基于血液代谢组学分析缺血性心脏病患者疾病进程的代谢紊乱特征

本研究以47例心绞痛患者、51例心肌梗死患者和80例心力衰竭患者的血浆作为样本,结合超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-HRMS)技术和化学计量学方法,分析缺血性心脏病患者疾病进程的代谢紊乱特征。实验共定性、定量鉴定97种内源性代谢物,基于t检验、主成分分析、偏最小二乘-判别分析、变量重要性投影等方法,分别筛选出28种和32种可区分心绞痛与心肌梗死患者,心肌梗死与心力衰竭患者的差异性特征代谢物。代谢通路分析结果表明,从心绞痛到心肌梗死,以及从心肌梗死到心力衰竭的疾病进程中,氨基酸代谢和三羧酸循环等能量代谢均发生了紊乱;从心肌梗死到心力衰竭的疾病进程中,以甘油磷脂代谢和脂肪酸生物合成为代表的脂质代谢显著紊乱;通过分析受试者工作曲线(ROC),糖胆酸、富马酸、棕榈酸、肌钙蛋白、高密度脂蛋白、谷丙转氨酶和谷草转氨酶等联合指标可提高心肌梗死诊断精度,ROC曲线下面积(AUC)值达到1.000 0;瓜氨酸、柠檬酸、硬脂酸、甘油磷酸胆碱和NT-proBNP联合指标可提高心力衰竭诊断精度,AUC值达到0.957 0。本研究可为缺血性心脏病患者的精准诊断和疾病发展过程中的药物、营养干预提供重要的代谢...     

基于质谱技术的黄芩治疗2型糖尿病的粪便代谢组学研究

采用粪便代谢组学方法,运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF MS）技术研究了黄芩治疗2型糖尿病大鼠的作用机制。采用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法判别分析方法 （OPLS-DA）对健康对照组、2型糖尿病模型组和黄芩治疗组的大鼠粪便中内源性代谢物进行分析,寻找黄芩治疗2型糖尿病大鼠的潜在生物标志物。结果表明,健康对照组、2型糖尿病模型组和黄芩治疗组的大鼠粪便代谢图谱有显著的区分;发现并鉴定了11种潜在的生物标志物。黄芩对2型糖尿病大鼠的鞘脂类代谢和脂肪酸代谢具有调节作用;对三羟基三甲基吲哚酮、白三烯E4、亮氨酰脯氨酸和雌二醇的含量具有调节作用;同时,大鼠体重和空腹血糖的变化趋势表明,黄芩具有改善糖尿病症状的作用。     

血管性认知障碍的载脂蛋白E基因多态性

目的 :分析血管性认知障碍的载脂蛋白E基因多态性,为临床诊断提供参考。方法 :选取2010年8月~2013年2月我院收治的血管性认知障碍患者90例为研究对象,其中脑出血患者45例,脑梗死患者45例。使用基因特异性多重聚合酶链反应技术进行APOE基因多态性测定。结果 :血管性认知障碍的患者以ε3/3基因最常见,但在脑出血、脑梗死中检出率无明显差异;脑出血患者ε2出现频率更高于脑梗死组,脑梗死患者ε4出现频率高于脑出血组,两组比较差异明显,P<0.05。结论 :血管性认知障碍的患者有APOE基因亚型改变,且以ε3/3基因最常见,推测在脑血管疾病患者中,携带有ε4患者更容易发生脑梗死倾向,而携带有ε2患者有更高脑出血倾向。     

血清CEA、CA125、CA19-9和CA72-4联合检测在胃癌诊断及治疗中的意义

目的 :探讨血清CEA、CA125、CA19-9和CA72-4联合检测在胃癌诊断及治疗中的临床价值。方法 :采用电化学发光法对48例胃癌患者手术前后、30例胃息肉患者、32例健康体检者血清CEA、CA125、CA19-9和CA72-4水平进行检测。结果 :胃癌患者血清中四种肿瘤标志物水平明显高于胃息肉患者和健康体健者(P<0.05)。胃癌Ⅲ~Ⅳ期患者血清中四种肿瘤标志物水平明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。同时胃癌高、中分化患者血清中四种肿瘤标志物水平和低分化患者血清中四种肿瘤标志物水平相比较,差异有统计学意义(P<0.05)。四种肿瘤标志物联合检查胃癌的诊断敏感性和准确性明显高于单一标志物。结论 :联合检测血清CEA、CA125、CA19-9和CA72-4水平可作为胃癌的早期诊断、手术方法的选择、疗效评价及预后监测的参考指标。     

小胖威利综合征和天使综合征细胞株培养液的代谢组学差异分析

小胖威利综合征和天使综合征是两种在15号染色体长臂(15q11-q13)发生基因变异的遗传性疾病。本研究对这两种细胞株的培养液开展基于高效液相色谱-质谱联用的代谢物组学数据收集,并利用XCMS在线分析平台对代谢产物组进行全局对比分析。通过Metlin数据库筛查代谢物组差异分析所命中的代谢产物,进一步依据Bio Cyc Pathway数据库绘制出包含这些显著差异代谢物结点的代谢网络通路。数据分析共发现了70种显著差异的代谢物和36个被高度覆盖的代谢通路,在此基础上探究了首次发现的、在代谢差异分析中最为显著的吗啡生物合成和尼古丁降解通路与疾病表型的潜在关联性,为遗传疾病的无损分子诊断提供了代谢组学基础和生物标志物候选靶标。     

基于色谱质谱联用技术的定量代谢组学研究

代谢组学是研究生物体系受到内在和外在因素刺激产生的内源性代谢变化的一门学科,可以对那些能描述代谢循环情况的关键化合物进行定性和定量分析[1],已经成为生命科学领域一个对复杂系统进行研究的重要的、有价值的工具。 近几年来, 代谢组学正朝着整合一体化、定量化和标准化的方向发展[2]。但其发展也存在着一些问题,代谢组学的最高目标是要实现所有代谢物的定性定量,为复杂系统的研究提供一种“全景模式（panorama）”,但是由于现阶段分析技术的局限性,当前代谢组学的“全景模式”仍然停留在代谢指纹谱研究阶段,还是一种比较模糊的”全景模式”,难以完全胜任复杂系统的深入研究需要,需要与“特写模式（close-up）”互为补充。 因此,我们建立了一套包含了全景与特写两个模式的定量代谢组学平台技术,一方面,我们进行多个代谢循环的精确定量,这可以对优先关注的代谢循环进行聚焦,对关键生物标志物进行确证并可以详细研究和精确刻画其时空变化规律。另一方面,我们利用代谢指纹图谱进行整体分析,这可以从总体上把握整体轮廓及其代谢演化轨迹,寻找未知生物标志物。将这两者结合,可以达到一个互补的作用,定量代谢组学技术平台对复杂系统的研究和刻画将更全面、更准确。 本文将具体介绍定量代谢组学技术平台应用于糖尿病肾病的研究。根据先验知识,采用多种色谱-质谱联用技术,建立了针对特定代谢循环（包括脂肪酸[3]、磷脂[4]、氨基酸[5]、嘌呤和核苷[6-7]）潜在生物标志物精确定量分析的方法。另外,还利用UPLC-QTOF得到了代谢指纹谱,反映代谢物的整体信息。研究表明,单纯使用任何一个模式或任何一个循环都只能得到一部分的标志物,会造成遗漏。而使用定量代谢组学平台技术,我们可以得到范围更全面的标志物,互相之间也可以做到补充和完善。利用这些标志物,可以对疾病的发生和发展进行预测和判断,还可以通过寻找不同类的生物标志物在生物学上的意义和联系,探索发病的机理,指导临床治疗。     

警犬血浆内源性代谢物的气相色谱-质谱分析

利用气相色谱-质谱技术对德国牧羊犬、史宾格犬和拉布拉多犬三个警用品种犬的血浆进行了分析研究。结果发现,犬的血浆中有200多种物质,而这三个品种犬血浆共有的内源性代谢物有38种,主要是氨基酸、脂肪酸,糖类等小分子量的化合物。通过对检测到的38种共有内源性代谢物比较分析,发现部分代谢物的含量在三个品种之间存在差异。     

阿加曲班应用时机对缺血性脑卒中患者疗效及生活质量影响

目的:观察急性脑卒中患者不同时段应用阿加曲班对疗效和患者恢复期生活质量影响。方法:对2012年7月至2013年12月我院收治的急性缺血性脑卒中患者资料进行回顾性分析,将错过早期溶栓时间窗后的12h内(发病6¹8h为A组)和24h(发病1818h为A组)和24h(发病18³0h为B组)内应用阿加曲班患者分为2组,2组阿加曲班用法相同,配合对症治疗及相似康复方案。比较治疗前后美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分、Fugl-Meyer肢体功能评分(FMA),改良巴氏指数评分(MBI)。结果:2组治疗7d后NIHSS评分与治疗前相比差异有统计学意义,但2组治疗后评分比较差异无统计学意义。2组3个月后,运动能力及日常生活活动能力均有显著改善,FMA及MBI评分提高均较治疗前有统计学意义,B组FMA评分、MBI评分较A组高,但2组间差异无统计学意义。结论:在符合阿加曲班适应症的不同时段对患者进行治疗,疗效肯定且不同时段疗效无明显差异,治疗时间窗较广。但脑卒中患者恢复期生活质量与综合康复方案的制定和实施效果关系更为密切。     

阿托伐他汀联用阿司匹林预防缺血性脑卒中复发300例临床分析

目的观察研究缺血性脑卒中患者服用阿托伐他汀治疗后,颈动脉粥样硬化变化情况及缺血性脑卒中复发情况。方法将300例缺血性脑卒中患者随机分成2组,每组150例,两组常规治疗方法相同,对照组阿司匹林10mg/d,治疗组在此基础上加用阿托伐他汀20mg/d。随访12个月,了解缺血性脑卒中复发情况,并在治疗之前及治疗之后2～3月进行颈动脉彩超检查,对比治疗前后缺血性脑卒中患者颈内动脉斑块、狭窄程度等改变情况。结果对照组150例复发率18.67%,治疗组复发率6.00%,差异有显著性(P<0.05)。治疗后治疗组病人颈动脉粥样硬化、狭窄及软斑发生均明显改变,与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿托伐他汀和阿司匹林联合治疗能显著降低缺血性脑卒中复发率,阿托伐他汀主要是通过对颈动脉粥样硬化的干预起到防止脑血栓形成,从而降低缺血性脑卒中的复发。     

浅谈高致病性禽流感的预防与控制

禽流感是由甲型流感病毒引起的一种人畜共患急性传染病。根据禽流感致病性和毒力的不同,可以将其分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和无致病性禽流感。禽流感病毒有不同的亚型,由H5和H7亚型毒株所引起的疾病称为高致病性禽流感（HPAI）,最近国内外由H5N1亚型引起的禽流感即为高致病性禽流感,其发病率和死亡率都很高,危害极大,世界卫生组织（OIE）将高致病性禽流感列为A型传染病,我国将高致病性禽流感列为一类动物疫病。     

A place for ultrastructural analysis of platelets in cerebral ischemic research

It is well known that estrogen is neuroprotective through various mechanisms which suggest that sex hormone levels, thrombotic mechanisms, and inflammatory processes are strongly interconnected in predicting the outcome and consequences of cerebral ischemia. Because platelet ultrastructure is altered in conditions like thrombosis and associated with stroke, the question arises whether ultrastructural analyses of platelet morphology may provide further insight into the role of estrogen during ischemic insult. In the current study, a hyperglycemic modification to the two‐vessel occlusion model for inducing experimental cerebral ischemia was employed, in order to correlate neural tissue integrity levels between three experimental groups to corresponding platelet ultrastructure so as to determine whether there is an association between cerebral ischemia and the presence of inflammatory or necrotic platelet ultrastructure. It is apparent in the results that under the influence of estrogen in cyclic or intact females, there is lesser neural tissue damage as well as a reduced degree of inflammation evident in platelet activation morphology when compared to males and acyclic or ovariectomized females. It is unmistakable that neural injury is closely shadowed, if not preceded, by inflammatory changes in the coagulation system, particularly manifested in platelet ultrastructure. It is therefore suggested that platelets may indeed be used successfully to follow the progression of events of cerebral ischemia and possibly assist in the assessment of treatment strategies and their effects on hemostasis. Microsc. Res. Tech. 76:795–802, 2013. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.     

UPLC-HRMS结合质谱分子网络高通量分析人血浆中的代谢物

本文建立了超高效液相色谱-高分辨质谱（UPLC-HRMS）结合质谱分子网络（MSMN）分析血浆中代谢物的方法。采用Folch方法提取血浆中的代谢物,运用UPLC-HRMS技术同时检测水相和有机相中的多种代谢物。以标准品准确定性的代谢物为种子化合物,采用MSMN筛选与种子化合物质谱特征相似的代谢物,扩展代谢物定性范围,提高代谢物定性效率。将该方法用于人血浆中代谢物的定性分析,共检测到187个代谢物。其中,在水相中定性检测到氨基酸、脂肪酸、糖类等80个代谢物,在有机相中定性检测到107个脂类代谢物,实现了人血浆中多类代谢物的高通量分析。     

高分辨气相色谱法在快速鉴别厌氧菌中的应用

为快速鉴别生物制品中用常规方法难以鉴别的双歧杆菌、乳酸杆菌及丁酸梭菌,本实验室摸索并建立了用高分辨气相色谱同时定性定量测定上述厌氧菌培养物中挥发性和非挥发性脂肪酸的方法。对27份送检厌氧菌标本进行实测。结果双歧杆菌主要产乙酸,乳酸杆菌主要产乳酸,丁酸梭菌主要产丁酸,用此方法极易鉴别出三种厌氧菌。     

电控燃油喷射系统相位识别新方法

本文提出利用进气压力传感器及摩托车磁电机触发信号为电控燃油喷射系统提供相位基准的新方法。磁电机每个工作循环产生两个触发信号，仅根据该信号不可能精确控制喷油及点火时刻。进气过程中进气压力传感器输出信号先减小，后升高，而这一变化过程正好位于两次触发信号之间，根据这一特征可以区分两次触发信号。在低转速工况，将当前采集的进气压力值同预设的参考值进行比较，通过判断进气过程是否到来，区分两个触发信号；高转速时在进气冲程只是保存进气压力数据，根据上一循环确定的触发信号进行喷油和点火控制，为防止电磁干扰带来的判断失误，在每个循环的“空闲时间”将采样的压力值进行校验，保证最多只有一个循环系统工作异常。利用该方法进行电控系统MAP图标定试验，整个过程中，系统工作正常，表明该方法是可行的。     

动态心电图与超声心动图诊断冠心病无症状性心肌缺血的价值比较

目的探讨24h动态心电图,超声心动图诊断冠心痛无症状性心肌缺血的价值。方法选择86例冠心病患者应用24h动态心电图(DCG)和超声心动图(ECHO)检查,以冠状动脉造影(CAG)结果为标准,对比分析动态心电图、超声心动图结果,比较其敏感性、特异性及准确率。结果动态心电图的敏感性为86%,特异性为66.7%,准确性为83.7%。超声心动图的敏感性为23%,特异性83.3%,准确性为31.4%。结论动态心电图因其监测时间长,对缺血性ST段改变的诊断具有较高的敏感性,可作为诊断冠心病无症状性心肌缺血的重要的无创性检查技术。     

分析化学中物质的分离方法

第一章 分离方法介绍 1．1高速逆流色谱 高速逆流色谱（HSCCC）是由美国国家医学院YioehiroIto博士于1982年首先开始的。当仪器工作时互不相容的两相溶剂在绕成线圈的聚四氟乙烯管内具有单向性流体动力平衡性质。在聚四氟乙烯管内做高速行星运转时，如用其中一相溶剂做固定相，     

Proteomics of brain extracellular fluid (ECF) and cerebrospinal fluid (CSF)

Mass spectrometry has become the gold standard for the identification of proteins in proteomics. In this review, I will discuss the available literature on proteomic experiments that analyze human cerebrospinal fluid (CSF) and brain extracellular fluid (ECF), mostly obtained by cerebral microdialysis. Both materials are of high diagnostic value in clinical neurology, for example, in cerebrovascular disorders like stroke, neurodegenerative diseases like Alzheimer's Disease, Parkinson's Disease, amyotrophic lateral sclerosis (ALS), traumatic brain injury and cerebral infectious and inflammatory disease, such as multiple sclerosis. Moreover, there are standard procedures for sampling. In a number of studies in recent years, biomarkers have been proposed in CSF and ECF for improved diagnosis or to control therapy, based on proteomics and mass spectrometry. I will also discuss the needs for a transition of research‐based experimental screening with mass spectrometry to fast and reliable diagnostic instrumentation for clinical use. © 2008 Wiley Periodicals, Inc., Mass Spec Rev 29:17–28, 2010     

CD34⁺ CD38^- subpopulation without CD123 and CD44 is responsible for LSC and correlated with imbalance of immune cell subsets in AML

Acute myeloid leukemia (AML) is regarded as a stem cell disease. However, no one unique marker is expressed on leukemia stem cells (LSC) but not on leukemic blasts nor normal hematopoietic stem cells (HSC). CD34⁺ CD38- with or without CD123 or CD44 subpopulations are immunophenotypically defined as putative LSC fractions in AML. Nevertheless, markers that can be effectively and simply held responsible for the intrinsical heterogeneity of LSC is still unclear. In the present study, we examined the frequency of three different LSC subtypes (CD34⁺ CD38^-, CD34⁺ CD38^- CD123⁺ , CD34⁺ CD38^- CD44⁺ ) in AML at diagnosis. We then validated their prognostic significance on the relevance of spectral features for diagnostic stratification, immune status, induction therapy response, treatment effect maintenance, and long-term survival. In our findings, high proportions of the above three different LSC subtypes were all significantly characterized with low complete remission (CR) rate, high relapse/refractory rate, poor overall survival (OS), frequent FLT3-ITD mutation, the high level of regulatory T cells (Treg) and monocytic myeloid-derived suppressor cells (M-MDSC). However, there was no significant statistical difference in all kinds of other clinical performance among the three different LSC groups. It was demonstrated that CD34⁺ CD38^- subpopulation without CD123 and CD44 might be held responsible for LSC and correlated with an imbalance of immune cell subsets in AML.     

尿胰蛋白酶原激活肽测定对急性重症胰腺炎诊断价值

目的探讨尿胰蛋白酶原激活肽测定对急性重症胰腺炎的诊断价值。方法选择51例急性胰腺炎患者,按Atlanta标准分为轻型（MAP）28例,重型（SAP）23例,比较轻型和重型患者发病后、24h、48h、72h血CRP、ESR、血淀粉酶和尿TAP水平,并以尿TAP诊断试验与同期APACHEⅡ评分系统比较,确定尿TAP对SAP诊断的灵敏度、特异性、准确率,并观察TAP与SAP合并症的关系。结果SAP患者尿TAP水平在入院时、24h、48h均高于MAP组（P〈0.05）,TAP测定结果法与APACHⅡ系统法对急性胰腺炎轻、重型的评估,差异无统计学意义（P〉0.05）,小于、大于临界值35 nmol/L时,尿TAP预测SAP的敏感性、特异性和准确性分别为86.9%、67.8%、76.5%和78.3%、75.0%、80.4%。有无腹水及是否合并MODS,TAP的检测结果差异有统计学意义（P〈0.05）。结论尿TAP水平与急性胰腺炎患者病情的严重程度有关,在发病24h内对早期SAP具有一定预测价值,与APACHEⅡ评分系统效果相当。