多种膜转运蛋白在早期非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)和乳腺耐药蛋白(BCRP)在肺癌中的表达及其临床意义.方法:利用组织芯片技术和免疫组织化学二步法,对86例行术后辅助化疗的早期非小细胞肺癌标本进行上述4种膜转运蛋白检测.结果:在肺癌组织中P-gp、MRP、LRP、BCRP表达的阳性率分别为70.9%、73.3%、79.1%和39.5%,其表达与临床病理类型无关(P＞0.05);术后化疗效果不佳患者MRP、BCRP的表达水平高于术后化疗效果佳患者,但差异无显著性(P＞O.05);P-gp、LRP的表达水平与肺癌耐药及预后有关(P＜0.05).结论:P-gp、MRP、LRP、BCRP在未化疗过的肺癌组织中均有不同程度的表达,且与肺癌的某些生物学行为有关,联合检测P-gp、LRP有助于早期肺癌术后辅助化疗的选择及预后的判断.     

肺耐药蛋白基因和多药耐药相关蛋白基因在急性白血病骨髓细胞中的表达及临床意义

为了研究肺耐药蛋白基因和多药耐药相关蛋白基因在急性白血病骨髓细胞中的表达及其临床意义，采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测初治急性白血病、复发难治白血病及正常对照骨髓细胞肺耐药蛋白基因(lung resistance protein，LRP)及多药耐药相关蛋白基因(multidrug resistance protein，MRP)的表达。结果显示，正常对照骨髓细胞LRP表达阴性，初治急性髓细胞白血病(AML)组及复发难治组LRP表达水平与正常对照组相比明显升高，增高的LRP mRNA水平与对初次化疗不敏感及预后差有关，LRP表达阳性患的完全缓解率明显低于表达阴性。经直线相关分析发现，LRP表达与MRP表达水平成正相关。结论：LRP可能是一项新的耐药指标，其高表达与急性髓细胞白血病的疗效及预后密切相关，同时检测LRP和MRP的表达可以指导治疗，估计预后。     

急性白血病患者LRP、GST-π、MRP1蛋白表达及临床意义

本研究探讨谷胱甘肽硫转移酶-π(GST-π)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药相关蛋白(LRP)与急性白血病(AL)多药耐药(multi-drug resistance,MDR)的关系、并探讨这3种耐药蛋白表达的相关性以及三者表达与AL患者临床特征的关系。采用免疫组织化学S-P法检测80例AL患者及30例正常人GST-π、MRP1及LRP的表达。结果表明:GST-π,MRP1,LRP蛋白表达均与临床耐药相关,3种耐药蛋白表达阳性组的完全缓解率均低于阴性组,提示耐药蛋白表达时白血病患者预后不良。GST-π、MRP1在AL难治组中的表达具有高度相关性。结论:GST-π/MRP1二者联合检测对评定白血病预后不良较单独测定某一蛋白更具有显著的临床意义。当外周血白细胞数≥10×109/L时,LRP阳性表达率显著增高,提示LPR对高白细胞数白血病患者的耐药性和预后评定具有很高的判断价值。     

原发性肺癌摄取99Tcm-MIBI与耐多药蛋白表达的关系

目的探讨原发性肺癌99Tcm-MIBI显像与P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)表达的关系。方法对25例原发性肺癌患者行30min、180min99Tcm-MIBI断层显像,应用免疫组化法检测手术标本中P-gp、MRP表达水平;将早期摄取比值(EUR)、晚期摄取比值(DUR)及储留指数(RI)与P-gp、MRP表达进行对比研究。结果①99Tcm-MIBI早期显像阳性率为92.00%,延迟显像为80.00%,EUR为1.46±0.42,DUR为1.45±0.39,RI<0者13例,RI>0者12例。②P-gp、MRP表达阳性率分别为52.00%(13/25)、16.00%(8/25);③在P-gp表达阴性组、阳性组RI有显著性差异;P-gp表达与RI有相关性(P<0.001);EUR、DUR及RI在MRP表达阴性组、阳性组均未见显著性差异;三者与MRP表达均未见相关性。④以99Tcm-MIBI的RI<0作为肺癌耐药阳性阈值时,RI对P-gp的灵敏度、特异性分别为84.62%、83.33%,阳性预测值、阴性预测值也分别为:84.62%、83.33%。⑤P-gp表达在RI<0和RI>0组间分别为(0.327±0.041)、(0.267±0.036)(P<0.01),MRP表达在两组间未见显著性差异。结论99Tcm-MIBI显像的RI可以作为检测原发性肺癌P-gp表达的指标,是判断肺癌MDR的最佳参数。而99Tcm-MIBI显像与MRP表达的关系尚需验证。     

急性髓系白血病细胞内柔红霉素潴留与多药耐药关系的研究

为检测急性髓系白血病(AML)细胞内柔红霉素(DNR)潴留(IDA)与耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药蛋白(LRP)表达水平之间的相关性，我们采用流式细胞术通过测定细胞内DNR荧光评估细胞内DNR浓度，活细胞直接或间接免疫荧光法测定多药耐药(MDR)蛋白的表达．     

肺腺癌细胞STAT5信号传导途径的初步研究

目的探讨STATS在肺腺癌细胞中增殖分化,抗凋亡作用与耐药之间的关系。方法采用浓度递增法诱导A549细胞株形成耐药细胞系,免疫组检测A549及耐药株（A549／CARP）中STATS．LRP、MRP蛋白表达情况。结果成功诱导了A549／CARP耐药细胞株。免疫组化显示A549组、A549／CARP组STATS阳性细胞数差异无统计学意义（P〉0．05）;LRP、MRP阳性细胞数差异有统计学意义（P〈0．01）STATS、LRP、MRP之间均无相关性（P〉0．05）。结论STATS参与了肺腺癌细胞的增殖分化和抗凋亡作用,并没参与介导肺腺癌的耐药;LRP、MRP均参与了诱导肺腺癌细胞的耐药,但二者之间无相关性;LRP、MRP介导的耐药机制与STATS信号传导途径无关;可通过破坏STAT5信号传导来控制肿瘤细胞的生长和繁殖。STATS可能成为肺癌基因治疗的新靶点。     

LRP和P—gp在卵巢上皮性癌组织中的表达及与化疗耐药关系的探讨

目的 探讨肺耐药蛋白 (Lungresistanceprotein,LRP)及P-糖蛋白 (P-glycoprotein,P -gp)在原发性卵巢上皮性癌 (primaryo varianepithelialcancer,POEC)组织中的表达及其与化疗耐药的关系。方法 采用SP组化法检测LRP和P-gp的表达。结果 (1)交界性卵巢肿瘤及POEC组织中LRP阳性表达率明显高于良性卵巢肿瘤 (P<0.01)。 (2)LRP、P-gp表达与POEC患者年龄、组织学类型、病理分级、临床分期和术后残存灶大小均无关 (P>0.05) ;(3)LRP阳性表达组患者近期化疗疗效明显低于阴性表达组 (P<0.05) ;P-gp表达与POEC患者近期化疗疗效无关 (P>0.05) ;(4)LRP、P -gp表达与患者术后生存时间均无关 (P>0.05) ;(5)LRP、P-gp表达无相关 (P>0.05) ;(6)经化疗后POEC组织中LRP、P -gp表达率均明显高于化疗前 (P<0.05)。结论 (1)检测LRP可预测化疗近期疗效 ,指导临床化疗方案的选择 ;(2)联合检测LRP与P-gp对POEC患者的预后可能无明显价值 ;(3)铂类化疗可诱导POEC组织中LRP及P -gp的表达。     

腺病毒介导的p53逆转结肠癌对5-FU耐药性的实验研究

目的活体探讨腺病毒介导的p53逆转结肠癌对5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的可能性及其机制。方法对5-FU耐药的人类结肠癌SW480/5-FU荷瘤裸鼠随机分成4组:对照组、5-FU治疗组、r Ad/p53治疗组和r Ad/p53+5-FU治疗组,各25只。各组于治疗后24 h、48 h、72 h、120 h、168 h分别随机取5只荷瘤鼠,腹腔注射过量水合氯醛处死,即切下肿瘤检测肿瘤组织的癌细胞凋亡和肿瘤的p53、PKC、P-gp、MRP1蛋白表达。用方差分析与SNK检验比较各组的癌细胞凋亡、各蛋白表达量,用Pearson相关检验分析各观察指标的相关性。结果 5-FU组不同时间点裸鼠肿瘤细胞凋亡范围、p53蛋白表达、PKC、P-gp、MRP1蛋白表达与对照组差别没统计意义(P>0.05)。r Ad/p53+5-FU组细胞凋亡(0.33±0.03~0.62±0.07)明显高于对照组(0.24±0.04~0.29±0.02)、5-FU组(0.27±0.03~0.31±0.02)与r Ad/p53组(0.29±0.02~0.46±0.06)(P<0.05);r Ad/p53组肿瘤凋亡范围明显高于对照组(P<0.05),48 h以后明显高于5-FU组(P<0.05)。r Ad/p53和r Ad/p53+5-FU组随时间增加p53蛋白表达明显逐渐增加,120 h达峰值表达,明显高于对照组(P<0.05),Ad/p53+5-FU组p53蛋白表达明显高于r Ad/p53(P<0.05)。r Ad/p53+5-FU组在不同观察时间点PKC、P-gp、MRP1蛋白表达量呈逐渐降低趋势,P-gp、MRP1的表达在各时间点明显低于对照组、5-FU组(P<0.05);48 h后PKC表达明显低于对照组、5-FU组、r Ad/p53组(P<0.05)。r Ad/p53组治疗48 h后,P-gp、MRP1的表达量明显低于对照组、5-FU组(P<0.05);120 h后PKC表达明显低于对照组、5-FU组(P<0.05)。结论 r Ad/p53携带的外源野生型p53基因能降低活体耐药的结肠癌细胞的PKC、P-gp、MRP1等耐药基因蛋白表达,同时促进癌细胞凋亡而逆转癌细胞对5-FU的抗性;5-FU也可增加外源野生型p53的表达产生两者的协同抗癌作用。     

复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562/A02移植瘤细胞膜转运蛋白表达的影响

为了观察复方浙贝颗粒(CZBG)联合阿霉素对K562/A02移植瘤细胞膜耐药相关蛋白P-gp、MRP、LRP表达的影响,将K562/A02细胞接种于BALB/c-nu裸小鼠腋前皮下以构建MDR移植瘤动物模型,给予复方浙贝颗粒灌胃联合阿霉素腹腔注射,实验结束后处死小鼠,剥离肿瘤,将瘤块组织制成切片,通过免疫组织化学结合Image ProP lus6.0免疫组织化学彩色图象分析,观察复方浙贝颗粒联合阿霉素对K562/A02移植瘤组织细胞膜P-gp、MRP、LRP表达的影响。结果表明:与阿霉素组相比,CZBG各剂量组移植瘤细胞膜所表达P-gp、MRP的积分光密度值(IOD)明显降低(p0.05),而未见明显LRP表达。结论:CZBG能协同阿霉素抑制K562/A02移植瘤组织细胞膜P-gp、MRP表达。     

磁性纳米四氧化三铁颗粒对卵巢癌细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的探讨磁性纳米四氧化三铁颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)耐药性的机制。方法将SKOV3/DDP细胞分为对照组、顺铂(DDP)组、Fe3O4-MNPs组和DDP+Fe3O4-MNPs组,用Westernblot方法检测P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)和多耐药相关蛋白1(MRP1),电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP)法测定细胞内铂含量。结果 DDP+Fe3O4-MNPs组P-gp、LRP和MRP1蛋白表达水平较DDP组下降明显(P<0.05)。DDP+Fe3O4-MNPs组细胞内铂含量明显高于DDP组(P<0.05)。结论 Fe3O4-MNPs逆转耐药的作用机制可能与Fe3O4-MNPs促进DDP进入细胞内,下调P-gp、LRP和MRP1蛋白表达,提高细胞内DDP浓度有关。     

重组人p53腺病毒注射液结合放疗治疗复发鼻咽癌不良反应的临床分析

目的观察重组人p53腺病毒注射液结合放疗治疗鼻咽癌的不良反应。方法选取中山大学附属第五医院放疗科2005年6月至2005年12月20例放疗后复发的鼻咽非角化型癌（WHO病理分型）。将患者随机分为基因治疗＋放疗组（GIRT）10例和单纯放疗组（RT）10例。GIRT患者应用重组人p53腺病毒注射液（rAd-053）瘤内注射1次／周×8,放疗在rAd．p53注射后3d开始。两组放疗剂量和方法相同。结果采用意向性分析,比较两组治疗不良反应。结果两组病例的性别、年龄、一般状况评分、分期方法及临床分期等均具有可比性。10例GIRT患者接受80人次rAd．p53治疗,I度发热（〈38℃）41人次,发生频率51．3％;II度发热（38℃～40℃）24人次,发生频率30％;Ⅲ度发热（〉40℃）15人次,发生频率18．7％。1例发生针道种植转移,发生率1．3％。无其他可纳入统计的不良反应。结论复发鼻咽癌再程放疗同期局部注射tad-p53的不良反应可耐受。     

重组人p53腺病毒联合放化疗治疗中晚期鼻咽癌的临床观察

目的:通过对重组人p53腺病毒(rAd-p53)瘤内注射联合同步放疗、化疗治疗中晚期鼻咽癌患者的临床观察,探讨其在中晚期鼻咽癌治疗中的增效作用。方法:41例确诊中晚期鼻咽癌的患者随机分为两组。治疗组rAd-p53瘤内注射+同步放化疗,对照组仅行同步放化疗。分别比较两组治疗结束时和治疗后3个月的有效率以及0.5、1、2年的生存率,2年的原发灶复发率、远处转移率和无瘤生存率。同时比较两组治疗过程中主要的药物毒副反应。结果:治疗后3个月,治疗组的完全缓解率优于对照组(P<0.05)。治疗组的无瘤生存率明显高于对照组(P<0.05)。rAd-p53的药物副反应主要是发热。两组骨髓抑制反应的发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:rAd-p53瘤内注射在中晚期鼻咽癌的同步放化疗中具有增效作用,但其远期疗效仍有待扩大样本量行更长时间的进一步观察。rAd-p53瘤内注射并未增加化疗的毒副反应,具有较大的安全性。     

重组人p53腺病毒治晚期非小细胞肺癌的并发症分析

目的:探讨CT引导下瘤内注射重组人p53腺病毒治疗晚期非小细胞肺癌的安全性及并发症的原因和防治对策。方法:对20例晚期非小细胞肺癌患者行CT引导下瘤内注射重组人p53腺病毒治疗100次。结果:治疗后出现发热41例次,占41%(其中需药物处理的11例次),咯血7例次,占7%(经观察和药物治疗后恢复),气胸5例次,占25%(经吸氧和观察后恢复)。治疗前后血常规、肝、肾功能检查无显著性差异(P>0.05)。结论:CT引导下瘤内注射重组人p53腺病毒是一种安全可行的治疗方法,术者经验、入路选择及操作技巧与并发症有关,合理选择穿刺路径、熟练掌握操作技巧是减少并发症的关键。     

重组人p53腺病毒瘤内注射联合^125I粒子植入治疗肝癌不良反应分析

目的评价重组人p53基因腺病毒注射液（rAd—p53）瘤内注射联合^125I粒子组织间植入治疗肝癌的安全性。方法49例经过TACE及物理消融治疗后的肝癌患者。20例（33个病灶）进行rAd—p53瘤内注射联合^125I粒子植入治疗（联合组）;29例（47个病灶）进行单独的^125I粒子植入术（对照组）。观察术后3d、1周和2周的不良反应,及1个月后的短期疗效。结果联合组术后3d的不良反应主要是寒战、发热、乏力、肌肉、关节轻度疼痛,发生率明显高于对照组;其他不良反应包括：恶心、呕吐、腹痛,但与对照组比较无统计学差异。术后1周,联合组仅有1例发热,其他不良反应缓解;术后2周,所有不良反应均消失。所有患者观察期内均未见大出血、胆汁瘘、胆囊炎及肠瘘等严重并发症;未见白细胞减低及肝肾功能损害;体力状况（Kamofsky评分）无明显降低。短期疗效显示,联合组和对照组的有效率（CR＋PR）分别为90．9％和76．6％,但无统计学差异。结论rAd—p53瘤内注射联合^125I粒子植入是一种较安全的肝癌治疗方式。     

重组人p53腺病毒治疗脊柱转移瘤的近期疗效观察

目的探讨重组人p53腺病毒（recombinant human p53 adenovirus,rAd-p53）在脊柱转移瘤的治疗中的近期疗效。方法 2006年6月2009年8月,以经皮注射rAd-p53联合放疗及单独放疗方法治疗肺鳞状细胞癌来源脊柱转移瘤患者各18例,通过比较两组治疗前后的肿瘤体积变化评价疗效,观察两组治疗后肿瘤细胞坏死率情况,检测P53蛋白在癌组织中的表达以及血清中抗特异p53基因腺病毒抗体水平。结果联合治疗组疗效评定有效率为66.7%,高于单独放疗组的27.8%,差异有统计学意义（P〈0.05）。联合治疗组可见明显肿瘤细胞坏死、P53蛋白表达阳性及血清中抗特异p53基因腺病毒抗体水平强阳性。结论 rAd-p53基因治疗能抑制肿瘤生长,联合放疗可弥补单一放疗的不足,提高放疗的敏感性,有效治疗脊柱转移瘤。     

急性白血病患者P-gp、mdr1、MRP和Topo Ⅱ表达及其与预后关系的研究

目的 探讨P糖蛋白（P－gp)、mdr1、MRP和TopoⅡ是否为急性白血（AL）临床耐药的预后因素。方法 用单抗UIC2标记,流式细胞术测定45例AL患者的P－gp;用RT－PCR方法检测其mdr1、MRP和TopoⅡ的表达。结果 耐药组P－gp、mdr1、MRP阳性率均高于敏感组,P值均＜0．01,而TopoⅡ耐药组表达阳性率较敏感组降低,但差异无统计学意义。经单因素逻辑回归分析,P－gp、mdr、MRP、TopoⅡ和年龄与临床耐药性显著相关;性别、发病时白细胞计数、FAB亚型和骨髓原始＋（早）幼稚细胞比例与耐药性无关。采用多因素逻辑回归分析经以上变量校正后显示P－gp、mdr1、MRP、TopoⅡ和年龄仍与耐药性显著相关：P－gp RR=14.87,P=0.003;mdr1 RR=19.98,P=0.003;MRP RR=16.53,P=0.006;TopoⅡRR=0.23,P=0.046;年龄RR＝10．87,P＝0．013。将36例初发AL患者单独分析,结果发现P－gp、mdr1和MRP亦可完全缓解密切相关。经直线相关分析发现所有病例组和临床耐药组P－gp和mdr1,P-gp和MRP,mdr1和MRP具有相关性（P＜0．001）。结论 P－gp、mdr1、MRP和TopoⅡ是AL临床耐药的独立预后因素。mdr1和MRP具有相关性。     

子宫颈癌患者新辅助化疗前后癌组织中mdr1、肺耐药蛋白mRNA及其蛋白的表达变化和意义

目的寻找预测子宫颈癌新辅助化疗效果的分子生物学指标。方法采用real time RT—PCR和免疫组织化学法检测40例子宫颈癌患者新辅助化疗前后癌组织中mdr1、肺耐药蛋白（LRP）mRNA及其编码蛋白P-gP、LRP表达水平。结果新辅助化疗前后子宫颈癌组织中mdr1的表达量分别为（45．800±0．636、62．381±0．743,t=-66．582,P〈0．01）;新辅助化疗前后子宫颈癌组织中LRP mRNA的表达量分别为（50．048±0．770、66．912±0．752,t=-78．604,P〈0．01）;新辅助化疗前后子宫颈癌组织中P-gP的阳性表达分别为40．0％（16／40）、70．0％（28／40）,x^2=7．273,P=0．007;新辅助化疗前后子宫颈癌组织中LRP的阳性表达分别为62．5％（25／40）、92．5％（37／40）,x^2=10．323,P=0．001,新辅助化疗后mdr1、LRPmRNA及其编码蛋白P-gP、LRP表达水平较化疗前明显升高,2组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。P-gP、LRP表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期、病理分级无关（P〉0．05）;P-gP蛋白的阳性与阴性患者其化疗有效率分别为6（37．5％）、17（70．8％）,2组比较差异有统计学意义（x^2=4．365,P〈0．05）。LRP蛋白的阳性与阴性患者其化疗有效率分别为12（48．0％）、13（86．7％）,2组比较差异有统计学意义（x^2=5．980,P〈0．05）;P-gP与LRP成正相关（x^2=4．177,r=0．323,P〈0．05）。结论P-gP、LRP表达状态有可能作为预测化疗效果的参考指标。     

子宫颈癌患者新辅助化疗前后癌组织中mdrl、肺耐药蛋白mRNA及其蛋白的表达变化和意义

目的 寻找预测子宫颈癌新辅助化疗效果的分子生物学指标.方法 采用real time RTPCR和免疫组织化学法检测40例子宫颈癌患者新辅助化疗前后癌组织中mdrl、肺耐药蛋白(LRP)mRNA及其编码蛋白P-gP、LRP表达水平.结果 新辅助化疗前后子宫颈癌组织中mdrl的表达量分别为(45.800 ±0.636、62.381±0.743,t=-66.582,P＜0.01);新辅助化疗前后子宫颈癌组织中LRP mRNA的表达量分别为(50.048±0.770、66.912±0.752,t=-78.604,P＜0.01);新辅助化疗前后子宫颈癌组织中P-gP的阳性表达分别为40.0%(16/40)、70.0%(28/40),χ2=7.273,P=0.007;新辅助化疗前后子宫颈癌组织中LRP的阳性表达分别为62.5%(25/40)、92.5%(37/40),χ2=10.323,P=0.001,新辅助化疗后mdrl、LRPmRNA及其编码蛋白P-gP、LRP表达水平较化疗前明显升高,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).P-gP、LRP表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期、病理分级无关(P＞0.05);P-gP蛋白的阳性与阴性患者其化疗有效率分别为6(37.5%)、17(70.8%),2组比较差异有统计学意义(χ2=4.365,P＜0.05).LRP蛋白的阳性与阴性患者其化疗有效率分别为12(48.O%)、13(86.7%),2组比较差异有统计学意义(χ2=5.980,P＜0.05);P-gP与LRP成正相关(χ2=4.177,r=0.323,P＜0.05).结论 P-gP、LRP表达状态有可能作为预测化疗效果的参考指标.     

鼻咽低分化鳞癌细胞X射线照射后多药耐药基因的表达及功能

目的：检测鼻咽癌CNE2细胞射线照射前后多药耐药基因（mdr1基因）及其编码产物P糖蛋白（P-glycoprotein，P-gP）的表达及其功能的变化。方法：利用RT-PCR、Westernblot和流式细胞仪检测CNE2细胞射线照射前后的mdr1基因和P-gp的表达及对柔红霉素的外排功能。结果：鼻咽癌CNE2细胞射线照射前mdr1基因、P-gp不表达；射线照射后较长时间内mdr1基因、P-gp均明显表达，对柔红霉素的摄取较射线照射前高。结论：鼻咽癌低分化鳞癌细胞CNE2射线照射后化疗敏感性增高，除了多药耐药机制外可能尚存在其他耐药机制。