反义IGF-Ⅱ基因对胃癌细胞恶性表型的影响

研究反义IGF-Ⅱ基因对胃癌细胞恶性表型的影响。将已构建的反义IGF-Ⅱ基因真核表达载体pIGF-ⅡAs导入人胃癌细胞BGC-823经G418抗性筛选,获得转基因细胞株克隆,测定细胞生长曲线,扫描电镜观察细胞表面结构,观察软琼脂细胞集落形成能力。结果转染反义IGF-Ⅱ基因细胞生长受抑制,细胞软琼脂集落形成能力下降。扫描电镜显示:转染反义基因细胞表面微绒毛减少。转染IGF-Ⅱ反义基因抑制胃癌细胞恶性表型.转染反义IGF-Ⅱ基因可能成为潜在的胃癌治疗手段。     

凋亡相关新基因TFAR19的cDNA克隆、表达和功能研究

利用RDA技术从人白血病细胞TF-1中克隆成功一个与凋亡相关的新基因TFA R19.序列分析表明,TFAR19 cDNA全长559bp,其中25-399bp编码125个氨基酸的蛋白质.mRNA斑点杂交分析表明TFAR19在50种组织中均有不同程度的表达.在大肠杆菌中表达并纯化了重组TFAR19蛋白质,制备了多克隆抗体,Western Blot发现TFAR19蛋白在凋亡的TF-1细胞中高表达.瞬时转染TFAR19正义基因后,TF-1细胞去细胞因子后凋亡速度增加.研究表明它能抑制胃癌细胞株803细胞和Hela细胞的生长,促进它们的去血清所致的凋亡.     

Nano-HA涂层与HA/CTS复合涂层抑制胶质母细胞瘤细胞活力作用的比较

实验采用电化学沉积法在钛合金表面制备了纳米羟基磷灰石涂层(nHA)、纳米和微米级羟基磷灰石/壳聚糖复合涂层(nHA/CTS,mHA/CTS),并应用XRD、SEM和FTIR对涂层的理化特性进行了表征。然后将人脑胶质母细胞瘤细胞系U87(U87)与3种涂层共培养,并比较3种涂层诱导U87细胞凋亡的能力。通过MTT法细胞生长抑制实验检测以及电镜下膜层表面细胞形态观察,发现nHA膜层比nHA/CTS和mHA/CTS能更有效地抑制胶质瘤细胞的增殖,具有明显的体外抗肿瘤作用。     

体外建立幽门螺秆菌感染胃粘液细胞的实验模型

建立胃粘液细胞原代培养的方法,并在此基础上观察幽门螺秆菌(Hp)对它的损伤作用。取水囊引产的胎龄5个月以上胚胎的胃粘膜,采用组织块贴壁培养的方法进行培养,用倒置显微、电镜进行形态学鉴定,并用电镜观察其与Hp共培养后形态学变化。结果细胞为多边形,呈簇状或片状生长,排列紧密,电镜下见细胞表面有微绒毛,胞浆内有丰富的粗面内质网、高尔基体及粘液分泌颗粒,细胞同有紧密连接。加入Hp后,原代培养的胃粘液细胞出现空泡变性,有部分细胞发生凋亡,其核固缩。胚胎的胃粘液细胞原代培养不失为一种体外研究Hp相关胃部疾病的较理想模型。     

葡聚糖包被磁性纳米材料的合成及其特异性细胞毒性

利用二甘醇作溶剂和还原剂水解还原三氯化铁,合成水溶性的葡聚糖包被磁性纳米材料(MNPs),选择大鼠的肝脏细胞BRL3A、肾脏细胞NRK、星型角质细胞和外周血单个核细胞(PBMC),运用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡和苏木素伊红(HE)染色细胞形态学观察进行细胞毒性研究.结果发现,MNPs共培养浓度达到64μg/ml时,PBMC出现明显凋亡(p＜0.01),而其它几种细胞在MNPs共培养浓度达到128μg/ml时,仍未出现明显凋亡(p＞0.05).电镜观察发现BRL3A、NRK和星型角质细胞均出现内吞该纳米颗粒,而未观察到PBMC的吞噬现象.结果提示,葡聚糖包被的MNPs的细胞毒性具有细胞特异性,实质性脏器细胞毒性较小,可能与其存在内吞MNPs能力有关,提示葡聚糖包被的MNPs可以运用于机体实质脏器核磁造影剂和药物载体.     

雌黄纳米粒对K562细胞的体外治疗作用及其机制

采用MTT法、细胞形态学观察和流式细胞术检测纳米雌黄对白血病K562细胞生长的影响;通过免疫组化、RT-PCR方法检测雌黄纳米粒处理K562细胞后凋亡相关基因的表达变化．结果表明,雌黄纳米粒能强烈抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,效果明显优于普通雌黄;雌黄纳米粒对K562细胞的bcl-2蛋白、bcl-2mRNA、survivin蛋白以及survivin mRNA表达均有抑制作用,对bax蛋白与mRNA表达均有促进作用,提示其抗肿瘤作用可能与凋亡抑制基因bcl-2、survivin表达减少、促凋亡基因bax表达增强有关,并从mRNA水平上发挥作用,     

嵌合抗CD20 Fab′诱导Raji细胞凋亡

为了研究嵌合抗CD2 0基因工程抗体Fab′的抗肿瘤活性及其抗肿瘤机制 ,利用3H掺入法测定嵌合抗CD2 0Fab′对Raji细胞生长的影响 ,结果显示嵌合抗CD2 0Fab′对Raji细胞的生长具有抑制作用 ,利用流式细胞仪测定嵌合抗CD2 0Fab′诱导Raji细胞凋亡作用 ,结果显示嵌合抗CD2 0Fab′可诱导Raji细胞凋亡作用。这些实验结果证明嵌合抗CD2 0Fab′通过诱导Raji细胞凋亡的机制抑制Raji细胞生长。     

嵌合抗CD20Fab‘诱导Raji细胞凋亡

为了研究嵌合抗CD20基因工程抗体Fab‘的抗肿瘤活性及其抗肿瘤机制,利用^3H掺入法测定嵌合抗CD20Fab‘对Raji细胞生长的影响,结果显示嵌合抗CD20Fab‘对Raji细胞的生长具有抑制作用,利用流式细胞仪测定嵌合抗CD20Fab‘诱导Raji细胞凋亡作用,结果显示嵌合抗CD20Fab‘可诱导Raji细胞凋亡作用。这些实验结果证明嵌合抗CD20Fab‘通过诱导Raji细胞凋亡的机制抑制Raji细胞生长。     

不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对肠上皮细胞凋亡及其相关基因Caspase-3表达的影响

研究不同浓度Mg-6Zn合金浸提液对大鼠肠上皮细胞IEC-6的凋亡及凋亡相关基因Caspase-3表达的影响。将Mg-6Zn合金制成不同浓度(20%和40%)的浸提液体外培养大鼠肠上皮细胞IEC-6,并以含10%胎牛血清的高糖DMEM(Dulbecco′s modified Eagle′s medium)培养基作为阴性对照。采用噻唑蓝(MTT)法通过计算细胞相对增殖率检测不同浓度合金浸提液对IEC-6细胞的毒性作用;采用流式细胞仪检测不同浓度合金浸提液对IEC-6细胞凋亡的影响;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同浓度合金浸提液对IEC-6细胞凋亡相关基因Caspase-3mRNA表达的影响。实验结果表明,20%和40%两种浓度的镁合金浸提液在体外培养IEC-6细胞第七天时细胞毒性分级分别为0级和1级,属于无毒性,符合医用材料细胞毒性分级的合格标准。40%和20%浓度镁合金浸提液中,IEC-6细胞的凋亡比例及Caspase-3活化度相对于对照组都增高,差异有统计学意义(P0.05),40%浓度组中,IEC-6细胞的凋亡比例及Caspase-3活化度相对于20%浓度组增高,差异有统计学意义(P0.05),说明Mg-6Zn合金浸提液在一定范围内处于较高浓度时易诱导IEC-6细胞的凋亡及Caspase-3的表达,且随浓度升高影响越大。     

氮、磷浓度对灌注搅拌式光生物反应器连续培养海带配子体细胞的影响

用搅拌式灌注光生物反应器对海带（Laminaria japonica）配子体细胞进行了连续培养,并研究了氮、磷两种营养元素对反应器培养海带配子体细胞的影响,首次定量描述了不同的恒定氮、磷浓度对配子体细胞生长的长期影响。研究结果表明,在培养液氮、磷摩尔浓度比固定在16：1,NO3^-维持浓度达到0．412mmol／L时,细胞在氮、磷稳定期的比生长速率达到最大值0．118d^-1,而NO3^-稳定浓度达到约2．50mmol／L时,细胞的生长开始明显受到抑制;在抑制阀值下,建立的Monod数学模型较精确地描述了细胞生长速率和氮、磷稳定浓度之间的关系。实验结果为大型海藻细胞或组织的光生物反应器培养提供了理论依据。     

SiO_2层对金刚石膜初期生长影响的研究

用俄歇子能谱（AES）研究了热丝法生长金刚石膜中未经划痕处理的单晶硅衬底在不同沉积时间下的表面结构及Si，C，O元素浓度的深度分布。结果表明：在沉积过程中，随沉积时间增加时，基材表面C浓度增加，O浓度下降，但SiC过渡层的生长缓慢。700℃沉积4h时仍无结构完整的SiC层生成，这是表面SiO2层阻碍了SiC的形成。分析了不经划痕处理的基材形核率低的原因。用高分辨电镜（HREM）观察了生长良好的金刚石膜的膜—基界面，发现没有SiO2层存在。     

壳寡糖对胰岛β细胞的保护及其体内抗氧化作用的研究

研究了体外研究酶解法制备的壳寡糖(COS)对胰岛β细胞的保护作用,并进一步探讨COS对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)大鼠胰腺的保护及其抗氧化保护机制.通过壳聚糖酶降解壳聚糖制备得到水溶性、低分子量的COS,在细胞水平上,通过形态学观察、四氮唑蓝(MTT)比色法、DNA凝胶电泳、彗星电泳等方法研究不同浓度的COS对链脲佐菌素损伤胰岛β细胞的保护和抑制细胞凋亡的作用;进行了体内实验,通过一般状态观察和病理组织学检查研究了COS对链脲佐菌素诱导的DM大鼠的胰腺保护作用,并对血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)浓度、总抗氧化能力(T-AOC)进行了测定.结果表明,COS可以抑制链脲佐菌素诱导的胰岛β细胞凋亡,对受损的胰岛β细胞有显著的保护作用;COS各剂量组对DM大鼠总抗氧化能力和SOD活力均有显著改善,MDA浓度与STZ损伤组比较均有极显著差异;胰腺组织学检查表明COS能减轻胰岛萎缩、数量减少、胰岛细胞丢失、核固缩等胰岛细胞退行性改变症状.     

纳米银对大肠杆菌的抗菌作用及其机制

以大肠杆菌为研究对象,对纳米银的抗菌效果进行了研究.并对其抗菌机制做了初步探讨.纳米银对大肠杆菌的抑制生长曲线的结果表明,20 μg/mL的纳米银能够完全抑制106 cfu/mL的大肠杆菌细胞生长,纳米银使大肠杆菌的延滞期加长,并且纳米银浓度越高,延滞期越长.采用透射电镜观察了经纳米银粒子处理过的大肠杆菌细胞形态变化过程,结果显示纳米银粒子先在细胞壁上产生小的孔洞,通过这些孔洞进入周质空间,导致细胞膜成分渗漏和破坏细胞膜,进而进入细胞内部.进入细胞内部的纳米银粒子使DNA浓缩呈紧张态,并与破损细菌的细胞质结合积聚,最后引起胞内物质流失.另外,纳米银对大肠杆菌总DNA影响的分析表明.随着纳米银浓度的增高,大肠杆菌总DNA样品降解的程度增大.     

病毒感染对细胞表面超微结构影响的研究

用原子力显微镜（AFM）技术观察汉坦病毒的基本形貌,分别对用戊二醛固定的Vero—E6细胞和用汉坦病毒感染过的Vero—E6细胞进行成像,在原子级或纳米级水平上观测病毒感染后细胞表面超微结构的变化。将病毒直接滴加到云母片上自然风干后进行扫描,可以清晰地观察到病毒的结构大小;用0．5％～2．0％浓度的戊二醛固定细胞,通过成像发现,固定液浓度高时虽然成像质量较好,但对细胞的损伤较大,降低固定液浓度,细胞的形态接近于生理状态,成像质量良好;用不同稀释度的病毒感染细胞后,用合适的戊二醛浓度固定细胞进行观察,发现病毒感染前后细胞的形态结构发生了较大的变化,并且发现其形态的变化与病毒感染的浓度有显著的相关性。     

短发夹RNA介导RNA干涉的实验学控制研究

采用载体介导的RNA干涉(RNA interference,RNAi)技术抑制HEK293H细胞中外源报告基因的表达,并设置一系列的实验学控制以探讨其在RN加应用研究中的价值及意义。运用pAVU6 27,构建了针对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的一系列短发夹RNA表达载体,并用脂质体法转染于．HEK293H细胞中,检测EGFPmRNA及蛋白表达水平。瞬时转染48h后,RT-PCR及Western blot结果表明,针对EGFP三个靶点的干涉质粒均不同程度地抑制细胞内EGFP的表达,但仅转录正反义链、链内1—2个碱基错配的干涉载体不能介导特异的RNAi效应。此外,共转染实验结果表明干涉质粒两两间无相互增强或抑制的RNAi效应。在此基础上,通过G418筛选生成了HEK293H EGFP稳定表达株,在转染后不同时间点检测EGFPmRNA及蛋白表达变化,发现RNAi效应在一定时间范围内呈现明显的时间依赖性。这些结果表明,有效的实验控制在RNAi研究中十分必要,具有重要的参考价值。基于载体表达的RNAi作用呈现明显的时间依赖性效应,为RNAi应用研究提供了一定的参考及借鉴价值。     

鸡贫血病毒VP3基因对荷C6胶质瘤Weister大鼠的治疗

构建荷C6胶质瘤Weister大鼠的肿瘤模型,随机分组给予不同的处理给药,观察治疗期间及治疗后的肿瘤生长情况,通过病理组织学、超微结构分析,检测鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗在Weister大鼠体内的抗肿瘤作用。结果表明,pVVP3治疗组肿瘤生长速度明显受到抑制,其抑瘤率达85．57％。病理组织学观察可见化疗对照组肝组织有点状坏死,而pVVP3治疗组肝组织未见明显病变。肿瘤组织超微结构观察在pVVP3治疗组可见典型的凋亡特征。说明鸡贫血病毒VP3基因核酸疫苗对Weister大鼠C6胶质瘤生长有抑制作用,可诱导肿瘤细胞凋亡,且对肝组织无明显损伤。     

化学镀Ni-P镀层的生长机理研究

通过扫描电镜（SEM）等手段对化学镀Ni-P镀层断面形貌和表面形貌观察分析,研究了化学镀Ni—P镀层在不同配位剂（柠檬酸钠）浓度下的生长情况。结果表明,镀层在低配位剂浓度镀液中生长速度最快,镀层由层状组织组成;在中等配位剂浓度的镀液中镀层生长速度居中,镀层由较厚的层状组织组成;在高配位剂浓度的镀液中镀层生长速度最慢,由柱状组织组成。     

壳寡糖通过降低线粒体膜电位促进A549细胞凋亡

壳寡糖(chitooligosaccharides,COS)分子量小,可溶性好,具有抗肿瘤等多种生物活性.以人肺腺癌A549细胞系为研究对象,探究COS对A549细胞线粒体膜电位、细胞生长与死亡的影响.MTT结果表明COS浓度越高,刺激时间越长,其对A549细胞生长的抑制作用越明显;流式细胞仪检测结果显示,1mg/mL的COS明显地降低了细胞线粒体膜电位水平;活死细胞荧光染色实验表明,COS组死亡细胞比率提高,与对照组相比具有显著性差异.结果提示,COS可能通过降低线粒体的膜电位而促进A549细胞凋亡.     

卷烟烟气冷凝物致细胞恶性转化研究

观察卷烟烟气冷凝物（CSC）单次及多次染毒对细胞恶性化的不同影响。方法：以不同浓度CSC染毒,观察单次及多次染毒后BEP2D细胞血清抗性和倍增时间、锚着独立生长能力以及叙利亚地鼠胚胎细胞（SHE）转化频率的改变。结果：BEP2D细胞染毒5周后除单次低剂量组外均出现血清抗性,锚着独立实验多次染毒组克隆形成率均比相同剂量单次染毒组高,且与剂量呈反比;SHE细胞多次染毒组比相应剂量单次染毒细胞接种效率低,转化效率增加。结论：CSC多次染毒诱导细胞恶性化能力较单次染毒高,且低剂量较高剂量更易致细胞恶性化。