绒毛中表皮生长因子受体和血管内皮生长因子的表达对早孕绒毛血管生成的影响及与稽留流产的关系

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达对早孕绒毛血管生成的影响及与早孕稽留流产的关系。方法应用免疫组织化学方法检测30例稽留流产(稽留流产组)及30例早孕人工流产(早孕人工流产组)绒毛EGFR、VEGF的表达及绒毛的微血管密度(MVD),并分析相关因子的相关性。结果稽留流产组绒毛的MVD(7.03±1.72)比早孕人工流产组(14.74±1.66)显著降低(P0.01)。稽留流产组绒毛的EGFR表达水平(0.42±0.14)表达比早孕人工流产组(0.49±0.07)低(P0.05),稽留流产组绒毛的VEGF表达水平(0.47±0.12)表达比早孕人工流产组(0.60±0.12)低(P0.01)。Pearson相关分析显示在早孕人工流产绒毛及稽留流产绒毛中EGFR与VEGF的表达呈正相关,EGFR的表达与MVD呈正相关,VEGF表达与MVD呈正相关。结论绒毛组织中EGFR和VEGF的表达与绒毛血管生成状况密切相关,EGFR和VEGF低表达参与了稽留流产的绒毛血管的形成障碍。     

自然流产蜕膜及绒毛组织中钙网蛋白的表达及意义

目的:检测早期自然流产蜕膜及绒毛组织中钙网蛋白(CRT)和凋亡蛋白酶Caspase-3的表达及定位,初步探讨其在早期自然流产过程中的作用及相关性。方法:正常早孕者和早期自然流产者(先兆流产组、稽留流产组)行负压吸引人工流产术,取蜕膜及绒毛组织,HE染色比较其形态学变化,免疫荧光法检测CRT及Caspase-3的表达,统计学分析其相关性。结果:(1)CRT及Caspase-3在早期自然流产蜕膜及绒毛组织中表达高于正常早孕组;(2)稽留流产组蜕膜及绒毛组织中CRT及Caspase-3的表达均高于先兆流产组;(3)CRT与Caspase-3呈正相关。结论:CRT及Caspase-3异常表达可能参与早期自然流产的发生机制。     

米非司酮药物流产后绒毛蜕膜细胞凋亡的相关研究

目的:探讨米非司酮对早孕绒毛蜕膜细胞凋亡、增殖的作用机制。方法:以20例药物流产患者为研究组,以20例非意愿妊娠要求行人工流产负压吸引刮宫术的患者为对照组,分别收集绒毛和蜕膜标本,应用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,并采用免疫组织化学方法检测bcl-2、bax、fas、fasL、增殖细胞核抗原(PCNA)5种蛋白在绒毛和蜕膜中的分布与表达强度,同时应用原位杂交法测定fas与fasLmRNA的分布与表达强度。结果:凋亡细胞在正常早孕绒毛合体滋养细胞中少量存在,蜕膜中偶见;绒毛、蜕膜中bcl-2、bax、fas、fasL、PCNA均有表达。采用米非司酮药物流产的绒毛合体滋养细胞及蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡显著增多,同时伴有促凋亡bax、fas、fasL蛋白及fasLmRNA含量的增加,而PCNA蛋白含量与C组比没有变化。结论:米非司酮不仅能促进早孕绒毛合体滋养细胞、蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡,而且主要通过Fas与FasL转录及翻译途径介导,bax表达增加也其也有一定的相关性,此可能为其抗早孕机制之一。     

缺氧诱导因子(HIF)-lα在稽留流产患者绒毛中的表达

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在稽留流产中的作用。方法:经B超及β-hCG动态监测证实为稽留流产患者50例,其中不明原因组30例,有原因组20例;根据胚胎停止发育后稽留宫内时间不同又分为A组、B组和C组,分别为胚胎停止发育≤2周、3-4周和≥5周。选取同时期经B超证实为活胎,因非意愿妊娠在门诊要求行人工流产的早孕妇女20例为对照组。应用免疫组织化学方法比较各组绒毛组织中HIF-1α的表达。结果:HIF-1α的表达主要位于绒毛滋养细胞胞浆和胞核;与正常早孕妇女绒毛组织相比较,稽留流产患者绒毛组织中HIF-1α表达明显降低(P<0.05);但A、B、C组间HIF-1α表达无统计学差异(P>0.05)。结论:HIF-1α在绒毛组织中的低表达可能是导致稽留流产的原因之一。     

缺氧诱导因子(HIF)-1a在稽留流产、患者绒毛中的表达

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在稽留流产中的作用.方法:经B超及β-hCG动态监测证实为稽留流产患者50例,其中不明原因组30例,有原因组20例;根据胚胎停止发育后稽留宫内时间不同又分为A组,B组和C组,分别为胚胎停止发育≤2周、3-4周和≥5周.选取同时期经B超证实为活胎,因非意愿妊娠在门诊要求行人工流产的早孕妇女20例为对照组.应用免疫组织化学方法比较各组绒毛组织中HIF-1a的表达.结果:HIF-1a的表达主要位于绒毛滋养细胞胞浆和胞核:与正常早孕妇女绒毛组织相比较,稽留流产患者绒毛组织中HIF-1α表达明显降低(P＜0.05):但A、B、C组间HIF-1α表达无统计学差异(P＞0.05).结论:HIF-1α在绒毛组织中的低表达可能是导致稽留流产的原因之一.     

米非司酮对人早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白和绒毛膜促性腺激素-β表达的影响

目的:探讨米非司酮对早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白(OPN)和绒毛膜促性腺激素-β(β-hCG)表达的影响。方法:采用免疫组化半定量法检测米非司酮药物流产(n=20)和人工流产(n=20)的早孕绒毛及蜕膜中的OPN(骨桥蛋白)和β-hCG的表达。结果:OPN和β-hCG在早孕妇女绒毛组织和蜕膜组织中的表达米非司酮组均显著低于手术流产组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:米非司酮可能抑制了早孕绒毛及蜕膜中OPN和β-hCG的合成,进而影响胚泡着床和胎盘的形成,使妊娠难以维持,最终流产。     

凝集素受体WGA、RCA和ECL在米非司酮流产绒毛及蜕膜组织中表达的研究

目的:通过麦胚凝集素(WGA)受体、蓖麻凝集素(RCA)受体和鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)受体在米非司酮流产的绒毛及蜕膜组织中的表达,探讨米非司酮的抗早孕机理。方法:以生物素标记的凝集素WGA、RCA和ECL为探针,应用亲和组织化学染色法检测3种凝集素受体在米非司酮流产组(实验组)和人工流产组(对照组)早孕绒毛及蜕膜组织上皮细胞及其间充质细胞的分布。结果:实验组WGA受体、RCA受体和ECL受体在蜕膜组织上皮细胞的表达比对照组均显著降低(P0.01)。实验组ECL受体在绒毛上皮的表达显著低于对照组(P0.01),实验组WGA和RCA受体在绒毛上皮细胞的表达与对照组无显著差异(P0.05)。实验组3种凝集素受体在绒毛及蜕膜的间充质细胞的表达,与对照组无显著差异(P0.05)。结论:米非司酮可能通过下调蜕膜上皮组织中WGA受体、RCA受体和ECL受体的表达,阻碍胚胎发育而导致流产。     

肝素结合性表皮生长因子在早孕绒毛及蜕膜组织中的表达

目的　探讨肝素结合性表皮生长因子 (HB- EGF)在早孕绒毛及蜕膜组织中的表达 ;评估 HB- EGF在人类胚泡着床和早期胎盘组织发育中的作用。　方法　采用免疫组化法检测 18例早孕绒毛及蜕膜组织中的 HB- EGF的表达及定位。　结果　全部早孕绒毛及蜕膜组织标本均有 HB-EGF表达 ,早孕绒毛滋养细胞表达高于蜕膜组织 ,HB- EGF阳性产物定位于早孕绒毛及蜕膜组织中的细胞膜上和细胞浆内 ,呈棕黄色。　结论　人类早孕绒毛及蜕膜组织表达 HB- EGF可能与胚泡着床、胎盘形成和维持胎盘功能有关。     

半乳糖凝集素-3在早期绒毛和蜕膜中的表达

目的:了解半乳糖凝集素-3(galectin-3)在早孕期绒毛与蜕膜中的表达,为进一步探讨稽留流产发病机制提供理论依据。方法:分别获取手术流产组(n=20)、药物流产组(n=20)及稽留流产组(n=20)患者的流产绒毛及蜕膜,用免疫组织化学法及实时荧光相对定量PCR法检测各组绒毛及蜕膜组织中半乳糖凝集素-3的表达。结果:免疫组织化学显示稽留流产组绒毛半乳糖凝集素-3强阳性表达率(30.00%)明显低于手术流产组(80.00%)(P<0.01)。RT-PCR结果进一步证实稽留流产组绒毛半乳糖凝集素-3 mRNA的相对表达量(2-△△Ct=0.31±0.70)明显低于手术流产组(2-△△Ct=1.00±0.00)(P<0.01),药物流产组蜕膜半乳糖凝集素-3 mRNA的相对表达量(2-△△Ct=0.74±2.20)明显低于手术流产组(2-△△Ct=1.00±0.00)(P<0.01)。结论:半乳糖凝集素-3与妊娠早期绒毛及蜕膜发育有关,其表达降低可能促进了稽留流产的发生。     

正常与药物流产绒毛蜕膜组织细胞凋亡及相关基因的表达

目的：探讨米非司酮对早孕绒毛蜕膜细胞调亡、增殖及相关基因表达的影响。方法：对正常早孕绒毛与蜕膜、药物流产完全与不完全的绒毛、药物流产不完全蜕膜标本各10份（共50份标本）,应用原位末端标记法进行细胞凋亡的组织学检测,免疫组织化学方法测定bcl-2、bax、fas、增殖细胞核捩的（PCNA）5种蛋白在组织中的分布与含量,同时应用原位杂交法测定fas与fasL mRNA的分布与含量。结果：正常早孕绒毛中存在少量凋 细胞,主要分布于合体滋养细胞,蜕膜中凋亡细胞偶见;绒毛蜕膜中均可检测到上述5种蛋白。米非司酮药物流产的绒毛合体滋养细胞凋亡显著增,蜕膜凋亡细胞也增多,同时伴有促凋亡baz、fas、fasL蛋白及fas、fasL、mRNA含量的增加,而PCNA蛋白含量无减少。结论：米非司酮能促进早孕绒毛合体滋养细胞,蜕膜间质及腺上皮细胞的凋亡,且主要通过fas与fasL转录及翻译途径介导,bax表达增加也有一定相关性,此可能为其抗早孕机理之一。     

转化生长因子β1及其受体与体外受精-胚胎移植后流产关系的研究

目的　了解转化生长因子β1(TGF- β1)及其受体(TβR)在绒毛及蜕膜组织中的表达,初步探讨TGF- β1与体外受精胚胎移植(IVF- ET)后流产及自然流产的关系。方法　应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法,检测10例IVF -ET后流产患者(IVF- ET组)和20例早期自然流产患者(自然流产组)的绒毛及蜕膜组织中的TGF -β1及TβR(Ⅰ、Ⅱ型)表达情况,其表达水平以阳性染色部位的吸光度(A)值表示,并与20例人工流产者(对照组)进行比较。结果　TGF- β1及TβR在早孕绒毛滋养细胞、蜕膜组织腺体及间质细胞中均有阳性染色, 3组表达部位相同。TGF β1在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平(A值,中位数,下同)分别为0 167、0 .199,自然流产组为0 .198、0 .201,对照组为0 .277、0 .274;TβR Ⅰ在IVF- ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平为0 144、0 150,自然流产组为0 .202、0. 201,对照组为0 .238、0 .281;TβR Ⅱ在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中的表达水平为0 .199、0 .145,自然流产组为0. 153、0 .156,对照组为0 .300、0 .301。上述指标,IVF -ET、自然流产组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0. 01)。结论　TGF -β1及TβR在IVF- ET后流产及自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达下降,在IVF- ET后流产发病中起重要作用,     

细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)在先兆流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:初步探讨早孕母胎界面细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的作用。方法:26例妊娠35-49d先兆流产患者,采用RT-PCR法及Western blotting法、免疫组化法检测绒毛、蜕膜组织SOCS3的表达,并以30例正常早孕者作对照。结果:①绒毛、蜕膜组织均表达SOCS3,但先兆流产组SOCS3表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②绒毛中的SOCS3表达于滋养细胞和绒毛间质,蜕膜中的SOCS3主要位于蜕膜腺体及间质细胞,二组SOCS3表达定位一致。结论:母胎界面SOCS3可能在早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与先兆流产的发生、发展有关。     

早期自然流产患者绒毛KiSS-1、MMP-9和MMP-2基因及其蛋白表达

目的研究早期自然流产患者绒毛肿瘤转移抑制基因KiSS-1与基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)mRNA及蛋白的表达,探讨其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR、免疫印迹法检测30例正常早期妊娠和30例早期自然流产患者绒毛KiSS-1、MMP-9和MMP-2的mRNA及蛋白水平,用明胶酶谱分析法检测上述样本孵育液MMP-9、MMP-2的酶活性。结果(1)自然流产患者绒毛组织中MMP-9及MMP-2mRNA表达水平低于正常早期妊娠组(P<0.05),KiSS-1mRNA的表达高于正常早期妊娠组差异有统计学意义(P<0.05);(2)Westernblotting分析显示自然流产患者绒毛MMP-9、MMP-2蛋白表达低于正常早期妊娠差异有统计学意义(P<0.05),KiSS-1蛋白表达高于正常早期妊娠差异有统计学意义(P<0.05);(3)明胶酶谱分析结果显示,自然流产患者绒毛MMP-9、MMP-2酶活性低于正常早期妊娠者差异有统计学意义(P<0.05)。结论自然流产患者绒毛促浸润基因MMP-9、MMP-2mRNA及其蛋白表达水平降低,同时抑制浸润基因KiSS-1mRNA及其蛋白表达增加,造成滋养细胞浸润能力下降,可能与自然流产的发生有关。     

The role of VEGF and its receptors in the etiology of early pregnancy loss

Objective: This study aimed to investigate the role of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors (VEGFR1, VEGFR2) in maternal and embryonic tissues in the etiology of early pregnancy loss.

Methods: Immunohistochemistry was used to analyze the expression of VEGF and its receptors in placental and decidual tissues of 80 women with spontaneous incomplete abortion (n?=?20), missed abortion (n?=?20), blighted ovum (n?=?20) and from early terminated pregnancies (n?=?20).

Results: Compared with the controls, all study groups showed weaker VEGF immunoreactivity in cytotrophoblasts and syncytiotrophoblasts of placental villi and endothelial cells of decidua (p?=?0.002, p?=?0.003, p?p?p?p?Conclusion: These results suggest that decreased expression of VEGFR1 in decidua and weaker VEGF and VEGFR2 expression in placental villi and decidua may be associated with early pregnancy loss.     

多重连接依赖探针扩增技术在稽留流产绒毛组织染色体核型分析中的应用

目的 探讨多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术在稽留流产绒毛组织染色体核型分析中的应用.方法 选择2008年2-10月于深圳市妇幼保健院就诊,经激素水平测定、B超和临床检查确诊为稽留流产患者91例为病例组;随机抽样方法选择同期20例经激素水平测定、B超和临床检查为正常妊娠,要求人工流产者为对照组.人工流产术中无菌条件下获取两组妇女的绒毛组织,培养后每份样本分别采用传统细胞遗传学G显带染色体核型分析方法、同时提取DNA采用MLPA技术分析染色体异常,并与传统染色体核型分析结果进行比较.结果 91例病例组样本中,有84例(92%)采用MLPA技术进行染色体核型分析的非整倍体结果与传统染色体核型分析方法的结果一致,其中包括正常核型40例、常染色体三体29例、常染色体双三体1例、X染色体单体合并常染色体三体1例、X染色体单体10例、嵌合性X染色体单体2例和1例结构异常46,XX,der(5)t(5;8)(p1.2;q1.2);其余结果不一致的7例中,采用传统染色体核型分析方法检测出2例三倍体和5例四倍体,而采用MLPA技术检测结果均为正常的二倍体.20例对照组样本两种技术的分析结果均一致.结论 MLPA技术分析染色体非整倍体异常是一种简单、快速且有效的方法,具有临床实际应用价值.     

米非司酮药流时整合蛋白β3和细胞间粘附分子-1在蜕膜与绒毛内的表达

为了解米非司酮与米索前列醇对早孕流产的蜕膜、绒毛中整合蛋白 (Integrin)β3和细胞间粘附分子 1 (Intercellular adhesion molecule,ICAM 1 )的影响 ,应用流式细胞定性定量分析技术测定了 1 0例采用米非司酮与米索前列醇终止早孕妇女的蜕膜与绒毛组织中整合蛋白β3和 ICAM 1水平 ,并以 1 0例负压吸引人工流产者为对照。结果显示 :蜕膜与绒毛组织整合蛋白 β3和 ICAM 1均较对照组明显降低。实验组蜕膜组织整合蛋白 β3与 ICAM 1分别为 1 9.1± 5.0 1 %和 2 0 .6 1± 6 .51 % ,对照组分别为 2 9.3 1± 5.2 6和 2 6 .6 9± 6 .1 1 ;实验组绒毛组织整合蛋白β3与 ICAM 1分别为 2 1 .3 2± 4 .3 8%和 2 0 .2 9± 6 .4 9% ,而对照组则为 3 1 .3 1± 7.85和 2 8.6 9± 7.98。结果提示整合蛋白β3及 ICAM 1可能与维持早孕有关 ,米非司酮影响蜕膜、绒毛组织中整合蛋白 β3及 ICAM 1的表达 ,可能参与药物抗早孕机制。     

胎盘绒毛血管生成状况及VEGF、MMP-2和MMP-9表达与早期自然流产的关系

目的:探讨VEGF、MMP2和MMP9表达变化对胎盘绒毛血管生成的影响及与早期自然流产的关系。方法:选用CD34作为微血管标记物,应用免疫组化检测30例早期自然流产病例(自然流产组)和20例早期人工流产病例(人工流产组)胎盘绒毛微血管密度(MVD);RT-PCR检测胎盘绒毛VEGFmRNA的表达;酶谱分析法测定MMP-2和MMP-9的表达。结果:自然流产组VEGF121mRNA表达及MVD均明显低于人工流产组(P<0.01)。相关分析显示,两组中VEGF121mRNA相对表达量与MVD值均呈显著正相关(rθ=0.9794,rλ=0.9183)。自然流产组酶原型MMP-9的表达量显著低于人工流产组(P<0.01),激活型MMP-2的表达量显著高于人工流产组(P<0.01)。结论:孕期胎盘绒毛内VEGF121mRNA低表达所致的血管生成障碍以及MMP-2和MMP-9表达失调可能共同参与了早期自然流产的发生发展过程。