度洛西汀对多西他赛化疗所致大鼠神经病理性疼痛的影响

目的 研究度洛西汀对多西他赛化疗所致大鼠神经病理性疼痛的作用。方法 24只SD雄性大鼠随机分为4组（n=6）：正常对照组、度洛西汀组、多西他赛模型组及度洛西汀治疗组。在治疗后第8天,检测大鼠的机械性痛阈、热痛阈、冷痛阈,以及L4~6脊髓背根神经节（dorsal root ganglia, DRG）P物质（substance P, SP）的释放。结果 多西他赛能够产生机械性痛觉异常（P=0.009）、热痛觉过敏（P<0.001）、冷痛觉异常（P<0.001）,以及L4~6脊髓DRG的SP释放（P=0.018）。而连续8天口服度洛西汀能有效降低多西他赛导致的神经病理性疼痛,减轻机械性痛觉异常（P=0.037）,热痛觉过敏（P=0.001）和冷痛觉异常（P=0.002）,但并没有减少P物质的释放（P=0.653）。结论 度洛西汀可能是一种潜在的有效减轻化疗诱导神经病理性疼痛的药物。     

超微血流成像技术在前列腺癌精准靶向穿刺活检中的应用

目的 探讨超微血流成像（SMI）技术在前列腺癌精准靶向穿刺活检中的应用价值。方法 87例临床拟诊断前列腺癌患者均经过第一次系统12点穿刺术1月后选择进行第二次穿刺活检方式，其中48例采用系统12点穿刺法，39例采用SMI精准靶向定位异常区域替代局部系统穿刺法。根据第一次穿刺病理组织学结果，分析两种方式在前列腺癌穿刺活检中的异同。结果 在良恶性病变中，前列腺体积的差异无统计学意义，血清PSA水平差异有统计学意义（t=2.045, P=0.04）；SMI组穿刺恶性20例，穿刺阳性率为51.28%，总穿刺456针；对照组穿刺恶性14例，穿刺阳性率为29.17%，总穿刺576针。两组穿刺阳性率、平均穿刺针点数差异有统计学意义（χ ²=4.420, P=0.036; t=13.18, P=0.000）。SMI组中恶性病理组织为79条，患者Gleason最高评分（7.2±0.4）分；对照组中恶性病理组织为64条，患者Gleason最高评分（6.5±0.4）分。两组单次取材阳性率、Gleason最高评分差异有统计学意义（χ ²=8.232, P=0.004; t=5.940, P=0.000）。结论 SMI技术引导前列腺癌穿刺活检可提高取材的阳性率。     

ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤中的表达及其与转移的关系

目的 建立裸鼠鼻咽癌转移模型并探讨 E-选择素（ELAM-1）与鼻咽癌转移的相关性。方法 将鼻咽癌5-8F细胞悬液注射于裸鼠左后肢爪垫，观察裸鼠状态、成瘤情况并测量裸鼠体重及移植瘤长短径；采用连续病理切片苏木精-伊红染色观察移植瘤及转移情况，将16只人鼻咽癌荷瘤裸鼠分为转移组和非转移组；采用免疫组织化学法检测两组移植瘤组织中ELAM-1的表达。 结果 16只裸鼠均成瘤，成瘤率为100.0%，其中10只裸鼠出现转移瘤，转移率为62.5%。建模前，两组裸鼠体重差异无统计学意义［（13.83±0.56）g vs （14.62±0.30） g，t=1.026，P=0.071］。建模后4~7周，裸鼠瘤体体积呈指数增长，且转移组移植瘤增长速度较非转移组快，非转移组裸鼠瘤体体积小于转移组［（198.91 ± 163.29） mm³ vs （268.76 ±174.31） mm³，t=4.376，P=0.005］。ELAM-1在鼻咽癌裸鼠移植瘤、淋巴结转移灶及远处转移灶中的表达均为阳性，主要表达于细胞膜。转移组移植瘤光密度值高于非转移组（0.4497±0.0705 vs 0.0435±0.0082，t=4.388，P＝0.001）。结论 本研究成功构建稳定性好、转移率高的鼻咽癌裸鼠移植瘤转移模型，且ELAM-1在裸鼠移植瘤中高表达，可促进鼻咽癌裸鼠移植瘤生长和转移。     

二甲双胍对直肠癌细胞放疗敏感性的影响

目的 探讨二甲双胍（DMBG）对直肠癌细胞放疗敏感性的影响及其可能的作用机制。方法 体外培养直肠癌SW1463细胞，设对照组、DMBG组、照射组及DMBG+照射组，同时建立裸鼠移植瘤模型。MTT实验检测不同浓度（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、80 mmol/L）DMBG作用SW1463细胞的细胞活力，克隆集落形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期，免疫印迹法检测DNA损伤蛋白γ-H2AX及DNA损伤修复蛋白DNA-PK的表达，同时观察各组裸鼠移植瘤重量及体积变化，计算抑瘤率，绘制肿瘤生长曲线。 结果 不同浓度（5 mmol/L、10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L、80 mmol/L）DMBG作用可抑制SW1463 细胞活力（F=43.283，P=0.021）。DMBG+照射组在不同照射剂量（2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy）照射下的细胞存活率均低于DMBG组及照射组（P<0.05），细胞凋亡率明显高于DMBG组及照射组［（63.32±6.15）% vs （16.19±4.38）%，P<0.05；（63.32±6.15）% vs （17.24±5.17）%，P<0.05 ］；DMBG+照射组G2 /M期细胞比例增加到（61.50±5.25）%，G0 /G1期细胞比例减少为（17.36±3.17）%，上调了γ-H2AX蛋白表达，并下调了DNA-PK蛋白表达，与DMBG组及照射组比较差异有统计学意义（P<0.05）；裸鼠移植瘤体积和重量明显变小，抑瘤率亦明显高于DMBG胍组和照射组［（68.51±2.58）% vs （20.74±2.61）%，P<0.05；（68.51±2.58）% vs （31.52±3.43）%，P<0.05］。结论 二甲双胍对直肠癌SW1463细胞及其裸鼠移植瘤具有放疗增敏作用，可能与DMBG联合放疗后改变肿瘤细胞周期分布，抑制肿瘤细胞对DNA损伤的自我修复能力有关。     

前列腺周围脂肪对前列腺癌术前分期和分级的影响

目的 分析前列腺周围脂肪对前列腺癌术前与术后分期、分级差异性的影响。方法 选取行前列腺癌根治性切除术的184例局限性前列腺癌患者为研究对象,采用MRI测量前列腺癌患者前列腺周围脂肪的相关指标,将前列腺周围脂肪测量指标与前列腺癌患者临床及病理学资料运用SPSS13.0进行统计学比较。结果 前列腺周围脂肪面积（PFA）及内脏脂肪比率（Ratio）在前列腺癌临床分期与病理分期差异组和非差异组之间差异有统计学意义（P=0.014, P=0.037）;并且二者与前列腺癌术前、术后分期差异之间有统计学意义（P=0.031, P=0.002）;而术前穿刺病理结果Gleason评分与根治术后Gleason评分差异组和非差异组之间,PFA脂肪测定指标方面差异有统计学意义（P=0.017）;并且前列腺周围脂肪测定指标PFA、前列腺移行区体积与前列腺癌术前、术后Gleason评分差异之间有统计学意义（P=0.018, P=0.028）。结论 前列腺周围脂肪对前列腺癌患者术前准确的临床分期、分级的评估有影响。     

RSK4与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin在乳腺癌裸鼠移植瘤中的相关性研究

目的 分析乳腺癌裸鼠移植瘤中核糖体 S6蛋白激酶 4（ribosomal protein S6 kinase 4,RSK4） 与Ki-67、cyclin D1、CXCR4、E-cadherin表达的相关性,进一步探讨RSK4在乳腺癌发展中的作用机制。方法 将转染siRNA （RSK4-RNAi-LV）的MCF-7细胞（实验组）、转染siRNA （NC-GFP-LV）的MCF-7细胞（阴性对照组）和未转染的MCF-7细胞（空白对照组）分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,剥离裸鼠移植瘤;采用免疫组织化学法检测移植瘤标本中增殖因子RSK4、Ki-67、cyclin D1 及侵袭因子CXCR4、E-cadherin蛋白的表达。结果 实验组RSK4、E-cadherin蛋白的表达水平分别为（3.2±0.5）％、（28.2±0.7）％,明显低于空白对照组的（36.7±3.4）％、（51.7±4.2）％和阴性对照组的（61.1±5.1）％、（49.2±3.8）％,差异有统计学意义（F=56.79,61.89,P＜0.05）。实验组Ki-67、cyclin D1、CXCR4蛋白的表达水平分别为（67.8±5.8）％、（61.7±4.6）％、（56.3±3.9）％,明显高于空白对照组的（34.5±1.4）％、（29.7±2.5）％、（30.7±3.1）％和阴性对照组的（29.8±1.9）％、（35.7±4.6）％、（28.5±3.7）％,差异有统计学意义（F=45.24,52.16,61.24,P＜0.05）。相关性分析显示,RSK4与 Ki-67、cyclin D1、CXCR4表达呈负相关（r=-0.857,-0.826,-0.867,P<0.001）,与E-cadherin表达呈正相关（r=0.879,P<0.001）。 结论 RSK4可能通过调节CXCR4、Ki-67、CyclinD1和E-cadherin肿瘤相关因子的表达,在乳腺癌在乳腺癌生长及转移过程中发挥作用。     

p53β异构体在rmhTNF联合顺铂抑制胃癌细胞增殖中的作用

目的 探讨p53β异构体在rmhTNF联合顺铂干预人胃癌细胞MKN45和SGC7901生长实验中的生物学功能。方法 不同浓度rmhTNF单独或联合顺铂作用于人胃癌细胞MKN45和SGC7901,应用细胞增殖/毒性检测试剂盒（CCK-8试剂盒）检测抑制率;巢式反转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测p53β和bcl-2 mRNA的表达变化情况。结果 rmhTNF单独或联合顺铂（4 μg/ml）作用MKN45细胞24 h,联合组抑制率大于单独组,且随rmhTNF浓度的增加而增加,组间差异有统计学意义（P<0.05）;在SGC7901细胞中,联合组抑制率虽有增加但差异无统计学意义（P>0.05）。rmhTNF单独使用对MKN45细胞中p53β和bcl-2表达无影响,差异无统计学意义（F=0.006,P>0.05;F=1.179, P>0.05）,而与顺铂联合作用可明显上调p53β和下调bcl-2的表达,并且随rmhTNF浓度的增加,p53β逐渐增加,bcl-2逐渐减少,差异有统计学意义（F=18.577,P<0.01;F=169.309, P<0.01）。在SGC7901细胞中未见p53β表达,但bcl-2高表达。rmhTNF和顺铂单独或联合作用时bcl-2虽有降低但差异无统计学意义（F=1.340, P>0.05）。p53β与bcl-2表达呈负相关（r=-0.897, P<0.01）,细胞抑制率与bcl-2的表达呈负相关（r=-0.906, P<0.01）。结论 rmhTNF和顺铂对p53β阳性的胃癌细胞MKN45表现出明显的抑制效应且rmhTNF和顺铂联合作用时可表现出协同抗肿瘤作用,其协同抗肿瘤效应可能是通过p53β调节下游分子bcl-2实现的。     

贝伐珠单抗联合多西他赛治疗HER-2阴性复发转移性乳腺癌的临床疗效

目的 观察贝伐珠单抗联合多西他赛治疗人表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor-2,HER-2）阴性复发转移性乳腺癌的临床疗效。方法  79例HER-2阴性复发转移性乳腺癌患者根据不同化疗方案分为两组,观察组42例给予贝伐珠单抗联合多西他赛治疗,对照组37例给予多西他赛单药治疗,观察两组患者治疗后的临床疗效和1年、2年生存率及生存期。 结果 观察组总有效率为59.52%,对照组为37.84%,两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;观察组患者部分缓解率为47.62%,显著高于对照组的24.32%（P＜0.05）;观察组患者2年生存率为40.28%,高于对照组的16.22%（P＜0.05）;观察组患者贫血、血小板减少的发生率显著高于对照组（P＜0.05）。 结论 贝伐珠单抗联合多西他赛治疗HER-2阴性复发转移性乳腺癌的疗效较好,可提高患者生存率和生存期,但对患者血液系统影响较为明显,值得临床重视。     

GnRH/M2与mGM-CSF/βhCG融合蛋白致敏树突状细胞疫苗抗小鼠前列腺癌的作用

目的 探讨分别负载GnRH/M₂融合蛋白和m G M - C S F / β h C G融合蛋白的树突状细胞（dendritic cells, DCs）及与多西他赛（DTX）联合应用治疗小鼠前列腺癌的效果,及其抗肿瘤作用机制。方法 用GnRH/M₂融合蛋白与mGM-CSF/βhCG融合蛋白分别致敏DC,获得DC疫苗,流式细胞仪检测DC成熟度。测量各组小鼠肿瘤生长体积和重量、检测免疫小鼠脏器指数和脾细胞增殖,脾细胞对癌细胞特异性杀伤活性及小鼠外周血内细胞因子IFN-γ浓度,观察各组对荷瘤小鼠的抑瘤效果。结果 与0.9%氯化钠溶液对照组比较,单独用药对荷瘤小鼠肿瘤均具有抑制作用,差异有统计学意义（P<0.05）,联合应用组抗肿瘤效果均优于DC疫苗单独应用组（P<0.01）。结论 两种DC疫苗均能与多西他赛发挥协同抗前列腺癌作用,抑瘤效果显著增强。且联合应用也能有效抑制前列腺癌细胞RM-1荷瘤小鼠肿瘤的生长。     

索拉非尼联合斑蝥酸钠对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的 探讨索拉非尼联合斑蝥酸钠对肝癌HepG2细胞的抑制作用及相关机制。方法 将不同浓度的索拉非尼和斑蝥酸钠分为索拉非尼组、斑蝥酸钠组及索拉非尼+斑蝥酸钠联合用药组（联合用药组）,并设空白对照组,分别作用于肝癌HepG2细胞。CCK-8法测定两个单药组及联合用药组对肝癌HepG2细胞的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测ERK及pERK蛋白的表达水平。结果 索拉非尼组、斑蝥酸钠组及联合用药组均可抑制肝癌HepG2细胞的增殖,并具有剂量-时间依赖效应,联合用药组细胞抑制率高于两个单药组（P均<0.05）。索拉非尼浓度为4 μmol/L、斑蝥酸钠浓度为3.88 μmol/L联合用药的48 h时段表现为协同作用,其余大多表现为相加作用。3组G1期细胞百分比均明显高于对照组 （P均<0.001）,联合用药组较两个单药组更高（P<0.05）;两个单药组及联合用药组的ERK蛋白的表达较对照组无明显差异 （P=0.1）,索拉非尼组及联合用药组pERK蛋白的表达明显低于对照组的（P<0.05）,斑蝥酸钠组明显高于对照组 （P=0.023）。结论 索拉非尼和斑蝥酸钠对肝癌HepG2细胞均有抑制增殖的作用,联合用药表现为协同或相加作用,其机制可能与阻滞细胞周期及抑制RAF/MEK/ERK信号传导通路有关。     

姜黄素联合顺铂对宫颈癌裸鼠移植瘤生长及淋巴转移的影响

目的 探讨姜黄素联合顺铂在裸鼠体内的抗宫颈癌作用及其对淋巴转移的影响.方法 建立人宫颈癌 Caski 细胞裸鼠皮下移植瘤模型,采用随机数字表法分为4组:生理盐水对照组(10 ml/kg)、姜黄素组(100 mg/kg)、顺铂组(3 mg/kg)、联合用药组(姜黄素100 mg/kg+顺铂3 mg/kg),计算移植瘤体积、抑瘤率.应用实时荧光定量PCR检测 Caski 细胞裸鼠移植瘤组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF) mRNA及血管内皮生长因子-C(VEGF-C) mRNA的表达.结果 姜黄素组、顺铂组以及联合用药组的抑瘤率分别为40.8％、53.3％和60.0％.治疗15 d后,对照组、姜黄素组、顺铂组、联合用药组肿瘤体积分别为(123.44±35.62)、(71.72 ±28.36)、(65.47±18.32)、(53.44±10.79) mm3,姜黄素组、顺铂组及联合用药组裸鼠肿瘤体积增长相对缓慢,联合用药组能更有效地抑制裸鼠肿瘤体积增长,4组间比较差异有统计学意义(F=16.890,P=0.000).实时荧光定量PCR检测显示,相对于对照组(1.000),姜黄素组、顺铂组、联合用药组MIF mRNA相对表达量分别是0.322±0.094、0.154±0.006、0.136±0.007,差异有统计学意义(F=220.279,P=0.000),VEGF-C mRNA 相对表达量分别是0.312±0.068、0.263±0.072、0.221±0.041,组间比较差异有统计学意义(F=143.250,P=0.000);并且MIF mRNA与VEGF-C mRNA之间存在正相关(r=0.815,P=0.001).结论 姜黄素联合顺铂能够明显抑制人宫颈癌Carski细胞裸鼠移植瘤的生长,其通过下调MIF mRNA和VEGF-C mRNA的表达,进而抑制宫颈癌淋巴转移可能是其抗肿瘤作用的重要机制之一.     

过表达Numb基因对人膀胱癌5637细胞周期和增殖的影响

目的：：探讨 Numb 基因对人膀胱癌细胞周期和增殖能力的影响及相关机制。方法：选取人膀胱癌细胞5637为研究对象，采用 Numb-ORF 表达质粒转染细胞为实验组，设置阴性对照和空白对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹技术检测各组中 Numb 基因和细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）的表达；采用流式细胞技术检测各组的细胞周期；采用酶标仪检测细胞在490nm 的吸光度值，评价各组细胞的增殖活力。结果：实验组 Numb的△CT 值为1.58±0.41，阴性对照组为5.66±0.53，空白对照组为5.81±0.47，差异有统计学意义（F ＝77.39， P ＝0.00）；实验组 Cyclin D1的△CT 值为4.92±0.73，阴性对照组为2.59±0.33，空白对照组为2.45±0.26，差异有统计学意义（F ＝11.70，P ＝0.01）。实验组中 G0／G1期细胞的比例（％）为49.76±7.07，明显高于阴性对照组的36.52±3.32和空白对照组的38.21±2.06，差异有统计学意义（F ＝7.17，P ＝0.03）。增殖实验中，实验组24 h 的吸光度值为0.35±0.08，明显低于阴性对照组0.52±0.06和空白对照组0.55±0.04（F ＝9.03，P ＝0.02）。结论：Numb 基因可以提高 G0／G1期细胞比例，抑制膀胱癌细胞增殖，其机制可能是通过抑制 Cyclin D1表达实现。     

BAY 11-7082对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨BAY 11-7082对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响.方法:选择PC-3细胞分别加入不同浓度(2.5μmol/L、5μmol/L)的Bay 11-7082培养2h(实验1组与实验2组),同时选择空白对照组,检测三组细胞增殖、凋亡与细胞周期变化情况.结果:实验1组与实验2组的细胞存活率分别为(65.14±13.26)%和(55.81±14.55)%,明显低于空白对照组(85.45±12.33)%(P<0.05).空白对照组、实验1组与实验2组的细胞凋亡率分别为(0.56±0.11)%、(10.12±2.37)%和(17.23±2.46)%,对比差异都有统计学意义(P<0.05).实验组的G 0/G1期细胞数目较对照组明显增加(P<0.05),同时实验组的S、G 2/M期细胞数目较对照组明显减少(P<0.05),实验1组与实验2组之间对比差异也有统计学意义(P<0.05).结论:BAY 11-7082能明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,其部分机制可能是通过调节细胞周期实现的.     

Inhibition of human prostate cancer growth, osteolysis and angiogenesis in a bone metastasis model by a novel mechanism-based selective gelatinase inhibitor

Metastasis to the bone is a major clinical complication in patients with prostate cancer (PC). However, therapeutic options for treatment of PC bone metastasis are limited. Gelatinases are members of the matrix metalloproteinase (MMP) family and have been shown to play a key role in PC metastasis. Herein, we investigated the effect of SB-3CT, a covalent mechanism-based MMP inhibitor with high selectivity for gelatinases, in an experimental model of PC bone metastases. Intraperitoneal (i.p.) treatment with SB-3CT (50 mg/kg) inhibited intraosseous growth of human PC3 cells within the marrow of human fetal femur fragments previously implanted in SCID mice, as demonstrated by histomorphometry and Ki-67 immunohistochemistry. The anti-osteolytic effect of SB-3CT was confirmed by radiographic images. Treatment with SB-3CT also reduced intratumoral vascular density and bone degradation in the PC3 bone tumors. A direct inhibition of bone marrow endothelial cell invasion and tubule formation in Matrigel by SB-3CT in vitro was also demonstrated. The use of the highly selective gelatinase inhibitors holds the promise of effective intervention of metastases of PC to the bone.     

IL-12调控胃癌细胞凋亡及免疫逃逸因子分泌机制探讨

目的探讨白细胞介素-12(IL-12)调控胃癌细胞凋亡及免疫逃逸因子分泌的途径。方法培养胃癌SGC7901细胞,随机分为空白对照组、感染阴性对照(NC)腺病毒的NC腺病毒组、感染IL-12腺病毒的IL-12腺病毒组、转染NC质粒的NC质粒组、转染STAT4质粒的STAT4质粒组、转染NC siRNA的si-NC组、转染STAT4siRNA的si-STAT4组、感染IL-12腺病毒并转染STAT4siRNA的IL-12腺病毒+si-STAT4组。MTS法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中IL-12、STAT4蛋白表达,Elisa检测培养基中IL-12、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的分泌量;采用方差分析进行组间的统计学处理。结果IL-12腺病毒组细胞活力(0.41±0.08)较空白对照组(0.91±0.16)及NC腺病毒(0.86±0.13)降低,差异有统计学意义,F=25.123,P<0.001;凋亡率(10.95±2.85)%较空白对照组(1.86±0.32)%及NC腺病毒(2.24±0.41)%增加,差异有统计学意义,F=47.253,P<0.001。IL-12腺病毒组p-STAT4的蛋白表达量(3.23±0.62)较空白对照组(1.00±0.18)及NC腺病毒(1.05±0.22)增加,差异有统计学意义,F=54.565,P<0.001。培养基中IFN-γ、TNF-α分泌量分别为(3.09±0.74)、(3.88±0.62)ng/mg较空白对照组的(1.37±0.24)、(0.81±0.16)ng/mg及NC腺病毒组的(1.50±0.21)、(0.88±0.14)ng/mg增加,差异有统计学意义,F值分别为61.620、39.153,均P<0.001。IL-12腺病毒+si-STAT4组的细胞活力(0.76±0.12)较IL-12腺病毒组(0.40±0.08)增加,差异有统计学意义,t=5.582,P=0.001。IL-12腺病毒+si-STAT4组的细胞凋亡率(5.71±0.93)%较IL-12腺病毒组(10.95±2.85)%降低,差异有统计学意义,t=3.908,P=0.004。IL-12腺病毒+si-STAT4组培养基中IFN-γ的分泌量(2.03±0.52)ng/mg较IL-12腺病毒组(3.88±0.62)ng/mg降低,差异有统计学意义,t=5.112,P=0001;TNF-α的分泌量(1.42±0.29)ng/mg较IL-12腺病毒组(2.39±0.51)ng/mg降低,差异有统计学意义,t=3.697,P=0.006。结论IL-12通过激活STAT4途径调控胃癌细胞凋亡及免疫逃逸因子分泌。     

Galectin-3表达抑制对BT-549细胞系增殖和凋亡影响观察

目的：观察抑制Galectin-3表达与BT-549细胞系增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为三阴性乳腺癌基因治疗方法的可行性。方法：设计并化学合成Galectin-3小干扰片段并顺势转染乳腺癌细胞系BT-549（为Galec—tin-3siRNA组）,以未转染细胞为空白对照,以转染阴性干扰为阴性对照,荧光倒置显微镜和实时定量PCR验证干扰结果,XTT方法观察干扰后24、48、72和96h各组细胞增殖吸光度（A值）,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,划痕实验和Tral2swell实验比较不同组间细胞迁移和侵袭情况,以上实验均重复3次。结果：空白对照组、阴性对照组和Galectin一3siRNA组Galectin-3mRNA相对含量分别为（0．078±0．003）、（0．069±0．004）和（0．015±0．001）,差异有统计学意义,F=486．97,P〈O．001。XTT法检测结果显示,同一组不同时间点之间差异有统计学意义,P值均〈O．00l;同一时间点各组之间差异亦有统计学意义,P值均〈O．001。随着时间推移,空白组和阴性对照组细胞继续生长,Galectin-3siRNA组细胞生长抑制,数量逐渐减少,干扰时间和实验分组之间存在交互效应,F=26．43,P〈0．001。流式细胞仪检测结果显示,Galectin-3siRNA组、空白对照组和阴性对照组凋亡率分别为（26．83±2．15）％、（2．73土0．18）％和（5．86土0．51）％,差异有统计学意义,F=24537．92,P〈0．00l。空白对熙组、阴性对照组和Galectin-3siRNA组愈合率分别为（91．47±4．39）％、（82．36土3．68）％和（52．26士1．95）％,差异有统计学意义,F=213．71,P〈0。001。转染Galectin-3siRNA的乳腺癌细胞浸润穿过Matrigel膜的细胞数（169．36±23．71）要比空白对照组（480．80土30．80）和阴性对照组（320．70±28．12）的细胞数显著减少,差异有统计学意义,F=115．20,P〈0．001。结论：Galectin-3siRNA成功转染入BT-549细胞,并抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低其迁移侵袭能力,为三阴性乳腺癌基因治疗提供实验依据。     

慢病毒载体介导的Annexin-A10对HepG2皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察重组慢病毒对人肝癌裸鼠皮下移植瘤体生长情况的影响及其对移植瘤细胞中膜联蛋白A10（Annexin-A10,ANXA10）、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法:制备HepG2细胞悬液注入裸鼠右侧腋下。待瘤体直径长至1~2cm时,取出瘤体,分别接种至24只雌性裸鼠右侧腋窝皮下。每3天测量瘤体大小,计算瘤体体积。待瘤体直径长至0.3~0.5cm时,将裸鼠随机分为3组,分别为实验组、阴性对照组及空白对照组。3周后处死裸鼠,并取出裸鼠皮下瘤体。采用免疫组化法检测ANXA10、MMP-9的表达。结果:实验组裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑制,体积和重量均明显小于阴性对照组和空白对照组（体积:F=19.13,P<0.01;重量:F=46.91,P<0.01）。免疫组化结果显示:实验组裸鼠瘤体较阴性对照组及空白对照组的ANXA10蛋白表达明显升高;同时,MMP-9蛋白表达明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:重组慢病毒抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤体的生长,ANXA10基因过表达的慢病毒抑制MMP-9蛋白的表达。     

beclin 1过表达对三阴性乳腺癌BT-549细胞生长抑制作用观察

目的：观察自噬调控基因beclin 1过表达对三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）BT-549细胞的体外生长影响。方法：应用荧光显微镜观察细胞转染效率,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞beclin 1mRNA和蛋白表达水平,采用吖啶橙染色观察细胞自噬情况,采用MTT检测细胞的增殖率,采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况。结果：细胞转染48h实验组和对照组的细胞转染效率均〉45%,qRT-PCR提示实验组细胞beclin 1mRNA 2-ΔΔCt值为16.806±2.920,较空白组（0.853±0.025）显著升高,F=88.733,P〈0.001;蛋白质印迹法提示实验组细胞beclin 1/GAPDH灰度值比为1.050±0.056,较空白组（0.640±0.006）显著升高,F=137.213,P〈0.001;吖啶橙染色提示实验组细胞发生自噬的比例为33%,显著高于空白组（15%）,χ2=8.985,P=0.011;MTT法提示实验组细胞增殖率在24h（0.152±0.019）、48h（0.254±0.029）、72h（0.322±0.027）和96h（0.357±0.035）均显著低于空白组24h（0.202±0.023）、48h（0.308±0.030）、72h（0.446±0.032）和96h（0.851±0.014）,P值均〈0.05;72h实验组细胞凋亡率为（6.560±0.593）%,显著高于空白组（2.533±0.216）%,F=107.085,P〈0.001;实验组G0/G1期为（63.267±3.650）%,显著高于空白组（51.533±5.152）%,F=6.566,P=0.027。结论：自噬调节基因beclin 1过表达可显著抑制BT-549细胞的体外增殖水平。     

不同时间新辅助内分泌疗法对局部晚期前列腺癌疗效的影响

 【摘要】　目的　探讨局部晚期前列腺癌联合治疗中新辅助内分泌疗法（NHT）的理想方案。方法　诊断明确的局部晚期（T3-4N0M0）前列腺癌患者60例,均采用NHT治疗方案。治疗前随机分为3组,每组20例,各组行不同时间NHT,A组：2周NHT,B组：3个月NHT,C组：6个月NHT。结果　A、B、C组患者NHT后前列腺特异抗原（PSA）中位值分别为24.88（6.62～55.86）、0.20（0.05～12.07）和0.07（0.01～2.01）ng／ml,与治疗前比较差异均有统计学意义（均P＝0.00）,组间比较差异有统计学意义（均P＝0.00）。A、B、C组行NHT后前列腺体积分别为（49.50±14.19）、（47.35±17.99）和（36.15±7.17）ml,B、C两组治疗前后前列腺体积比较差异有统计学意义（P＝0.04、0.00）,治疗后A组与C组、B组与C组比较差异有统计学意义（P＝0.00、0.01）。A、B和C组治疗后最大尿流率（Qmax）平均值分别为（8.75±2.15）、（11.70±2.81）和（14.45±2.61）ml／s,B组和C组治疗前后比较差异有统计学意义（均P＝0.00）,治疗后各组间比较差异有统计学意义（均P＝0.00）。结论　NHT治疗时间至少应达到3个月,能够达到降低PSA、缩小前列腺体积和提高Qmax的效果。     

siRNA敲减DNMT1表达对T-cadherin基因甲基化及结肠癌细胞生物学行为的影响

目的 肿瘤的发生、发展和侵袭转移是影响结肠癌治疗的重要原因,有研究发现DNA甲基化状态在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,抑制T-cadherin表达可增强肿瘤细胞侵袭和迁移能力.本研究探讨siRNA敲减DNA甲基转移酶1(DNA methyl transferase 1,DNMT1)基因表达对结肠癌细胞T-cadherin基因甲基化及细胞生物学行为影响.方法 设计针对DNMT1的siRNA1、siRNA2和siRNA3重组质粒,分别转染HT-29、SW620和HCT116细胞系,采用实时荧光定量PCR检测DNMT1表达,以筛选敲减效率最高的DNMT1 siRNA和细胞系.用敲减效率最高的DNMT1 siRNA转染相应细胞系,采用甲基化特异性PCR检测T-cadherin甲基化水平,采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测T-cadherin表达.用敲减效率最高的DNMT1 siRNA转染相应细胞系,采用噻唑蓝比色法、流式细胞术、Transwell和细胞划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,观察敲减DNMT1对细胞生物学行为的影响;同时设置T-cadherin shRNA重组质粒转染组,观察同时敲减DNMT1和T-cadherin对细胞生物学行为的影响.结果 DNMT1 siRNA1重组质粒对HT-29细胞系DNMT1的敲减效果最好.DNMT1 siRNA1转染HT-29细胞后,DNMT1组T-cadherin基因甲基化水平明显低于空质粒组和空白组,DNMT1组与空质粒组(F=314.182)和空白组(F=283.625)差异有统计学意义,均P<0.001.DNMT1组和联合组DNMT1 mRNA表达量(0.27±0.08)和蛋白表达量(0.41±0.12)显著低于空质粒组和空白组.其中mRNA表达,DNMT1组与空质粒组(F=544.581)和空白组(F=525.811)组差异有统计学意义,均P<0.001;联合组与空质粒组(F=507.501)和空白组(F=494.958)也差异有统计学意义,均P<0.001.蛋白表达量,DNMT1组与空质粒组(F=217.550)和空白组(F=275.469)差异有统计学意义,均P<0.001:联合组与空质粒组(F=321.707)和空白组(F=407.225)也差异有统计学意义,均P<0.001:而DNMT1组和联合组比较mRNA(F=0.002,P=0.965)和蛋白表达量(F=0.811,P=0.394)均差异无统计学意义.DNMT1组T-cadherin mRNA表达量(1.17±0.34)和蛋白表达量(1.38±0.54)显著高于联合组、空质粒组和空白组.其中mRNA表达,DNMT1组与联合组(F=433.103)、空质粒组(F=313.768)、空白组(F=372.118)差异有统计学意义,均P<0.001.对于蛋白表达量,DN-MT1组与联合组(F=89.315)、空质粒组(F=156.745)、空白组(F=196.702)差异有统计学意义,均P<0.001.而联合组与空质粒组(F=1.310,P=0.262;F=0.144,P=0.714)和空白组(F=3.713,P=0.064;F=0.038,P=0.850)的mRNA和蛋白表达量比较差异无统计学意义.与联合组、空质粒组和空白组比较,DNMT1组第24、36、48、72 h的A值显著减小,F组别=14.479,P<0.001;F时间=37.755,P<0.001.DNMT1组与联合组(F=1004.194,P<0.001)、空质粒组(F=1190.815,P<0.001)、空白组(F=781.018,P<0.001)比较细胞总凋亡率显著升高;DNMT1组穿膜细胞数目为(61.3±10.7)个,与联合组(F=86.730,P<0.001)、空质粒组(F=282.962,P<0.001)、空白组(F=152.538,P<0.001)比较显著减少.DNMT1组细胞迁移距离为(235.8±6.3)μm,与联合组(F=2535.55,P<0.001)、空质粒组(F=9767.233,P<0.001)、空白组(F=8420.830,P<0.001)比较显著减少.而联合组与空质粒组和空白组比较,A值、细胞总凋亡率、穿膜细胞数目和细胞迁移距离均差异无统计学意义,P>0.05.结论 DNMT1 siRNA1可有效敲减HT-29细胞DNMT1表达,逆转T-cadherin高甲基化状态并上调其表达.敲减DNMT1可明显抑制HT-29细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力;而同时敲减T-cadherin能够逆转此种现象,说明敲减DNMT1引起的细胞生物学行为改变可能是通过T-cadherin来实现的.