发芽粟谷中谷氨酸脱羧酶的主要酶学性质初探

[目的]探讨发芽粟谷[Setaria italica (L.)Beauv.]中谷氨酸脱羧酶(GAD)的主要酶学性质.[方法]以发芽粟谷为试材,研究发芽粟谷GAD的活性及其主要酶学性质.[结果]发芽粟谷GAD最适温度为40℃, 其耐热性较差,32℃保温1h后其酶活保持率为86.3%;发芽粟谷GAD最适pH值为5.5,在pH值5.0～5.5范围内酶活保持率在80.0%以上;发芽粟GAD对Glu的Km为22.36mmol/L,Vmax为2.28 μmol/min;Ca2+、Mg2+、Li+、PLP和VB6对发芽粟谷GAD活力具有促进作用,而Zn2+、La3+、Cu2+起抑制作用,Mn2+、Na+、Fe2+和EGTA则无显著影响.[结论]该研究可为利用发芽粟谷内源GAD富集GABA提供理论依据.     

黑曲霉葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质研究

[目的]分离能水解獐牙菜苦苷的胞外β-葡萄糖苷酶,并研究其分子量、最适催化温度、最适pH、稳定性及催化特征.[方法]黑曲霉液体发酵3 d,收集培养液,培养液经盐析、柱分离得到1个β-葡萄糖苷酶.[结果]该β-葡萄糖苷酶的分子量的86 kD,最适pH为5.0～6.0,最适反应温度为50～60℃,在60℃以下时酶稳定;Ca2+、Zn2+、Fe3+和Cu2+能抑制β-葡萄糖苷酶的活性,而Mg2+和Mn2+能够激活β-葡萄糖苷酶的活性;纤维二糖是该β-葡萄糖苷酶的最适催化底物.[结论]该酶和大多数真菌来源黑曲霉相似,对獐牙菜苦苷的亲和性弱,对p-NPG的亲和力强.     

皂苷鼠李糖苷酶RhaG和RhaD的酶反应特性研究

[目的]研究皂苷鼠李糖苷酶RhaG 和RhaD 的酶反应特性.[方法]对微生物Absidia sp.G3g 菌产的人参皂苷糖苷酶(RhaG)和Absidia sp.DOd菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)分别进行分离纯化,并对2种提纯酶的分子量和酶性质进行了研究.[结果]RhaG 和RhaD 的酶蛋白分子质量分别为61、56 kDa.RhaG的酶反应最适pH为5.0,pH 稳定范围为3.0-7.0;最适温度为40℃,30～60℃温度稳定性较好;米式常数Km为9.523 mmol/L.RhaD的酶反应最适pH为5.0,pH稳定范围为3.0～7.0;最适温度为40℃,30～50℃温度稳定性较好;米式常数Km为8.834 mmol/L.[结论]该研究为进一步探明2 种酶间的差别奠定了基础.     

枯草芽抱杆菌产酶规律及酶学性质研究

[目的]研究浙江建德分离得到的枯草芽抱杆菌淀粉酶的产酶规律和酶学性质.[方法]将分离得到的枯草芽袍杆菌发酵培养,研究其淀粉酶产酶规律,并研究了温度、pH、金属离子对酶学性质的影响.利用双倒数曲线法获得该酶的米氏常数戈.[结果]随着发酵时间的延长,发酵液中淀粉酶的含量提高.在培养30h时,产酶量达到最高.该淀粉酶的最佳反应温度和pH分别为40℃和7.5.该酶具有一定的热稳定性,对酸碱条件较敏感.Na+、K+、Ca2+、Mg2+对该酶具有激活作用,Pb2+、Hg2+对该酶具有显著的抑制作用,Cu2+的影响不显著.该淀粉酶的米氏常数Km为2.31×10-3 mol/L.[结论]该研完对该菌株淀粉酶的开发及工业应用具有较强的指导意义.     

荔枝果肉多酚氧化酶酶学性质研究

[目的]为研究荔枝果肉多酚氧化酶(PPO)的作用机制,控制荔枝果肉在贮藏和加工过程中的酶促褐变提供理论依据.[方法]从荔枝果肉中提取多酚氧化酶,并对其酶学性质进行研究.[结果]荔枝果肉PPO的最适反应温度为55 ℃,对热稳定性较强,90 ℃水浴保温30 min后剩余相对酶活为22.6%;pH值为7.0时该酶的活力最强,在pH值6.5～8.0范围内酶活力较稳定;邻苯二酚与该酶的结合能力最强,其次为4-甲基儿茶酚;谷胱甘肽为该酶的最好抑制剂,其次为半胱氨酸、抗坏血酸、NaF和亚硫酸钠;SnCl2和FeSO4对该酶活性有抑制作用,而CuSO4、MgCl2和CaCl2对其活性有促进作用.[结论]该研究确定了荔枝果肉多酚氧化酶的最适作用条件.     

菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质研究

[目的]研究菌株I13产碱性蛋白酶的酶学性质.[方法]从一株碱性蛋白酶生产菌株I13中得到了碱性蛋白酶粗酶液,并研究了温度和pH对该酶液酶活力的影响.[结果]所产碱性蛋白酶的最适反应温度为40℃,在20～30℃范围内仍保持了最大活力的40%以上;最适反应pH为10.5,在pH 8.0-11.0范围内保持了最大活性的90%以上,有较宽的pH谱.[结论]该碱性蛋白酶具有开发成为洗衣粉添加剂的巨大潜力.     

脂肪酶产生菌的筛选·产酶条件及酶特性研究

[目的]筛选脂肪酶高活性菌株作为脂肪酶生产菌株和脂肪酶基因的供体菌.[方法]从油脂厂等地采集26份含菌样品,采用溴甲酚紫平板对样品进行初筛,以产脂肪酶发酵培养基摇瓶复筛,获得1株产脂肪酶活性较高的菌株09-7-1,经鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger).采用正交试验对影响该菌株产酶的因素进行了研究,并探讨了该菌株所产脂肪酶的性质.[结果]该菌株最佳产酶条件:碳源为0.5%的可溶性淀粉,氮源为0.2%的酵母膏,培养温度为32℃,发酵液pH为5.2,该菌株最初发酵液中酶活力为13.164 U/ml,优化后酶活力达24.112 U/ml,是最初酶活力的1.83倍.该菌株所产脂肪酶最适作用温度为30℃,最适作用pH为7.0;酶液在60℃保温90 min后,活性损失较少,pH为5.5～10.0内稳定.[结论]该研究可为脂肪酶生产和基因研究奠定基础.     

美味牛肝菌合成漆酶的发酵条件研究

[目的]研究美味牛肝菌合成漆酶的最适发酵条件.[方法]采用液体深层培养法研究不同碳源、氮源、pH、温度等因素对美味牛肝菌产酶量的影响.[结果]美味牛肝菌合成漆酶的最适发酵条件为:葡萄糖2.0%,牛肉膏0.5%,KH<,2>PO<,4> 0.4%,MgSO<,4>·7H<,2>O 0.3%,微量元素溶液8.0%,维生素B<,1> 0.003%,pH4.5,温度28℃,培养时间为8 d.[结论]在此条件下,漆酶产量最高,为71.27 U/ml,该研究为美味牛肝菌漆酶的开发应用提供了科学依据.     

洋葱过氧化物酶活性测定及性质分析

[目的]寻找过氧化物酶含量丰富且活性高而稳定的植物原料.[方法]从洋葱中分离、纯化过氧化物酶并测定其活性,同时对其酶学性质进行鉴定并研究NaHSO、、抗坏血酸和EDTA对酶活性的影响.[结果]洋葱过氧化物酶在20～60 s内反应速度恒定,证明酶有活性;所提过氧化物酶的最适反应pH值为6.5,最适反应温度为60℃,温度高于100℃时,过氧化物酶基本失活;抗坏血酸和NaHSO3对过氧化物酶活性有抑制作用,且随NaHSO、浓度增加,其对酶活性的抑制作用增强;EDTA对酶活性的抑制作用不明显.[结论]该研究为过氧化物酶加工工业的进一步发展提供了借鉴.随着NaHSO3浓度的增加,抑制作用逐渐加强;EDTA的抑制效果最不明显.     

日本刺沙蚕纤溶酶的酶学性质及其分类

目的:探讨日本刺沙蚕纤溶酶(NJF)的最适反应温度和最适反应pH 值以及金属阳离子和蛋白酶抑制剂对酶活性的影响,确定NJF的酶学分类.方法:采用偶氮酪蛋白(azocasein)水解法测定NJF的最适温度及最适pH 值;利用10种金属阳离子(Na+、K+、Cu2+、Ca2+、Zn2+、Co2+、Fe2+、Fe3+、Al3+和Hg2+)确定金属离子对NJF酶活性的影响;采用9种蛋白酶抑制剂(PMSF、EDTA、EGTA、β-巯基乙醇、苯甲脒、碘乙酸、抑肽酶、胃酶抑素A和大豆胰蛋白酶抑制剂)确定NJF的蛋白酶分类.结果:NJF具有较宽的热稳定性及pH稳定性范围,在40～80℃及pH7～11范围内有较好的稳定性,NJF酶最适温度为60℃,最适pH值为9;Hg2+能够强烈地抑制NJF的酶活性,Cu2+具有较弱的抑制作用,而其他金属阳离子对酶活性无明显抑制作用;NJF的酶活性能被典型的丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF完全抑制.结论:NJF是一种典型的丝氨酸蛋白酶.     

果胶酶产生菌的分离及其产酶条件研究

[目的]从自然界寻求高效的果胶酶生产菌株,减少生产成本,使发酵产生的果胶酶直接应用于果汁、果酒等的澄清中.[方法]从富含果胶质的土壤及腐烂水果中采集样品,筛选出2株产酶活性相对较高的菌株,并对其最佳培养时间、培养温度、最适pH以及最适接种量等酶学性质进行初步研究.[结果]确定了2个菌株的最佳培养条件:A1在28 ℃,pH 7.0,接种量20%,发酵周期48 h时产酶最高,具有较强的分解果胶质的能力;A2在31 ℃,pH 7.0,接种量30%,发酵周期60 h时产酶最高,其有较强的分解果胶质的能力.[结论]菌株A1生长繁殖周期较短,具快速的生长期.同时生长的外界环境易于获得,但产酶效益较低,酶学曲线波动较大.稳定性差;A2具长的生长期,所需培养温度也较高,培养条件有些难度,但产酶效益较高,总体酶学曲线稳定性较好,具长的稳定期.     

斑菌发酵产胆红素氧化酶及其对酸性靛蓝脱色的研究

[目的] 提高漆斑菌(Myrothecium sp.IMER1)产胆红素氧化酶产量,并研究其酶液对酸性靛蓝脱色性能.[方法]筛选合适的产酶培养基,研究外加碳源、温度、pH 值等条件对产酶量的影响.提取粗酶液并对酸性靛蓝进行了脱色研究,用紫外-可见分光光度计扫描其在200～800 nm波长的变化.[结果] 漆斑菌在PDB培养基上生长良好且产酶量最大;当以PDB培养基为基本培养基时,葡萄糖是其产酶的最适外加碳源,该菌最适产酶的温度和pH值分别是28 ℃和7.0.该酶在2 h内对酸性靛蓝脱色率可达到82%,酸性靛蓝降解液的扫描光谱图证实了染料分子的结构受到了破坏.[结论]试验结果为提高胆红素氧化酶产量提供了试验依据,证实了该酶在印染废水的脱色净化处理中具有潜在的应用前景.     

黑曲霉糖化酶基因的克隆及其在毕赤酵母X33中的表达

[目的]以毕赤酵母(Pichia pastoris)X33为宿主菌高效表达黑曲霉(Aspergillus niger)糖化酶,为进一步扩大糖化酶在工业上的应用奠定基础.[方法]利用RT-PCR技术,提取黑曲霉总RNA进行反转录,以得到的cDNA为模板,根据NCBI数据库中A.niger CBS513.88糖化酶的cDNA序列(glaA)设计引物,通过PCR扩增得到去除天然信号肽的糖化酶成熟肽编码基因glaAm,并将其克隆到pUC19载体中,序列分析表明,glaAm的开放阅读框由1 879个核苷酸组成,编码625个氨基酸.以此片段构建了pFLDα-glaAm重组表达载体,经Nsi I线性化后,电击转化毕赤酵母X-33.摇瓶培养中通过添加终浓度为0.5%的甲醇诱导糖化酶的分泌.[结果]SDS-PAGE和Starch-PAGE显示,糖化酶得到正确的分泌表达,且具有较高的生物活性,发酵上清液中酶活最高达到380.78 U/ml(发酵液).重组糖化酶的最适反应温度和最适pH分别为60～65℃和4.0,在pH 2.5～5.5范围内均保持90%以上的酶活力.该酶具有较高的热稳定性,pH 4.0条件下,该酶在50℃下稳定;60℃处理60 min,仍能保持90%以上的酶活力;65℃下的半衰期约为44 min.[结论]黑曲霉糖化酶基因在毕赤酵母X33中得到了异源高效表达.     

酶解制备水溶性大豆多糖的研究

[目的]采用植物复合水解酶水解不溶性豆渣粉制备水溶性大豆多糖(SSPS),研究最佳制备工艺.[方法]用3,5-二硝基水杨酸比色法测定总糖和还原糖,通过单因素试验研究料液比、pH、温度、酶添加量和水解时间对SSPS得率的影响,在单因素试验的基础上设计正交试验选出优化的因素组合.[结果]各因素对SSPS得率的影响大小依次为水解温度>水解时间>酶添加量>pH,在料液比1:20(g:ml),酶添加量1.2%,pH4.5,温度50℃、提取时间25h的最佳条件下,SSPS得率为8.89%.[结论]酶解制备SSPS工艺设备简单,条件温和,但是耗时较长.     

西兰苔籽中硫代葡萄糖苷酶解条件的研究及产物的鉴定

[目的]研究西兰苔籽中硫代葡萄糖苷酶解的影响因素,确定硫苷酶解的最佳条件并分析和鉴定酶解产物.[方法]以西兰苔籽粉末为材料,研究不同的温度、pH以及时间对酶水解的影响,并且利用气相色谱-质谱连用技术分析鉴定了酶解产物.[结果]酶解时间为8 h,水解温度为25 ℃,pH值为7是最佳酶解条件.利用气象色谱-质谱连用技术分析鉴定出5种化合物,占硫苷酶解产物中挥发性化合物总量的80%. [结论]确定了西兰苔籽中硫代葡萄糖苷酶解的最佳条件,并为西兰苔籽的抗癌活性研究提供了一定的理论基础.     

黄绿木霉菌菌株产几丁质酶发酵条件的研究

[目的]研究黄绿木霉菌(Trichoderma aureoviride sp.)产几丁质酶的最佳发酵条件,为几丁质酶工业提供新酶源.[方法]采用正交试验设计,以DNS法测定酶解后糖含量变化为指标,对发酵务件进行优化.[结果]在以2%胶体几丁质为碳源、2%蛋白胨为氯源、摇床转速为170 r/min时,黄绿木霉菌产几丁质酶的最佳发酵条件组合:培养基的初始pH为5,接种量为8%,瓶装量为20 ml,在28℃下培养6 d.[结论]试验确定了黄绿木霉菌产几丁质酶最佳条件,为其在工业生产中的应用奠定了基础.     

白假丝酵母脂肪酶CaLIP5在毕赤酵母X33中的优化重组表达

[目的]研究新的脂肪酶及优化脂肪酶发酵培养条件.[方法]在毕赤酵母X33系统中重组表达白假丝酵母脂肪酶CaLIP5.利用响应面分析法,构建了CaLIP5的酶活回归方程.[结果]由响应面分析可知,在温度25.71℃,pH8.33,酵母提取物浓度1.28%和葡萄糖浓度4.06%时,预测最大酶活为8.33U/ml.试验验证酶活为9.24U/ml.实际试验值与模型预测值基本一致.优化后的酶活提高了22.22%.[结论]在优化的培养条件下,可以获得毕赤酵母X33重组表达CaLIP5的最大酶活.     

不同pH对甘草种子萌发及幼苗生长的影响

[目的]研究甘草种子萌发和幼苗生长的最适pH,优化甘草中药材产业化栽培技术.[方法]用不同pH溶液(pH 3,5,6,7,8,9,10,11)处理甘草种子7 d,分别计算其发芽率、发芽势、发芽指数,并测定胚根胚芽长度及整株幼苗鲜重;采用水培法,以不同pH的营养液(pH为5,6,7,8,9)培养甘草幼苗,30 d后测定其生物量、药用成分,蛋白质,氨基酸,可溶性总糖,淀粉,丙二醛含量以及硝酸还原酶和过氧化物酶活性等指标.[结果]pH为6时甘草种子的发芽率最高、出苗整齐,且发芽后胚芽长度及幼苗鲜重均有最大值;溶液培养pH为6时,甘草生物量、甘草酸、蛋白质、淀粉等含量最高,同时其硝酸还原酶和过氧化物酶活性也最大.[结论]pH6时最利于甘草种子的萌发,幼苗生长及药用成分的积累.     

果胶酶用于制取脐橙果汁的优化工艺研究

[目的]研究果胶酶制取脐橙果汁的优化工艺.[方法]采用果胶酶制取脐橙果汁,通过单因素试验和正交优化试验研究酶量、酶解时间、酶解温度、酶解pH4个因素对脐橙出汁率的影响.[结果]在酶添加量0.06%、酶解时间0.5 h、酶解温度45℃、酶解pH4.0,脐橙的出汁率最高可达到53.93%.[结论]该研究结果为脐橙果汁的深加工奠定了基础.     

果胶酶用于制取德庆贡柑果汁的优化工艺研究

[目的]研究德庆贡柑果汁生产的最佳酶解工艺条件.[方法]采用果胶酶制取德庆贡柑果汁,通过单因素试验和正交优化试验研究酶量、酶解时间、酶解温度、酶解pH 4个因素对德庆贡柑出汁率的影响.[结果]在酶添加量0.06%、酶解时间2.5 h、酶解温度45℃、酶解pH 4.0的最佳工艺条件下,德庆贡柑的出汁率最高可达到70.03%.[结论]该研究为德庆贡柑果汁的深加工奠定了基础.