粒细胞巨噬细胞刺激因子对大鼠创面哺乳动物西罗莫司靶蛋白信号通路的作用

目的 了解应用粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)对大鼠创面愈合的影响及对哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白(mTOR)信号通路的作用. 方法 将50只SD大鼠按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组25只,于其背部制作约2 cm×2 cm全层皮肤缺损创面.治疗组大鼠创面外涂重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子( rhGM-CSF)凝胶,10 μg/cm2,rhGM-CSF实际作用量为1×10-4 μg/cm2;对照组创面涂抹不含任何药物的凝胶基质,10 μg/cm2.2组每日给药1次直至创面愈合.于致伤后1、3、5、7、14 d,每组每时相点处死5只大鼠:(1)观察并计算创面愈合率.(2)于前4个时相点取创面组织标本,行HE染色观察组织病理学改变,ELISA法检测GM-CSF含量,蛋白质印迹法检测GM-CSF、CD31及mTOR信号通路相关分子P70S6K、磷酸化(p-)P70S6K、4E-BP1、p-4E-BP1、mTOR、p-mTOR表达量.对数据行t检验. 结果 (1)伤后1d,2组大鼠创面愈合率接近(t=0.307,P＞0.05);伤后3～ 14 d,治疗组创面愈合率明显高于对照组(t值为2.704～ 4.030,P ＜0.05或P ＜0.01).(2)HE染色可见,与对照组同时相点相比,治疗组创面肉芽组织及微血管数量明显增多,创缘角化上皮细胞增殖明显.(3)ELISA法和蛋白质印迹检测结果显示,2组大鼠创面GM-CSF含量及蛋白表达量均在伤后3d达到峰值,对照组分别为(720.9±0.9)pg/mL、2.45±0.10,治疗组分别为(910.5±1.3)pg/mL、2 80±0.48.治疗组各时相点GM-CSF含量均明显高于对照组(t值为105.743～298.971,P值均为0.000),治疗组伤后1、5、7 d GM-CSF蛋白表达量明显高于对照组(t值为4.070～5.275,P值均小于0.01).(4)治疗组伤后1、3、7d创面组织中CD31表达量均明显高于对照组(t值为7.237～26.401,P值均小于0.01).(5)治疗组伤后各时相点创面组织中mTOR和p-mTOR表达量均高于对照组(t值为2.921 ～23.143,P ＜0.05或P＜0.01).治疗组P70S6K表达量伤后3、5、7d高于对照组(t值为2.950～5.275,P＜0 05或P＜0.01),p-P70S6K表达量于伤后1、3、7d高于对照组(t值为3.307 ～22.793,P＜0.05或P＜0.01).治疗组伤后1、3、5 d 4E-BP1表达量均明显低于对照组(t值为2.449～6.431,P＜0.05或P＜0.01),p-4E-BP1表达量于伤后1、3、7 d高于对照组(t值为5.522～11.613,P值均小于0.01). 结论 GM-CSF能促进大鼠创面组织mTOR蛋白及其下游信号分子P70S6K、4E-BP1的磷酸化,从而激活mTOR信号通路,促进创面愈合.     

P物质与表皮干细胞联用对糖尿病大鼠创面愈合与神经再生的影响

目的 观察感觉神经肽P物质与表皮干细胞(ESC)联合应用对糖尿病大鼠创面愈合与神经再生的作用. 方法 分离培养SD大鼠ESC(经鉴定),接种于羊膜滋养层上构建羊膜-ESC备用.选择48只糖尿病模型大鼠,每只背部制作4个全层皮肤缺损创面.按随机抽签法将此192个创面分为ESC+P物质组、ESC组、P物质组、对照组,每组48个创面.ESC+P物质组和ESC组创面均移植羊膜-ESC,P物质组、对照组创面移植羊膜.移植后,ESC+P物质组、P物质组在创周及创面中央注射1×10-7 mol/L的P物质250μL,ESC组、对照组在创周及创面中央注射PBS 250μL作对照,各组每日注射2次,连用4d.于大鼠伤后4、7、10、14、17、23 d,观察并计算创面愈合率(每时相点8个创面),HE染色观察创面组织结构改变.伤后4、7、10 d,行Masson染色观察创面组织总胶原分布,免疫组织化学染色观察Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积量.伤后14、23 d,用免疫组织化学染色法观察创面组织中蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)及P物质阳性神经纤维分布情况.对数据行单因素方差分析和t检验. 结果(1)ESC+P物质组伤后14 d创面愈合率达100.0％,明显早于ESC组、P物质组、对照组完全愈合时间(伤后17、17、23 d).HE染色显示ESC+P物质组创面愈合质量明显优于其余3组.(2)伤后10 d,ESC+P物质组与P物质组创面组织中胶原着色深、面积广;其余2组胶原染色较浅、面积较小.随着伤后时间推移,各组创面Ⅰ型胶原沉积量逐渐升高,Ⅲ型胶原沉积量逐渐下降.伤后4、7、10 d,ESC+P物质组Ⅰ型胶原沉积量明显高于ESC组(t值分别为32.72、118.21、26.71,P值均小于0.01)和对照组(t值分别为44.37、22 76、30.32,P值均小于0.01);ESC+P物质组与P物质组水平相对接近.伤后4、7、10d,ESC+P物质组创面Ⅲ型胶原沉积量明显高于ESC组(t值分别为32.27、28 68、14.51,P值均小于0.01)和对照组(t值分别为35 68、22.52、22 24,P值均小于0.01).(3)ESC +P物质组与P物质组创面组织中有大量PGP 9.5和P物质阳性神经纤维再生,创面深层部分神经纤维末梢向表皮延伸.ESC组、对照组仅见创面深层有少量PGP 9.5和P物质阳性神经纤维,且未向表皮延伸.伤后14、23 d,ESC+P物质组创面PGP 9.5阳性神经纤维面积占(3.86±0.25)％、(7 03±0.28)％,明显高于ESC组[(1.48±0.30)％、(3.01±0 43)％,t值分别为23 95、30 27,P值均小于0.01]和对照组[(1 46±0 23)％、(2.84±0.29)％,t值分别为27.35、40.32,P值均小于0.01].伤后14、23 d,ESC+P物质组创面P物质阳性神经纤维面积占(2.01±0 14)％、(1.19±0 11)％,明显高于ESC组[(0.85±0 17)％、(1.34±0 21)％,t值分别为20.50、2.60,P＜0.05或P＜0.01]和对照组[(0.74 ±0.15)％、( 1.30 ±0.17)％,t值分别为23 98、2.41,P＜0.05或P＜0.01]. 结论 感觉神经肽P物质和ESC联合应用,可以有效促进糖尿病大鼠创面愈合与神经再生.     

早期电动磨痂结合不同种敷料覆盖修复小儿深Ⅱ度烧伤创面的疗效观察

目的：观察小儿深Ⅱ度烧伤创面早期电动磨痂后结合不同种敷料覆盖的治疗效果.方法：将2010年1月-2012年1月收治的60例四肢和躯干热液烫伤患儿随机分为凡士林油纱组、生物敷料组和负压封闭引流（VSD）组,每组20例.各组患儿在磨痂后,根据分组的不同,分别应用凡士林油纱、异种脱细胞真皮基质或VSD覆盖创面.术后观察创面愈合时间、愈合质量、换药次数、治疗费用.结果：生物敷料组、VSD组的创面愈合时间分别为（16.3±1.9）d和（16.9±1.8）d,明显短于凡士林纱布组[（19.2±2.5）d,P＜0.05];生物敷料组、VSD组反映瘢痕增生程度的温哥华评分分别为（4.5±0.7）分和（4.1±0.8）分,明显低于凡士林油纱组[（8.6±1.2）分,P＜0.01];VSD组的换药次数[（3.0±0.5）次]明显低于凡士林油纱组[（6.9±0.7）次,P＜0.05]和生物敷料组[（7.2±0.8）次,P＜0.01];凡士林油纱组的住院费用[（6 560.34±1 230.00）元],明显低于生物敷料组[（12 028.24±1 380.00）元,P＜0.01]和VSD组[（14 125.40±1 560.00）元,P＜0.01].结论：早期磨痂应用异种生物敷料和VSD覆盖较普通油纱覆盖能明显促进小儿深Ⅱ度烧伤创面愈合,缩短住院时间,显著提高创面愈合质量,减少换药次数,减轻患儿痛苦,但住院费用较高,临床上应根据患儿具体情况,灵活选择磨痂后创面覆盖物.     

表皮生长因子对小鼠创面组织过氧化物酶体增殖物激活受体β的调节作用

目的 了解小鼠创面外用冻干鼠表皮生长因于(mEGF)后,过氧化物酶体增殖物激活受体β(PPAR-β)表达量的变化及对创面愈合的影响. 方法 于70只BALB/c小鼠背部脊柱两侧各制作1个1.5 cm×0.5 cm全层皮肤缺损创面,将左侧创面设为实验组、右侧创面作为对照组.实验组创面滴加mEGF溶液(5μg/mL)、对照组创面滴加生理盐水.(1)伤后7、11、16 d各取20只小鼠,评估创面愈合率.(2)伤后1、3、7、11、14、18 d切取创缘组织(每时相点创面数为10个),采用免疫组织化学染色法检测PPAR-β蛋白表达,原位杂交法检测PPAR-β mRNA表达量,结果均用积分吸光度(IA)值表示.对实验数据行t检验. 结果 (1)创面愈合率:伤后7、11、16 d,实验组创面愈合率均明显高于对照组(t值分别为3.03、6.05、11.90,P值均小于0.01).(2)免疫组织化学检测:伤后早期PPAR-β蛋白主要表达于2组剖面内芽组织Fb以及创缘KC胞核中,创面上皮化后主要表达于新生上皮及其下层Fb中,创面修复后表达逐渐减弱.实验组伤后各时相点PPAR-β蛋白表达量明显高于对照组(t值为2.15～7.37,P ＜0.05或P ＜0.01),其中伤后3d达高峰[IA值为(3.46±1.33)×103],此时对照组IA值为(2.35±1.09) ×103.(3)原位杂交:伤后2组创面PPAR-β mRNA表达均开始上调,主要阳性表达部位为创面Fb及创缘KC胞质,持续至创面上皮化基本完成时,表达量开始下降.实验组创面各时相点PPAR-β mRNA表达量均明显高于对照组(t值为2.35～6.64,P＜0.05或P ＜0.01),其中伤后3 d达峰值[IA值为(7.3±2.6)×106],此时对照组IA值为(4.5±3.0)×106. 结论 外用mEGF可上调小鼠创面组织中PPAR-β表达并促进创面愈合.     

烧伤大鼠淋巴液细胞因子及淋巴结T淋巴细胞亚群的变化

目的 观察烧伤对大鼠淋巴液细胞因子及淋巴结T淋巴细胞亚群的影响. 方法 取18只Wistar大鼠,将每只鼠单侧后腿浸于70℃热水30 s,造成约4％ TBSA深Ⅱ度烫伤(烧伤组);对侧后腿浸于22℃温水30 s模拟烫伤(假伤组).分别于伤后6、24、72 h按随机数字表法取6只大鼠,收集2组髂总淋巴结及其输出淋巴管内的淋巴液,ELISA法检测淋巴液中TNF-α、γ干扰素、IL-4水平并计算γ干扰素/IL-4比值,流式细胞术检测淋巴结中CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比并计算CD4 +/CD8+比值.对数据进行t检验. 结果 (1)大鼠伤后6、24、72 h,烧伤组淋巴液TNF-α水平分别为(51.6±5.4)、(27.4±2.6)、(23.0±2.7)pg/mL,明显高于假伤组的(17.8±1.6)、(16.4±1.2)、(17.2±2.0)pg/mL,t值分别为15.346、11.854、4.189,P值均小于0.01.(2)伤后6、24、72 h,烧伤组与假伤组γ干扰素水平比较,差异无统计学意义(t值分别为2.059、-0.805、-0.415,P值均大于0.05);烧伤组IL-4水平明显高于假伤组(t值分别为9.141、11.669、6.940,P值均小于0.01),γ干扰素/IL-4比值(2.27±0.34、1.54±0.19、1.60±0.16)明显低于假伤组(3.33±0.25、3.34±0.22、2.52±0.24,t值分别为-6.298、-11.313、-8.893,P值均小于0.01).(3)伤后6、24 h,烧伤组与假伤组CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比及CD4 +/CD8+比值比较,差异无统计学意义(t值为- 2.486 ～-0.215,P值均大于0.05).伤后72 h,烧伤组CD4+T淋巴细胞百分比及CD4 +/CD8+比值分别为(38.6±2.3)％、2.13±0.16,明显低于假伤组的(48.9±2.9)％、2.68±0.12,t值分别为-7.551、-5.068,P值均小于0.01;CD8+T淋巴细胞百分比与假伤组比较,差异无统计学意义(t=0.845,P＞0.05). 结论 烧伤能够引起大鼠局部引流淋巴液γ干扰素/IL-4比值和局部引流淋巴结内CD4+/CD8+比值降低,抑制其局部免疫功能.     

不同敷料组合对烧伤患者供皮区创面微环境的影响

目的 了解不同敷料组合对烧伤创面微环境及愈合的影响.方法 选择烧伤后需行手术植皮的患者186例,供皮区创面取皮厚度均为0.3 mm.将200个供皮区创面按表格随机法进行分组,分为藻酸盐棉垫组(藻酸盐敷料+棉垫)、凡士林棉垫组(凡士林油纱+棉垫)、藻酸盐泡沫组(藻酸盐敷料+泡沫敷料)、凡士林泡沫组(凡七林油纱+泡沫敷料).观察各种敷料对患者创面水分蒸发量及pH值的影响,比较各组创面的细菌定植情况、揭除敷料时患者疼痛程度及创面愈合时间.结果 共有184例患者的198个创面完成试验全过程,4种组合敷料可造成不同的创面微环境.藻酸盐棉垫组、凡士林棉垫组、藻酸盐泡沫组、凡士林泡沫组患者创面的敷料表面水分蒸发量分别为(35.5±3.2)、(31.3±2.8)、(23.1±2.9)、(18.1±2.3)mL·h-1·m-2,保湿性能以凡士林泡沫组为佳;创面pH值分别为7.22±0.06、7.41±0.03、7.05±0.03、7.34±0.06.创面细菌培养阳性率以藻酸盐泡沫组(4.0%)最低,凡士林泡沫组(22.4%)最高.揭除患者创面敷料时疼痛程度以藻酸盐泡沫组最轻(0.98±0.12),凡士林棉垫组最重(8.14±0.82).创面愈合时间藻酸盐泡沫组最短,为(6.7±0.8)d;凡士林泡沫组最长,为(15.6±3.5)d.结论 不同敷料在同样创面上使用,会营造不同的创面微环境;该环境与创面愈合时间密切相关,湿度对创面愈合的影响比pH值更为重要.     

肠三叶因子和黏蛋白对烧伤血清所致肠上皮细胞增殖移行能力变化的影响

目的 观察烧伤血清所致肠上皮细胞增殖、移行能力的变化,以及联合应用肠三叶因子(ITF)和黏蛋白对其的影响.方法 将大鼠小肠上皮细胞株IEC-6传代培养,按照随机数字袁法分为正常对照组、烧伤血清组、ITF+烧伤血清组、黏蛋白+烧伤血清组和ITF+黏蛋白+烧伤血清组,均采用DMEM培养液培养,其内分别添加体积分数10％小牛血清、体积分数10％烧伤大鼠血清、25 μg/mL ITF和体积分数10％烧伤大鼠血清、250 μg/mL黏蛋白和体积分数10％烧伤大鼠血清以及联合使用上述剂量ITF、黏蛋白和烧伤大鼠血清.处理后0～4d观察细胞增殖能力;划痕实验后12、24、36、48、72 h观察细胞移行情况;Transwell法(细胞置于上室、培养液加入下室)培养4、6、8、10、12 h,观察细胞变形能力,以下室内细胞计数表示.对数据进行t检验.结果 (1)细胞增殖能力.处理后1～4d烧伤血清组细胞数量明显低于正常对照组(t值为-16.569 ～ - 2.613.P＜0.05或P＜0.01).ITF+烧伤血清组和黏蛋白+烧伤血清组细胞数量与烧伤血清组接近(t值分别为0.037～0 740、0.116～0.429,P值均大于0 05);处理后2d,ITF+黏蛋白+烧伤血清组细胞数量明显高于烧伤血清组(t =6.484,P＜0.01)、ITF+烧伤血清组(t =3.838,P＜0.01).(2)细胞移行能力.烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离均远远短于正常对照组(t值为-37.594～ -6.727,P值均小于0.0I).与烧伤血清组比较,黏蛋白+烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离无明显变化(t值为0.055 ～0.589,P值均大于0 05).ITF+烧伤血清组划痕后12、24、36 h细胞移行距离分别为(47±6)、(126±13)、(170±11) μm,明显长于烧伤血清组[(42±7)、(98±14)、(154±22) μm,t值为2.230～4.817,P＜0.05或P＜0.01].ITF+黏蛋白+烧伤血清组划痕后各时相点细胞移行距离明显长于烧伤血清组(t值为2.982 ～7.390,P＜0.05或P＜0.01),划痕后12 ～48 h明显长于ITF+烧伤血清组(t值为2.707 ～2.918,P＜0.05或P＜0.01).(3)细胞变形能力.与正常对照组比较,烧伤血清组穿孔细胞数大幅减少(t值为- 23.965 ～ -6.436,P值均小于0.01).与烧伤血清组比较,黏蛋白+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数改变不明显(t值为0.199～ 0.797,P值均大于0 05);ITF+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数均明显增加(t值为3.650 ～10.028,P值均小于0.01).ITF+黏蛋白+烧伤血清组各时相点穿孔细胞数明显多于烧伤血清组(t值为4.313～15.100,P值均小于0.01),培养10、12 h时穿孔细胞数分别为(328±47)、(465±37)个,明显多于ITF+烧伤血清组[(277±25)、(353±34)个,t值分别为3.051、6 945,P值均小于0.01].结论 ITF对肠上皮细胞增殖影响有限,但能明显改善细胞变形能力,促进细胞移行;单独使用黏蛋白对细胞无明显作用,与ITF联合应用能增强ITF的作用.ITF维护肠黏膜屏障的主要机制为促进细胞移行.     

改良负压封闭引流术在难愈性烧伤创面治疗中的应用

目的探讨改良负压封闭引流术(vacuum sealing drainage, VSD)对难愈性烧伤创面的治疗效果。方法选取自2013年2月至2016年10月收治的难愈性创面患者76例,按随机数字表法分为实验组(38例)和对照组(38例)。对照组患者采用常规VSD治疗;实验组患者采用改良VSD治疗,即在常规VSD治疗基础上增加银离子敷料覆盖创面。观察两组患者的治疗效果、创面愈合时间、敷料维持时间和住院时间以及创面细菌感染率并进行比较分析;采用视觉模拟评分法(visual analogue acale, VAS)对两组患者治疗前后的疼痛程度进行评价。结果实验组和对照组患者总有效率分别为92.11%(35/38)和73.68%(28/38),两组差异具有统计学意义(P0.05);与对照组比较,实验组创面愈合时间与住院时间均明显缩短,辅料维持时间明显延长(P0.05);两组患者治疗前的VAS评分比较,其差异无统计学意义(P0.05);实验组治疗后的VAS评分明显低于对照组(P0.05);实验组与对照组患者创面的细菌感染率分别为5.26%(2/38)和21.05%(8/38),两组差异具有统计学意义(P0.05)。结论在常规VSD基础上增用银离子敷料可显著提高难愈性烧伤创面的疗效,有效缩短创面愈合时间,减少更换敷料的次数,从而降低创面细菌的感染率,具有临床推广价值。     

不同方式修复猪Ⅲ度烧伤阴囊对生精细胞凋亡及bcl-2蛋白表达的影响

目的 观察不同方式修复猪Ⅲ度烧伤阴囊对睾丸生精功能的影响. 方法 将20只雄性贵州小型香猪按随机数字表法分为正常对照组、自然愈合组、皮瓣修复组、植皮修复组,每组为5只.正常对照组不致伤,将后3组猪阴囊制成Ⅲ度烧伤.自然愈合组创面不行特殊处理,任其自行愈合;皮瓣修复组取腹股沟皮瓣修复创面;植皮修复组取下腹部全厚皮修复创面.观察后3组猪伤后即刻及伤(术)后3个月阴囊外观;伤(术)后3个月,取后3组猪双侧睾丸标本,原位末端标记法检测生精细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测bcl-2蛋白表达.同法观察或检测正常对照组猪以上指标.对数据行单因素方差分析及LSD检验. 结果 (1)正常对照组猪阴囊皮肤有皱褶,具备收缩功能.其余3组猪阴囊烧伤后即刻呈皮革样改变,质硬.伤(术)后3个月,自然愈合组创面呈瘢痕愈合,睾丸被挤入腹股沟区;皮瓣修复组重建阴囊皮肤较厚,睾丸位于皮瓣内;植皮修复组重建阴囊皮肤薄,睾丸位于阴囊内.(2)正常对照组各级生精细胞排列规则,少量精母细胞和精子细胞凋亡;自然愈合组、皮瓣修复组、植皮修复组生精上皮变薄,大部分生精细胞凋亡,以精原细胞和精母细胞为主.自然愈合组、皮瓣修复组、植皮修复组、正常对照组生精细胞凋亡指数分别为(46.3±3.3)％、(40.9±3.5)％、(20.6±2.3)％、(7.5±1.9)％,组间比较差异有统计学意义(F =405.65,P＜0.01).前3组组间两两比较,差异均有统计学意义(P值均小于0.01).(3)自然愈合组、皮瓣修复组、植皮修复组、正常对照组的bcl-2蛋白表达水平分别为(52±5)％、(53±4)％、(64±5)％、(75±5)％,组间比较差异有统计学意义(F=56.63,P＜0.01).自然愈合组与皮瓣修复组该指标水平相近(P=0.66),均显著低于植皮修复组(P值均小于0.01). 结论 无论瘢痕化愈合还是用皮瓣移植或者植皮方式修复猪阴囊Ⅲ度烧伤创面,对生精功能均有抑制作用,其中植皮修复造成的影响相对较小.     

血管内皮生长因子在电烧伤大鼠血清及创面组织中的表达变化

目的 观察电烧伤大鼠血清和创面组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化,探讨其在电烧伤病变中的作用机制. 方法 按随机数字表法将64只SD大鼠分为正常对照组(8只)和电烧伤组(56只).于伤后6h和1、3、7、14、21、28 d,每时相点处死8只电烧伤组大鼠,留取创面肌肉组织和血清样本.HE染色观察创面组织病理学改变,双抗体夹心ELISA法检测血清VEGF含量,蛋白质印迹法检测创面VEGF蛋白的表达量,免疫组织化学法检测创面VEGF的表达定位,计算微血管密度(MVD)值.对MVD值与VEGF表达强度行相关性分析.取未经任何处理的正常对照组大鼠腿部腹侧肌肉组织及血清进行上述指标检测.对数据进行单因素方差分析与Spearman等级相关分析,两两比较LSD-t检验. 结果 (1)电烧伤组大鼠伤后6h及1d,创面组织肌纤维断裂,大量炎性细胞浸润,组织水肿明显;伤后3d有新生血管生成;7d时肉芽组织及新生血管数量明显增多.(2)电烧伤组大鼠伤后6h及1、14 d,血清VEGF含量分别为(43±11)、(44±11)、(74±27) pg/mL,明显高于正常对照组的(15±9)pg/mL(t值为4.001～5.724,P值均小于0.01).(3)与正常对照组肌肉组织VEGF蛋白表达量(0.21±0.09)比较,电烧伤组各时相点大鼠创面组织VEGF蛋白表达量均升高,伤后7d达峰值,为0.63±0.13(t =4.965,P＜0.05).(4)电烧伤组早期炎性细胞VEGF表达强阳性,后期以新生血管内皮细胞阳性表达为主.(5)电烧伤组伤后3、7、14、21、28 d,创面组织MVD值和VEGF表达强度呈显著正相关(rs=0.834,P＜0.01). 结论 电烧伤后不同阶段,VEGF在大鼠创面组织及血清中的表达各不相同,其改变与伤后体液渗出及创面愈合过程密切相关.     

硝酸银软膏对Ⅱ度烧伤创面治疗作用的多中心临床研究

目的观察硝酸银(AgNO3)软膏对浅Ⅱ、深Ⅱ度烧伤创面的治疗效果,并评价其药物不良反应。方法选择80例浅Ⅱ度和40例深Ⅱ度烧伤患者,进行多中心、随机、阳性药物平行对照和同体试验研究(共4个中心,每个中心30例)。将患者创面按用药不同分为AgNO3组和磺胺嘧啶银(SD-Ag)组,观察各组创面完全愈合时间、指定时相点下创面愈合率、创面细菌培养情况、药物疗效和安全性、药物对创面的刺激性等。结果浅Ⅱ度创面:AgNO3组完全愈合时间为(9．5±2．7)d, SD-Ag组为(10．8±3．4)d,用药后7 d创面愈合率分别为(77．9±20．5)％及(67．3±22．6)％;深Ⅱ度创面:AgNO3组完全愈合时间为(21．5±4．8)d,SD-Ag组为(23．3±6,4)d,用药后20 d创面愈合率分别为(86．6±15．9)％及(78．5±17．7)％。同等深度烧伤创面上述各项数据两组间比较,差异均有统计学意义(P<0．01)。同等深度烧伤创面AgNO3组与SD-Ag组比较,具有同样明显的杀菌作用,但前者对创面的刺激性更小。结论AgNO3软膏是一种可用于浅Ⅱ、深Ⅱ度烧伤创面的有效、安全的外用药。     

大鼠烫伤创面感染模型的研制

目的 拟建立稳定的大鼠烫伤创面感染模型,以便于进行相关防治研究.方法 (1)取50只SD大鼠,使用恒温恒压烫伤仪,以底面积4.5 cm2、质量0.5kg的80℃圆柱形烫头垂直接触大鼠脊柱左右两侧皮肤,致伤4、6、8、10、12 s(每种致伤时间10只大鼠,左右侧烫伤时间相同)制作烫伤模型.伤后24 h,观察创面大体情况,记录左侧创面愈合时间,取右侧创面组织行组织学观察,根据结果筛选浅Ⅱ度、深Ⅱ度创面致伤时间.(2)另取36只SD大鼠,按随机数字表法分为浅Ⅱ度组、深Ⅱ度组,每组18只,按照前述方法与选定的致伤时间分别制成浅Ⅱ度、深Ⅱ度烫伤创面.伤后即刻在2组大鼠一侧创面分别接种0.1 mL含1×109、1×107、1×105CFU铜绿假单胞菌标准菌株ATCC 27853的菌液(每种菌量6只大鼠),在另一侧创面涂抹等体积生理盐水作为对照.接种细菌后24 h HE染色观察创面炎症反应情况;接种细菌后1、2、3、5、7、14 d进行革兰染色及生化反应鉴定菌种,检测并计算痂下细菌含量;记录2组大鼠创面愈合时间.对数据行t检验.结果 (1)根据大鼠创面愈合时间及组织学检查结果,筛选出烫伤6 s和8 s分别为浅Ⅱ度和深Ⅱ度创面的致伤时间.(2)浅Ⅱ度组大鼠仅接种1×109CFU细菌的创面有少许炎性细胞浸润;深Ⅱ度组接种1×109、1×107CFU细菌创面均有炎性细胞浸润,前者浸润更明显.(3)创面细菌鉴定结果为铜绿假单胞菌.浅Ⅱ度组创面接种各种菌量后14 d内,痂下细菌含量绝大多数低于1×105CFU/g;深Ⅱ度组创面接种1×109 CFU细菌后14 d内,痂下细菌含量均高于1×105CFU/g并呈持续上升趋势.(4)浅Ⅱ度组接种1×109、1×107、1×105 CFU细菌的创面与生理盐水对照创面愈合时间相近(t值分别为1.26、0.29、1.07,P值均大于0.05);深Ⅱ度组接种1×109CFU细菌创面愈合时间[(22.5±1.0)d]较生理盐水对照创面[(19.4±1.6)d]明显延长(t=2.73,P＜0.05).结论 大鼠深Ⅱ度烫伤创面接种1×109 CFU铜绿假单胞菌标准菌株ATCC 27853,可作为感染创面防治研究的实验模型,该模型稳定、重复性较高.

Abstract：

Objective To reproduce a reliable rat model of burn with infection for the study of prevention and treatment of infected wound. Methods ( 1 ) Electrical burn producing apparatus equipped with constant temperature (80 ℃ ) and pressure (0.5 kg) was used to reproduce burn injury (with area of 4.5 cm2 ) on both sides of the back in 50 SD rats for different duration (4, 6, 8, 10, 12 s) , with 10 rats for each burn duration. On post burn day (PBD) 1, gross condition of wounds was observed with naked eyes.Wounds on the left side were used to observe healing time. The wounds on the right side were used for histological observation to determine the depth of injury, and they were classified into superficial and deep partialthickness injury. (2) Another 36 SD rats were divided into A (inflicted with superficial partial-thickness burn, n = 18) and B (inflicted with deep partial-thickness burn, n = 18) groups according to the random number table. Rats in both groups were treated in accordance with method of preliminary experiment. Immediately after burn, 0. 1 mL of liquid containing 1 × 109, 1 × 107, 1 × 105 CFU Pseudomonas aeruginosa (PA) ATCC 27853 was respectively inoculated to the wounds on one side (with 6 rats for each amount) ,while the wounds on the other side were treated with the same volume of normal saline as control. Inflammatory reaction of wounds was examined with HE staining on post inoculation day (PID) 1. On PID 1, 2, 3,5, 7, and 14, the number of subeschar bacteria was respectively counted and the bacteria were identified with Gram stain and biochemical reaction. Wound healing time was recorded. Data were processed with t test. Results (1) Burn for 6, 8 s was respectively identified as injury time resulting in superficial or deep partial-thickness injury according to histological observation and wound healing time. (2) Obvious inflammatory cell infiltration was observed in the wounds in B group which were inoculated with 1 × 107 , 1 ×109 CFU PA, and the infiltration was less marked in A group with inoculation of 1 × 109 CFU PA. (3) The bacteria isolated from wounds of A and B groups was identified as PA. The subeschar bacteria count within PID 14 in A group, in which different amount of PA was inoculated, was mostly less than 1 × 105 CFU/g of tissue, while that in B group in which 1 × 109 CFU PA was inoculated was more than 1 × 105 CFU/g of tissue. (4) There was no obvious difference in wound healing time between wounds inoculated with different amount of PA and wounds treated with normal saline in A group ( with t value respectively 1.26, 0. 29, 1.07,P values all above 0.05 ). Wound healing time of wounds in B group, in which 1 × 109 CFU PA was inoculated, was longer as compared with that treated with normal saline [(22.5 + 1.0) d vs. ( 19.4 + 1.6) d, t =2.73, P ＜0. 05]. Conclusions In rat, deep partial-thickness burn wound inoculated with 1 × 109 CFU PA ATCC 27853 is a reliable model with high reproducibility for the study of infection of burn wound.     

应用表皮生长因子治疗深Ⅱ度烧伤创面的远期临床疗效观察

目的　观察重组人表皮生长因子 (rhEGF)用于深Ⅱ度烧伤创面治疗的远期疗效及安全性。　方法　对 37例烧伤患者进行随机、双盲、同体对照实验 ,每例患者选择一块深Ⅱ度烧伤创面 ,并将其分为面积相近的两部分 ,于伤后第 1天开始分别用单纯等渗盐水 (对照组 )和含rhEGF的等渗盐水 (治疗组 )进行换药治疗。创面愈合后 1、4年时 ,对各患者进行院外随访 ,采用改良温哥华瘢痕测量法 ,评价上述受试创面愈合后的瘢痕指数 (SI)。　结果　 1年后随访时 ,治疗组SI为 7.19± 1.6 7,明显小于对照组 8.92± 1.78(P <0 .0 1) ;4年后随访时 ,治疗组SI为 6 .12± 1.5 4 ,明显小于对照组 8.0 9± 1.81(P <0 .0 1)。所有受试创面均无肿瘤形成、癌变等并发症发生。　结论　外用rhEGF治疗深Ⅱ度烧伤创面 ,能明显减少后期瘢痕的形成 ,远期疗效和安全性较好。     

CGF在多种类型创面修复中的临床应用

目的:探讨CGF(浓缩生长因子)在多种类型创面修复中的临床应用价值。方法:30例创面患者,随机分为CGF组与对照组,两组各包括6例慢性溃疡,5例皮肤软组织坏死,4例浅Ⅱ度伴部分深Ⅱ度烧伤,对照组采用清创去除坏死组织、抗生素抗感染、活血化瘀、换药等常规处理,CGF组在上述常规治疗的基础上同时行液态CGF注射和(或)湿敷及凝胶态CGF膜覆盖和(或)填塞治疗。运用SPSS 19.0软件进行统计学分析,对比两组创面愈合时间及瘢痕外形满意度。结果:CGF组慢性溃疡(14.83±2.93)d痊愈,对照组(32.00±3.58)d痊愈;CGF组皮肤软组织坏死(7.40±1.34)d痊愈,对照组(16.80±2.39)d痊愈;CGF组浅Ⅱ度伴部分深Ⅱ度烧伤9d痊愈,对照组(18.75±2.87)d痊愈。所有CGF组创面愈合时间均短于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。CGF组术后外形总体满意率为100.00%(15/15),对照组为53.33%(8/15)。结论:不同性状CGF联合应用能有效促进创面愈合,加快创面愈合速度,提高创面愈合质量,控制感染,减轻瘢痕形成,且制备简单,操作便捷,在临床创面修复中具有很高的应用价值及前景。     

局部应用胰岛素对烫伤大鼠创面愈合的影响

目的观察局部应用小剂量胰岛素对烫伤大鼠创面愈合的影响,探讨其可能的作用机制.方法制作深Ⅱ度烫伤大鼠模型.部分大鼠创面下浸润注射0.1、1.0 U胰岛素,分别设为B、C组;以创面下浸润注射等渗盐水(A组)和腹部皮下注射0.1 U胰岛素(D组)的烫伤大鼠作为对照.记录各组创面愈合时间,伤后3 d起隔日计算A、B、C组的创面愈合百分率.观察各组创面愈合后的组织形态学改变,采用流式细胞仪对各组创面表皮细胞进行细胞周期分析,并测定血糖浓度的变化. 结果A、B、C、D组创面愈合时间分别为(24.57±5.19)、(18.36±4.12)、(21.46±2.97)、(24.50±1.05)d,B组较其他3组明显缩短(P<0.01).伤后5、9、11、13、15、17、19 d B组创面愈合率均明显高于A组,且伤后17 d时明显高于C组(P<0.05～0.01).组织形态学观察可见A组表皮层薄,钉脚数量少,真皮层内多见纤维细胞;B、C组表皮层增厚,钉脚数量多,真皮层内多见成纤维细胞.B组伤后4 d S期细胞比例明显高于A组(P<0.01);B组伤后4、5 d G2-M期细胞比例均明显高于A、C组(P<0.05～0.01).烫伤后24 h A组血糖波动在3.42～4.62 mmol/L;B组血糖变化规律与A组相似;C、D组注射后1 h血糖明显降低(P<0.01),注射后4 h逐渐恢复正常.结论局部应用小剂量胰岛素能明显地促进烫伤大鼠创面愈合,胰岛素可加速修复细胞的增殖分裂可能是其作用机制之一.     

负压封闭引流治疗小鼠创面铜绿假单胞菌感染的效果及机制

目的 观察VSD对感染创面中铜绿假单胞菌生长的影响,并探讨其可能机制。 方法 选取健康成年雄性C57BL/6小鼠40只,按照随机数字表法分为对照组和治疗组,每组20只。无菌条件下切除各小鼠背部1 cm×1 cm的全层皮肤,将细菌荧光素酶目的基因luxCDABE标记的野生型铜绿假单胞菌菌株PAO1 -lux涂抹于创面,包扎创面24 h,制成铜绿假单胞菌感染小鼠模型。治疗组小鼠创面行VSD治疗（负压为-16.625 kPa）,对照组创面常规换药。分别于治疗前和治疗24 h时,用小动物活体成像系统检测2组小鼠创面PAO1-lux荧光强度,激光多普勒血流成像仪检测创面血流量,以实时荧光定量RT-PCR检测创缘组织IL-1β、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达水平。观察治疗24 h时2组小鼠创缘组织病理学特点。对实验数据行t检验。 结果(1)治疗前,治疗组小鼠创面PAO1 -lux荧光强度与对照组相近(t=0.03,P=0.98);治疗24 h时,治疗组的荧光强度为(2.69±0.75)光子·秒-1·厘米-2·单位角度-1(photons· s-1- cm-2·sr-1),明显低于对照组的(5.18±0.96)photons·s-1·cm-2·sr-1,t =3.54,P=0.02。(2)治疗前,治疗组小鼠创面血流量与对照组相似(t =0.50,P=0.64);治疗24 h时,治疗组创面血流量为(96±9)灌注单位,明显高于对照组的(70±11)灌注单位,t=3.13,P=0.04。(3)治疗前,2组小鼠创缘皮肤组织中IL-1β、VEGF mRNA表达水平接近（t=0.19,P=0.86;t=0.07,P=0.95）;治疗24h时,治疗组IL-1β、VEGF mRNA表达水平分别为4.72±0.37、2.68±0.39,均明显高于对照组的2.24±0.50、1.22±0.13,t值分别为6.90、6.12,P值均为0.00。(4)治疗24 h时,治疗组创缘皮肤组织内炎性细胞浸润数量较对照组增加约77％。 结论 与常规换药相比,VSD治疗在小鼠全层皮肤缺损早期即能明显降低创面铜绿假单胞菌含量。其机制可能与增加创面局部血流量、提高创面组织炎性细胞数量、促进IL-1β和VEGF的mRNA表达有关。     

不同敷料对深度烧伤创面植皮后愈合情况的影响对比

目的:对比分析不同敷料对深度烧伤创面植皮后愈合情况的影响。方法:选取我院于2011年5月～2012年5月收治的69例深度烧伤并接受创面植皮的患者,选择患者身上2处大小为1%的邻近创面,将创面内层覆盖物为聚酰胺薄纱的所有创面作为实验组,内层覆盖物为凡士林油纱的创面作为对照组。对比分析两组术后的创面蒸发量、不同时间点的创面愈合率、创面愈合时间及换药时的疼痛情况。结果:术后5天,实验组内层敷料表面的蒸发量要明显少于对照组[(25.3±6.1)ml.h-.1m-2vs(35.8±4.9)ml.h-.1m-2t=11.147 P<0.05],所有患者内层敷料表面的蒸发量要显著少于裸露创面(P<0.05),但高于正常皮肤表面(P<0.05);实验组术后10天,15天及20天的创面愈合率均高于对照组[(81.2±19.5,95.3±9.4,99.8±0.4)%vs(72.4±7.6,84.6±10.4,97.2±2.3)%t=3.493,6.340,9.251 P<0.05],且创面完全愈合时间要显著短于对照组[(14.1±2.0)天vs(17.2±2.5)天t=8.043 P<0.05];实验组术后5天换药及揭除内层敷料时的VAS评分要明显低于对照组[(3.3±0.7,5.0±0.6)vs(4.9±0.4,7.9±0.5),t=16.485,30.843 P<0.05]。结论:相比与传统的凡士林油纱,聚酰胺薄纱更有利于深度烧伤创面植皮后的愈合,且减轻了患者换药时的疼痛,值得推广。     

几种深Ⅱ度烧伤创面处理方法的回顾及改善创面微循环的初步实验研究

目的回顾性分析几种深Ⅱ度烧伤创面的修复方法,探讨改善创面微循环对创面愈合的意义. 方法 (1)对于笔者单位烧伤患者的深Ⅱ度创面,应用削痂疗法治疗614例、磨痂疗法治疗32例、清创后异体皮覆盖86例、外用磺胺嘧啶银后创面暴露1 836例、外用中药京万红烫伤膏包扎治疗408例.统计、分析各种疗法的治疗效果.(2)制作大鼠深Ⅱ度烫伤模型.伤后5 min内分别由其尾静脉注入等渗盐水(对照组,10只)、巴曲酶(治疗组,10只),创面均外用磺胺嘧啶银.测定两组大鼠伤前及伤后0.5-72.0 h的创面皮肤血流灌注单位,计算其伤后14、18 d的创面愈合率、收缩率及创面愈合时间.用组织学方法观察两组大鼠创面愈合后的皮肤毛囊数. 结果 (1)削痂疗法术后2-3周创面愈合,其中烧伤总面积50%～79%TBSA的患者治愈率94.8%,总面积80%～98%TBSA者治愈率93.4%.磨痂疗法磨痂+异体皮覆盖术后(13.8±2.1)d创面愈合,无瘢痕形成.清创后异体皮覆盖其中82例患者术后(18.0±2.3)d创面愈合.外用磺胺嘧啶银后暴露其中1 658例患者用药后(26.0±3.2)d痂下愈合.外用京万红烫伤膏后包扎患者多有细菌感染,其中下肢创面愈合时间为(26.0±2.8)d.(2)治疗组大鼠伤后2.0-72.0 h创面局部血流灌注单位均明显高于对照组(P<0.01).伤后14、18 d,治疗组创面愈合率明显高于对照组(P<0.01),但两组创面收缩率接近(P>0.05).治疗组创面愈合时间短于对照组(P<0.01).伤后30 d,对照组大鼠真皮层中残存少量毛囊,数量明显少于治疗组(P<0.01). 结论深Ⅱ度烧伤后早期采用削痂、磨痂或清创后覆盖异体皮的方法处理创面,可减轻感染、缩短疗程、提高治愈率和愈合质量.使用巴曲酶可改善深Ⅱ度烧伤创面微循环,加快愈合速度.     

糖基化终末产物对糖尿病大鼠烧伤创面愈合的影响

目的 了解糖基化终末产物(AGE)蓄积对糖尿病大鼠烧伤创面愈合的影响. 方法 将75只SD大鼠按完全随机化方法 分为对照组、糖尿病组及氨基胍干预组,每组25只.将大鼠造成深Ⅱ度烫伤(以下称烧伤)后,后2组制作成糖尿病模型,氨基胍干预组给予管饲氨基胍100 mg·kg~(-1)·d~(-1).于伤后0(伤后当天)、3、7、14、21 d处死大鼠.描取创面形状,并取全层皮肤组织待测.同时取大鼠背部表皮行KC培养及鉴定.观察各组创面愈合率及皮肤组织糖含量,创面组织形态学变化,皮肤组织中AGE分布.观察不同浓度AGE对KC增殖,凋亡的影响,以仅加表皮细胞培养液的KC为对照组. 结果 伤后7、14、21 d糖尿病组创面愈合率显著低于对照组(P<0.01),而氨基胍干预组却明显高于前2组(P<0.01).糖尿病组皮肤组织含糖量为(2.62±0.19)mmol/g,氨基胍干预组为(2.58±0.07)mmol/g,均高于对照组(1.04±0.09)mmol/g(P<0.01).对照组大鼠创面炎性细胞浸润强烈而局限,坏死组织形成、脱落及时,创面愈合无明显延迟;糖尿病组大鼠炎性细胞浸润缓慢、弥散而持久,坏死组织形成、脱落较迟,创面愈合明显延迟;氨基胍干预组大鼠炎性细胞浸润及时、强烈,坏死组织形成、脱落以及创面愈合时间较糖尿病组早.对照组中有少量散在的AGE沉积,糖尿病组AGE蓄积显著增加,而氨基胍干预组AGE含量显著降低.AGE作用48 h后,KC的增殖显著降低,呈现浓度依赖性,各剂量AGE干预组的吸光度值均低于对照组(P<0.01).100μg/mLAGE干预组KC早期凋亡连接素V阳性细胞比例为(15.1±2.3)%,明显高于对照组[(11.2±1.2)%,P<0.05];终未期凋亡双阳性细胞比例为(14.3±3.5)%,与对照组(15.2±2.4)%比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 高血糖可能是通过AGE蓄积,抑制KC等修复细胞增殖导致创面难愈;减少AGE蓄积,可改善糖尿病创面愈合延迟现象.