蟾毒灵通过下调c-Flip和XIAP增强TRAIL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的：研究蟾毒灵（ bufalin）对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的的影响及机制。方法：MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫荧光实验检测DR4、DR5的表达情况,Western blot法检测c-Flip和XIAP蛋白的表达。结果：MTT结果显示bufalin作用于MDA-MB-231细胞后24h和48h的IC50分别为934nmol/L 和513nmol/L。流式分析显示50nmol/L 的 bufalin 作用24h 仅诱导4.5%的MDA-MB-231细胞凋亡,100ng/ml的TRAIL作用24h诱导5.1%的MDA-MB-231细胞凋亡,50nmol/L的bufalin与100ng/ml的TRAIL联合作用24小时后可诱导32.5%的MDA-MB-231细胞凋亡。Western blot分析显示bufalin与TRAIL联合作用后导致c-Flip和XIAP的明显下调。结论：Bufalin可通过下调c-FLIP和XIAP的表达增强TRAIL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

XIAP siRNA对TRAIL诱导结肠癌细胞SW620凋亡能力的影响

 目的
研究XIAP siRNA对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related Apoptosis-Inducing Ligand,TRAIL)诱导结
肠癌细胞SW620凋亡的影响。方法SW620细胞分为转染XIAP siRNA组、空转染对照组或者siRNA阴性对照组,然后给予TRAIL处理。XIAP
表达水平的变化、细胞增殖抑制、Caspase-3活性分别由Western blot、MTT法和Caspase-3荧光测定来检测。切割PARP的表达水平由
Western blot来测定。结果XIAP siRNA转染以后显著下调XIAP蛋白表达水平。和空转染对照组、siRNA阴性对照组相比,XIAP siRNA
显著增强10、100、1 000 ng/ml等浓度的TRAIL作用以后SW620细胞的增殖抑制、Caspase-3活性和激活PARP。结论 XIAP siRNA能显
著增强TRAIL诱导结肠癌细胞SW620的凋亡。     

白藜芦醇联合TRAIL抑制乳腺癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)联合TRAIL对乳腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-xl表达的影响。方法:50μmol/L RES、100ng/ml TRAIL及二者联合分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Real time PCR检测Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1的mRNA表达,Western blot检测Bcl-xl、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达。结果:MTT结果显示RES、TRAIL均能明显抑制乳腺癌细胞增殖,且联合组抑制率高于单独处理组(P<0.05)。RES、TRAIL单独或联合能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡率分别为(16.34±0.34)%,(43.52±0.99)%和(73.60±2.80)%,与对照组的(4.13±0.25)%比较有统计学意义(P<0.05);而对MCF-7凋亡影响不明显。Realtime PCR结果显示RES联合TRAIL能明显抑制MDA-MB-231细胞Bcl-xl mRNA表达,联合组与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示RES联合TRAIL能抑制Bcl-xl蛋白的表达而对Bcl-2和Mcl-1抑制不明显。结论:RES能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性,这可能与二者抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达有关。     

c-Met抑制剂SGX523诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞系的凋亡

目的:研究c-Met小分子抑制剂SGX523对人乳腺癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:以不同浓度的SGX523作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase-3）、PARP的表达和c-Met及Akt磷酸化水平的变化。结果:SGX523能明显抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.05）,其对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)值为（0.767±0.115）μmoL/L。SGX523处理MDA-MB-231细胞48 h后,可诱导乳腺癌细胞凋亡和细胞周期G₀/G₁期阻滞。同时,SGX523可促进凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的剪切,并有效抑制c-Met及AKT的磷酸化水平,呈一定的剂量依赖关系。结论:c-Met抑制剂SGX523通过诱导凋亡和G₀/G₁期阻滞来抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长,其机制可能与c-Met/PI3K/AKT信号转导通路的磷酸化水平受抑制相关。     

XIAP抑制剂Embelin对人T淋巴瘤细胞Jurkat增殖抑制作用

  目的   研究XIAP抑制剂Embelin体外对人T淋巴瘤细胞Jurkat增殖的影响,并探讨其作用机制。   方法  应用MTS法分析不同浓度Embelin对人T淋巴瘤细胞增殖的影响;光学显微镜下观察经Embelin处理后细胞形态学的改变;经Annexin V/PI双染后用流式细胞术检测Embelin对Jurkat细胞凋亡的影响;Western blot方法检测Embelin作用后细胞XIAP、PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-xl、Bcl-2表达的变化。   结果  Emebeli对人白血病细胞具有显著增殖抑制作用（P < 0.05）;Caspase-3抑制剂z-DEVD-fmk,Caspase-9抑制剂Ac-LEHD-CHO能显著下调这种增殖抑制作用。经不同浓度Emebelin处理24 h后,Jurkat细胞凋亡率明显增高,与未处理组比较有显著性差异（P < 0.01）;经Emebelin处理24 h后,Jurkat细胞出现PARP、Caspase3、9裂解片段,且Bax蛋白表达上调,Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达水平下调。   结论  Embelin在体外可明显抑制人T淋巴瘤细胞Jurkat的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过拮抗XIAP的作用,激活Caspase依赖性的细胞凋亡内源途径而诱导Jurkat细胞发生凋亡。      

Ad-p53诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡作用

目的：观察重组人p53腺病毒（ p53-expressing adenovirus,Ad-p53）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞生长、细胞周期、凋亡和p53表达的影响。方法：流式细胞仪检测Ad-p53作用于MDA-MB-231细胞72h后细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot法检测MDA-MB-231细胞p53蛋白表达。结果：经Ad-p53处理72h后倒置显微镜下MDA-MB-231细胞形态发生明显的变化。流式细胞术检测结果显示, Ad-p53作用MDA-MB-231后其细胞凋亡率与对照组相比明显增加,G0/G1期细胞比例逐渐升高,S期、G2/M期细胞比例相应减少（ P＜0.05）。Western blot证实了外源野生型p53基因能在MDA-MB-231细胞表达增加。结论：Ad-p53可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长,促进其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期以及野生型p53蛋白表达增加实现的。     

维生素E琥珀酸酯诱导HER-2过表达乳腺癌细胞凋亡机制的研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对HER-2过表达乳腺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法测定VES对乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞增殖的抑制作用，应用Western blot法筛选HER-2过表达乳腺癌细胞系，同时检测VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中的表达水平，划痕实验与侵袭实验观察VES对乳腺癌细胞体外迁移能力的影响，流式细胞术检测VES对乳腺癌细胞凋亡的作用。结果:VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-453细胞中的表达明显高于在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达，VES作用于HER-2低表达乳腺癌细胞使其迁移及侵袭能力明显增强，却能够抑制HER-2高表达乳腺癌细胞的迁移及侵袭。VES以直接杀伤方式作用MDA-MB-231细胞，而对MDA-MB-453则以诱导细胞凋亡方式杀伤，VES使HER-2高表达乳腺癌MDA-MB-453细胞发生G1/G0期阻滞。结论:VES促进乳腺癌细胞凋亡是通过影响多条信号传导途径完成的，VES作用于不同HER-2表达乳腺癌细胞其迁移及侵袭能力明显不同，其机制与细胞表面蛋白表达有关。     

ABT-263增敏Lexatumumab诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的研究

目的:研究Bcl-2抑制剂对于死亡受体单克隆抗体Lexatumumab激活诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的增敏效果。方法:体外培养ER、PR和HER-2三阴性细胞株。分为对照组、ABT-263处理组、Lexatumumab 处理组、ABT-263+Lexatumumab处理组。用亚致死剂量的ABT-263,或者Lexatumumab,或者二者同时处理细胞,荧光显微镜观察对照组和处理组细胞内细胞核凋亡形态变化情况。然后凋亡细胞计数,统计凋亡率。免疫印迹（Western blotting）法检测细胞凋亡标志性蛋白Caspase 3 和PARP切割条带在各组中的表达,以评估Bcl-2抑制作用对死亡受体信号通路诱导细胞凋亡的影响。结果:在荧光显微镜下,可以观察到ABT-263和Lexatumumab单独处理细胞不能够诱导三阴性乳腺癌细胞核出现固缩凝聚现象。抑制剂ABT-263能够显著逆转Lexatumumab诱导的乳腺癌细胞凋亡。结论:Bcl-2抑制剂ABT-263能够增敏单克隆抗体Lexatumumab诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞凋亡。ABT-263和Lexatumumab联合诱导的凋亡作用具有Caspase依赖性。     

紫花牡荆素抑制FOXM1诱导乳腺癌细胞凋亡的研究北大核心CSCD

背景与目的:紫花牡荆素分离自传统中草药蔓荆子,具有广泛的抗肿瘤活性。转录因子FOXM1在多种肿瘤中高表达,对肿瘤发生发展具有重要影响。本研究旨在探讨紫花牡荆素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及其作用机制是否涉及FOXM1。方法:碘化丙啶(Propidium iodide,PI)流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测经不同浓度紫花牡荆素处理的体外培养MDA-MB-231细胞的凋亡率。免疫酶联试验(ELISA)测定细胞组蛋白/DNA碎片水平。DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡梯形条带图谱。蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞FOXM1和Survivin蛋白表达。结果:紫花牡荆素以浓度依赖的方式(0、0.1、0.5和1.0μmol/L)增加MDA-MB-231细胞凋亡率[(4.36±0.12)%、(6.37±0.28)%、(11.30±0.62)%和(34.50±0.85)%]和增高细胞组蛋白/DNA碎片水平。紫花牡荆素处理MDA-MB-231细胞基因DNA琼脂糖电泳图谱呈现典型凋亡"梯型条带",Western blot检测结果显示,紫花牡荆素以浓度依赖方式下调FOXM1和Survivin蛋白表达。结论:紫花牡荆素能有效诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞细胞凋亡,其作用机制涉及下调FOXM1和Survivin表达。     

Embelin 通过上调死亡受体 DR4 / DR5 mRNA 表达增加 HL - 60 细胞对 TRAIL的敏感性

目的：探讨Embelin增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的敏感性及可能的作用机制.方法：TRAIL 1、5、10、50及100 ng/ml分别处理HL-60细胞6、12、24及48h,MTT法绘制细胞生长曲线;TRAIL 10 ng/ml±亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,Annexin V/PI复染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测24h时Caspase-3、8及9的表达;亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,实时荧光定量PCR检测DR4及DR5 mRNA 的表达.结果：TRAIL对HL-60 细胞具有增殖抑制作用.亚细胞毒浓度的Embelin联合10 ng/ml TRAIL作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的Caspase-3、8及9的表达也随之增加.结论：亚细胞毒浓度的Embelin可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与上调DR4及DR5 mRNA表达并进而启动凋亡途径有关.     

卡铂联合TRAIL对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察卡铂联合TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。方法:经20、40、80 μg/mL卡铂和100 ng/μL TRAIL单用或联用处理后,用MTS法检测A549细胞的增殖能力,在光镜下观察细胞形态学变化;并采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR和Western blot法检测死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)、Survivin和X连锁凋亡抑制蛋白基因(XIAP)mRNA与蛋白表达的变化。结果:卡铂和TRAIL单用或联用均可浓度依赖性抑制A549细胞的增殖,诱导其凋亡,两药联用比单用卡铂时抑制率和凋亡率更高(P<0.05)。单用卡铂或TRAIL可使A549细胞数减少,漂浮细胞增多,出现明显的凋亡形态变化,且明显降低Survivin和XIAP的mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05);但对A549细胞DR4和DR5 mRNA表达均无明显影响,而单用卡铂或TRAIL却能升高A549细胞DR5蛋白的表达(P<0.05)。与单用组相比,TRAIL与卡铂联用A549细胞凋亡形态变化更明显,可明显降低A549细胞Survivin和XIAP mRNA和蛋白的表达水平及升高DR5蛋白表达水平(P<0.05)。结论:卡铂与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞A549细胞增殖,促进其凋亡,且与卡铂能够增加A549细胞DR5蛋白的表达和降低Survivin及XIAP的表达相关。     

c-FLIP-L影响乳腺癌MDA-MB-231细胞对TRAIL致凋亡作用的敏感性

目的：观察c-FLIP-L对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其具体机制。方法：构建靶向c-FLIP-L 的 siRNA 质粒,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞, RT-PCR、Weston blotting验证基因抑制效果。实验分空白对照组、TRAIL组、c-FLIP-L siRNA组和c-FLIP-L siRNA+TRAIL组共4组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖情况,流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率,Transwell实验检测MDA-MB-231细胞侵袭能力,RT-PCR 、Western blotting检测MDA-MB-231细胞中c-FLIP-L、caspase-3、caspase-8、MMP-2、MMP-9的表达。结果：靶向c-FLIP-L的 siRNA 质粒转染至乳腺癌细胞株可有效抑制c-FLIP-L mRNA \[(37.12±3.02) vs (183.21±8.31),(174.65±10.06);P<0.05\]及其蛋白的水平。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理MDA-MB-231细胞,与两者单独处理相比,细胞增殖抑制率显著升高\[72 h时,（75.51±2.01)% vs （3375±1.60）%,（34.31±2.01）%;均P<0.05\],凋亡率显著升高\[72 h时,（76.30±4.11）% vs （38.95±214）%,（29.28±166）%;均P<0.05\],对细胞侵袭能力的抑制也显著增强。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理后,与两者单独处理相比,乳腺癌细胞中casepase-3、casepase-8的表达显著增强,而MMP-2、MMP-9的表达明显减弱。结论：抑制c-FLIP-L表达能够增强MDA-MB-231细胞对TRAIL的敏感性,从而提高诱导肿瘤细胞凋亡的能力,其机制可能与caspase-3、caspase-8的表达上调和MMP-2、MMP-9的表达下调有关。     

Akt抑制剂MK2206对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究新型Akt抑制剂MK2206对体外培养的人乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度的MK2206作用于人乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞,采用MTT法检测细胞的增殖抑制率,FCM法检测细胞的凋亡率,Western印迹法检测细胞中caspase-3、多聚ADP核糖聚合酶(polyADP-ribosepolymerase,PARP)、bcl-2、bax、磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,T-Akt)蛋白表达水平的变化。结果:0.1、1、10和100nmol/LMK2206作用细胞24h后,可明显抑制T47D和MDA-MB-231细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其作用随着药物浓度的增加而增强。MK2206可促进乳腺癌细胞中caspase-3和PARP蛋白剪切,上调bax蛋白表达,下调bcl-2和p-Akt蛋白的表达,且均呈剂量依赖性,但对T-Akt表达却无明显影响。结论:MK2206可抑制乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制Akt磷酸化从而阻断PI3K/Akt信号转导途径有关。     

Celecoxib下调NF-kB信号通路促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

背景与目的:Celecoxib可以抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡,但具体的作用机制尚不明确.本研究探讨Celecoxib是否通过阻断NF-kB信号途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡.方法:RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达.MTT法检测Celecoxib、PGE2与Celecoxib联合应用对MDA-MB-231细胞增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化.Westernblot法检测0、40、80、120 μmol/L Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h后细胞中Caspase-3、p65蛋白的表达变化.结果:RT-PCR检测显示MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达随着Celecoxib浓度的增加而逐渐降低.Celecoxib能够显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),但Celecoxib联合PGE2与单独应用Celecoxib对细胞增殖的影响差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示Celecoxib可使MDA-MB-231细胞阻滞在G0/G1期,并可诱发细胞凋亡.Western blot检测发现Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h,随着Celecoxib浓度的增加,Caspase-3蛋白表达增加,P65蛋白表达下调.结论:Celecoxib可以通过下调P65蛋白的表达从而阻断NF-kB信号途径,抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡.     

Flavopiridol增强TRAIL诱导SPC-A1细胞凋亡作用机制研究

目的:研究夫拉平度(FP)增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导非小细胞肺癌细胞SPC-A1凋亡的作用及其分子机制。方法:采用TRAIL、FP单独及联合作用的方法诱导细胞凋亡,MTT法检测各处理组细胞的增殖及活性;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关基因蛋白水平的表达;定量PCR检测TRAIL受体及髓系细胞白血病-1(Mcl-1)、Fas相关死亡结构域样IL-1β转化酶样抑制蛋白(FLIP)、X染色体连锁的细胞凋亡抑制因子(XIAP)和Livin等凋亡基因的转录水平表达变化。结果:100nmol/L FP处理组(F)细胞存活率为(80.26±2.43)%,100ng/mL TRAIL处理组(T)为(90.49±1.60)%,FP和TRAIL联合组(F+T)为(47.48±1.41)%,联合组的细胞存活率低于单一处理组,F=406.08,P=0.000。FP和TRAIL合用时,FLIP和XIAP分别降为对照组的4%和15%,Mcl-1与Livin的表达量甚至低于可检测水平。Caspase-3和Caspase-8的活性片段约为对照组的4倍。细胞色素c由线粒体向细胞质的释放增加约7倍,而Bcl-2家族蛋白Bcl-2、Bax、Bak和Bcl-xl的表达量基本不变。FP作用后引起DR4的mRNA表达水平(2.51±0.14)上升,P<0.05。但FP和TRAIL单独作用并未引起Mcl-1、FLIP、XIAP和Livin在转录水平的表达变化。联合组加入广谱Caspase抑制剂Z-VAD-FMK后,细胞存活率由(58.26±1.75)%上升至(88.17±2.65)%,P=0.003。说明Z-VAD-FMK可明显抑制联合处理组的凋亡效应。结论:FP能显著增强TRAIL诱导SPC-A1细胞凋亡的作用,此协同促凋亡效应与抗凋亡基因Mcl-1、FLIP、XIAP和Livin的蛋白水平表达降低以及Caspase活性增强和线粒体损伤有关,同时涉及内源性(线粒体)及外源性(非线粒体)凋亡信号通路的共同作用。     

IFN-γ联合阿霉素或依托泊苷增强TRAIL对神经母细胞瘤细胞的诱导凋亡作用

  目的  探讨半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase 8)和死亡受体(DR)在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导神经母细胞瘤(NB)细胞凋亡中的作用。  方法  应用RT-PCR方法检测γ干扰素(IFN-γ)作用前后NB细胞Caspase 8 mRNA的表达; 应用Western blot方法检测Caspase 8、DR4和DR5蛋白表达; 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞术检测IFN-γ, TRAIL, IFN-γ+TRAIL, Caspase 8抑制剂+TRAIL及IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL对NB细胞株生长及凋亡的影响。  结果  IFN-γ在NB细胞株SKNDZ中诱导了Caspase 8mRNA及蛋白表达。SY5Y细胞对TRAIL不敏感, 而IFN-γ与TRAIL或阿霉素, 依托泊苷联用对SY5Y细胞有明显诱导凋亡作用。IFN-γ+TRAIL组SY5Y细胞早期凋亡率(23.09+2.35)%高于TRAIL组[(6.15±0.54)%(P< 0.01)], 但低于IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL组[(43.41±6.46)%/(38.86±7.29)%, P< 0.01]。阿霉素或依托泊苷可以诱导NB细胞株DR5蛋白表达, 但未诱导DR4蛋白表达。IFNγ诱导后表达Caspase 8的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用仍不敏感, 而阿霉素或依托泊苷处理后同时表达DR5的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用相对敏感。IFN-γ+阿霉素/依托泊苷+TRAIL组SKNDZ细胞早期凋亡率(11.54±2.49)%/(13.38±1.65)%高于IFN-γ+TRAIL组(P< 0.01)。  结论  IFN-γ上调Caspase 8表达及化疗药阿霉素或依托泊苷诱导DR5表达可以恢复NB细胞对TRAIL的敏感性, Caspase 8和DR5在TRAIL诱导NB细胞凋亡中起着十分关键的作用。      

防己诺林碱诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的作用机制

目的 探讨防己诺林碱(FAN)对三阴性乳腺癌(TNBC)的抗肿瘤机制.方法 体外细胞培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231,Alamar-Blue法检测FAN对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的半抑制浓度(IC50);6孔板检测细胞迁移情况;细胞流式技术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及磷酸化PI3K、AKT、mTOR蛋白表达.结果 FAN可抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的活力(IC50为6.25μmol/L),抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移能力,且随着FAN浓度升高,抑制作用明显.FAN可以诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡,且随着FAN浓度升高,细胞凋亡率增高,同时FAN还可以下调PI3K、AKT、mTOR及磷酸化PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达,随药物浓度的升高,其蛋白表达降低.结论 FAN可通过下调TNBC MDA-MB-231细胞凋亡PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制TNBC细胞的增殖、迁移,诱导细胞凋亡,可能具有抗肿瘤作用.     

AZD2281诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的实验研究

目的 观察AZD2281对乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法MTT法和流式细胞仪法观察不同浓度AZD2281（2.5、5、10 nmol/L）作用于MDA-MB-231细胞24、48、72 h后对细胞增殖、周期分布及细胞凋亡的影响;Western blotting检测经AZD2281处理该细胞24 h后细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达水平的变化。结果AZD2281可显著抑制MDA-MB-231细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性;AZD2281作用于MDA-MB-231细胞24 h后,细胞被阻滞在G0/G1期,并促进其凋亡,且呈剂量依赖性。AZD2281作用MDA-MB-231细胞24 h后,凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达呈剂量依赖性下降,而凋亡促进蛋白caspase-3的表达呈剂量依赖性上升。结论AZD2281能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖和促进其凋亡,其作用机制可能是通过上调caspase-3和下调Bcl-2蛋白表达实现的。     

抑制骨保护素表达对乳腺癌细胞增殖及TRAIL致其凋亡的影响

目的观察抑制肿瘤细胞骨保护素（OPG）表达对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）致其凋亡的影响。方法采用M1Tr法检测对照MDA-MB-231和MDA-MB-231i细胞（OPG表达抑制）增殖;流式细胞术分析对照MDA-MB-231细胞和TRAIL作用24h后MDA-MB-231、MDA-MB-231i细胞凋亡率。结果前2组细胞倍增时间分别为43．5±2．9小时和45．8±3．6小时,差异无统计学意义;后3组细胞凋亡率分别为6．4％±1．3％、16．1％±1．7％和24．4％±3．3％,每2组之间差异均有统计学意义（P值分别为0．001、0．01和0．018）。结论抑制乳腺癌细胞OPG表达不影响其增殖能力。TRAIL可以诱导乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞OPG表达可显著增强TRAIL诱导其凋亡的能力。     

下调FAM111B对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨下调FAM111B对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:构建siR-FAM111B慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF7细胞,qRT-PCR检查转染组与对照组FAM111B mRNA表达,Western blotting法检测各组细胞FAM111B蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin-V/PI双染各组细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:siR-FAM111B成功转染MDA-MB-231和MCF7细胞,转染后应用qRT-PCR和Western blotting检测,结果显示,FAM111B mRNA与蛋白水平均下调。siR-FAM111B能抑制两种细胞的增殖。Annexin-V/PI双染结果显示,下调FAM111B诱导两种细胞凋亡。Western blotting结果显示,下调FAM111B可以促进两种细胞Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:下调FAM111B能够抑制乳腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。