几种植物多酚对Hela细胞抑制作用的初步研究

采用噻唑蓝比色法、吉姆萨染色法和吖啶橙荧光染色法研究了莲房原花青素、葡萄籽多酚和茶多酚对Hela肿瘤细胞株的体外抑制作用.结果表明,在一定的浓度范围内,这三种植物多酚对Hela细胞均有明显的抑制作用,且存在良好的剂量-教应关系.它们对Hela肿瘤细胞株的半数抑制浓度分别为茶多酚IC50=245.0μg/mL,葡萄籽多酚IC50=78.7μg/mL,莲房原花青素IC50=190.8μg/mL,其抑制效果依次是葡萄籽多酚>莲房原花青素>茶多酚.普通显微镜和荧光显微镜观察发现,Hela细胞经这三种植物多酚作用后,细胞形态发生明显的变化,可见凋亡小体,荧光强度增强,细胞呈现凋亡现象.     

复方铁线蕨颗粒中总黄酮和总酚的提取及其对宫颈癌细胞的作用

目的提取复方铁线蕨颗粒中的总黄酮及总酚研究其对SiHa、HeLa、C-33A等宫颈癌细胞的增殖和凋亡的作用。方法从复方颗铁线蕨粒中按提取工艺提取并纯化得到总黄酮及多酚提取物,制作芦丁及没食子酸的标准曲线并采用紫外分光光度法测定含量;将不同浓度的总黄酮及总酚给予3种细胞,通过药物细胞毒性实验测定各细胞在2种不同提取物作用下的IC50值。以1/2IC50、IC50、2IC50作为低、中、高浓度给药,采用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)偶联Annexin-V染色法检测细胞凋亡。结果复方铁线蕨颗粒剂中总酚含量为30.83%,总黄酮含量39.14%。与正常对照组相比,不同浓度的2种提取物给药下的SiHa、HeLa和C-33A细胞,随着浓度的增加抑制率增加。在总酚作用下SiHa细胞IC50为367μg/mL, HeLa细胞IC50为380μg/mL, C-33A细胞的IC50为256μg/mL。在总黄酮作用下SiHa细胞IC50为268μg/mL, HeLa细胞IC50为274μg/mL, C-33A细胞的IC50为110μg/mL。在总酚及总黄酮高中低浓度作用下3种细胞的凋亡率与正常对照组相比具有显著差异,且各个细胞总酚给药组和总黄酮给药组组内差异显著。结论复方铁线蕨颗粒剂提取的总酚及总黄酮能抑制SiHa、HeLa、C-33A细胞的增殖,诱导3种宫颈癌细胞凋亡。     

蓝莓花色苷提取物对人脂肪干细胞增殖、分化和脂质积累的影响

目的：研究蓝莓花色苷提取物对人脂肪干细胞增殖、分化和功能的影响,评估其抗脂肪形成的能力及可能的机制。方法：原代分离培养人脂肪间充质干细胞,建立人脂肪细胞体外分化模型。采用不同质量浓度的蓝莓花色苷提取物干预不同生长时期的脂肪细胞。通过噻唑蓝法和乳酸脱氢酶测定,观察蓝莓花色苷提取物对脂肪细胞的增殖抑制作用。采用油红O染色实验和AdipoRed实验评价分化期脂肪细胞的脂质积累情况,采用葡萄糖氧化酶法测定成熟期脂肪细胞的葡萄糖吸收情况,采用酶联免疫吸附测定实验和实时荧光定量聚合酶链式反应法分析脂肪细胞因子分泌水平以及脂肪细胞成脂分化基因和脂肪细胞因子基因的表达量。结果：1）干预48 h后,蓝莓花色苷提取物可以显著抑制对数生长期、融合期的脂肪细胞增殖（P＜0.05）,且有剂量-效应关系（25～175 μg/mL）;对分化期的脂肪细胞增殖也有显著抑制作用（P＜0.05）;同时极显著抑制成熟脂肪细胞的脂质积累（P＜0.01）。2）不论1 μmol/L胰岛素是否存在,蓝莓花色苷提取物对成熟脂肪细胞的葡萄糖摄取均有显著的促进作用（P＜0.05）,且能够显著上调脂联素的表达（P＜0.05）。3）蓝莓提取物使分化期脂肪细胞中的过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ）表达下调,但在成熟期脂肪细胞中表达显著上调（P＜0.05）。蓝莓花色苷提取物可以降低人脂肪干细胞的增殖,抑制细胞分化,减少脂质堆积。通过增加葡萄糖摄取以及脂联素和PPARγ的表达来维持或增强成熟脂肪细胞的功能。结论：蓝莓花色苷提取物可能具有抗肥胖的潜能。     

杨梅多酚提取物对高糖损伤INS-1细胞活性及Pdx-1表达的影响

目的:研究杨梅多酚提取物(CBE)对高糖损伤的INS-1细胞活力、凋亡和坏死以及Pdx-1蛋白表达水平的影响。方法:通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胰岛细胞活性,采用Hoechst 33342/PI双染法观察细胞的凋亡和坏死,同时以Western blot法检测Pdx-1蛋白的表达水平。结果:杨梅多酚提取物(0.5～20μg/mL)对高糖损伤INS-1细胞具有保护作用,其中5μg/mL CBE的保护效果较好,与损伤组相比,细胞活性上升14%以上。且在低质量浓度范围(0.5～5μg/mL),CBE的保护效果呈剂量效应关系。荧光染色结果表明杨梅多酚提取物对高糖诱导损伤的INS-1细胞凋亡具有明显的抑制作用。免疫印迹试验显示杨梅多酚提取物干预可改善INS-1细胞因高糖诱导的Pdx-1表达水平下调。结论:杨梅多酚提取物对高糖诱导损伤的INS-1细胞具有显著的保护作用,其机制可能与改善葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能有关。     

绿茶成分对3T3-L1细胞的细胞增殖及脂肪代谢的影响

目的:研究绿茶成分——儿茶素、咖啡碱和茶氨酸对3T3-L1前脂肪细胞的细胞增殖及脂肪代谢的影响。方法:测定不同浓度儿茶素、咖啡碱和茶氨酸对3T3-L1细胞增殖的影响,确定无毒性浓度。在分化诱导液中添加各绿茶成分后对3T3-L1细胞进行96h诱导分化,分化后第6天测定脂肪细胞中甘油三酯(TG)含量。细胞分化后第9天,单独添加绿茶成分或同时添加去甲肾上腺素(NA)24h,分析对细胞中脂肪分解的影响。结果:添加20μg/mL以上质量浓度的儿茶素能显著抑制3T3-L1细胞增殖,但质量浓度40,80μg/mL的儿茶素对3T3-L1细胞有毒性作用,而160μg/mL咖啡碱和茶氨酸对细胞增殖无明显影响。20μg/mL儿茶素能显著抑制3T3-L1细胞中TG的合成,而咖啡碱和茶氨酸对细胞脂肪沉积无明显影响。与单独添加NA相比,同时添加咖啡碱能显著促进NA诱导细胞中脂肪分解的能力。结论:儿茶素抑制脂肪细胞的增殖和脂肪沉积,咖啡碱促进激素诱导脂肪分解。绿茶成分中儿茶素和咖啡碱对脂肪细胞内的脂肪代谢有调节作用。     

紫甘薯花色苷制备及其抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖研究

目的:制备紫甘薯花色苷提取物并分析其主要成分,研究其对3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的抑制作用。方法:应用响应曲面法优化提取条件;用高效液相色谱法(HPLC)分析其主要成分;以3T3-L1前脂肪细胞为体外模型,利用MTT法得到最佳铺板密度,得到细胞生长曲线,从而在最佳密度和对数生长期检测不同浓度紫甘薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞的增殖的影响。结果:花色苷提取物总量达到39.79 mg/g;选择细胞接板密度为5×103 cfu/mL,细胞铺板12h之后继续培养24 h,紫甘薯花色苷从最低质量浓度15.625μg/mL时即相对于空白组能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞生长增殖的作用(P0.05)且具有剂量效应关系,紫甘薯花色苷半数抑制浓度IC50为(413.853±2.617)μg/mL。结论:体外细胞实验显示紫甘薯花色苷具有抑制脂肪细胞生长增殖,提示紫甘薯花色苷具有预防肥胖的作用。     

荷叶生物碱对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:研究荷叶生物碱提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其可能的作用机理。方法:采用MTT法检测荷叶生物碱提取物(LLAE)对前脂肪细胞生长的抑制效果并确定半抑制浓度(IC50);流式细胞仪技术测定细胞周期及凋亡情况;使用诱导剂对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色法分析荷叶生物碱提取物(LLAE)对前脂肪细胞分化程度的影响。结果:荷叶生物碱提取物(LLAE)能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖且呈剂量时间依赖性;在G0/G1期产生阻滞,有效诱导细胞凋亡;能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,降低细胞中脂肪滴的积累。结论:荷叶生物碱提取物(LLAE)能有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖及分化,揭示其可能具有预防肥胖的功效。     

紫马铃薯花色苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的:研究紫马铃薯花色苷提取物对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响及其机理。方法:采用MTT法检测紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)对细胞生长的抑制效果,确定半抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡情况;对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,油红O染色比色分析紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)对其分化程度的影响。结果:紫马铃薯花色苷提取物(PPAE)能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖且呈剂量时间依赖性;能有效诱导细胞凋亡,同时在G2/M期产生阻滞;紫马铃薯花色苷提取物能显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,减少细胞中脂质的沉积。结论:紫马铃薯花色苷提取物能有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化,提示其可能具有预防肥胖的功效。     

发酵大麦提取物对3T3-L1前脂肪细胞分化及脂代谢的影响

研究乳酸菌发酵大麦提取物(LFBE)对3T3-L1前脂肪细胞分化及其脂代谢的影响与作用途径。利用植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum dy-1)发酵大麦获得LFBE,采用Folin-Ciocalteu法测定总酚含量;凯氏定氮法测定蛋白质含量与苯酚硫酸法测定多糖含量;采用CCK-8法检测细胞增殖能力和油红O染色法分析前脂肪细胞的分化程度;采用Realtime PCR法检测LFBE对脂代谢关键基因转录水平的调控作用。结果表明,与未发酵大麦提取物相比,LFBE中总酚含量增加了20.88%;LFBE中蛋白质含量从发酵前的13.93%增加至34.94%;多糖含量从未发酵时的64.94%下降至35.43%。与未发酵大麦提取物组相比,LFBE能够有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的生长,其IC_(50)约为560μg/mL;与模型组和未发酵大麦提取物组相比,400μg/mL LFBE能够显著抑制3T3-L1前脂肪细胞分化,抑制率达到58.85%。与模型组相比,LFBE能显著抑制脂代谢关键基因C/EBPα、PPAR-γ、SREBP-1c、PTP1B和aP2的mRNA表达水平,上调GLUT4的mRNA表达水平(p0.05)。LFBE可有效抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,并通过调节脂代谢相关基因的转录水平抑制其分化,表明其可能具有预防肥胖的作用。     

溪黄草多酚的抗氧化活性

对溪黄草中的多酚提取物的抗氧化性进行了研究。通过DPPH自由基清除实验、过氧化氢清除实验、还原力实验、抑制β-胡萝卜素褪色实验以及抑制亚油酸过氧化实验,分别研究了溪黄草多酚与抗坏血的抗氧化能力。结果表明:溪黄草多酚提取物具有良好的抗氧化能力,其清除DPPH自由基、清除过氧化氢、抑制亚油酸过氧化的IC50值分别为5.00、42.51与66.58μg/mL,高于抗坏血酸相应的IC50值,即5.99、56.74与94.83μg/mL。表明在试验范围内,溪黄草多酚的抗氧化活性强于抗坏血酸。     

桑葚渣多酚提取物冻干粉的制备及稳定性分析

桑葚渣是一种潜在的多酚类食品功能成分,但其氧化和热降解稳定性低,限制了其实际应用。本研究以副产物桑葚渣为原料,制备一种醇溶液提取物,添加冻干保护剂得到7 种不同的桑葚渣多酚提取物冻干粉（P1～P7）。结果表明,添加不同冻干保护剂后的桑葚渣多酚提取物冻干粉的总酚含量（单独添加麦芽糊精组除外）及抗氧化活性均有所提高,但单体花色苷含量（表观）均显著降低（P＜0.05）,保护剂的包裹影响了花色苷的提取率,P5的保护效果较好,其次为P4、P7（麦芽糊精包埋组）。25 ℃贮藏1 个月后未添加保护剂组的总酚含量、总花色苷含量、抗氧化活性较初始分别下降了19.27%、18.16%、11.41%,麦芽糊精和乳清蛋白粉提高了其贮藏稳定性,且活性成分含量更高,抗氧化活性更强。未添加保护剂组的矢车菊素-3-葡萄糖苷及矢车菊素-3-芸香糖苷含量分别为（11.63±0.13）、（4.14±0.05）mg/g,较初始分别下降了26.72%、16.53%,P4、P7两种主要的花色苷单体的含量没有明显下降,稳定性较好。随着体外消化的进行,各组花色苷含量呈下降趋势,且微胶囊包埋组（P3、P6、P2）中花色苷保留率较高,提高了桑葚渣多酚提取物的消化稳定性。     

桑叶多酚氧化酶分离及活性研究

采用分光光度法和扫描电子显微镜对桑叶多酚氧化酶(PPO)的结构、活性以及不同抑制剂的抑制效果进行研究。结果表明:桑叶多酚氧化酶为纤维状蛋白;其最适pH值为7.0,最适温度为40℃;在相同抑制剂浓度下,总体抑制效果为:抗坏血酸>亚硫酸氢钠>柠檬酸>氯化镁>氯化钠。     

富含黄酮和生物碱的桑叶提取物的提取工艺研究

目的：研究桑叶黄酮和生物碱的同步高效提取工艺,通过正交试验获得最佳提取方案。方法：在单因素试验基础上用正交试验进行工艺参数的优化,获得最佳提取方案。结果：桑叶黄酮和生物碱的最佳同步提取工艺为液料比10:1(V/m)、乙醇浓度60%(pH2)、提取时间2h、提取温度80℃、提取2 次。结论：用该法对桑叶黄酮和生物碱进行共同提取,提取率较高,可以获得二者含量较高的提取物。     

桑葚提取物体外抗炎作用及机制的研究

本文采用脂多糖(LPS)刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7,建立细胞体外的炎症模型,研究桑葚提取物对LPS诱导巨噬细胞RAW264.7分泌功能的影响及其作用机制。实验用1μg/mL LPS刺激RAW264.7细胞,在不同浓度样品的干预下,用MTT法检测不同浓度的样品对RAW264.7细胞的作用;用Griess法检测细胞液中NO的含量;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞液中PGE2含量;用免疫印迹法(Western Blot)和RT-PCR法检测桑葚提取物对细胞iNOS和COX-2表达的影响;用HPLC法检测桑葚提取物中白藜芦醇的含量。结果表明桑葚提取物浓度在0.5~2 mg/mL范围内对细胞生长无明显影响;在1~2 mg/mL范围内能有效抑制NO和PGE2的分泌并能有效抑制iNOS和COX-2的表达;桑葚提取物中白藜芦醇的含量为107.44±0.48μg/g。这表明桑葚提取物抑制炎症相关因子表达量,从而减弱促炎症反应,发挥抗炎功效,其抗炎活性可能与桑葚中含有较高的白藜芦醇相关。     

桑葚酒的酿制工艺

桑葚含水分84.71％、粗蛋白0．36％、转化糖9．16％、灰分0．66％、粗纤雏0．91％、苹果酸、雏生素B1、雏生素B2、核黄素、胡萝卜素等。桑葚酒酿制工艺中添加1％～3％的Y-ADY发酵，20～25mg／kg的K2S2O5抗氧化，0．19％～0．5％的皂土澄清处理，68～72℃水浴杀茵15～20min，成品酒口味酸甜适宜、口味纯正，果香、酒香协调。     

桑叶水提物对高脂饮食小鼠粪便中胆固醇代谢产物的影响

本文研究了桑叶水提物对高脂饮食小鼠粪便中胆固醇代谢产物的影响,为桑叶饮料降血脂功能确定提供数据支持。将桑叶水提物按其DNJ含量设置成高(8.0 mg/kg·bw)、中(4.0 mg/kg·bw)、低(2.0 mg/kg·bw)3个剂量组,分别灌胃高脂饮食小鼠4、8、12、16周,测定各组小鼠粪便pH、粪固醇、胆汁酸、短链脂肪酸(Short Chain Fatty Acids,SCFAs)含量,并对SCFAs和血清胆固醇(Total Cholesterol,TC)水平、动脉粥样硬化指数(Atherosclerosis Index,AI)进行相关性分析。与高脂对照组相比,每天灌胃8mg/kg·bwDNJ的桑叶水提物16周,小鼠粪固醇升高22.31%,胆汁酸升高22.31%,SCFAs升高36.76%,乙酸升高39.25%,丙酸升高96.52%,丁酸升高60.43%,异丁酸升高68.05%,戊酸升高74.21%,异戊酸升高23.78%,粪便pH降低2.05%,上述指标的变化均具有显著性(p0.05)。血清TC、AI分别与乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸呈极显著负相关(p0.01)。桑叶水提物可改善高脂饮食小鼠肠道环境,促进肠道微生物发酵产生SCFAs,促进粪固醇、胆汁酸排出,从而有助于降血脂作用。     

桑椹乳饮料的研制

提出了桑椹乳饮料的加工工艺、杀菌条件和最佳配方，并对其主要机理进行了探讨。产品与普通饮料相似，但风味高于一般饮料。     

桑葚的开发及利用现状

我国种桑养蚕历史悠久,桑树种类品种以及桑葚产量均居世界首位,资源相当丰富.桑葚营养丰富,含有人体所必需的各种营养成分,其各种营养成分高于常见水果,还具有医疗保健的作用.我国历代的中医本草,公认桑葚有补肝益肾、滋阴养血、黑发明目、祛斑延年的功效;已经被人们认为是一类具有营养保健功能的天然食品.药桑为原料开发绿色食品和中药草原剂,不仅能增加农民的经济收入,为企业创造更多的财富,而且能满足市场对桑葚保健食品的需求,取得很好的经济效益和社会效益.所以,开发利用桑葚资源前景广阔.本文综述了桑葚的化学成分,桑葚中白黎芦醇功能及花色糖苔的介绍,同时介绍了我国药桑开发及在医药行业应用的现状,并且论述了桑葚红色素的提取工艺及其应用市场前景,为开发和利用桑葚提供参考.     

桑椹保健功能的研究进展

桑椹富含丰富的功能性物质,是我国传统的药食两用资源.我国的桑椹资源十分丰富,但由于其成熟期短,不宜保藏,对其的开发利用还处于初期阶段.本文从保健食品可申报的功能出发,简述了桑椹的药理作用,提出桑椹类保健食品可研发的产品类型及要解决的问题,希为以桑椹为原料研发保健食品和其进一步开发和综合利用提供理论参考.