外敷氨基胍霜剂对糖尿病大鼠皮肤组织的影响

目的 观察外敷氨基胍霜剂对糖尿病大鼠皮肤组织晚期糖基化终末产物(AGE)形成、KC细胞增殖及氧化应激的影响.方法 将硬脂酸、液状石蜡、凡士林、羊毛脂、肉豆蔻酸异丙酯、甘油、50 g/L尼泊金醇、盐酸氨基胍等试剂按一定比例混合制成氨基胍霜剂,以不含有氨基胍的霜剂为基质.取健康大鼠背部皮肤,分别用5、10 g/L氨基胍霜剂和5 g/L氨基胍+10g/L氮酮霜剂处理,于用药后2、4、7、10、12、24 h测定药物透皮效果.将30只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组6只、糖尿病组8只、氨基胍治疗组8只、基质治疗组8只.后3组大鼠腹腔注射链脲佐菌素65 mg/kg,诱导糖尿病模型;对照组大鼠注射0.05 mmol/L柠檬酸缓冲液.注射1周后,正常对照组与糖尿病组大鼠不行任何治疗,氨基胍治疗组与基质治疗组大鼠背部分别连续外用10 g/L氨基胍霜剂与基质治疗4周.取各组皮肤组织,胶原提取液荧光强度检测法测定AGE含量,流式细胞仪分析表皮KC周期,检测氧化应激相关指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、总抗氧化能力、髓过氧化物酶(MPO)含量.对实验数据行t检验.结果 10 g/L氨基胍霜剂透皮效果优于5g/L氨基胍和5 g/L氨基胍+10 g/L氮酮的霜剂.1只基质治疗组大鼠未诱导成功.建模后4周,糖尿病组与氨基胍治疗组大鼠分别死亡4只和1只.糖尿病组大鼠皮肤组织AGE含量为每毫克羟脯氨酸(OHP)中(36.8±2.6)U,明显高于正常对照组的每毫克OHP中(24.6±2.7)U(t=7.2,P＜0.01);氨基胍治疗组AGE含量为每毫克OHP中(28.6±3.7)U,明显低于糖尿病组(t=-3.9,P＜0.05);基质治疗组AGE含量[每毫克OHP中(32.2±5.2)U]与糖尿病组相近(t=1.6,P＞0.05).糖尿病组大鼠S期KC比例为(5.3±0.6)%,低于正常对照组的(7.6±0.9)%(t=4.50,P＜0.01);氨基胍治疗组大鼠S期和G2/M期KC比例均明显高于糖尿病组(t值分别为6.80、3.17,P值均小于0.01);基质治疗组大鼠S期KC比例[(9.2±1.5)%]显著高于糖尿病组(t=4.90,P＜0.01).糖尿病组大鼠皮肤组织氧化应激指标含量均高于正常对照组,其中SOD和MPO差异有统计学意义(t值分别为4.4、3.7,P值均小于0.05);氨基胍治疗组各氧化应激指标含量均较糖尿病组降低,其中SOD含量显著低于糖尿病组(t=-1.4,P＜0.05);基质治疗组MDA、MPO含量显著低于糖尿病组(t值分别为2.6、2.9,P值均小于0.05).结论 外用氨基胍霜剂可以在一定程度上阻碍糖尿病大鼠皮肤组织中AGE的形成,改善表皮KC细胞增殖能力,适当降低皮肤组织氧化应激状态;单用霜剂基质也可适当降低皮肤组织氧化应激状态.

Abstract：

Objective To investigate the effects of aminoguanidine cream on the proliferation of keratinocytes (KC), content of advanced glycosylation end products (AGE) and oxidative stress in skin tissue of rats with diabetes. Methods Stearic acid, liquid paraffin, vaseline, lanolin, isopropyl myristate fat,glycerol, 50 g/L alcohol paraben, aminoguanidine hydrochloride etc. were mixed in certain proportion to make aminoguanidine cream, and cream without aminoguanidine was used as matrix. The dorsal skin of normal rats were harvested and treated by aminoguanidine cream with dose of 5, 10 g/L, or 5 g/L together with 10 g/L azone. The transdermal effect was respectively measured at post treatment hour 2, 4, 7, 10, 12,24. Thirty SD rats were divided into normal control(NC, n = 6) , diabetes(D, n = 8) , aminoguanidine cream-interfered(AI, n = 8), matrix cream-interfered groups(MI, n = 8) according to the random number table. Diabetes was reproduced by intraperitoneal injection of STZ (65 mg/kg) in rats of D, AI, and MI groups, and rats in NC group were injected with 0. 05 mmol/L citrate buffer as control. One week later, dorsal skin of rats in AI and MI groups were respectively treated with 10 g/L aminoguanidine cream and matrix cream by external use for 4 weeks. AGE content was determined with fluorescence detection from skin collagen extract. KC cell cycle was detected by flow cytometry. Skin tissue specimens were obtained for determination of levels of superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), myeloperoxidase (MPO), and total antioxidant capacity. Data were processed with t test. Results Transdermal effect of aminoguanidine cream with dose of 10 g/L was better than that with 5 g/L or 5 g/L + 10 g/L azone cream. One rat was not induced successfully in MI group. Four weeks after model reproduction, 4 rats died in D group and 1 rat died in AI group. The AGE content in D group was obviously higher than that in NC group [(36.8 ± 2.6),(24. 6 ±2.7) U per milligram hydroxyproline, respectively, t = 7.2, P ＜0. 01], and that in AI group [(28.6 ±3.7) U per milligram hydroxyproline] was also lower as compared with that in D group(t = -3.9,P ＜ 0.05). There was no significant difference in AGE content between MI [( 32.2 ± 5.2) U per milligram hydroxyproline] and D groups(t = 1.6, P ＞ 0. 05). The percentage of KC in S phase was obviously lower in D group than in NC group [(5.3 ±0.6)%, (7.6±0.9)%, respectively, t =4.50, P ＜0. 01], while that in MI group [(9. 2 ± 1.5) %] was higher as compared with that in D group(t = 4.90, P ＜ 0. 01). It was more higher in AI group than in D group on KC percentage in S and G2/M phase (with t value respectively 6.80, 3.17, P values all below 0. 01). The oxidative stress indexes of skin tissue in D group were all higher than those in NC group, in which levels of MPO and SOD showed statistical difference(with t value respectively 4.4, 3.7, P values all below 0. 05). The oxidative stress indexes were all lower in AI group than in D group, especially in SOD level(t = -1.4, P ＜0. 05). Levels of MAD, MPO in MI group were significantly lower than those in D group(with t value respectively 2.6, 2.9, P values all below 0. 05).Conclusions Aminoguanidine cream can promote KC proliferation and appropriately reduce oxidative stress through inhibiting AGE formation to a certain extent in skin tissue of rats with diabetes. Signal use of matrix cream can also reduce oxidative stress in skin tissue of rats with diabetes.     

晚期糖基化终末产物与其受体对糖尿病创面氧化应激反应的影响

目的 观察糖尿病患者皮肤和创面中晚期糖基化终末产物(AGE)的蓄积和炎症反应,并结合体外干预实验推测两者之间可能存在的关系. 方法 采集10例2型糖尿病患者(糖尿病组)和12例非糖尿病患者(非糖对照组)的皮肤和创面组织标本,部分于光学显微镜下观察胶原排列、细胞分布(HE染色),AGE及其受体(RAGE)表达(免疫组织化学染色);部分匀浆后采用ELISA法检测丙二醛含量.体外采集、分离健康人外周血中性粒细胞,并分为正常对照组(添加RPMI-1640培养液培养)、低浓度干预组、中浓度干预组和高浓度干预组,3个干预组分别在RPMI-1640培养液中添加AGE修饰的人血清白蛋白,其中AGE的浓度依次为0.315、0.625、1.250 mg/mL;噻唑蓝法检测细胞存活率,荧光探针二氢二氯荧光黄双乙酸钠测定细胞内活性氧水平.对数据进行t检验. 结果 与非糖对照组比较,糖尿病组皮肤组织中胶原萎缩,排列紊乱;创面组织中炎性细胞弥散分布,胶原排列稀疏紊乱.糖尿病组皮肤组织中AGE和RAGE表达均多于非糖对照组;2组创面组织中RAGE呈阳性表达的细胞数量均多于所在组皮肤组织,以糖尿病组更显著,其创面内可见大量RAGE呈阳性表达的炎性细胞.糖尿病组患者皮肤和创面组织中每毫克蛋白丙二醛含量分别为(6 3±1.0)、(7.1±2.4)nmol,均明显高于非糖对照组相应组织[(2.9±1.0)、(3.6±1.4)nmol,t值分别为8.017、4.349,P ＜0.05或P＜0.01].与正常对照组[(34±5)％]比较,低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组中性粒细胞存活率均明显上升[(59±8)％、(77±5)％、( 67±6)％,t值分别为7.195、14.890、11.130,P＜0.05或P＜0.01].与正常对照组(0.58±0.06)比较,低浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组中性粒细胞内活性氧水平均升高(1.67±0.14、2.13±0.17、3 48±0.48,t值分别为20.195、24.905、16.864,P＜0.05或P＜0.01). 结论 异常的氧化应激水平导致糖尿病皮肤具有异常的创伤修复起点,创面愈合过程中AGE-RAGE效应是影响糖尿病创面氧化应激水平的重要因素.     

L-精氨酸对糖尿病烧伤创面促愈作用的研究

目的探讨精氨酸对糖尿病烧伤创面修复的影响及其可能的机制. 方法 SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、糖尿病对照组(B组)、糖尿病精氨酸干预组(C组)和糖尿病甘氨酸对照组(D组).糖尿病模型通过腹腔注射STZ建立,然后喂养8周后给予深Ⅱ度烫伤,于伤后0、1、3、7、14、21 d时相点对创面愈合面积、组织形态学改变、创面组织糖含量、羟脯氨酸(OHP)含量及局部组织释放转化生长因子-β1(TGF-β1)含量进行检测. 结果应用精氨酸后,皮肤组织糖含量降低,创面局部炎症反应出现较早,坏死组织脱落及上皮匍行提前,OHP含量、组织释放TGF-β1能力均增加,创面愈合明显加快(P﹤0.05～0.01). 结论 L-精氨酸可通过降低皮肤组织糖含量及增加TGF-β1的合成和释放,促进糖尿病烧伤创面愈合.     

糖尿病大鼠皮肤组织糖代谢紊乱与皮肤神经病变相关性研究

目的 研究糖尿病皮肤组织糖代谢紊乱与皮肤神经病变的关系,进一步探讨神经病变与创面难愈的机制.方法80只SD大鼠按随机抽签法分为正常对照组、糖尿病对照组、氨基胍干预组和胰岛素干预组,每组20只.后3组通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型.诱导后1周,氨基胍干预组胃管饲人氨基胍100 mg·kg-1·d-1,胰岛素干预组皮下注射胰岛素将血糖控制在正常范围.分别于注射STZ后2、4、8周,观察大鼠后肢足掌部机械痛和热痛阈值变化并获取大鼠足掌部皮肤标本.检测皮肤组织中糖含量、晚期糖基化终末产物(AGE)含量、神经纤维变化及神经肽P物质和降钙素基因相关肽(CGRP)含量.对数据进行t检验.结果糖尿病对照组大鼠机械痛、热痛阈值在注射STZ后2周时分别为(6.3±1.5)g、(6.0±0.9)s,明显低于正常对照组的(13.0±3.2)g、(10.3±1.2)s,t值分别为2.71、3.42,P值均小于0.05;皮肤组织糖和AGE含量均明显增加,8周时各为(2.85±0.33)mg/g、(31.7±3.2)U/mg,明显高于正常对照组[(0.82±0.22)mg/g、(22.2±1.9)U/mg,t值分别为1.65、6.47,P值均小于0.01];有髓神经纤维髓鞘水肿变性、轴突被挤压,无髓神经纤维水肿空泡化、微丝微管排列紊乱;P物质含量2周时降至低谷[(16.8±3.4)pg/g],明显低于正常对照组[(28.5±5.0)pg/g,t=2.42,P＜0.01];CGRP含量变化不明显.与糖尿病对照组比较,氨基胍干预组大鼠皮肤组织糖含量无明显改变,8周时AGE含量明显减少[(27.2±1.4)U/mg,t=3.38,P＜0.05];胰岛素干预组糖含量和AGE含量均明显减少,8周时分别为(1.42±0.38)mg/g、(23.6±1.3)U/mg,t值分别为1.74、8.17,P＜0.05或P＜0.01.2个干预组P物质下降幅度减轻,低谷滞后;CGRP含量无明显变化.结论高糖和AGE蓄积是导致糖尿病皮肤神经病变的重要原因,使糖尿病皮肤具有不同于正常皮肤的创伤起点,可在伤后持续影响创面愈合进程最终导致创面难愈.氨基胍和胰岛素可以减少糖尿病皮肤组织糖含量和AGE含量,改善皮肤神经病变.

Abstract：

Objective To analyze the relationship between cutaneous glycometabolic disorders and cutaneous neuropathy in diabetic rats, and to look for the mechanism of neuropathy and impaired wound healing. Methods Eighty male SD rats were randomly divided into the normal control group (NC, n =20 ), diabetic group (D, n = 20 ), aminoguanidine-interfered group (AⅠ, n = 20 ), and insulin-interfered group ( Ⅱ, n = 20) by drawing lots. Diabetes was reproduced in rats of D, AⅠ, and Ⅱ groups with intraperoguanidine, while rats in Ⅱ group were subcutaneously injected with insulin for satisfactory control of blood glucose. Changes in mechanical and heat pain thresholds of pad of hind limb were measured at post injection week ( PIW ) 2, 4, 8. Skin specimens were collected during PIW 2-8 from pads for determination of contents of glucose, advanced glycation end product ( AGE), substance P ( SP), calcitonin gene-related peptide ( CGRP), and observation of distribution and ultrastructure of skin nerve fibers. Data were processed with t test. Results The mechanical and heat pain thresholds in D group at PIW 2 [(6.3 ± 1.5) g, (6.0 ±0.9) s, respectively] were obviously lower than those in NC group [(13.0 ±3.2) g, (10.3 ± 1.2) s,with t value respectively 2.71, 3.42, P values all below 0.05]. Contents of glucose and AGE in skin tissue in D group were significantly increased when compared with those in NC group, especially at PIW 8 [(2.85 ±0.33) mg/g, (31.7±3.2) U/mg of hydroxyproline vs. (0.82 ±0.22) mg/g, (22.2 ±1.9) U/mg of hydroxyproline, with t value respectively 1.65, 6.47, P values all below 0.01]. The myelinated nerve fibers were edematous and degenerated, with axons compressed, while the unmyelinated nerve fibers were vacuolated, with microfilament and microtubule disorderly arranged. Content of SP in skin tissue in D group was lower as compared with that in NC group, especially at PIW 2 [(16.8 ±3.4) pg/g vs. (28.5 ±5.0) pg/g,t = 2.42, P ＜ 0.01]. There was no obvious difference in content of CGRP between NC and D groups, and also in content of glucose in skin between D and AⅠ groups. Compared with those in D group, content of AGE in AⅠ group at PIW 8 was decreased markedly [(27.2 ± 1.4) U/mg of hydroxyproline, t = 3.38, P ＜0.05]; contents of glucose and AGE in Ⅱ group at PIW 8 were significantly decreased [( 1.42 ± 0.38 ) mg/g,(23.6 ± 1.3 ) U/mg of hydroxyproline, with t value respectively 1.74, 8.17, P ＜ 0.05 or P ＜ 0. 01].Compared with that in D group, contents of SP in AⅠ and Ⅱ groups were increased, with a delay in time of trough value. Content of CGRP showed no obvious difference among D, AⅠ, and Ⅱ groups. Conclusions High glucose and accumulation of AGE are key mediators of cutaneous neuropathy and impaired wound healing in diabetes mellitus, which confirms that diabetic wound takes an atypical footing during wound repairing. Aminoguanidine and insulin can reduce contents of glucose and AGE in diabetic skin tissue, and ameliorate diabetic cutaneous neuropathy.     

血竭生肌膏对糖尿病大鼠皮肤溃疡VEGF、PCNA表达的影响

目的:探讨血竭生肌膏对糖尿病大鼠皮肤溃疡的修复作用以及对创面组织中血管内皮生长因子(VEGF)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:建立糖尿病大鼠背部皮肤溃疡模型,随机分为正常对照组、模型组、中药治疗组和西药治疗组,后两组分别给予血竭生肌膏和重组人表皮生长因子(EGF)外涂创面,每日1次,共4周。结果:4周后,中药治疗组创面愈合明显优于西药治疗组及模型组,正常对照组创面基本愈合。模型组VEGF的表达为0.07367±0.010690,低于西药治疗组(0.07467±0.014264)和中药治疗组(0.07567±0.006532),且中药治疗组溃疡创面VEGF的表达明显高于西药治疗组(P0.01)。模型组PCNA的表达为0.08067±0.008262,低于西药治疗组(0.11583±0.010553)和中药治疗组(0.12167±0.009668),且中药治疗组溃疡创面PCNA的表达明显高于西药治疗组(P0.01)。结论:血竭生肌膏通过提高糖尿病大鼠溃疡创面VEGF的表达,促进新生血管形成,同时促进创面组织细胞增殖,加快糖尿病溃疡创面愈合。     

晚期糖基化终末产物对中性粒细胞生物学行为的影响

目的 观察晚期糖基化终末产物(AGE)对中性粒细胞生物学行为的影响,了解皮肤组织中AGE蓄积与糖尿病愈合中异常炎性反应的关系. 方法 体外分离培养SD大鼠中性粒细胞.在细胞悬液中加入不同的刺激物,根据所加物质分为:对照组,加入RPMI 1640培养液;A组,加入0.315 mg/mL AGE+RPMI 1640;B组,加入0.625 mg/mL AGE+RPMI 1640;C组,加入1.250mg/mL AGE+RPMI 1640.噻唑蓝法检测中性粒细胞活力;反转录-PCR法检测L-选择素mRNA表达;酶联免疫吸附测定法检测中性粒细胞弹性蛋白酶释放量;二氢二氯荧光黄二醋酸盐法检测中性粒细胞内活性氧水平. 结果 A、B、C组中性粒细胞活力(0.320±0.030、0.380±0.020、0.290±0.010)均高于对照组(0.170±0.040,P＜0.05).各实验组L-选择素mRNA表达水平(A组0.95±0.08、B组1.36±0.27、C组0.50±0.26)、弹性蛋白酶释放量(A组1.98±0.43、B组2.50±0.43、C组2.01±0.18)、活性氧水平(A组1.64±0.20、B组2.16±0.26、C组3.26±0.75)也均高于对照组(此3项指标分别为0.36±0.26、0.91±0.21、0.72±0.15,P＜0.05). 结论 AGE能增强中性粒细胞活力,使细胞的多种生物学行为发生改变,这可能是糖尿病异常炎性反应的主要原因之一.     

糖尿病大鼠深Ⅱ度烫伤创面新生血管形成障碍的研究

目的 了解有糖尿病基础的机体烫伤后,创面新生血管化程度与创面难以愈合的关系. 方法 将SD大鼠分成对照组和以链脲佐菌素诱导的糖尿病组,每组50只.2组大鼠均造成20%TBSA的深Ⅱ度烫伤,于伤后即刻及1、3、7、14和21 d取创面组织,行组织学观察评分,并计算创面愈合率;同时采用免疫荧光双标记法检测创面组织的新生血管化程度及血管内皮细胞数量. 结果 糖尿病组大鼠创面组织评分及创面愈合率均低于对照组;糖尿病组大鼠各时相点新生血管化程度较对照组明显降低(伤后7 d,糖尿病组为12.00±1.40、对照组为60.00±3.00,P＜0.01).2组大鼠各时相点创面血管内皮细胞数量差异不明显,但糖尿病组大部分血管内皮细胞未形成功能性微血管. 结论糖尿病深Ⅱ度烫伤难愈创面虽血管内皮细胞增殖活跃但仍血供不良,其机制与功能性微血管形成障碍有关.     

通过抑制c-Myc 过多的氧连接氮乙酰葡萄胺糖基化修饰缓解角质形成细胞功能障碍加速糖尿病创面愈合

糖尿病足溃疡是糖尿病的主要并发症之一, 其主要特征是延迟愈合。研究表明表皮KC功能障碍在糖尿病创面愈合延迟中起关键作用, 而c-Myc蛋白及其氧连接氮乙酰葡萄胺糖基化修饰(O-GlcNAc)与KC功能障碍的关系尚不清楚。上海交通大学医学院附属瑞金医院刘琰教授团队近期于《Burns & Trauma》发文《Inhibiting Hyper-O-GlcNAcylation of c-Myc accelerate diabetic wound healing by alleviating keratinocyte dysfunction》, 该研究观察到糖尿病患者创面边缘KC的增殖和分裂活跃, 迁移和分化降低;在糖尿病大鼠创面边缘KC和30 mmol/L葡萄糖培养中的人永生化表皮细胞HaCaT中也观察到前述同样的现象。进一步研究显示KC中c-Myc的表达增加, c-Myc的高表达促进了HaCaT的增殖, 抑制了其迁移和分化, 通过抑制c-Myc促进了大鼠糖尿病创面愈合。30 mmol/L葡萄糖通过增加c-Myc的O-GlcNAc使c-Myc蛋白更稳定, 抑制O-GlcNAc缓解了KC...     

自拟苍肤汤熏洗坐浴促进肛裂术后伤口愈合的临床观察

目的 观察自拟苍肤汤坐浴对肛裂手术后创面愈合的效果.方法 将182例肛裂术后患者随机分成两组,其中治疗组采用自拟苍肤汤熏洗坐浴.对照组采用pp粉坐浴.结果 治疗组愈合时间为平均(14.51±2.4)d,对照组平均(16±3.5)d,治疗组愈合时间明显短于对照组(p<0.01);治疗组创面愈合速度明显快于对照组,差异显著 (P<0.01);治疗组创面红活率明显高于对照组(P<0.01).结论 中药坐浴对促进肛裂术后创面愈合有明显疗效.     

富血小板纤维蛋白联合脂肪干细胞对糖尿病小鼠皮肤创面愈合的影响研究

目的:评价富血小板纤维蛋白(platelet-richfibrin,PRF)和脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)对于糖尿病小鼠皮肤创面愈合的作用。方法:在18只糖尿病裸鼠和6只正常裸鼠上制成48个皮肤创面,将糖尿病裸鼠创面随机分为PRF-ADSCs组、PRF组、糖尿病对照组,观察各组创面愈合情况,并行组织病理学检查及CD31表达检测。结果:PRF存在大量纤维蛋白聚集并形成疏松的立体网络结构,在交界处有大量血小板和白细胞聚集。在接种ADSCs并培养1周后的PRF中,可见大量ADSCs细胞粘附在PRF的纤维蛋白网络中。伤后3、7、10、14d,PRF-ADSCs组创面愈合率分别为(35.2±4.2)%、(76.2±5.0)%、(88.3±5.0)%、(97.6±2.7)%,PRF组为(28.0±5.0)%、(62.0±5.2)%、(81.0±3.7)%、(92.3±3.2)%,糖尿病对照组为(16.0±2.7)%、(26.1±4.8)%、(60.9±7.7)%、(72.0±8.1)%,正常对照组为(31.0±4.0)%、(64.8±4.2)%、(83.0±3.5)%、(98.5±2.7)%,PRF-ADSCs组愈合率优于其它3组,差异均具有统计学意义(P0.01)。PRF-ADSCs组创面愈合时间为(14.75±0.45)d,PRF组为(15.33±0.49)d,糖尿病对照组创面愈合时间为(17.67±0.49)d,正常对照组创面愈合时间为(14.42±0.51)d,PRFADSCs组和正常对照组的愈合时间优于其余2组(P0.01)。伤后14dPRF-ADSCs组、PRF组和正常对照组创面毛细血管和组CD31阳性细胞计数多于糖尿病对照组(P0.01)。结论:应用PRF联合ADSCs治疗糖尿病小鼠皮肤创面,可以显著促进创面愈合,且效果优于单纯使用PRF。     

CGF在多种类型创面修复中的临床应用

目的:探讨CGF(浓缩生长因子)在多种类型创面修复中的临床应用价值。方法:30例创面患者,随机分为CGF组与对照组,两组各包括6例慢性溃疡,5例皮肤软组织坏死,4例浅Ⅱ度伴部分深Ⅱ度烧伤,对照组采用清创去除坏死组织、抗生素抗感染、活血化瘀、换药等常规处理,CGF组在上述常规治疗的基础上同时行液态CGF注射和(或)湿敷及凝胶态CGF膜覆盖和(或)填塞治疗。运用SPSS 19.0软件进行统计学分析,对比两组创面愈合时间及瘢痕外形满意度。结果:CGF组慢性溃疡(14.83±2.93)d痊愈,对照组(32.00±3.58)d痊愈;CGF组皮肤软组织坏死(7.40±1.34)d痊愈,对照组(16.80±2.39)d痊愈;CGF组浅Ⅱ度伴部分深Ⅱ度烧伤9d痊愈,对照组(18.75±2.87)d痊愈。所有CGF组创面愈合时间均短于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。CGF组术后外形总体满意率为100.00%(15/15),对照组为53.33%(8/15)。结论:不同性状CGF联合应用能有效促进创面愈合,加快创面愈合速度,提高创面愈合质量,控制感染,减轻瘢痕形成,且制备简单,操作便捷,在临床创面修复中具有很高的应用价值及前景。     

蜂胶对糖尿病大鼠创面愈合的影响

目的：观察蜂胶对四氧嘧啶造成的糖尿病大鼠伤口愈合的影响。方法：健康Wistar大鼠80只,随机分为对照组（n=36）和模型组（n=44）。2组又各随机分为生理盐水处理组和蜂胶处理组。模型组大鼠尾静脉注射四氧嘧啶制成糖尿病模型。4周后所有动物背部两侧制备直径为1.8cm的圆形全皮层伤口。生理盐水处理大鼠用生理盐水冲洗伤口,蜂胶处理大鼠在伤口表面滴加4滴蜂胶。伤口均用无菌纱布固定包扎,每日换药1次。观察各组的创面愈合时间,3、7、14、21d的伤口愈合率,于伤后3、7、14d进行组织病理学观察及免疫组化法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：与盐水处理相比,对照大鼠和蜂胶大鼠经蜂胶处理能明显提高创面愈合率（P〈0.01）,缩短创面愈合时间（P〈0.05）.促进PCNA表达（P〈0.01）。结论：蜂胶可以促进糖尿病大鼠创面细胞增殖,加速伤口愈合。     

嵌合体大鼠诱导异种皮肤移植免疫耐受的初步研究

目的 探讨嵌合体大鼠诱导异种皮肤移植免疫耐受的可行性。方法 采集兔骨髓干细胞，经行宫内胎鼠移植以及对新生子鼠行肝内注射，制作兔骨髓干细胞嵌合体大鼠模型。6周后将15只嵌合体大鼠分为A组（8只）、B组（7只）。将A组大鼠皮肤移植给供髓兔，将7只非嵌合体大鼠皮肤移植给非供髓兔作A组对照；将B组大鼠、7只非嵌合体大鼠（B组对照）皮肤同时移植给供髓兔。记录移植后皮片成活时间、创面愈合时间。结果A组对照移植皮片成活（9．3±1．8）d，创面于（20．9±2．1）d愈合；A组移植皮片成活（15．1±2．6）d，创面于（18．5±1．3）d愈合。B组及其对照移植皮片的成活时间、创面愈合时间与A组相似。与各自对照皮肤移植相比，A、B组皮片成活时间延长（P〈0．01），创面愈合时间缩短（P〈0．05或P〈0．01）。结论 嵌合体大鼠行异种皮肤移植后能诱导移植皮片免疫耐受．使其成活时间明显延长．创面愈合时间缩短。     

偎脓长肉法对大鼠慢性溃疡组织病理学及肉芽组织 VEGF、Notch1、TGF-β1表达的影响

目的:观察偎脓长肉法对大鼠皮肤慢性溃疡愈合过程中肉芽组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)及Notch1表达的影响。方法:将24只大鼠随机分为正常组、模型组、对照组、治疗组共4组,每组6只。正常组无创面,其他3组大鼠采用“激素干预-皮肤缺损-细菌感染”复合因素叠加法制备慢性皮肤溃疡模型,模型组给予生理盐水换药,对照组给予凡士林纱条外敷,治疗组给予生肌象皮膏外敷,每日换药1次,共14 d。于治疗3、7、14 d,分别取各组大鼠溃疡创面肉芽组织,行HE染色观察组织病理学改变,并采用免疫组化方法检测VEGF、TGF-β1、Notch1等的表达情况。结果:治疗组应用偎脓长肉法治疗14 d后创面为(0.012±0.004)cm2,基本愈合,与模型组、对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在创面修复早、中期(3~7 d),与模型组、对照组比较,治疗组创面组织TGF-β1、VEGF表达水平升高,Notch1表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);疮面修复晚期(14 d),各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:偎脓长肉法可能通过调节肉芽组织VEGF、Notch1、TGF-β1的表达,起到促进肉芽组织生长、促进疮面修复的作用。     

组织工程化表皮膜片构建及其在供皮区的应用研究

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于供皮区创面治疗。方法利用患者少量自体或同种异体正常皮肤分离、培养、扩增的表皮细胞,接种于壳聚糖明胶膜构建成表皮细胞膜片;将膜片移植于治疗组供皮区创面、适度加压,同时设立对照组:空白材料对照以及传统油纱布对照覆盖创面。于术后5～10d、30d、90d行大体观察、组织学检查、广谱角蛋白、外皮蛋白、层粘连蛋白、免疫组织化学检测以及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值测定(偏光显微镜、RTPCR)。结果利用自体及异体表皮细胞和壳聚糖明胶膜能够构建出人表皮细胞膜片,应用于临床供皮区创面治疗15例,经过3个月随访,疗效肯定。移植膜片创面愈合时间(8.1±1.3)d,空白材料对照区为(16.2±3.8)d,空白油纱布对照区为(23.0±5.8)d。移植膜片存活良好,结构较完整、术后30d及90d观察:12例无明显增生,3例有轻度增生(20.0%),而空白油纱布对照区11例遗留增生性瘢痕(74.4%,χ2=8.127,P<0.01)。结论表皮细胞-壳聚糖明胶膜片能促进供皮区创面早期愈合并减少后期瘢痕增生,具有良好治疗效果。     

表皮生长因子对小鼠创面组织过氧化物酶体增殖物激活受体β的调节作用

目的 了解小鼠创面外用冻干鼠表皮生长因于(mEGF)后,过氧化物酶体增殖物激活受体β(PPAR-β)表达量的变化及对创面愈合的影响. 方法 于70只BALB/c小鼠背部脊柱两侧各制作1个1.5 cm×0.5 cm全层皮肤缺损创面,将左侧创面设为实验组、右侧创面作为对照组.实验组创面滴加mEGF溶液(5μg/mL)、对照组创面滴加生理盐水.(1)伤后7、11、16 d各取20只小鼠,评估创面愈合率.(2)伤后1、3、7、11、14、18 d切取创缘组织(每时相点创面数为10个),采用免疫组织化学染色法检测PPAR-β蛋白表达,原位杂交法检测PPAR-β mRNA表达量,结果均用积分吸光度(IA)值表示.对实验数据行t检验. 结果 (1)创面愈合率:伤后7、11、16 d,实验组创面愈合率均明显高于对照组(t值分别为3.03、6.05、11.90,P值均小于0.01).(2)免疫组织化学检测:伤后早期PPAR-β蛋白主要表达于2组剖面内芽组织Fb以及创缘KC胞核中,创面上皮化后主要表达于新生上皮及其下层Fb中,创面修复后表达逐渐减弱.实验组伤后各时相点PPAR-β蛋白表达量明显高于对照组(t值为2.15～7.37,P ＜0.05或P ＜0.01),其中伤后3d达高峰[IA值为(3.46±1.33)×103],此时对照组IA值为(2.35±1.09) ×103.(3)原位杂交:伤后2组创面PPAR-β mRNA表达均开始上调,主要阳性表达部位为创面Fb及创缘KC胞质,持续至创面上皮化基本完成时,表达量开始下降.实验组创面各时相点PPAR-β mRNA表达量均明显高于对照组(t值为2.35～6.64,P＜0.05或P ＜0.01),其中伤后3 d达峰值[IA值为(7.3±2.6)×106],此时对照组IA值为(4.5±3.0)×106. 结论 外用mEGF可上调小鼠创面组织中PPAR-β表达并促进创面愈合.     

锌-金属硫蛋白对大鼠皮肤烫伤创面的影响

目的研究Ｗｉｓｔａｒ大鼠深Ⅱ度烧伤后皮肤活力的下降与脂质过氧化反应的关系。方法以氧耗量、琥珀酸脱氢酶、Ｓｃｈｉｆ’ｓ碱及创面愈合时间为指标,以金属硫蛋白作为保护剂外用于烫伤创面,分别采用空白对照及５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ,１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ两种浓度,测定伤后８,２４,４８ｈ各项指标的变化。结果皮肤氧耗量、琥珀酸脱氢酶活性下降,Ｓｃｈｉｆｓ碱含量明显升高。应用金属硫蛋白保护后,皮肤活性（氧耗及琥珀酸脱氢酶含量）均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）,同时Ｓｃｈｉｆ’ｓ碱含量下降（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）,创面愈合时间平均提前２天。结论烫伤组织损伤与脂质过氧化反应有一定的关系,而金属硫蛋白有一定保护作用。