海参酶解液的体外抗氧化活性研究

分别选用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝蛋白酶水解海参体壁,以DPPH·清除能力、O2-·清除能力、Fe2+螯合力和还原力为抗氧化指标,研究不同海参酶解液体外抗氧化活性的差异。结果表明,随着水解时间的增加,5种酶解液基本上均表现出酶解液的抗氧化能力先增加后下降的趋势。菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶酶解液的DPPH·清除能力和O2-·清除能力较强;胰蛋白酶酶解液的Fe2+螯合能力最强;而木瓜蛋白酶酶解液的还原力最大。从清除自由基角度上,菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶可作为开发海参抗氧化肽的优选工具酶。     

鳙鱼鱼肉不同酶解产物的加工特性及抗氧化性

为了研究酶解时间、pH值及酶解产物分子质量大小对鳙鱼(Aristichthys nobilis)鱼肉蛋白酶解产物加工特性及抗氧化性的影响,本研究采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶对鳙鱼鱼肉进行酶解,对其酶解产物进行加工特性和抗氧化性分析。结果表明:2种蛋白酶酶解产物在pH 4条件下的溶解性和热稳定性均低于pH 7。其中,碱性蛋白酶和风味蛋白酶酶解产物分别在酶解4.0 h和1.0 h具有较优的溶解性及热稳定性。碱性蛋白酶酶解产物具有较优的亚铁离子螯合能力,而乳化性、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率及还原力则是风味蛋白酶酶解产物更优。酶解产物的加工特性及抗氧化性受蛋白酶种类、酶解时间、pH值及酶解产物分子质量大小的影响。     

清酱肉多肽的抗氧化活性和氨基酸分析

以清酱肉为研究对象,提取并通过超滤分离得到清酱肉多肽（分子质量＜10 kDa）,测定不同质量浓度多肽液对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（·OH）的清除效果、Fe2＋螯合能力和还原能力,分析清酱肉多肽的氨基酸组成。结果表明：当清酱肉多肽液的质量浓度为5 mg/mL时,其对·OH和DPPH自由基的清除率分别可达51.49%和57.50%,与相同质量浓度的谷胱甘肽（glutathione,GSH）相比差异显著（P＜0.05）;清酱肉多肽的Fe2＋螯合能力随其质量浓度的增加而显著提高,当质量浓度为5 mg/mL时,其对Fe2＋的螯合率可达50.97%;清酱肉多肽还具有一定的还原性。此外,清酱肉多肽液的氨基酸组成较为丰富,其中必需氨基酸含量为29.14%;与抗氧化活性相关的碱性、酸性及疏水性氨基酸的总量达到87.75%。综上所述,清酱肉多肽液具有一定的抗氧化能力及营养价值。     

响应面法优化草菇抗氧化肽的酶法制备工艺

以草菇为原料提取蛋白质,蛋白酶酶解蛋白制备抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,结合响应面法优化草菇抗氧化肽的提取工艺。通过超滤分离纯化获得不同分子量的肽段,采用DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力法测定超滤组分的抗氧化活性。结果表明:中性蛋白酶为最优酶解蛋白酶,最佳酶解工艺条件为酶解时间3.70 h,加酶量3.81%,底物质量浓度3.11 g/100 mL,在此条件下,酶解产物的DPPH自由基清除率为69.85%±2.52%。通过超滤分级制备所得分子量最小的肽段F1（<3 kDa）具有最高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、Fe2+螯合率和还原力分别为78.81%±1.56%、91.05%±1.65%、0.47±0.02。草菇抗氧化肽可作为潜在的天然抗氧化剂来源得到开发利用。     

水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

实验是以水牛奶为原料,分离纯化后得到乳清蛋白。利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶5种不同的蛋白酶对水牛奶乳清蛋白酶解以制备抗氧化活性多肽。酶筛选结果显示,中性蛋白酶是最适宜酶解水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽,其酶解液的还原能力和DPPH自由基清除率较其他4种酶高。探讨酶解反应时pH、温度、时间、酶浓度对酶解反应的水解度、酶解液的还原能力和DPPH自由基的清除率的影响,在单因素试验基础上,采用响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明,中性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳工艺参数为:pH为7.4,温度为50.5℃,酶与底物浓度比为2.1%,酶解时间5.0h,此时2mg/mL酶解物的DPPH自由基清除率为32.58%。实测结果与预测值吻合效果良好。     

石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以冰鲜石斑鱼肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解的方法制备蛋白肽。以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化肽的制备工艺;利用DPPH自由基法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）自由基法、羟自由基（·OH）法和铁氰化钾还原法评价酶解物的抗氧化性。结果表明：石斑鱼肉肽的最佳制备条件为：酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶用量5 000 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h;石斑鱼肉肽酶解物具有较强的抗氧化性,清除DPPH自由基能力、ABTS+·能力、·OH能力和总还原力均随酶解物质量浓度的增加而增强;酶解物清除DPPH自由基、ABTS+·、·OH的半抑制浓度（IC50）值分别为（1.18±0.26）、（0.89±0.05） mg/mL和（0.35±0.02） mg/mL。     

鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性

为了解酶解时间、蛋白酶种类对鸭肉蛋白酶解产物抗氧化特性的影响,分别用复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰酶对鸭肉进行单酶酶解和双酶分步酶解（胰酶＋复合蛋白酶、胰酶＋风味蛋白酶）,制备不同时间段的酶解产物,并对其自由基清除能力（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl radical,·OH）和超氧阴离子自由基（superoxide radical,O2－·））和总还原力进行分析。结果表明：各鸭肉蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率随着酶解时间的延长而增加,但·OH和O2－·清除率及总还原力随着酶解时间的延长先增加后降低（P＜0.05）。在5 种鸭肉蛋白酶解产物中,复合蛋白酶酶解物表现出最强的DPPH自由基清除能力（75.70±1.54）%、·OH清除能力（59.41±1.24）%和O2－·清除能力（98.50±4.51）%,但用双酶分步酶解得到的酶解产物表现出最强的总还原力（0.330±0.017）。因此鸭肉蛋白酶解产物的抗氧化特性受酶解时间和蛋白酶种类的影响,复合蛋白酶是制备鸭肉蛋白源抗氧化肽的最适蛋白酶。     

抗氧化活性林蛙胎卵多肽酶解酶的筛选

以东北林蛙胎卵为原料,以酶解液对DPPH自由基和羟自由基(.OH)清除率为指标,分别研究木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶在最佳酶作用条件下酶解时间对酶解液清除DPPH自由基、.OH的影响,筛选出适合生产抗氧化活性林蛙胎卵蛋白肽的碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶,再经过复合双酶酶解林蛙胎卵实验,结果表明,以中性蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解林蛙胎卵3h得到肽液的.OH清除率与DPPH自由基清除率最高,达到80.91%和70.45%。     

响应面试验优化裙带菜蛋白酶解工艺及酶解液抗氧化活性

运用响应面分析方法对裙带菜蛋白酶解工艺条件进行优化。经单酶筛选,在单因素试验基础上,以亚铁离子螯合率和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为主要指标,水解度为辅助指标,研究酶解时间、酶解温度、p H值、底物质量浓度、加酶量对裙带菜蛋白酶解产物抗氧化活性和水解度的影响,并比较优化条件下的酶解液与常用天然抗氧化剂抗坏血酸、合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole,BHA)的抗氧化活性。结果表明:复合蛋白酶是裙带菜蛋白酶解的最适用酶,酶解液螯合亚铁离子能力和清除DPPH自由基的最优条件为酶解时间8.1 h、酶解温度50℃、p H 7.0、底物质量浓度15 g/L、加酶量0.2%(0.3 AU/g裙带菜粉末)。在此条件下,酶解液的亚铁离子螯合率为88.58%,DPPH自由基清除率为59.22%,水解度为29.72%。对比常用抗氧化剂,在亚铁离子螯合能力方面,酶解液显著高于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05),而在DPPH自由基清除能力和还原能力方面,酶解液低于0.01%抗坏血酸和0.01%BHA(P0.05)。     

内外源酶制备海参肽的组成及抗氧化性质研究

为了对比不同方法制备海参肽的组成和抗氧化性质差异,采用内源酶（海参自溶）方法制备海参肽,并与外源酶（中性蛋白酶,碱性蛋白酶和胰蛋白酶）酶解制备的海参肽相比较。结果表明,自溶方法制备的海参粗肽水解度从高到低依次为自溶8 h>自溶4 h>自溶2 h,外源酶制备的海参粗肽水解度从高到低依次为胰蛋白酶酶解>碱性蛋白酶酶解>中性蛋白酶酶解;自溶2、4和8 h 产生的海参肽94%以上分子量小于314 Da,酶解制备的海参肽分子量主要分布在1~8.5 kDa;随着自溶时间的增加,自溶制备海参肽的氨基酸种类逐渐增多,且自溶8 h时呈味氨基酸含量较高;自溶2、4和8 h制备的海参肽比酶解法制备的海参肽具有更好的羟基自由基清除能力、DPPH自由基清除能力以及Fe3+还原能力,在浓度10 mg/mL时,自溶8 h羟基自由基清除率为93.4%,DPPH自由基清除率为85.8%,Fe3+还原力为0.740。综上,自溶方法制备的海参肽具有自身独特的优势,本研究可为海参肽的制备提供理论支撑。     

山羊乳酪蛋白酶解物制备及体外抗氧化活性研究

以自由基清除能力、金属离子螯合能力和抗脂质过氧化能力为指标,采用均匀试验研究山羊乳酪蛋白酶解物的制备及其体外抗氧化活性,并且比较自由基清除能力的方法。结果表明：山羊乳酪蛋白适宜的酶解工艺为在60g/kg的底物浓度下,中性蛋白酶和碱性蛋白酶的添加量分别为4000U/g和250U/g,45℃、pH7.5条件下酶解24h。山羊乳酪蛋白经酶解后其体外抗氧化活性显著增强。山羊乳酪蛋白酶解物 ·OH清除率的EC50值是其蛋白的3.59倍,ABTS＋ ·的清除能力是其蛋白的158.72倍,螯合Fe2＋的能力是其蛋白的5.44倍;在亚油酸体系中抗脂质过氧化能力强于TBHQ,与VE相当。清除 ·OH、DPPH自由基、O2－ ·和ABTS＋ ·的方法不能相互替代。     

猪皮胶原蛋白水解物体外抗氧化作用模式初探

通过测定不同浓度不同水解时间的猪皮胶原蛋白水解物的还原能力、清除自由基能力、抗脂质氧化能力、金属离子鳌合能力来探讨其体外抗氧化作用机制。结果表明:在一定水解范围内,猪皮胶原蛋白水解物的抗氧化活性随着底物浓度的增加而增加,且水解物的还原能力、自由基清除能力、抗脂质氧化能力及Cu2+和Fe2+鳌合能力均随水解时间的延长而增大;底物浓度为4%、水解6 h的猪皮胶原蛋白水解物与其他水解条件下的水解物相比,具有较高的抗脂质氧化能力和较强的清除自由基能力,且具有丁基羟基甲苯(butylated hydroxytolu-ene,BHT)、抗坏血酸(ascorbic acid,Vc)等抗氧化剂所不具备的金属鳌合能力;4%的猪皮胶原蛋白6h水解物与0.02%Vc的还原能力相近。猪皮胶原蛋白水解物具有较高的抗氧化活性,可以作为氢供体、自由基稳定剂和金属离子螯合剂来抑制脂肪氧化。     

超声-离子液体处理对乳清蛋白酶解动力学及其产物抗氧化活性的影响

为了阐明超声-离子液体处理后乳清蛋白酶解动力学特性,研究初始底物质量浓度、酶质量浓度和酶解时间对乳清蛋白水解度的影响,在此基础上建立了乳清蛋白-碱性蛋白酶酶解动力学模型,并通过清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基法、螯合Fe~(2+)法和还原力法研究了超声-离子液体处理对乳清蛋白酶解产物抗氧化活性的影响。结果表明:超声-离子液体处理后,乳清蛋白的酶解动力学模型发生了改变,其酶解反应所需的临界酶质量浓度降低了43.1%,这表明超声-离子液体处理促使了乳清蛋白酶解。抗氧化实验表明,超声-离子液体处理后,乳清蛋白酶解产物清除DPPH自由基活性和螯合Fe~(2+)能力分别提高了14.4%和28.4%,其还原力也得到了改善。体积排阻色谱分析表明,超声-离子液体处理显著提高了乳清蛋白酶解产物中1~5 ku组分的含量(P0.05),比未处理组提高了12.2%。     

Antioxidant properties and protein compositions of porcine haemoglobin hydrolysates

Porcine haemoglobin hydrolysates were prepared through hydrolysis by Alcalase followed by Flavourzyme, and their protein compositions were analyzed using Sephadex G-50 gel filtration chromatography. The antioxidant activities, including reducing power, ferrous ion chelating ability, and DPPH radical scavenging activity, of the hydrolysates were evaluated. The results showed that the hydrolysates of haemoglobin exhibited low reducing powers, but high ferrous ion chelating abilities and DPPH radical scavenging activities. The hydrolysate, obtained through hydrolysis by 2% Alcalase for 4 h and followed by 1% Flavourzyme for 6 h, had the highest ferrous ion chelating ability of 63.54% at a concentration of 5.0 mg/mL. The hydrolysate, obtained through hydrolysis by 2% Alcalase for 4 hrs, had the highest DPPH radical scavenging activity of 41.94% at a concentration of 5.0 mg/mL. According to the results of protein composition analysis, we divided the hydrolysates into three groups, including high molecular weight (MW) group (Group I), medium MW group (Group II), and low MW group (Group III). The reducing power and ferrous ion chelating ability of the hydrolysates were significantly and positively correlated to the relative amount of Group I, and negatively correlated to the relative amount of Group III. This study revealed that the antioxidant activities of porcine haemoglobin hydrolysates were dependent on their protein compositions. The high MW protein fraction (Group I) was responsible for the high reducing power and ferrous ion chelating ability of the hydrolysate.     

蛋清酶解多肽的制备及其清除自由基活性

为探索蛋清酶解多肽体外清除自由基活性,开发功能性蛋制品,本文采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶,通过对比实验、单因素实验和正交实验确定了蛋清酶解多肽的制备方法,采用体外清除自由基对比实验研究了蛋清酶解多肽的体外清除自由基活性。结果表明:蛋清蛋白浓度调整至4 g/100 mL(m/V),用18000 U/g蛋白的碱性蛋白酶在pH9.0于60 ℃水解7 h,制备的蛋清多肽清除DPPH自由基能力最强;用碱性蛋白酶制备的蛋清多肽在体外对超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基清除能力和Fe3+还原能力均明显优于蛋清,但远不及V_C。证明蛋清经碱性蛋白酶控制水解能明显增强其清除自由基能力,提高其保健性能。     

碱性蛋白酶水解时间对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响

为探究碱性蛋白酶(alcalase)水解对玉米谷蛋白理化性质及抗氧化活性的影响,对不同水解时间获得的玉米谷蛋白水解物的表面疏水性、二硫键含量、热性能、分子质量分布、抗氧化活性等进行了评价。结果表明：碱性蛋白酶水解对玉米谷蛋白的性质有显著影响,分子质量和二硫键含量显著降低(P<0.05),与玉米谷蛋白相比其水解物具有较高的溶解性、起泡性、乳化性和热稳定性。此外,玉米谷蛋白水解产物具有良好的抗氧化性能,当水解时间为150 min时玉米谷蛋白水解物的DPPH自由基清除为(54.46±1.43)%,羟自由基(·OH)清除率为(74.06±1.49)%,Fe²⁺螯合力为(86.69±1.35)%。     

猪血浆蛋白水解物抗氧化作用模式的研究

将猪血浆蛋白(4%浓度,W/W)分别用碱性蛋白酶水解0.5～6h。用pH-Stat方法测定其水解度;同时测定水解物还原能力、金属离子(Cu2+和Fe2+)鳌合能力以及对DPPH自由基清除能力来分析猪血浆蛋白水解物的抗氧化作用模式。结果表明,5h的猪血浆蛋白碱性蛋白酶水解物具有较高的还原能力、合成抗氧化剂所没有的金属鳌合能力以及较强的清除自由基的能力。通过比较不同浓度的水解物抗氧化性实验发现,随着水解物浓度的增高,其抗氧化活性显著增强(p＜0.05)。尽管未水解的猪血浆蛋白也有一定的抗氧化活性,但远远低于水解物的抗氧化活性(p＜0.05)。由于猪血浆蛋白水解物具有一定的抗氧化活性,所以可以作为金属离子鳌合剂、氢供体和自由基稳定剂用以抑制脂质氧化。     

Effect of defatting and enzyme type on antioxidative activity of shrimp processing byproducts hydrolysate

Shrimp processing byproducts (SPB) was digested by 6 proteases (trypsin, pepsin, neutrase, Protamex, Flavourzyme, and Alcalase) to produce antioxidative peptides. Both degree of hydrolysis (DH) and DPPH radical scavenging activity (DSA) of the Alcalase hydrolysate were the highest of all. The effect of defatting on DH and DSA of the Alcalase hydrolysate was significant. The DH decreased while the DSA increased after defatting of the byproducts. The antioxidative activity of Alcalase hydrolysate was also investigated using several in vitro assays, including DPPH, ABTS radical scavenging assays (ASA), reducing power assay, and chelating activity. The antioxidative activity of the hydrolysate was obviously concentration dependent. The SPB Alcalase hydrolysate exhibited notable DSA and ASA with the IC50 values of 500 and 7.4 μg/mL, respectively. And the hydrolysate showed 38.9% chelating activity at 120 μg/mL level. The SPB Alcalase hydrolysate was a potential source of natural antioxidants.     

蓝圆鲹蛋白酶解物的螯合矿物离子活性研究

以蓝圆鲹为原料,采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶及碱性蛋白酶对其进行水解,研究酶解产物与钙、亚铁、锌离子的螯合活性。结果表明:蓝圆鲹经胰蛋白酶水解,水解度为23.14%时其产物具有较高螯合铁、锌离子的活性,其螯合率分别高达96.63%和94.28%;蓝圆鲹经木瓜蛋白酶水解,水解度为22.00%时,其产物具有较高螯合钙离子的活性,其螯合率高达96.78%;同时研究表明上述两种酶解物还具有较好的抗氧化活性,其1,1-二苯基-2-三硝基苯肼半抑制浓度值分别为3.74 mg/m L和3.64 mg/m L。此外,氨基酸分析表明蓝圆鲹高螯合矿物离子活性的酶解物中天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸含量较高。