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达下降（均P<0.05），PARP、Bax 蛋白表达升高（均P<0.05）；MDA-MB-231乳腺癌干细胞表面标志物ALDH表达下降（均P<0.05）。TCGA数据库分析显示，ALDH与抗凋亡分子Bcl-2、Caspase-3的表达呈正相关（r=0.209，P=0.007；r=0.235，P=0.002），与Bax、PARP的表达呈负相关（r=-0.326，P＜0.001；r=-0.453，P＜0.001）。结论 Sal可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长，可能通过下调肿瘤干细胞表面标志物ALDH表达实现。     

鱼藤素通过FZD7调控Wnt通路抑制三阴性乳腺癌细胞侵袭、迁移、EMT的实验研究

目的:探讨鱼藤素对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞增殖、侵袭、迁移和上皮-间质转化（EMT）的抑制作用及可能的机制。方法:体外培养人TNBC细胞系（MDA-MB-231和BT-20）,加入鱼藤素（5、10、20 μmol/L）诱导后,采用CCK-8法检测MDA-MB-231和BT-20细胞的存活率;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western Blot检测细胞中卷曲同源物7（FZD7）、Ki-67、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、β-连结蛋白（β-catenin）、c-myc蛋白表达。利用FZD7过表达载体质粒（pcDNA-FZD7）转染建立FZD7过表达细胞,进一步研究FZD7过表达对鱼藤素抗TNBC作用的影响;裸鼠成瘤实验检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞体内生长的影响。结果:与对照组（0 μmol/L）相比,鱼藤素（5、10、20 μmol/L）呈剂量依赖性的显著降低MDA-MB-231和BT-20细胞存活率,并显著增加MDA-MB-231和BT-20细胞的凋亡率（P＜0.05）。与对照组相比,鱼藤素可显著降低MDA-MB-231和BT-20细胞增殖活力、克隆形成能力、迁移与侵袭能力和细胞内Vimentin、FZD7、β-catenin、c-myc蛋白表达,升高细胞凋亡率和细胞内E-cadherin蛋白表达（P＜0.05）;过表达FZD7可逆转鱼藤素对TNBC细胞恶性表型的影响。体内实验中,与对照组相比,鱼藤素组裸鼠的肿瘤体积和肿瘤质量、肿瘤中FZD7蛋白表达和FZD7、Ki-67阳性表达显著降低（P＜0.05）,与鱼藤素组和鱼藤素+pcDNA-NC组相比,鱼藤素+pcDNA-FZD7组肿瘤体积和肿瘤质量、肿瘤中FZD7蛋白表达和FZD7、Ki-67阳性表达显著升高（P＜0.05）。结论:鱼藤素可抑制TNBC细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调FZD7的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

Akt抑制剂MK2206对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究新型Akt抑制剂MK2206对体外培养的人乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度的MK2206作用于人乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞,采用MTT法检测细胞的增殖抑制率,FCM法检测细胞的凋亡率,Western印迹法检测细胞中caspase-3、多聚ADP核糖聚合酶(polyADP-ribosepolymerase,PARP)、bcl-2、bax、磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,T-Akt)蛋白表达水平的变化。结果:0.1、1、10和100nmol/LMK2206作用细胞24h后,可明显抑制T47D和MDA-MB-231细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其作用随着药物浓度的增加而增强。MK2206可促进乳腺癌细胞中caspase-3和PARP蛋白剪切,上调bax蛋白表达,下调bcl-2和p-Akt蛋白的表达,且均呈剂量依赖性,但对T-Akt表达却无明显影响。结论:MK2206可抑制乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制Akt磷酸化从而阻断PI3K/Akt信号转导途径有关。     

小檗碱增加乳腺癌细胞对阿霉素药物敏感作用的实验研究

目的:观察小檗碱联合阿霉素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖的影响及潜在机制。方法:培养三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞株;CCK-8检测不同浓度阿霉素和联用小檗碱后细胞的存活率变化;Western blot检测细胞内p300、hSIRT-2、H3K56ac蛋白表达情况;细胞划痕实验、侵袭小室法检测药物对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:阿霉素对细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,相同浓度阿霉素联合终浓度80 μmol/L盐酸小檗碱对细胞的增殖抑制率均明显高于单独使用阿霉素（P＜0.05）。p300、hSIRT-2、H3K56ac三种蛋白在对照组及加药组中均有表达,hSIRT-2蛋白在加药后含量降低,p300和H3K56ac蛋白的含量仅在含小檗碱组的细胞中增多,差异有统计学意义（P＜0.05）。细胞侵袭和迁移实验显示小檗碱可以有效增强阿霉素对乳腺癌MDA-MB-231细胞三维迁移能力的抑制作用。结论:小檗碱可协同阿霉素抑制MDA-MB-231细胞增殖,共同发挥抗肿瘤效果,作用机制可能与p300、hSIRT-2、H3K56ac蛋白有关。     

褪黑素对阿霉素抗雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA—MB-231作用的影响及其机制

目的探讨生理浓度（10^-9mol／L）褪黑素和药理浓度（10^-5moL／L）褪黑素对阿霉素抑制雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231作用影响及其机制。方法（1）应用四甲基偶氮唑蓝（Mar）法检测经不同浓度褪黑素孵育后阿霉素对MDA—MB-231的抑制率和IC50变化。（2）应用流式细胞学方法观察不同浓度褪黑素、阿霉素以及两药联用时对MDA-MB-231细胞周期分布和凋亡的影响。（3）应用western blot法检测不同浓度褪黑素、阿霉素单药和两药联用对MDA—MB-231细胞p53和bcl-2蛋白表达的影响。结果（1）阿霉素对乳腺癌MDA—MB-231细胞具有明显的抑制作用,且呈剂量时间依赖性。IC50值为（1．00±0．09）μg／ml,经生理浓度和药理浓度褪黑素孵育后IC50分别降为（0．85±0.06）μg／ml和（0．47±0．03）μg／ml,前者与孵育前相比未,差异无统计学意义（P〉0．05）,后者相比差异无统计学意义（P〈0．01）。（2）流式细胞学检测结果显示,阿霉素对细胞MDA．MB-231有凋亡促进作用,随浓度增高凋亡率未见增加（P〉0．05）。生理浓度褪黑素联合阿霉素与相应浓度的阿霉素单药相比,凋亡率未见明显增加（P〉0．05）。药理浓度褪黑素联合阿霉素与相应浓度阿霉素单药比较,凋亡率明显提高（P〈0．05）,但联合组随着阿霉素浓度增加凋亡率并未见明显变化（P〉0．05）。（3）MDA-MB-231乳腺癌细胞株中呈p53蛋白低表达、bcl-2蛋白高表达。药理浓度褪黑素可显著增高细胞p53蛋白并降低bcl-2蛋白表达（P〈0．01）。药理浓度褪黑素联合不同浓度阿霉素对两蛋白表达未见显著性差异（P〉0．05）;阿霉素对两种蛋白表达未见明显影响（P〉0．05）。结论（1）生理浓度褪黑素（10^-9mol／L）对阿霉素的抗雌激素受体阴性乳腺癌细胞作用未见明显影响,药理浓度（10^-9mol／L）以上褪黑素表现出对阿霉素明显的增敏作用。（2）阿霉素较低浓度时,凋亡促进作用可能是褪黑素对其增敏机制的一部分,随着阿霉素浓度的提高,褪黑素的细胞毒增敏机制可能占主要地位。（3）药理浓度褪黑素能提高雌激素受体阴性乳腺癌细胞p53蛋白表达并降低bcl-2蛋白表达,并具有剂量依赖性。涉及p53和bcl-2的凋亡通路可能是褪黑素对阿霉素增敏机制的一部分。     

桔梗皂苷D诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的:研究来自桔梗的天然单体化合物桔梗皂苷D(platycodin D,PD)对高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响,初步探索其可能的作用机制.方法:以不同浓度(0、2.5、5、10 μmol/L)PD处理乳腺癌MDA-MB-231细胞后,采用MTT法检测细胞增殖率并计算IC50值,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平.结果:PD呈剂量依赖性显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P＜0.01),作用72 h的IC50值为(7.30±2.67) μmol/L.与对照组相比,10 μmol/L的PD可显著促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P＜0.05).PD激活了caspase家族蛋白,上调有活性的cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9的表达,下调无活性的caspase-8和caspase-9的表达;PD同时减少Bcl-2的表达,增加Bax的表达,使Bcl-2/Bax的比值降低.研究还发现PD使突变型P53蛋白的表达减少、E2F1的表达增加.结论:PD抑制乳腺癌细胞增殖具有明显的抗肿瘤效应,而诱导凋亡的发生可能是其发挥抗肿瘤效应的机制之一.     

蒽贝素协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导乳腺癌细胞凋亡性死亡的实验北大核心CSCD

目的研究小分子化合物蒽贝素(Embelin)是否能协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡。方法应用Embelin、TRAIL或者联合应用分别处理MDA-MB-231细胞。MTT法测定药物处理的细胞毒性,APOP-BRDU试剂盒及流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blot观察Caspase3,9和PARP的表达水平。半定量PCR和Western blot分别观察Embelin处理以后X连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)mRNA、蛋白表达水平的变化。结果 MDA-MB-231细胞呈TRAIL部分耐药,Embelin的细胞毒性在MDA-MB-231细胞呈浓度依赖性。亚毒性浓度的Embelin能显著增强TRAIL诱导的细胞毒性、凋亡率、Caspase 3,9的活化和PARP的切割。但是,亚毒性浓度的Embelin未直接改变XIAP的蛋白和mRNA表达水平。结论 Embelin能显著增强TRAIL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡。     

c-Met抑制剂SGX523诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系的凋亡

目的:研究c-Met小分子抑制剂SGX523对人乳腺癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:以不同浓度的SGX523作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）、PARP的表达和c-Met及Akt磷酸化水平的变化。结果:SGX523能明显抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05）,其对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为（0.767±0.115）μmoL/L。SGX523处理MDA-MB-231细胞48 h后,可诱导乳腺癌细胞凋亡和细胞周期G₀/G₁期阻滞。同时,SGX523可促进凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的剪切,并有效抑制c-Met及AKT的磷酸化水平,呈一定的剂量依赖关系。结论:c-Met抑制剂SGX523通过诱导凋亡和G₀/G₁期阻滞来抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,其机制可能与c-Met/PI3K/AKT信号转导通路的磷酸化水平受抑制相关。     

壮骨镇痛胶囊对MDA-MB-231细胞骨架蛋白表达的影响

目的:研究壮骨镇痛胶囊对高转移人乳腺癌MDA-MB-231细胞骨架蛋白p-Ezrin、F-actin和β-tubulin表达水平的影响.方法:RT-PCR法检测不同浓度壮骨镇痛胶囊含药血浆对MDA-MB-231细胞p-Ezrin基因转录水平的影响,免疫细胞化学法检测其对MDA-MB-231细胞p-Ezrin、F-actin和β-tubulin翻译水平的影响.结果:5.0%、1.25%壮骨镇痛胶囊含药血浆显著抑制了MDA-MB-231细胞p-Ezrin基因的转录(P值分别为0.000和0.042)和翻译(P值分别为0.000和0.001),抑制了F-actin(5.0%和1.25%的P值分别为0.003和0.044)和β-tubulin(5.0%和1.25%的P值均为0.000)蛋白表达;0.63%壮骨镇痛胶囊舍药血浆反而促进了p-Ezrin基因的转录(P=0.000),但对p-Ezrin、F-actin和β-tubulin蛋白表达无显著影响.结论:壮骨镇痛胶囊可通过抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞p-Ezrin、F-actin和β-tubulin蛋白表达来降低细胞的迁移能力,并且该作用与浓度密切相关.     

QRICH1介导NF-κB p65调控Bcl-2、Bax在砷致肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨砷（AS）诱导肝癌细胞凋亡过程中QRICH1通过调控NF-κB p65表达水平调控Bcl-2、Bax的作用机制。方法:体外培养人的肝癌细胞(HepG2细胞）,采用慢病毒转染的方式,构建过表达/敲低QRICH1稳定表达HepG2细胞株。分为对照组、加砷组、砷+QRICH1过表达阴性对照组、砷+QRICH1过表达组、砷+QRICH1敲低阴性对照组、砷＋QRICH1敲低组。在细胞对数生长期时,加入40 μmol/L 亚砷酸钠（NaAsO2）作为终浓度处理24 h。对照组加入与NaAsO2同等体积的磷酸缓冲盐溶液（PBS）处理。采用细胞计数（CCK-8）检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:CCK-8结果显示与对照组比较,砷处理组增殖率比例明显降低（P<0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞增殖率明显上升（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞增殖率明显下降（P＜0.05）,差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示与对照组比较,砷处理组总凋亡率比例明显升高（P＜0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞总凋亡率比例明显下降（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞总凋亡率比例明显上升（P＜0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示与对照组比较,砷处理组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）。与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较高,Bax的蛋白表达水平较低（P＜0.05）。与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）,差异具有统计学意义。结论:砷致HepG2凋亡过程中,QRICH1通过调节NF-κB p65的表达,进而影响了Bcl-2、Bax的表达。提示QRICH1可能是促进肝癌细胞凋亡的潜在作用靶点。     

lncRNA MEG3调控NLRP3/caspase-1/GSDMD通路影响三阴性乳腺癌对紫杉醇的敏感性

目的:探究长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）母系表达基因3（maternally expressed gene 3,MEG3）调控含NLR家族Pyrin域蛋白3（NLR family,Pyrin domain containing protein 3,NLRP3）/含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1）/消皮素D（gasdermin D,GSDMD）通路对三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）对紫杉醇（paclitaxel,PTX）敏感性的影响。方法:通过逐渐增加PTX剂量间歇作用的方法诱导TNBC耐药细胞MDA-MB-231/R,qRT-PCR检测lncRNA MEG3表达;将MDA-MB-231细胞分为对照组（未转染+PTX）、Vector组（空载体+PTX）、pcDNA3.1-MEG3组（pcDNA3.1-MEG3表达载体+PTX）、pcDNA3.1-MEG3+BAY11-7082组（pcDNA3.1-MEG3表达载体+PTX+5 μmol/L NLRP3抑制剂BAY11-7082）,qRT-PCR检测转染后lncRNA MEG3表达;CCK-8法检测MDA-MB-231细胞增殖情况;通过免疫荧光染色和扫描电镜（scanning electron microscope,SEM）观察MDA-MB-231细胞焦亡情况;Western blot检测MDA-MB-231细胞中NLRP3/caspase-1/GSDMD通路蛋白表达;体内成瘤实验检测肿瘤质量。结果:与MDA-MB-231细胞相比,MDA-MB-231/R细胞中lncRNA MEG3表达水平显著降低（P＜0.05）;与对照组相比,pcDNA3.1-MEG3组细胞增殖抑制率、GSDMD-N+细胞数量、细胞焦亡、细胞凋亡率及NLRP3、cleaved-caspase 1/caspase-1、GSDMD-N/GSDMD表达水平显著增加,IC50、肿瘤质量显著降低（P＜0.05）;与pcDNA3.1-MEG3组相比,pcDNA3.1-MEG3+BAY11-7082组细胞增殖抑制率、GSDMD-N+细胞数量、细胞焦亡、细胞凋亡率及NLRP3、cleaved-caspase 1/caspase-1、GSDMD-N/GSDMD表达水平显著降低,IC50、肿瘤质量显著增加（P＜0.05）。结论:上调lncRNA MEG3表达可通过激活NLRP3/caspase-1/GSDMD通路,促进MDA-MB-231细胞焦亡,以此增加TNBC对PTX的敏感性。     

小檗胺对胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的:探讨小檗胺对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）增殖、凋亡的影响并探讨其分子机制。方法:利用MTT 实验检测胃癌细胞的增殖,利用集落形成实验检测胃癌细胞的生长, 流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率以及细胞周期, Western blot检测凋亡相关蛋白的表达水平。结果:小檗胺（0~64 μg/ml）能够剂量依赖性以及时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖 （P＜0.05）。集落形成实验结果显示小檗胺(32 μg/ml)能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长 （P＜0.05）。流式细胞实验显示,小檗胺(32 μg/ml)同时能够促进AGS和SGC-7901细胞的凋亡 （P＜0.05）,增殖G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例 （P＜0.05）。Western blot实验结果显示小檗胺(32 μg/ml)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平,同时降低Bcl-2的蛋白水平 （P＜0.05）。结论:小檗胺能够抑制胃癌细胞的增殖,其机制可能与改变细胞周期以及促进细胞凋亡有关。     

人参皂苷Rg3通过人乳腺珠蛋白A促进乳腺癌MDA MB 231细胞凋亡及其可能的机制

目的:研究人参皂苷Rg3通过促进乳腺癌MDA-MB-231细胞人乳腺珠蛋白A(mammaglobin-A,MGBA)的表达从而抑制细胞增殖的作用机制.方法:MTT法和流式细胞术检测5、10、15 μg/ml Rg3对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,Westernblotting检测对乳腺癌细胞内MGBA表达的影响;Rg3和siRNA-MGBA单独或联合处理MDA-MB-231细胞,MTT法和流式细胞术检测其对细胞增殖和凋亡的影响,Western blotting检测其对细胞MGBA表达的影响,敏感硫电极法检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞H2S分泌的影响.结果:作用细胞48 h后,与对照组相比,5、10、15 μg/ml Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显增高[(18.78±0.82)％、(33.25±1.17)％、(35.11±0.94)％vs(9.72±0.91)％,均P＜0.05],Rg3可促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P＜0.05),也明显增强MDA-MB-231细胞内MGBA蛋白的表达(P＜0.05).与对照组相比,Rg3组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显升高[(30.12±1.01)％ vs(10.66 ±0.59)％,P＜0.05],Rg3+ siRNA-MGBA组和siRNA-MGBA组MDA-MB-231细胞增殖抑制率明显降低[(6.61±0.63)％、(7.02±0.46)％ vs (10.66±0.59)％,均P＜0.05];Rg3组MGBA和胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达和H2S的分泌明显增强,而Rg3+ siRNA-MGBA组、siRNA-MGBA组明显抑制(均P ＜0.05).结论:Rg3可以明显抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,并促进凋亡,其作用机制可能是通过增强MGBA蛋白的表达并激活H2S/CSE系统得以实现的.     

Mus81基因沉默对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖、凋亡及裸鼠成瘤能力的影响北大核心

目的:分析甲磺酸盐及紫外线敏感性81号基因(Mus81)在乳腺癌组织中的表达水平,观察Mus81基因敲减对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和裸鼠移植瘤形成能力的影响。方法:从TCGA数据库下载乳腺癌样本基因表达数据,应用perl及R软件整理数据筛选出每个样本Mus81基因表达量。通过慢病毒介导的小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)技术构建Mus81基因敲减的MDA-MB-231乳腺癌细胞系(即Mus81敲减组)和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞系,以实时定量PCR法检测Mus81基因的敲减效率,再以MTT检测实验、克隆形成实验、细胞流式检测及实时定量PCR法检测两组MDA-MB-231细胞的生长、增殖、细胞周期分布、凋亡水平及Mus81下游基因表达水平。最后,向BALB/c裸鼠右侧腋下注射Mus81基因敲减组和阴性对照组MDA-MB-231乳腺癌细胞,观察Mus81基因沉默对MDA-MB-231细胞在裸鼠中成瘤能力的影响。结果:Mus81基因在乳腺癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织(P<0.05)。Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞中Mus81基因的表达水平明显低于阴性对照组(P<0.05),Mus81基因的敲减效率达70.7%。较之阴性对照组,Mus81基因敲减组MDA-MB-231细胞的生长速度明显减缓(P<0.05);形成的细胞克隆数也明显下降(P<0.05);细胞凋亡水平、G2/M期细胞比例则明显升高(P<0.05)。STC2等Mus81下游基因的表达水平在两组MDA-MB-231细胞间也有明显差异(P<0.05)。裸鼠成瘤实验显示,Mus81基因敲减组形成的裸鼠瘤体体积和重量均明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:Mus81基因在乳腺癌组织中的表达明显升高,且可能通过调控STC2等下游基因的表达促进三阴性乳腺癌细胞的生长增殖及裸鼠体内成瘤能力并抑制其凋亡,提示其可能是一个潜在的乳腺癌治疗靶点。     

PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨PTEN基因通过Akt-mTOR对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法:人乳腺癌MDA-MB-231细胞随机分为两组:pcDNA3.0组与pcDNA3.0-PTEN组,分别转染pcDNA3.0质粒、pcDNA3.0-PTEN质粒2 μg,转染48 h收集细胞。采用CCK-8法检测细胞存活率,双染法检测细胞凋亡,Western-blot检测细胞蛋白表达。结果:pcDNA3.0-PTEN组的细胞存活率低于pcDNA3.0组,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。与pcDNA3.0组对比,pcDNA3.0-PTEN组的细胞凋亡率显著上升,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。pcDNA3.0-PTEN组的PTEN蛋白表达量高于pcDNA3.0组,Akt、mTOR蛋白表达量低于pcDNA3.0组,对比差异有统计学意义(P＜0.05)。结论:PTEN基因过表达可通过抑制Akt-mTOR信号通路,提高乳腺癌细胞凋亡指数,降低细胞增殖活性,从而发挥抑癌作用。     

蛋白激酶SGK3过表达对乳腺癌细胞株MDA-MB-231影响的研究

目的 血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶3 (serum and glucocorticoid-inducible protein kinase 3,SGK3)参与细胞增殖、分化和物质转运等生命活动,在某些肿瘤形成中担任重要角色.本研究设计观察SGK3过表达对乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖和存活的影响,并初步探讨其作用的分子机制.方法 免疫组化方法检测乳腺癌组织中SGK3蛋白的表达;通过GenEscortTMⅠ介导用重组质粒pEGFPN1-SGK3瞬时转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,荧光显微镜和蛋白质印迹法鉴定转染细胞中融合蛋白SGK3-GFP的表达;细胞增殖实验观察转染细胞的生长增殖情况;流式细胞术分析转染细胞的细胞周期时相变化;蛋白质印迹方法检测细胞增殖与存活相关基因的表达.结果 SGK3在乳腺癌组织中的表达量明显高于癌旁组织和正常乳腺组织(F=29.672,P＜0.001),与二者组间比较,均P＜0.01.荧光显微镜下可见转染细胞因外源基因的表达而发出绿色荧光,且蛋白质印迹法检测可见融合蛋白SGK3-GFP的表达;过表达SGK3的MDA-MB-231细胞,其细胞生长速度加快,细胞倍增时间缩短(F=19.557,P-0.001),与亲本细胞及转染空载体细胞组间比较均P＜0.01.与亲本细胞和转染空载体组比较,SGK3过表达使细胞凋亡比例明显下降(F=12.156,P=0.008),与前两者组间比较P值分别为0.019和0.030;细胞内源性Bad的表达量降低(F=11.152,P=0.010),与前两者组间比较P值分别为0.008和0.005;而Bcl-xL(F=8.810,P=0.016,与前两者组间比较P值分别为0.014和0.009)以及p-GSK3β(F=42.253,P＜0.001,与前两者组间比较P值分别为＜0.001和0.009)的表达量均升高.结论 乳腺癌组织高表达SGK3,SGK3过表达可促进MDA-MB-231细胞的增殖与存活,影响细胞增殖与存活相关基因的表达可能是其发挥作用的主要分子机制.