2013-2014年云南省剑川县野鼠鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌的调查分析

目的 对剑川县野鼠鼠疫疫源地小肠结肠炎耶尔森菌分布情况调查分析。方法 从剑川采集鼠盲结肠标本进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养、表型鉴定和特异基因分析。结果 从采集的645份鼠类标本中,分离到34株小肠结肠炎耶尔森菌,分离率为5.27%(34/645);其中致病株1株、非致病株33株。鼠类标本分别是大绒鼠、贝氏树鼩、褐家鼠、齐氏姬鼠、小林姬鼠等,其中大绒鼠采集率和检出率最高(2.79%),其次为齐氏姬鼠(1.55%)。结论 剑川县野鼠鼠疫疫源地中,小肠结肠炎耶尔森菌的主要宿主与鼠疫菌主要宿主基本一致,推测小肠结肠炎耶尔森菌的存在与鼠疫的相对静息相关。     

2004-2005年江苏省海安县小肠结肠炎耶尔森菌病监测分析

目的 了解2004-2005年江苏省海安县小肠结肠炎耶尔森菌人群带菌情况以及家禽、家畜肉污染情况.方法 采集动物和腹泻患者粪便及冷藏的禽、畜肉和苍蝇等样本进行小肠结肠炎耶尔森菌增菌培养,并对阳性菌株进行血清学分型和毒力基因检测.结果 所有样本中,仅160份动物粪便样本检测阳性,阳性率达17.19%(160/931),其中猪的带菌率较高.151株小肠结肠炎耶尔森菌共有29个血清型,其中血清型以O:16,29、O:6,30、O:5、O:7,8、O:12,26、O:4,33、O:8等为主,除61株ystB阳性外,其余毒力基因均为阴性.结论 小肠结肠炎耶尔森菌江苏省海安县家畜家禽中普遍携带菌,但这些菌株大多属于非致病菌株,对人群威胁不大.     

天津市蓟县小肠结肠炎耶尔森菌的带菌动物调查

目的 了解天津市蓟县动物宿主小肠结肠炎耶尔森菌的带菌情况,做好小肠结肠炎耶尔森菌感染的预防与控制工作.方法 2006年5～6月份在全县范围内开展易携带病原菌的猪、牛、羊、鸡等家禽家畜的监测工作.用冷增菌培养法进行分离培养.结果 从猪粪便中检出4株小肠结肠炎耶尔森菌,经聚合酶链反应(PCR)鉴定,其中3株菌株带有ail、ystA、yadA、virF 4种毒力基因,同时还具有O:3血清型特异性的rfbC基因,1株菌株带有ystB一种毒力基因.结论 猪为天津市该菌的动物宿主之一,猪粪可能成为食品污染的来源.     

小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体的制备

目的 利用杂交瘤技术制备小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型特异性单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株的分型鉴定.方法 用小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株作为抗原,以骨髓杂交瘤细胞融合技术制备小肠结肠炎耶尔森单克隆抗体,用玻片凝集筛选法进行单克隆抗体的特异性鉴定.结果 筛选到1株与小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株呈现阳性反应,并与日本的抗血清检测结果相一致,而与被检测的其他血清型小肠结肠炎耶尔森菌和常见肠道致病菌无交叉凝集反应.结论 本实验筛选获得的单克隆抗体,用于小肠结肠炎耶尔森菌O:8血清型菌株鉴定,具有良好的特异性,避免了免疫血清难以避免的交叉凝集现象.     

2011年江苏省东台市小肠结肠炎耶尔森菌监测分析

目的 了解江苏省东台市腹泻患者和不同宿主粪便小肠结肠炎耶尔森菌感染及其毒力基因携带情况。 方法 从所检标本中分离小肠结肠炎耶尔森菌,同时用聚合酶链反应方法检测分离菌株5种毒力基因携带状况。 结果 15种样品795份标本中,小肠结肠炎耶尔森菌检出率为3.77%,猪粪中的检出率最高,达22.50%;犬粪次之,为8.05%。猪粪中携带ail、 ystA、yadA 和virF 4种毒力基因的致病菌株检出率最高,均达12.50%;犬粪次之,分别为4.60%、4.60%、4.60%和4.60%。 结论 猪、犬是东台市小肠结肠炎耶尔森菌的重要携带者。     

小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性单克隆抗体制备

目的　制备出小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型特异的单克隆抗体。方法　用常规的骨髓杂交瘤融合技术。结果　筛选到了一株针对于小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性的克隆株 (编号 :Y6H8) ,且证实分泌的抗体属于针对于脂多糖免疫球蛋白IgG ,可用于玻片凝集法鉴定 0∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌。 结论　通过本实验证实小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型菌株脂多糖存在其特异性成分 ,可用于该菌株的分型鉴定.     

小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性单克隆抗体制备

目的　制备出小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型特异的单克隆抗体。方法　用常规的骨髓杂交瘤融合技术。结果　筛选到了一株针对于小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性的克隆株 (编号 :Y6H8) ,且证实分泌的抗体属于针对于脂多糖免疫球蛋白IgG ,可用于玻片凝集法鉴定 0∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌。 结论　通过本实验证实小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型菌株脂多糖存在其特异性成分 ,可用于该菌株的分型鉴定     

小肠结肠炎耶尔森氏菌的质粒图谱及REAP的分析

本文对福建、浙江两地分离的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行了血清型鉴定及毒力质粒的研究,用ＥｃｏＲＩ对不同血清型菌株进行了ＲＥＡＰ（质粒的限制性内切酶图谱分析）比较。结果表明,小肠结肠炎耶氏菌的毒力质粒不仅在不同血清型菌株之间有差异,而且在０∶３血清型的菌株之间也有一定差异,这些差异可以反映出一定的地区特点。     

北京市顺义区细菌性痢疾临床诊断病例的感染致病菌检测分析

  目的  分析北京市顺义区细菌性痢疾临床诊断病例的感染致病菌构成及病原特征,为该类疾病的科学防控提供依据。  方法  收集细菌性痢疾临床诊断病例44例,进行志贺菌属、弯曲菌属、沙门菌属、副溶血弧菌、霍乱弧菌、致泻大肠埃希菌、小肠结肠炎耶尔森菌7种常见致病菌的分离培养,对分离菌株进行血清分型、分子分型及毒力基因检测。  结果  志贺菌属和小肠结肠炎耶尔森菌检出率为0,其他致病菌检出率由高到低依次为弯曲菌属（30.00%,9/30）、沙门菌属（18.18%,8/44）、副溶血弧菌（15.91%,7/44）、致泻大肠埃希菌（4.55%,12/44）、霍乱弧菌（3.13%,1/32）。 9株空肠弯曲菌分成9种ST型;8株沙门菌分成4种血清型,7种脉冲电场凝胶电泳带型;8株副溶血弧菌分成4种血清型,毒力基因特征均为tdh+/trh-;1株霍乱弧菌为非O1/O139血清型,毒力基因特征为ctx-/t3ss+。  结论  北京市顺义区细菌性痢疾临床诊断错误率较高。 细菌性痢疾临床诊断病例具有较高的致病菌检出率,以弯曲菌属、沙门菌属为优势构成。 志贺菌属与其他腹泻肠道致病菌的快速鉴别诊断应在临床尽快建立并推广应用。     

浙江省温州市鼠疫静息期鼠类携带耶尔森菌调查分析

目的了解浙江省温州市鼠疫静息期鼠类耶尔森菌携带情况。方法采用日夹笼法捕鼠,无菌解剖捕获鼠,对盲肠末端内容物进行耶尔森菌分离。结果本次调查共捕获687只鼠,室内鼠占91.27%。共检到耶尔森菌81株,检出率为11.79%,以小肠结肠炎耶尔森菌为主,占79.01%,其次为中间型耶尔森菌、克氏耶尔森菌和假结核耶尔森菌,分别占11.11%、7.40%、2.47%。结论温州市鼠类耶尔森菌携带率较高,室内鼠类能携带各型耶尔森菌,野外鼠类只携带小肠结肠炎耶尔森菌。     

2018－2021年江苏省不同来源小肠结肠炎耶尔森菌药物敏感性特征分析

  目的  了解2018—2021年江苏地区间不同来源小肠结肠炎耶尔森菌的耐药表型和耐药基因携带情况。  方法  收集2018—2021年江苏地区各类标本,进行小肠结肠炎耶尔森菌分离培养鉴定,采用肉汤稀释法对分离株进行9类15种抗菌药物的敏感性测定,将分离株的全基因组序列与抗菌药物抗性基因数据库（CARD）比对,对基因组中的耐药基因进行扫描分析。  结果  2018—2021年江苏省共采集各类标本6 414份,共鉴定出132株小肠结肠炎耶尔森菌,分离率为2.06%,其中47株菌分离自腹泻患者。 药敏分析结果显示全部菌株对青霉素类抗菌药物氨苄西林均耐药,对替加环素和阿米卡星全部敏感。 对其他12种抗菌药物均有不同的程度的耐药（3.79%～38.64%）。 共发现42种药物非敏感表型,66.02%（87/132）的菌株对3类以上抗菌药物非敏感。 基因组序列分析发现,菌株共携带8类16种耐药基因,分别是?-内酰胺酶基因blaA、blaB和bla_OXA-10;氨基糖苷类耐药基因aac、aad和aph;喹诺酮类耐药基因qnr;四环素类耐药基因tet;酰胺醇类耐药基因floR、cmlA和cat;磺胺类耐药基因dfrA、qac和sul、链阳菌素类耐药基因vatF和利福霉素类耐药基因arr,携带率范围为0.76%～96.97%。 其中32.58%的菌株发生了GYRA 83位氨基酸的突变,介导菌株对喹诺酮类药物的耐药。 耐药严重的菌株PIN-YC-2019139携带一个由11个耐药基因和多个转移元件组成的耐药基因簇,提示可移动元件介导了耐药性在小肠结肠炎耶尔森菌株间的转移。  结论  2018—2021年江苏省监测小肠结肠炎耶尔森菌耐药情况严重,获得性耐药基因的获得和固有基因的突变导致菌株呈现多种药物非敏感谱。 耐药基因和可移动元件的嵌合是耐药基因簇加速转移的潜在风险,提示应加强监测和抗菌药物的合理使用,警惕超级耐药菌的出现。     

Class 1 integron-borne gene cassettes in multidrug-resistant Yersinia enterocolitica strains of different phenotypic and genetic types

Seventy nine strains of Yersinia enterocolitica resistant to one or more antimicrobials were analyzed for integrons. Only class 1 sul1 integrons containing aadA1a (28 strains), aadA1a-dfr1-sat1 (2 strains), and dfr1-aadA1a (1 strain) gene cassettes were found. The first two types were found in clinical isolates belonging to serotype O:3, biotypes 2 to 4, and eight combined ribotypes, and the third was found in the reference strain, CECT4054 (O:8). All screened resistance markers were found in strains with and without integrons (except for chloramphenicol resistance, encoded by catA1 gene, which was only present in strains with integrons), but in different resistance profiles (R profiles). A profile (ampicillin, streptomycin, sulfadiazine, and trimethoprim resistance, encoded by the tem1, aadA1a, sul1, and dfr1 genes, respectively) was found in strains, with and without integrons. Integrons and some of the resistance genes are located on plasmids with sizes ranging between 65 and 140 kb. This is the first report of class 1 integrons in Y. enterocolitica.     

浙江省舟山市售贝类中创伤弧菌的定量检测及毒力基因分析

目的 了解2010-2012年浙江省舟山市售贝类中创伤弧菌(Vibrio vulnificus,VV)的污染状况与季节性变化规律,及其毒力相关基因分型。 方法 采用3%氯化钠碱性蛋白胨水增菌,纤维二糖一多粘茵素E(cc)琼脂分离贝类海产品中的创伤弧菌,可疑菌落的鉴定采用API20E,采用最近似值法(most probable number,MPN)进行创伤弧菌的定量检测,应用PCR技术进行生物Ⅰ型、Ⅱ型和血清E型鉴定,及vcg、16S rRNA毒力基因分型。 结果 179份样品检出64株创伤弧菌,检出阳性率为35.75%。不同季节检出率差异有统计学意义(2=35.23,P0.05),夏季检出率最高为68%。39株VV菌株为溶血素A基因(hemolysin gene A, vvhA)核酸阳性,1株BT2型,1株血清E型,其余37株均为BT1型。vcgC/E和16S rRNA A/B毒力基因分型结果显示:CB型 31株,CAB型4株,EA型 3株,EAB型 1株。 结论 舟山市售贝类中创伤弧菌的污染状况严重,尤其是夏秋季,毒力基因型呈多样性,以CB型为主。应对贝类的食品安全进行风险评估,预防食源性疾病的暴发。     

Specific detection of plasmid bearing Yersinia isolates by PCR

A total of 210 isolates belonging to 9 different species of the genus Yersinia (Y.) was investigated with three different PCR assays targeting two plasmoidal genes, the Yersinia adhesin gene (yadA) and the V-antigen gene. The yadA PCR assay described in 1995 by Blais and Phillipe, targeting a Y. enterocolitica specific gene region and a newly designed assay targeting the gene region functionally responsible for autoagglutination, were compared. Both assays identified the same Y. enterocolitica strains. To exclude the possibility that false negative results were obtained due to mutations that had occurred in parallel in both gene regions, a third PCR assay by Neubauer et al. (2000) targeting a conserved region of the V-antigen gene was used as control. Again, DNA of the same Y. enterocolitica strains was amplified. In contrast to the yadA PCR assay described by Blais and Phillipe, the newly established yadA and the V-antigen PCR assays amplified DNA from Y. pseudotuberculosis strains. Therefore, by using the PCR technique as a molecular tool spontaneous mutations could be excluded as the cause of anomalous reactions in PCR assays targeting genes of the Yersinia virulence plasmid. Based on these results, it can be assumed that all presumptive pathogenic Yersinia isolates can be identified on the basis of PCR analysis. These molecular assays may also produce fewer false positive reactions in comparison to phenotypic tests such as the autoagglutination test which depend heavily on the handler's experience. It has to be stressed that the PCR assays used in this study have not been evaluated for routine use. Therefore, standardization of the PCR methodology including sample preparation, primer target sequences and PCR reagents is needed for the reliable and safe diagnosis of pathogenic Yersinia spp. in future.     

泛耐药铜绿假单胞菌的毒力基因检测和同源性分析

目的了解毒力基因在泛耐药铜绿假单胞菌中的分布情况,并分析其同源性。方法采用PCR方法检测毒力基因exoU和exoS,用BOX—PCR指纹图谱分析技术进行同源性分析。结果53株临床分离的泛耐药铜绿假单胞菌,其中40株毒力基因为exoS＋／exoU一型,10株为exoU＋／exoS-基因型,1株为exoS＋／exoU＋基因型,2株为exoS-／eexo U-基因型。BOX-PCR结果显示,41株exoS＋菌株分为24种基因型,11株exoU＋菌株分为7种基因型。结论临床分离的泛耐药铜绿假单胞菌,毒力基因的携带率高,BOXPCR指纹图谱分析技术适合铜绿假单胞菌的同源性分析,可为医院感染的控制与管理提供病原学基因分型资料。     

临床分离非O1/O139群霍乱弧菌毒力及耐药特征分析

目的 了解临床分离的非O1/O139群霍乱弧菌毒力及耐药特征。方法 收集2014-2015年北京友谊医院4-10月肠道门诊分离到的非O1/O139群霍乱弧菌,采用微量肉汤稀释法检测霍乱弧菌对15种抗生素的耐药性;PCR检测霍乱弧菌的毒力相关基因。结果 35株非O1/O139群霍乱弧菌对复方新诺明的耐药率(40.0%)最高,其次是氯霉素(28.5%)和磺胺异恶唑(22.6%),对阿莫西林/克拉维酸、头孢曲松、头孢西丁、头孢吡肟及亚胺培南完全敏感。毒力基因检测显示所有菌株均携带hlyA和ompU,hapA(97.1%)、rtxA(91.4%)、Ⅵ型分泌系统T6SS(94.3%~97.1%)、Ⅲ型分泌系统T3SS(80.0%~85.7%)和nanH(62.9%)阳性率较高;主要的毒力基因型为hlyA-rtxA-hapA-ompU-nanH-vasA-vasK-vasH-vcsC-vcsV-vcsN-vspD(40.0%)。结论 临床分离非O1/O139群霍乱弧菌毒力基因多样化,对抗菌药物耐药性较高,需加强腹泻病例中非O1/O139群霍乱弧菌的毒力及耐药监测。     

北京市昌平区食源性单增李斯特菌特征分析

目的 了解北京市昌平区食源性单增李斯特菌（Lm）的毒力基因携带情况、抗生素敏感性及分子特征。方法 对2010－2016年12类食品中分离的22株Lm进行血清型、毒力基因、抗生素敏感性、多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析。结果 22株Lm分为5种血清型（以1/2c、3a血清型为主）;19种毒力基因携带谱（T1～T19）,毒力基因阳性数为6～12个;对氨苄西林、青霉素、美罗培南、复方新诺明、万古霉素和环丙沙星敏感,出现对四环素、红霉素耐药菌株;分为8个序列型（ST）（包括7个新型STA1～STA7）,STA3为主要型别;分为17种PFGE带型,其相似系数为63.5%～100.0%,PTⅠ为主要PFGE带型。结论 昌平区食源性Lm以1/2c、3a血清型为主,STA3为主要型别,PTⅠ为主要PFGE带型,其毒力基因的携带具有差异性,出现对四环素、红霉素耐药株,为食源性Lm的研究提供了参考。