响应面法优化芝麻蛋白酶解工艺及其产物 抑菌活性的研究

目的为了得到芝麻蛋白双酶分步酶解的最佳工艺参数以及酶解产物的抑菌活性。方法采用响应面法优化双酶分步酶解芝麻蛋白的工艺参数,并以抑菌圈直径大小为指标,考察芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性以及最小抑菌浓度。结果响应面优化得到双酶分步酶解的最适酶解条件为:总酶量6200 U/g,碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶=3:1,先加入碱性蛋白酶后反应1.6 h后加入木瓜蛋白酶,总反应时间为4 h。在此条件下,芝麻蛋白水解度实测值为29.673%,与预测值30.622%相近。芝麻蛋白酶解产物对大肠杆菌无抑制作用,但是具有抑制金黄色葡萄球菌的活性,得到其最小抑菌活性浓度为25.29mg/m L。结论响应面分析法优化芝麻蛋白双酶分步酶解工艺是可行的,芝麻蛋白酶解产物具有抑制金黄色葡萄球菌的活性。     

桉叶精油对水产品中4种微生物的抑菌效果及抑菌机理

本文研究了桉叶精油对水产品中4种微生物的体外抑菌活性及其抑菌机理。通过滤纸片法和倍比稀释法分别测定抑菌圈直径(DIZ)和最低抑菌浓度(MIC),分析植物精油(桉叶精油、薄荷精油、茶树精油、丁香精油)对水产品中4种常见微生物(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、腐败希瓦氏菌和副溶血性弧菌)的抑菌效果;进一步以腐败希瓦氏菌和金黄色葡萄球菌为研究对象,通过扫描电镜、透射电镜、电导率、核酸含量、细胞内ATP含量分析植物精油的抑菌机理。结果表明,桉叶精油对大肠杆菌、腐败希瓦氏菌、副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为33.33、27.87、38.88、39.61 mm,对大肠杆菌、腐败希瓦氏菌、副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌的MIC值分别为1.00、1.25、0.75、0.63 μL/mL,在4种植物精油中显示出最强的抗菌活性。桉叶精油改变了腐败希瓦氏菌和金黄色葡萄球菌的细胞形态和超微结构,加了细胞膜的通透性,破坏了细胞膜的完整性,造成细胞内容物的泄露及细胞生理功能紊乱,从而导致细菌的死亡。本实验将为桉叶精油作为一种天然抑菌物质应用于水产品行业提供理论依据。     

牛骨胶原蛋白抗菌肽的制备及其抑菌活性

以牛骨胶原蛋白为原料,采用胃蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、动物复合蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对其进行水解,确定最佳的酶解时间和酶用量,并比较酶解效果.酶解液经离心过滤和真空冷冻干燥后,测定其对金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌的抑制活性.结果表明:动物复合蛋白酶酶解牛骨胶原蛋白得到的酶解液的水解度最高,其最佳的酶解时间为4h,最适宜的酶添加量(占骨质量的百分比)为1.25%;风味蛋白酶和中性蛋白酶的酶解液对金黄色葡萄球菌具有抑菌效果,其抑菌圈直径分别为6.03mm和7.97mm;动物复合蛋白酶、风味蛋白酶和胰蛋白酶对肠炎沙门氏菌具有抑菌效果,其抑菌圈直径分别为8.67、9.10、9.03mm.     

响应面试验优化酶法制备辣木籽多肽工艺及其抑菌活性分析

以辣木籽蛋白粉为原料,首先筛选蛋白水解效果较佳的蛋白酶,其次考察酶添加量(酶底质量百分比)、料液比、酶解温度及酶解时间对蛋白水解度和肽得率的影响,并结合响应面法优化辣木籽多肽制备工艺,最后研究该酶解产物的抑菌活性。实验结果表明,碱性蛋白酶具有较好的蛋白水解度,酶法制备辣木籽多肽的最佳工艺条件为碱性蛋白酶添加量5.50%、pH9.0、料液比1:30(g/mL)、酶解温度62.50℃、酶解时间143 min,在此条件下肽得率实际值为(84.43±2.31)%、蛋白水解度为(20.69±0.46)%。该辣木籽蛋白酶解产物对单增李斯特菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门氏菌等4种致病菌株均有抑制作用,最小抑菌浓度依次为3.00 mg/mL、0.75 mg/mL、0.38 mg/mL、0.75 mg/mL,对培养至4.5 h后的金黄色葡萄球菌呈现较好抑制效果。     

响应面法优化辣木叶总黄酮提取工艺及其抑菌性研究

为提高辣木资源利用率,对辣木叶总黄酮的提取工艺进行优化,并测定辣木叶总黄酮的抑菌能力。以超声处理功率、超声辅助提取时间、乙醇体积分数、液料比为考查因素,以辣木叶总黄酮提取率为考查目标,在单因素试验的基础上进行Box-Behnken响应面试验设计,优化确定辣木叶总黄酮的最适提取工艺;同时,采用牛津杯法和二倍稀释法测定辣木叶总黄酮对4种供试菌的抑菌圈直径和最低抑菌浓度,考查辣木叶总黄酮的抑菌活性。研究结果表明,辣木叶总黄酮超声辅助提取最佳工艺为超声功率400 W、超声时间35 min、乙醇体积分数65%、液料比41∶1(mL/g),此时辣木叶总黄酮提取率达7.64%。抑菌研究结果表明,最优工艺条件下提取的辣木叶总黄酮对白色假丝酵母、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌具有不同程度的抑菌作用,白色假丝酵母、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为2.05 mg/mL,枯草芽孢杆菌的MIC为4.10 mg/mL。     

响应面试验优化双酶酶解法制备鱼鳞抗菌肽工艺及其抑菌性能分析

采用双酶酶解法制备鱼鳞抗菌肽,进行酶筛选并通过响应面法优化酶解条件;通过葡聚糖凝胶G-25分离纯化酶解液,研究有效抑菌组分对不同菌的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）。结果表明,当采用碱性蛋白酶结合酸性蛋白酶分步酶解鱼鳞,底物质量浓度为30?g/100?mL时,最适酶解条件为碱性蛋白酶在pH?9.5时首次酶解,酶解时间62?min,酶解温度55?℃;酸性蛋白酶在pH?3.0时再次酶解,酶解时间3?h,酶解温度34.4?℃。此条件下制备的酶解液对副溶血性弧菌的抑菌圈直径为27.72?mm,与预测值基本相符。酶解液经层析后,其抑菌性G2组分对假单胞菌和希瓦氏菌的MIC为1.56?μg/mL,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门菌及副溶血性弧菌的MIC为6.25?μg/mL。可见,双酶酶解法制备的鱼鳞抗菌肽具有较强的抑菌性。     

鲫鱼鱼鳞抗菌多肽的制备纯化及其抑菌活性

以鲫鱼鱼鳞为原料,对其预处理后采用柠檬酸浸提酶解等工艺得到鱼鳞抗菌多肽粗酶解液,经透析后,再依次经Sephadex G-15、Sephadex G-50凝胶过滤层析和纤维素DEAE-52阴离子交换层析对其进行分离纯化,最后得到具有较强抑菌活性的鲫鱼鱼鳞抗菌多肽,并对其进行分子质量分析以及对多种细菌、霉菌的抑菌活性和最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）测定。结果表明：经分离纯化后得到的具有抑菌活性的蛋白组分AcIII,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示为单一条带,表明其已达到电泳级纯,其分子质量约为20.1 kDa,抑菌活性测定结果表明鲫鱼鱼鳞抗菌多肽具有很好的广谱抗菌活性,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、副溶血性弧菌、假单胞菌和希瓦氏菌的MIC为16 μg/mL,对大肠杆菌和沙门氏菌的MIC为32 μg/mL。     

鲢鱼源多肽锌的制备工艺对其抑菌活性的影响

研究了制备工艺中的主要因素对鲢鱼源多肽锌螯合物的抑菌活性影响。以抑菌圈直径为指标,探讨了酶解工艺(蛋白酶种类和酶解时间)和螯合工艺(螯合反应的pH、多肽与氯化锌的质量比、螯合反应的温度和时间)对多肽锌螯合物的抑菌活性影响。结果表明,酶法水解鲢鱼蛋白制备抑菌型多肽锌的最佳条件为风味蛋白酶酶解时间6h、螯合反应pH为6.0、多肽与氯化锌质量比为2:1、反应时间45min、温度30℃,得到的螯合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为12.50mm和12.66mm,螯合物得率38.67%。因此,鲢鱼源多肽锌螯合物具有较好的抑菌活性,有望作为一种潜在的抗菌剂。     

恩施地区粉葛不同组织活性成分含量与抑菌活性分析

利用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）测定粉葛不同组织的葛根素、鹰嘴豆芽素、大豆苷、大豆苷元的含量,并运用滤纸片法研究粉葛不同组织的抑菌效果。结果表明,大豆苷元、大豆苷2种黄酮活性成分在根中的含量最高,分别为（4.28±0.85）、（972.25±98.72）μg/g;葛根素在茎中的含量最高,为（7.37±1.14）mg/g;鹰嘴豆芽素在叶中的含量最高,为（33.48±4.01）μg/g。粉葛根部对金黄色葡萄球菌有中度敏感抑菌效果,其最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）值为50.23 mg/mL;粉葛茎部对金黄色葡萄球菌、粪链球菌、苏云金芽孢杆菌、多耐铜绿假单胞菌有中度敏感抑菌效果,其MIC值分别为0.55、2.21、1.10、17.67 mg/mL;粉葛叶对苏云金芽孢杆菌有中度敏感抑菌效果,其MIC值为16.14 mg/mL。     

无花果叶提取物的抑菌作用研究

为探讨无花果叶逐级提取物的抑菌作用,实验测定了无花果叶逐级提取物对各实验菌种的抑菌圈及最低抑菌浓度,结果表明各级提取物对实验菌分别有不同程度的抑菌作用,其中对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌作用最为明显,各级提取物的抑菌强度依次为:乙酸乙酯萃取物(金黄色葡萄球菌:MIC≤6.25mg/mL,枯草杆菌MIC:≤12.5mg/mL)、正丁醇萃取液(两种菌的抑菌作用:MIC≤25mg/mL)、石油醚萃取液(两种菌的抑菌作用:MIC≤50mg/mL),其中乙酸乙酯萃取物的抑菌活性最强。     

解淀粉芽孢杆菌HRH317菌株抗菌肽发酵条件优化及其抑菌活性研究

本文以抑菌圈直径为指标,采用单因素试验和响应面法对解淀粉芽孢杆菌HRH317菌株产抗菌肽的发酵条件进行优化,并对该抗菌肽的抑菌谱及其最小抑菌浓度(MIC)进行了研究。得到最佳发酵条件为：pH7.5,装液量为50 mL,接种量3%,培养时间13h、温度38.5℃、转速145r/min,抗菌肽含量441.56±1.24 μg/mL。在此条件下抗菌肽的抑菌圈直径达15.95 mm。针对9种指示菌的抑菌谱结果表明,抗菌肽对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌抑制效果最好,其次是霉菌、酵母菌。其中,抗菌肽对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的MIC为 3.45 μg/mL,大肠杆菌、白地霉、巴氏醋酸杆菌MIC为6.9 μg/mL,禾谷镰孢菌、黄曲霉、假丝酵母MIC为 55.20 μg/mL,红酵母MIC为110.40μg/mL。     

细叶小檗碱的抑菌稳定性及其对细菌蛋白质的影响

通过滤纸片法测定细叶小檗碱对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌与大肠杆菌的抑菌圈直径（DIZ）,使用二倍稀释法测定其最低抑菌浓度（MIC）,评估其抑菌活力。通过分析温度、pH值以及紫外线照射对小檗碱抑菌活力变化率的影响,研究其稳定性。此外,测定菌体细胞内外蛋白质浓度,聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析小檗碱对细菌蛋白质的影响。结果表明：小檗碱对4种供试菌种均有一定的抑菌效果,对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌以及沙门氏菌的抑菌圈直径分别为（11.6±0.11）,（10.1±0.18）,（10.2±0.14）mm和（9.8±0.14）mm,最低抑菌浓度分别为2.40,3.60,3.30和3.945 mg/mL,对大肠杆菌的抑菌效果较显著。紫外线照射对小檗碱的抑菌活力几乎没有影响,强酸、强碱及高温破坏部分小檗碱的结构,抑菌活力降低。加入小檗碱的细菌细胞内蛋白浓度降低,而细胞外蛋白浓度增加。通过计算细胞蛋白总浓度以及SDS-PAGE分析表明小檗碱能够抑制蛋白的合成。     

布氏乳杆菌细菌素BSX01对金黄色葡萄球菌及其生物被膜形成的影响

为评估布氏乳杆菌所产细菌素在食品工业中的应用潜力，通过培养布氏乳杆菌获得具有抑制金黄色葡萄球菌的抑菌活性物质，经纯化后鉴定其相对分子质量大小与抑菌特性，并对抑制金黄色葡萄球菌生物被膜的形成进行探讨。结果发现，布氏乳杆菌在37 ℃ MRS培养基中培养至20 h后进入稳定期，在26 h时对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达峰值，为（26.36±0.86） mm。 通过АKTA pure系统串联Superdex 30 Increase纯化后，鉴定得到抑菌活性物质（BSX01）的相对分子质量为773.56，对多种蛋白酶敏感，推测为Ⅰ类细菌素。在pH 10(2 h)和121 ℃(30 min)处理后，BSX01仍具有较好的抑菌活性，最小抑菌质量浓度（MIC）仅为12.50 μg/mL。此外，BSX01在1/2 MIC时可有效降低金黄色葡萄球菌生物被膜的形成，在2 MIC时能够完全抑制生物被膜的形成。基于上述结果，布氏乳杆菌产生的细菌素BSX01是食品工业中的潜在生物防腐剂和抑制食源性致病菌生物被膜形成的有效候选品。     

迷迭香酸协同ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌的抑菌机理初探

本文研究了迷迭香酸协同ε-聚赖氨酸对食品常见污染菌——金黄色葡萄球菌的抑菌作用,检测了两种抑菌成分对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)、抑菌圈、联合作用效果、抑菌动力学曲线、可溶性蛋白、还原糖外泄和菌表面蛋白SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)图谱的效果。结果表明:迷迭香酸和ε-聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为4和0.1875 mg/mL,且抑菌浓度指数(FICI)为0.5,有较好的协同增效作用。1/4 MIC迷迭香酸和1/4 MIC ε-聚赖氨酸的复合有较强的抑菌活力,能损伤菌细胞膜,导致蛋白质和还原糖外泄,其蛋白图谱分析的菌体表面蛋白分子量变化,说明这两种抑菌成分促使金黄色葡萄球菌表面蛋白降解,抑制了金黄色葡萄球菌表面毒力因子的毒性。     

桉叶精油气相扩散抑菌活性及抑菌成分研究

通过测定桉叶精油在气相、液相和固相扩散方式下对供试菌的抑菌圈大小和最低抑菌浓度(MIC),探讨桉叶精油气相扩散抑菌效果,并结合气相色谱-质谱(GC-MS)和顶空固相微萃取(SPME)/GC-MS技术,对比分析气态桉叶精油的抑菌成分。结果表明:桉叶精油通过气相扩散方式抑菌也具有明显抑菌效力,对供试菌的MIC值范围为0.045~0.36mg/mL,显著低于液相MIC值(4.5~18.0 mg/mL)和固相MIC值(4.5~18.0 mg/mL);对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑制作用较好,对黑曲霉抑制作用稍差;气态桉叶精油与桉叶精油的主要成分无显著差别,均以萜烯类和醇类物质为主,萜烯类物质相对含量的升高导致抑菌活性变强;气态桉叶精油的抑菌活性与α-蒎烯、右旋柠檬烯、3-蒈烯、异松油烯和月桂烯等物质有关。     

南五味子乙醇提取物对食品腐败细菌的抑菌活性研究

目的:研究南五味子乙醇提取物的体外抑菌活性,以期为寻求新的天然食品防腐剂提供实验依据。方法:以抑菌圈直径、最低有效抑菌浓度等为指标,以金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门氏菌等7种食品腐败细菌作为供试菌,研究南五味子乙醇提取物的体外抗菌活性。结果:南五味子乙醇提取物对供试菌的抑菌圈直径均>20mm,且对革兰氏阳性细菌的抑制效果强于革兰氏阴性细菌。乙醇提取物对供试菌的MIC值和MBC值分别为金黄色葡萄球菌3.125,6.25mg/mL,蜡样芽孢杆菌1.562,3.125mg/mL,大肠杆菌25,25mg/mL,变形杆菌12.5,25mg/mL,枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌、宋内氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌的MIC值和MBC值均为12.5mg/mL。提取物对供试菌的抑菌率随抑菌作用时间的延长,提取物浓度的增加而升高。提取物对蜡样芽孢杆菌抑菌能力大于苯甲酸钠和山梨酸钾;对金黄色葡萄球菌的抑菌能力与苯甲酸钠相同,稍差于山梨酸钾。结论:南五味子乙醇提取物对食品腐败细菌具有显著的抑菌活性,有望开发成天然食品防腐剂。     

溶菌酶酶解物的抗菌活性研究

目的:考察溶菌酶酶解物的抑菌能力,为扩展溶菌酶的应用提供理论依据。方法:采用胃蛋白酶对溶菌酶进行酶解,得到溶菌酶酶解物(Lysozyme hydrolysate,LH);采用二倍稀释法检测LH对几种常见食品腐败菌的抑菌能力;以金黄色葡萄球菌为受试菌种,通过抑菌圈实验探讨LH的抑菌活性,并与溶菌酶和乳酸链球菌素作比较。结果:LH对几种常见阳性菌都有很强的抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;未经热处理时,LH的抑菌活性略低于溶菌酶,而高于乳酸链球菌素;经热处理后,LH的抑菌活性高于溶菌酶和乳酸链球菌素。菌酶酶解物有望被开发成一种天然的食品防腐剂。     

香樟精油的体外抑菌活性

采用抑菌圈实验和二倍稀释法研究了香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性显著,当香樟精油的浓度大于12.5%时,可完全抑制金黄色葡萄球菌的生长。     

姜黄油抑菌作用的研究

就姜黄油对几种常见细菌、霉菌抑菌效果进行了研究.结果表明：姜黄油对几种菌有明显的抑制作用.其中对金黄色葡萄球菌最强,MIC=1.25%,抑菌圈直径为17.5mm,对大肠杆菌的抑制作用较弱,MIC=5%,抑菌圈直径为10mm.     

香樟精油的体外抑菌活性

采用抑菌圈实验和二倍稀释法研究了香樟精油对金黄色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌浓度（MIC）。结果表明：香樟精油对金黄色葡萄球菌抑菌活性显著,当香樟精油的浓度大于12.5％时,可完全抑制金黄色葡萄球菌的生长。