急性缺血对单个家兔窦房结起搏细胞自发性电活动的影响及雷诺定的干预作用

目的:观察急性缺血对窦房结(sino-atrial node,SAN)起搏细胞(pacemaker cells,PCs)自发性电活动的影响及肌浆网(sarcoplasmic reticulum,SR)钙释放特异性阻断剂雷诺定的干预作用,探讨SR钙释放在急性缺血诱导的心动过缓中的作用。方法:实验分为2组:非干预组(实验Ⅰ组),细胞先灌流正常台式液作为对照;记录自发性动作电位(action potential,APs)后,灌流缺血样台式液(低pH、无葡萄糖以及100%N2饱和)5~8 min模拟缺血;最后用正常台式液冲洗。雷诺定干预组(实验Ⅱ组)在灌流缺血样台式液5~8 min之前,先灌流40μmol/L雷诺定15 min,其他实验步骤同实验Ⅰ组。结果:实验Ⅰ组灌流缺血样台式液5~8 min后起搏频率(beating rate,BR)减慢13%(P<0.05),APs的超射值(overshoot,OS)增大 6 mV(P<0.01),APs时程(actionpotential duration,APD)延长44%(P<0.05),而最大舒张期电位(maxi mumdiastolic potential,MDP)无显著变化;实验Ⅱ组经雷诺定干预处理15 min后,BR减慢12%(P<0.05),灌流缺血样台氏液5~8 min后,BR进一步减慢23%(P<0.01),OS增大 5 mV(P<0.05),APD延长29%(P<0.05)。结论:5~8 min缺血可改变单个家兔SAN PCs自发性电活动,而雷诺定不能阻断该效应,提示SR钙释放可能在急性缺血诱导的家兔单个SANPCs起搏过缓中的作用不大。     

模拟缺血再灌注对乳兔窦房结细胞起搏电流的影响

目的观察模拟缺血再灌注（I／R）对乳兔窦房结细胞形态及起搏电流（If）的影响,阐明I／RN备窦房结细胞损伤的电生理特征改变。方法选用新生新西兰乳兔,采用双酶解法／差速贴壁法分离窦房结细胞,模拟I／R制备受损模型,利用膜片钳技术记录动作电位和风结果乳兔窦房结细胞主要呈梭形,搏动频率快,细胞表面光滑完整。模拟I／R后大部分细胞肿胀变形,伪足回缩,胞膜有较多颗粒、欠光滑。模拟再灌注后窦房结细胞If最大舒张电位由（-50．9±5．3）mV变为（-43．5±4．6）mV,电流密度由（-3．2±0．41）pA／pF变为（-2．47±0．32）pA／pF,其稳态激活曲线较对照组明显右移,半数激活电压由（-98．6±2．3）mV变为（-107．8±4．7）mV（P〈0．05）。结论模拟I／R导致窦房结细胞损伤,细胞电生理发生改变,尤以If重构为主。     

模拟缺血-再灌注对窦房结细胞起搏离子流的影响及K_(ATP)通道开放剂的干预作用

探讨模拟缺血 再灌注对窦房结细胞起搏离子流 (If)的影响及KATP通道开放剂Pinacidil的干预效果。分离乳鼠窦房结细胞 ,纯化培养 2天后进行实验。随机分为对照组、模拟缺血 再灌注组 (I/R)、KATP通道开放剂Pinacidil干预组 (P +I/R)及KATP通道阻断剂 5 HD干预组 (5 HD +P +I/R及 5 HD +I/R)。采用常规全细胞膜片钳技术及多导管灌流系统 ,测定各组细胞If 密度 ,并绘制If 激活曲线。结果 :①每个窦房结细胞均可记录到If 电流 ,在相同指令电压下 ,I/R组窦房结细胞If 密度值较对照组明显增加 (P <0 .0 1) ;而P +I/R组则较I/R组显著减小 (P <0 .0 1) ;5 HD +P +I/R及 5 HD +I/R两组又较P +I/R组明显增加 (P <0 .0 1) ,但与I/R组比较无显著差异。②与对照组比较 ,I/R组窦房结细胞的If 激活曲线发生右移 ,半数最大激活电压由 - 10 8.0± 12 .4mV变为 - 89.5± 7.2mV(P <0 .0 1) ;P +I/R组窦房结细胞If 激活曲线较I/R组左移 ,半数最大激活电压为 - 99.5± 10 .8mV(P <0 .0 5 ) ;KATP通道阻断剂 5 HD可阻断Pinacidil对If 激活曲线的影响。结论 :KATP通道开放剂Pinacidil可对抗模拟缺血 再灌注对窦房结细胞If 的影响 ,此有利于维持模拟缺血 再灌注时窦房结细胞离子稳态和电生理活动的相对稳定     

兔窦房结细胞三种主要起搏离子流的作用

目的应用不同的起搏离子流通道阻断剂,观察If、IK和ICa.T在自律性活动中的作用,以比较它们作用的大小。方法细胞内微电极技术记录兔心窦房结细胞自律性动作电位,研究它们对自律性活动的影响。结果用E4031（1μmol/L）阻断钾通道,窦房结自律活动减慢45.4%;Cs（2 mmol/L）阻断If通道后,心率减少26.8%;N i（100μmol/L）阻断T型钙通道后,自律活动减少14.3%。联合运用2种通道阻断剂,留下所观察的通道,得出类似的结果。结论对窦房结细胞起搏作用大小的次序为IK、超极化激活的起搏离子流If和T型钙通道电流ICa.T。     

急性缺血对单个家兔窦房结起搏细胞钙通道的影响

目的:观察急性缺血对窦房结(SAN)起搏细胞(PCs)钙通道电流的影响,探讨急性缺血诱导自发性电活动改变的离子机制.方法:灌流缺血样台氏液(低pH、无葡萄糖以及100% N2饱和)模拟缺血;酶消化法分离家兔SAN PCs,采用穿孔膜片钳技术,记录电压依赖性的钙电流.结果:缺血可显著增大L-型钙电流(ICa,L)密度,并增大最大膜电导,使稳态-失活曲线右移,而对激活曲线无明显影响;然而缺血可明显抑制T-型钙电流(ICa,T).结论:急性缺血通过增大最大膜电导以及抑制通道的失活从而增强SAN PCs的ICa,L;急性缺血后ICa,L的密度增大以及ICa,T的密度减小可能是急性缺血诱导的自发性电活动改变的主要离子机制.     

卡维地洛对老龄大鼠心房肌细胞起搏电流的作用

目的研究卡维地洛（Car）对大鼠心房肌细胞起搏电流（If）的影响，探讨其降低心房颤动的机制。方法选择22～24月龄SD大鼠分离心房肌细胞，利用全细胞膜片钳技术记录If。结果Car可明显降低老龄大鼠心房肌细胞的超极化激活起搏电流，在-150mV时，1．0μmol／L Car使If的电流密度从（3．2±0．4）pA／pF降至（2．4±0．3）pA／pF（P％0．01）。Car的抑制电流效应呈电压依赖性，即随着超极化电位的增加，Car的效应也增加。在0．1～30．0μmol／L的范围内，Car以浓度依赖性方式阻滞起搏电流，其IC50为1．37μmol／L（95％可信限为1．96～0．57μmol／L）。进一步，Car可以使If的稳态激活曲线向超极化方向移动，使半激活电压从（-87．5±2．3）mV移至（-96．2±4．7）mV。从而使电流激活减慢，这可能是其减少，If的主要原因。结论卡维地洛可明显降低老龄大鼠心房肌细胞起搏电流密度。     

HCN4在缺血诱导乳兔窦房结细胞损伤中的作用

目的:观察乳兔窦房结细胞在缺血条件下HCN4的表达变化及其对窦房结功能及细胞凋亡的影响。方法:将原代培养的乳兔窦房结细胞分为正常对照组和模拟单纯缺血组(缺血1h、3h、6h);采用RT-PCR和Western blot法检测细胞中HCN1-4的表达;采用细胞免疫荧光方法检测窦房结细胞内HCN4蛋白的亚细胞分布;采用RT-qPCR检测Bax和Bcl-2的表达;采用全细胞膜片钳记录单个窦房结细胞的If电流,并运用HCN通道抑制剂伊伐布雷定观察抑制HCN4对乳兔窦房结细胞电活动的影响。结果:原代乳兔窦房结细胞主要表达HCN4,少量表达HCN1和HCN2,HCN3 mRNA未检出,Western blot仅检测出HCN4,未检测出HCN1、HCN2、HCN3的蛋白水平,HCN4蛋白广泛分布于细胞质内;膜片钳可记录到单一窦房结细胞自发起搏电流,伊伐布雷定可通过特异性的降低窦房结舒张期去极化速率来延缓自发活动,伊伐布雷定可持续抑制窦房结细胞的If电流产生,使If明显减小;与正常对照组相比,随着缺血时间的延长(1h、3h、6h),HCN4mRNA表达及蛋白水平逐渐减少,同时Bax mRNA表达及蛋白水平明显上调,Bcl-2mRNA表达及蛋白水平明显下降;急性缺血处理显著抑制了窦房结细胞的电活动,与正常对照组相比,随着时间的延长,窦房结细胞的起搏电流If也逐渐减少。结论:HCN4蛋白参与调控乳兔窦房结细胞的起搏功能。急性缺血可引起窦房结细胞凋亡,导致HCN4的表达下降,使得通道If电流密度减少导致窦房结功能障碍。     

细胞兴奋:从起搏电流到超极化激活的环核苷酸门控通道

心脏传导组织特定心肌细胞的起搏点功能就在于这些细胞可以产生舒张期自动去极化。在动作电位 (AP)结束时 ,起搏点去极化可使膜电位逐渐增高接近新AP启动的阈值 ,因而产生周而复始的电活动。起搏点去极化的离子机制是一种超极化激活的电流If。这种电流首次在兔窦房结(SAN)上描述时曾被称做“特种电流 (funnycurrent,If;或queercurrent,IQ)” ,现在也称做超极化激活的阳离子电流(hyperpolarization activatedcationcurrent,Ih) ,原因是它有几种不同寻常的特点 ,包括超极化激活、钾钠离子通透、胞内cAMP调节及微弱的单通道电导等[1 ,2 ]…     

不同形态的家兔房室结细胞超极化钳制电流特性的研究

为探讨家兔房室结 3层细胞束细胞的电生理特性 ,按房室结 3层细胞束 4种细胞的形态特点 ,用胶原酶灌注分离房室结细胞并从中筛选 4种形态细胞 :圆形、椭圆形、细长形和条状形细胞 ,应用膜片钳全细胞记录技术观察各形房室结细胞超极化钳制电流的特征。超极化钳制时 ,房室结细胞中 12个条状形细胞中有 4个记录到较弱的内向整流钾电流 (Ik1 ) ,其他各形细胞均未记录到 Ik1 。大部分圆形和椭圆形细胞 (11 14 )记录到起搏电流 If,其电流密度为 - 4 .73± 0 .81p Ap F- 1 ,部分细长形细胞 (4 11)记录到较弱的 If,其电流密度为 - 0 .2 8± 0 .0 7p Ap F- 1 ,负向电流明显低于圆形和椭圆形细胞 (P<0 .0 1) ,长条形细胞除 1个外其余均未记录到 If。结果表明家兔房室结的 4种形态细胞的超极化钳制电流有明显不同 ,提示家兔房室结 3层细胞束的电生理及传导功能存在差异。     

起搏胶囊治疗家兔病态窦房结综合征的实验研究

目的:观察起搏胶囊对病态窦房结综合征(SSS)家兔的心率、心电图、电生理影响。方法:采用随机、平行对照的研究方法,选用30只家兔制备SSS模型,随机分为3组:模型组、起搏胶囊组、心宝丸组,给予相应的药物干预,10d后观察家兔心率、电生理的情况。结果:起搏胶囊组SSS家兔的平均窦性心动周期、窦房传导时间、窦房结恢复时间、校正窦房结恢复时间、心率较模型组均差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),与心宝丸组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:起搏胶囊对窦房结功能损伤的恢复有一定作用,对窦房结损伤心肌组织有一定的修复作用。在改善SSS家兔窦房结功能方面是安全有效的。