鼠疫耶尔森菌纤维蛋白溶解酶原激活因子的研究进展

鼠疫耶尔森菌纤维蛋白溶解酶原激活因子（Pla）是鼠疫菌特有的pPCP1质粒编码的细胞表面蛋白酶，介导了耶尔森菌外膜蛋白（YOPs）在体外的降解，具有温度依赖的纤溶酶原激活剂活性和凝固酶活性，可致纤溶酶原激活和α2抗纤溶酶失活，是鼠疫菌从皮下感染扩散到循环系统的重要毒力因子，是黏附素也是侵袭素，在鼠疫耶尔森菌致病过程中发挥重要作用。对Pla的研究将有助于进一步阐明鼠疫菌的致病机制，寻找更好的鼠疫诊断方法和防治措施。现对Pla的基因、活性、毒力研究近况进行综述。     

制定来源于中国各类鼠疫自然疫源地鼠疫菌种的新编号方案的建议

目前，中国保存着来自全国各种类型的鼠疫自然疫源地，自1948年以来的各个流行时期的鼠疫菌的代表菌株，数量超过8000株以上，是世界上最大的鼠疫菌种多样性资源。这一资源已经多次在中国鼠疫预防与控制的实践中发挥作用，是提高中国对鼠疫的认识，在防制能力和控制技术方面赶上世界水平的最重要的条件。     

鼠疫耶尔森菌基因组重排研究进展

介绍细菌基因组重排现象的发现、特点以及重排后对细菌遗传和进化所产生的影响。经研究发现鼠疫菌基因组中的插入序列和重复序列是造成鼠疫菌基因组频繁重排的重要原因,不同来源鼠疫菌基因组的重排有一定的规律性,它们之间的遗传学距离以及基因之间相应的连接方式是识别和鉴定鼠疫菌的重要指标。     

鼠疫菌基因组“默认编码序列”数据库的建立与初步研究

目的对8株鼠疫耶尔森菌全基因组间编码序列进行比对,寻找鼠疫菌中最普遍存在的编码序列,建立"默认编码序列"数据库。方法应用Blast软件、Perl编程及Excel软件等,对8株已测序全基因组编码序列进行比对和统计。结果建立了"默认编码序列"数据库,共有4271个编码序列。其中8株鼠疫菌核苷酸(氨基酸)完全一致的编码序列为1176个;对应的编码序列只存在1种"默认编码序列"的是2465个;存在2种"默认编码序列"的是630个。结论 "默认编码序列"数据库是鼠疫菌中最普遍存在的编码序列集合,为进一步深入研究鼠疫菌的遗传特征提供了可靠信息。     

鼠疫与假结核耶尔森菌基因组比较分析

为了在流行静息期间建立鼠疫监测,比较自网上下载的10株鼠疫菌及3株假结核菌的全基因组序列。发现依照鼠疫菌CO92株划分的68个"板块",67个在假结核菌中完整或大部出现,确定了这些板块在假结核菌基因组中的连接顺序。确定了假结核菌具有与鼠疫菌同样的7拷贝rRNA基因簇,并由此引起最初的基因组重排。假结核菌与鼠疫菌分野前已在16个位置插入了4种插入序列,这些插入序列在假结核菌中尚未引起重排。确定了20处鼠疫菌特有的"疫岛(PeI)"与39处假结核菌特有的"假岛(PsI)"序列,这些序列可在监测中遇到非典型菌株时,用于鉴别鼠疫菌与假结核菌。     

小肠结肠炎耶尔森菌感染性疾病

耶尔森菌属对人类致病的包括三个种：鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌,其中小肠结肠炎耶尔森菌是一种很重要的人类肠道致病菌,世界各大洲均有发现,近年来逐渐受到全球重视.它引起的临床症状十分广泛,从中度腹泻到肠系膜淋巴结炎,对一些免疫功能异常的病人则会出现严重的并发症（败血症）,在某些国家和地区（如芬兰）,小肠结肠炎耶尔森菌是一种引起慢性无菌性关节炎的常见因子.     

新疆维吾尔自治区阿勒泰山地鼠疫疫源地的发现与证实

目的 调查、证实新疆维吾尔自治区（新疆）阿勒泰山地是否存在鼠疫自然疫源地。方法 2021—2022年在阿勒泰山地（青河县、福海县、阿勒泰市）开展鼠疫疫源性调查，采用鼠疫细菌学、血清学、分子生物学对捕获和捡拾的啮齿类动物脏器、血清、心脏浸液、媒介寄生蚤进行实验室检验检测，鉴定分离鼠疫耶尔森菌株的生化表型。结果 鼠疫细菌学检验阿勒泰山地青河县、福海县和阿勒泰市捕获和捡拾的自毙啮齿动物合计115只，其中长尾黄鼠和灰旱獭为优势种，分别占总数的60.87%和20.87%，宿主寄生蚤9组136只，其中长尾黄鼠和灰旱獭寄生蚤的优势种分别为方形黄鼠蚤阿勒泰亚种和谢氏山蚤，分别占宿主寄生蚤的67.74%和100.00%。血清学检测血清样本86份、小型鼠心脏浸液21份、自毙啮齿动物脏器研磨液8份，荧光定量PCR方法检测自毙啮齿动物脏器组织提取核酸DNA 8份。1份长尾黄鼠血清鼠疫F1抗体阳性[间接血凝试验（IHA）滴度为1∶128，酶联免疫吸附试验（ELISA）滴度为1∶256]。1份自毙灰旱獭脏器研磨液鼠疫F1抗原阳性[反相间接血凝试验（RIHA）滴度为1∶64,ELISA滴度为1∶128]。2份自毙长...     

浙江省温州市鼠疫静息期鼠类携带耶尔森菌调查分析

目的了解浙江省温州市鼠疫静息期鼠类耶尔森菌携带情况。方法采用日夹笼法捕鼠,无菌解剖捕获鼠,对盲肠末端内容物进行耶尔森菌分离。结果本次调查共捕获687只鼠,室内鼠占91.27%。共检到耶尔森菌81株,检出率为11.79%,以小肠结肠炎耶尔森菌为主,占79.01%,其次为中间型耶尔森菌、克氏耶尔森菌和假结核耶尔森菌,分别占11.11%、7.40%、2.47%。结论温州市鼠类耶尔森菌携带率较高,室内鼠类能携带各型耶尔森菌,野外鼠类只携带小肠结肠炎耶尔森菌。     

青藏高原喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地鼠疫耶尔森菌遗传特征分析

目的 研究青藏高原喜马拉雅鼠疫疫源地那曲和比如地区鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）菌株的分子分型特征,确定具有该分型特征的鼠疫菌在青藏高原鼠疫疫源地的分布情况。方法 应用板块重排、差异区段分析、间区规律短回文重复、多位点可变数目串联重复序列分析方法对分离自青藏高原地区、四川省、云南省的98株鼠疫菌进行分析。结果 那曲和比如地区的鼠疫菌菌株中第57~60板块的排列方式与测序菌株Z176003一致,在其他实验菌株中未发现该重排特征。结论 分离自那曲和比如的鼠疫菌菌株具有独特的分子分型特征,该特征在本地区的菌株中普遍存在,且菌株多态性持续分化。     

云南部分鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌的分离及鉴定

目的 了解云南部分鼠疫疫源地中小肠结肠炎耶尔森菌的分布及病原学特征。方法 2012年5月至2014年4月采集剑川、梁河两县鼠类盲肠,对其进行培养,通过菌落聚合酶链反应初筛小肠结肠炎耶尔森菌,通过生化鉴定确定菌株并作毒力基因检测。结果 915份标本中分离到小肠结肠炎耶尔森菌35株,总检出率为3.83%,分离株包含1株致病株、34株非致病株。35株小肠结肠炎耶尔森菌全部为生物1A型,1株致病株为1A/O:9生物血清型,毒力基因为(ail+、ystA-、ystB-、yadA-、virF-、rbfc-),非致病株血清为O:5、O:8及未分型,毒力基因为(ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-、rbfc-)。 结论 小肠结肠炎耶尔森菌在剑川野鼠鼠疫疫源地鼠间流行,分离菌株血清型别较为多样,分离到的致病株缺乏典型毒力基因;小肠结肠炎耶尔森菌在梁河家鼠鼠疫疫源地尚未发现鼠间的流行。     

2013-2014年云南省剑川县野鼠鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌的调查分析

目的 对剑川县野鼠鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌分布情况调查分析。方法 从剑川采集鼠盲结肠标本进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养、表型鉴定和特异基因分析。结果 从采集的645份鼠类标本中,分离到34株小肠结肠炎耶尔森菌,分离率为5.27%(34/645);其中致病株1株、非致病株33株。鼠类标本分别是大绒鼠、贝氏树鼩、褐家鼠、齐氏姬鼠、小林姬鼠等,其中大绒鼠采集率和检出率最高(2.79%),其次为齐氏姬鼠(1.55%)。结论 剑川县野鼠鼠疫疫源地中,小肠结肠炎耶尔森菌的主要宿主与鼠疫菌主要宿主基本一致,推测小肠结肠炎耶尔森菌的存在与鼠疫的相对静息相关。     

鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性研究

目的 建立分析鼠疫耶尔森菌外膜蛋白抗原性的简便方法. 方法 采用DNAstarProtean和EMBOSS网络分析平台综合预测鼠疫耶尔森菌外膜蛋白YopE、YopH、YopT、YopJ、YopM的免疫原性,并通过蛋白质芯片技术对上述外膜蛋白的免疫原性进行验证. 结果 计算机综合预测分析显示外膜蛋白YopE抗原...     

鼠疫菌基因组学研究进展

不同来源鼠疫菌株和假结核菌的测序完成,为我们通过比较基因组学手段对鼠疫菌进行研究提供了前所未有的机遇。本文通过对鼠疫菌基因组间及其与假结核菌基因组的分析比较,从全基因组的水平描述了鼠疫菌的基本特征,并论述了目前以比较基因组学为手段,从基因组水平来探讨鼠疫菌在编码序列、基因组重排、毒力基因、生境适应、种间种内进化等方面的研究现状。     

内蒙古鼠疫耶尔森菌差异区段分型特征研究

目的 研究分离自内蒙古不同鼠疫疫源地、不同宿主和媒介的鼠疫耶尔森菌的差异区段基因型分布特征。方法 选取内蒙古3个鼠疫疫源地分离的鼠疫耶尔森菌307株,采用差异区段分析法,设计24对引物进行DFR位点扩增分型,用BioNumerics软件分析。结果 通过差异区段分型方法共发现13种基因型,其中5种基因型(Gnm1~Gnm5)为本研究首次报道。长爪沙鼠疫源地有9种基因型,主要基因型为G11(71.8%,122/170);达乌尔黄鼠疫源地有6种基因型,主要为G10(44.1%,41/93)和G11(35.5%,33/93);布氏田鼠疫源地有4种基因型,主要为G14(90.9%,40/44)。3个疫源地均分布有G11型。结论 内蒙古鼠疫耶尔森菌差异区段基因型分布具有明显的地理分布特征,对分析内蒙古鼠疫的传播和遗传演变具有重要的分子流行病学意义。     

云南省鼠疫耶尔森菌多位点可变数目串联重复序列分析

目的 通过多位点可变数目串联重复序列分析(multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA)方法,对云南省鼠疫菌株进行基因分型。 方法 采用聚合酶链反应(PCR)和毛细管电泳,通过BioNumerics软件进行处理,分析云南省158株鼠疫耶尔森菌基因型。 结果 选取鼠疫菌的14个VNTR位点,5个VNTR位点对云南省鼠疫菌具有多态性分析意义,利用这5个位点对云南菌株进行分析,云南158株鼠疫菌可分为2个群,3个簇,5个基因型,野鼠鼠疫菌属于A簇,丽江玉龙鼠疫菌属于B簇,家鼠鼠疫菌属于C簇,与传统的生态分型结果吻合。 结论 本次试验筛选的5个位点可以用于云南省鼠疫菌的分型,云南家鼠鼠疫菌、野鼠鼠疫菌及玉龙鼠疫菌分属不同的基因簇,玉龙鼠疫菌与野鼠鼠疫菌同属一个群,聚类结果与实际的地理相关性很好。     

庆大霉素或多西环素治疗鼠疫的随机对照临床试验

鼠疫是一种古老的烈性传染病，历史上有记载的大流行就有3次，这个俗称“黑死病”的瘟疫曾使欧洲的人口减少了四分之一，并改变了历史进程。20世纪以来，印度、越南、非洲等地均出现过鼠疫的大流行，而近年来鼠疫流行主要集中在非洲撒哈拉地区、东非、马达加斯加等地。随着恐怖主义者利用鼠疫耶尔森菌气雾剂作为生物武器，鼠疫重新引起全世界的关注。由于传统治疗鼠疫的药物如链霉素、氯霉素、四环素在许多国家已经停产或停用，因此需要找到新的合适的治疗药物。为了验证庆大霉素治疗鼠疫的有效性和安全性，并为治疗生物恐怖导致的鼠疫提供经验，2002年在坦桑尼亚进行了为期4个月的临床试验，试验药物为庆大霉素，与多两环素标准疗法进行随机、对照、开放临床研究。人选患者为65例出现鼠疫症状3d以内的成人或儿童，年龄7个月～65岁，均为微生物学确诊或疑诊的患者，临床类型包括腺鼠疫、败血症型及肺鼠疫。患者随机分为庆大霉素治疗组和多西环素治疗组，分别包括35例和30例患者，前者用庆大霉素2．5mg／kg，每12小时1次，肌内注射，后者用多西环素100mg，每12小时1次，口服（儿童2．2mg／kg，每12小时1次，口服），疗程均为7d。治疗前进行淋巴结穿刺液、血液培养鼠疫杆菌，并留取急性期和恢复期的血清检测鼠疫耶尔森菌的F1抗原，     

鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法的建立与应用评价

  目的  建立一种鼠疫多重荧光定量PCR内标检测方法,并进行应用效果评价。  方法  选择鼠疫菌染色体YPO0393基因与pMT1质粒caf1基因为靶基因,设计合成YPO0393-内标模板、特异性引物和TaqMan荧光探针,构建鼠疫多重荧光定量PCR内标检测体系;对非鼠疫菌DNA、不同稀释浓度鼠疫菌DNA、野外监测样本进行检测,评价该方法的特异性、灵敏性、重复性和应用效果。  结果  采用多重荧光定量PCR内标方法,8株鼠疫菌DNA均出现明显的扩增曲线,12株非鼠疫菌DNA未显示扩增曲线,提示该方法特异性良好。 不同浓度的鼠疫EV76疫苗株DNA,检测最低限为22.5×10?4 ng/μL,变异系数为0.99～3.42,提示灵敏性、重复性较好。 105份野外监测样本中,荧光定量PCR内标方法检测阳性的6份,与普通PCR方法检测结果一致,4份样本分离培养出鼠疫菌且采用PCR方法检测阳性。  结论  通过设置双靶基因与内标对照,本研究建立的鼠疫多重荧光定量PCR内标方法可降低检测假阳性率,特异性、灵敏性和重复性理想,可用于鼠疫快速检测。     

鼠疫菌感染兔血清中的10种重要抗体的检测分析

目的对鼠疫感染兔血清中的10种重要抗体(Ab)进行检测,寻找除F1外的其他可能用于鼠疫菌感染诊断的新靶标。方法利用一种新的基于上转发光法的十通道免疫层析检测技术(TC-UPT-LF)和另一种经典的间接酶联免疫吸附试验(ELISA),同时检测了54份抗F1-Ag抗体阳性的鼠疫菌感染兔血清样品,对样品中10种靶标抗体的阳性率进行了综合分析。结果在54份鼠疫菌感染兔血清样品中抗体检出阳性率较高的有3个,依次为F1-Ab(100%)、YPO1089-Ab(75%)、YopD-Ab(72%),其余7个靶抗体阳性率都低于50%。结论在鼠疫感染的诊断中,除现有的F1外,YopD极有可能作为新的辅助诊断靶标。     

鼠疫耶尔森菌感染动物血清标本中10种抗体检测与分析

目的 分析鼠疫耶尔森菌(Y.pestis)感染动物血清标本中鼠疫抗体的分布规律,寻找新的鼠疫血清学辅助诊断靶标.方法 采用自制的酶联免疫吸附试验板条检测不同种属的Y.pestis感染动物血清标本(狗血清5例、羊血清5例及黄鼠血清14例)中的10种靶标抗体.结果 各靶标抗体在3种不同种属动物血清标本中具有不同的阳性率;抗FI抗体阳性率最高(100.0%),抗YopD抗体的阳性率较高(狗、羊和黄鼠血清标本的阳性率分别为80.0%、100.0%和78.6%),针对LcrV、YPO1089、YPO1613、YPO2131、YPO2118、YPO1435这6个蛋白的抗体在3种血清标本中的阳性率差异较大,抗YPO3827抗体和抗YPO1303抗体在3种血清标本中的阳性率均较低.结论 除抗FI抗体外,针对其他抗原的抗体的分布均存在种属差异,抗YopD抗体有可能成为新的Y.pestis感染辅助诊断靶标.