钙网蛋白介导的凋亡在早期先兆流产过程中的作用

目的探讨不同表达水平的钙网蛋白(calreticulin,CRT)与先兆流产的关系。方法 (1)分别应用免疫组织化学法、Western blotting和q PCR检测早期正常妊娠(n=35,均因非意愿妊娠而要求人工流产)及早期先兆流产患者人工流产后的蜕膜和绒毛组织中CRT蛋白及mRNA的表达。(2)分别转染合成并经检测的质粒m Emerald-CRT与CRT-siRNA至BeWo细胞中,检测CRT及Caspase-3的表达。结果免疫组织化学可见CRT阳性信号定位于绒毛两层滋养层细胞的胞质和胞膜上,先兆流产组染色比正常早孕组深、面积大;q PCR与Western blotting检测CRT表达量在先兆流产组明显高于正常早孕组,先兆流产组中mRNA表达量为正常早孕组的1.2倍(P0.05)。q PCR与Western blotting检测CRT与Caspase-3表达量在质粒(m Emerald-CRT)转染组高于对照组,质粒转染组中CRT及Caspase-3的表达量分别是对照组的3.5倍与2倍(P0.05),在si-RNA组低于对照组,对照组中CRT及Caspase-3的表达量分别si-RNA组的5倍与2倍。结论早期先兆流产的发生可能与CRT在绒毛和蜕膜组织中的高表达并介导凋亡相关。     

细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)在先兆流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:初步探讨早孕母胎界面细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)的作用。方法:26例妊娠35-49d先兆流产患者,采用RT-PCR法及Western blotting法、免疫组化法检测绒毛、蜕膜组织SOCS3的表达,并以30例正常早孕者作对照。结果:①绒毛、蜕膜组织均表达SOCS3,但先兆流产组SOCS3表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。②绒毛中的SOCS3表达于滋养细胞和绒毛间质,蜕膜中的SOCS3主要位于蜕膜腺体及间质细胞,二组SOCS3表达定位一致。结论:母胎界面SOCS3可能在早期妊娠的维持中起重要作用,其表达水平降低可能与先兆流产的发生、发展有关。     

反复早期自然流产血浆溶血磷脂酸及其受体3在绒毛、蜕膜组织中的表达

目的 探讨反复早期自然流产患者血浆溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)水平及溶血磷脂酸受体3(lysophosphatidic acid receptor3,LPA3)在绒毛、蜕膜组织中的表达.方法 2007年1-6月在石家庄市妇幼保健院选取反复早期自然流产患者30例以及同孕龄正常早孕妇女30例和30例正常非孕期妇女采用薄层比色法测定外周血血浆溶血磷脂酸水平;并采用免疫组化方法检测上述反复早期自然流产惠者及正常早孕妇女人工流产的绒毛、蜕膜组织中溶血磷脂酸受体3的表达情况.结果 反复早期自然流产患者血浆溶血磷脂酸水平(3.72±2.39)μmol/L高于正常早孕妇女(1.99±O.94)μmol/L及正常非孕期妇女(1.70±O.67)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);后两者相比差异无统计学意义(P>0.05).反复早期自然流产患者绒毛、蜕膜组织中溶血磷脂酸受体3的表达[(2.667±1.093)μmol/L,(2.60±1.192)μmol/L]低于正常早孕相应孕龄妇女[(5.867±2.161)μmoL/L,(5.333±1.807)μmol/L],两者比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 血浆溶血磷脂酸水平升高及绒毛、蜕膜组织中溶血磷脂酸受体3的低表达可能导致反复早期自然流产的发生率增高.     

Th17及相关细胞因子在妊娠早期母-胎免疫耐受中的作用

目的:研究Th17细胞及相关细胞因子IL-22、IL-23在人孕早期不明原因的自发性流产母-胎免疫耐受中的作用。方法:以10例正常人工流产患者为正常早孕组,收集18例染色体正常自发性流产患者为自然流产组。分离两组患者外周血单个核细胞及蜕膜组织免疫细胞,用流式细胞术检测上述细胞中Th17细胞比例及相关细胞因子的表达,探讨其与自发性流产的关系。结果:自然流产组外周血Th17细胞比例显著高于正常早孕组(P<0.05),IL-23显著低于正常早孕组(P<0.01),但两组IL-22无显著差异;自然流产组蜕膜局部Th17细胞比例显著高于正常早孕组(P<0.01),IL-23亦显著高于正常早孕组(P<0.01),IL-22则显著低于正常早孕组(P<0.01)。结论:Th17细胞在孕早期蜕膜局部及外周血中的数量增多可能导致母胎免疫耐受失衡,在早期自然流产中发挥重要的正诱导作用,而IL-22、IL-23等细胞因子在其中的调控效应则具有明显的微环境相关性。     

组蛋白去乙酰化酶1蛋白在早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)蛋白在早期自然流产发生中的病理生理作用及临床意义。方法:应用免疫组织化学和Western blot法检测早期自然流产和早期正常妊娠者绒毛及蜕膜组织中HDAC1蛋白的表达。结果:免疫组化示:HDAC1主要定位于绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和子宫蜕膜细胞、腺上皮细胞的胞核;早期自然流产绒毛组织中HDAC1的表达强度低于早期正常妊娠组,而蜕膜组织中,早期自然流产组织HDAC1的表达强度高于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Westernblot示:早期自然流产绒毛组织中HDAC1蛋白的相对表达量为1.38±0.63,明显低于正常妊娠组(1.92±0.82),差异有统计学意义(P<0.05);而早期自然流产蜕膜组织中HDAC1蛋白的相对表达量为1.02±0.53,明显高于正常妊娠组(0.71±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HDAC1在早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的异常表达可能在早期自然流产的发生、发展中起重要作用。     

绒毛中表皮生长因子受体和血管内皮生长因子的表达对早孕绒毛血管生成的影响及与稽留流产的关系

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达对早孕绒毛血管生成的影响及与早孕稽留流产的关系。方法应用免疫组织化学方法检测30例稽留流产(稽留流产组)及30例早孕人工流产(早孕人工流产组)绒毛EGFR、VEGF的表达及绒毛的微血管密度(MVD),并分析相关因子的相关性。结果稽留流产组绒毛的MVD(7.03±1.72)比早孕人工流产组(14.74±1.66)显著降低(P0.01)。稽留流产组绒毛的EGFR表达水平(0.42±0.14)表达比早孕人工流产组(0.49±0.07)低(P0.05),稽留流产组绒毛的VEGF表达水平(0.47±0.12)表达比早孕人工流产组(0.60±0.12)低(P0.01)。Pearson相关分析显示在早孕人工流产绒毛及稽留流产绒毛中EGFR与VEGF的表达呈正相关,EGFR的表达与MVD呈正相关,VEGF表达与MVD呈正相关。结论绒毛组织中EGFR和VEGF的表达与绒毛血管生成状况密切相关,EGFR和VEGF低表达参与了稽留流产的绒毛血管的形成障碍。     

半乳糖凝集素-3在早期绒毛和蜕膜中的表达

目的:了解半乳糖凝集素-3(galectin-3)在早孕期绒毛与蜕膜中的表达,为进一步探讨稽留流产发病机制提供理论依据。方法:分别获取手术流产组(n=20)、药物流产组(n=20)及稽留流产组(n=20)患者的流产绒毛及蜕膜,用免疫组织化学法及实时荧光相对定量PCR法检测各组绒毛及蜕膜组织中半乳糖凝集素-3的表达。结果:免疫组织化学显示稽留流产组绒毛半乳糖凝集素-3强阳性表达率(30.00%)明显低于手术流产组(80.00%)(P<0.01)。RT-PCR结果进一步证实稽留流产组绒毛半乳糖凝集素-3 mRNA的相对表达量(2-△△Ct=0.31±0.70)明显低于手术流产组(2-△△Ct=1.00±0.00)(P<0.01),药物流产组蜕膜半乳糖凝集素-3 mRNA的相对表达量(2-△△Ct=0.74±2.20)明显低于手术流产组(2-△△Ct=1.00±0.00)(P<0.01)。结论:半乳糖凝集素-3与妊娠早期绒毛及蜕膜发育有关,其表达降低可能促进了稽留流产的发生。     

早孕绒毛滋养层细胞胰岛素生长因子-II mRNA表达与胚胎发育的关系

目的 :探讨早孕绒毛组织中IGF IImRNA表达水平的变化与胎盘、胚胎早期发育的关系。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测 2 0例正常早孕妇女 (正常对照组 )、15例自然流产妇女 (自然流产组 )及 2 0例药物流产妇女 (药物流产组 )绒毛组织中IGF IImRNA的表达 ,同时用PAS染色法分别观测其绒毛组织中糖原储存水平的变化 ,并进行半定量分析和相关性分析。结果 :(1)IGF IImRNA在自然流产组、药物流产组绒毛组织中的表达水平分别为 1.19± 0 .6 7、1.4 2± 0 .6 4,明显低于正常早孕组的 2 .2 2± 0 .95 ,差异均具有显著性 (P <0 .0 5 ) ,药物流产组与自然流产组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;(2 ) 3组绒毛组织中糖原灰度值分别为 10 6 .0 4± 12 .6 0、82 .85± 2 2 .79、85 .94± 16 .15 ,自然流产组、药物流产组与正常对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;(3)绒毛组织中IGF IImRNA的表达强度与其糖原储存水平呈正相关 (P <0 .0 5 )。结论 :推测早孕绒毛组织IGF IImR NA的适量表达与胎盘、胚胎发育有关 ,IGF对胎盘糖原合成的调节可能是其重要作用机制之一。     

TNF-α在IVF-ET后自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在胚胎早期发育过程中的作用及其与流产的关系.方法应用免疫组织化学标记法(SP法),比较IVF-ET后自然流产(10例,A组)、复发性流产(20例,B组)、人工流产(20例,C组)3组患者早孕绒毛、蜕膜组织中TNF-α的表达情况.结果TNF-α在3组绒毛及蜕膜组织中均有表达,A、B组蜕膜及绒毛组织中表达的平均光密度与C组相比差异有非常显著性(P＜0.01).结论TNF-α调节生殖免疫过程,参与了母-胎间相互作用,TNF-α表达异常,在自然流产发病中起重要作用,是导致自然流产的原因之一.     

子宫内膜蜕膜化过程中miR-203的表达及其意义

目的:了解子宫内膜和蜕膜组织中mi R-203的表达,探讨其在子宫内膜蜕膜化中的意义。方法:选取分泌期子宫内膜组织14例(分泌期组),正常妊娠早期蜕膜组织16例(早孕组),自然流产蜕膜组织18例(流产组),利用定量聚合酶链反应(q PCR)技术检测3组mi R-203的表达量以及候选靶基因胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)的m RNA表达量。结果:分泌期组mi R-203的表达量高于早孕组和流产组,差异有统计学意义(P<0.05)。IGF2R在早孕组表达量最高,在流产组表达量最低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:mi R-203的表达变化可能参与子宫内膜蜕膜化,IGF2R的差异表达对蜕膜化以及早期妊娠的评估可能有一定的指导意义。     

转化生长因子β1及其受体与体外受精-胚胎移植后流产关系的研究

目的　了解转化生长因子β1(TGF- β1)及其受体(TβR)在绒毛及蜕膜组织中的表达,初步探讨TGF- β1与体外受精胚胎移植(IVF- ET)后流产及自然流产的关系。方法　应用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶(SP)连接法,检测10例IVF -ET后流产患者(IVF- ET组)和20例早期自然流产患者(自然流产组)的绒毛及蜕膜组织中的TGF -β1及TβR(Ⅰ、Ⅱ型)表达情况,其表达水平以阳性染色部位的吸光度(A)值表示,并与20例人工流产者(对照组)进行比较。结果　TGF- β1及TβR在早孕绒毛滋养细胞、蜕膜组织腺体及间质细胞中均有阳性染色, 3组表达部位相同。TGF β1在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平(A值,中位数,下同)分别为0 167、0 .199,自然流产组为0 .198、0 .201,对照组为0 .277、0 .274;TβR Ⅰ在IVF- ET组蜕膜及绒毛组织中表达水平为0 144、0 150,自然流产组为0 .202、0. 201,对照组为0 .238、0 .281;TβR Ⅱ在IVF ET组蜕膜及绒毛组织中的表达水平为0 .199、0 .145,自然流产组为0. 153、0 .156,对照组为0 .300、0 .301。上述指标,IVF -ET、自然流产组分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0. 01)。结论　TGF -β1及TβR在IVF- ET后流产及自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达下降,在IVF- ET后流产发病中起重要作用,     

早期自然流产患者绒毛Notch受体mRNA和蛋白表达及与妊娠关系的初步探讨

目的:初步探讨早期自然流产患者绒毛Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4)mRNA及蛋白表达及对滋养细胞的调控作用。方法:用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和免疫印迹法检测6例自然难免流产患者和12例正常早期妊娠妇女绒毛Notch1、Notch2、Notch3、Notch4的mRNA和蛋白的表达水平。结果:(1)自然流产组绒毛Notch1和Notch3 mRNA表达水平高于正常早期妊娠组(P<0.05);(2)Western-blot检测显示早期自然流产患者绒毛中Notch1、Notch2、Notch3受体蛋白的表达水平高于正常早期妊娠组(P<0.05)。结论:Notch受体蛋白在早期自然流产患者绒毛中表达上调,可能与自然流产的发病原因有关。     

米非司酮对人早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白和绒毛膜促性腺激素-β表达的影响

目的:探讨米非司酮对早孕绒毛及蜕膜中骨桥蛋白(OPN)和绒毛膜促性腺激素-β(β-hCG)表达的影响。方法:采用免疫组化半定量法检测米非司酮药物流产(n=20)和人工流产(n=20)的早孕绒毛及蜕膜中的OPN(骨桥蛋白)和β-hCG的表达。结果:OPN和β-hCG在早孕妇女绒毛组织和蜕膜组织中的表达米非司酮组均显著低于手术流产组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:米非司酮可能抑制了早孕绒毛及蜕膜中OPN和β-hCG的合成,进而影响胚泡着床和胎盘的形成,使妊娠难以维持,最终流产。     

白血病抑制因子在正常早孕、先兆流产及难免流产患者绒毛组织中的表达

目的测定白血病抑制因子(LIF)在正常早孕、先兆流产及难免流产患者绒毛组织中表达的差异,探讨LIF在先兆流产及难免流产发病中的作用。方法采用放射免疫法检测正常早孕妇女(正常早孕组,30例)、先兆流产患者(先兆流产组,30例)及难免流产患者(难免流产组,30例)血清孕酮及人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平;采用免疫组化技术———链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接(SP)法对LIF在3组妇女绒毛组织中的表达进行组织学定位和半定量分析;采用蛋白印迹法对3组妇女绒毛组织中LIF的相对表达量进行测定。结果(1)血清孕酮及hCG水平在正常早孕组、先兆流产组及难免流产组分别为(95±26)、(90±26)、(36±17)nmol/L及(75±14)、(68±13)、(13±3)kU/L。正常早孕组与先兆流产组血清孕酮及hCG水平分别比较,差异均无统计学意义(P>0·05);而难免流产组与其他两组妇女血清孕酮及hCG水平分别比较,差异均有统计学意义(P<0·01)。(2)3组妇女绒毛组织中LIF均呈现阳性表达,阳性染色主要位于滋养细胞胞质中,胞核无明显着色。(3)正常早孕组、先兆流产组及难免流产组LIF相对表达量分别为1·17±0·13、1·06±0·10、0·30±0·02,难免流产组与其他两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0·01),而正常早孕组与先兆流产组比较,差异无统计学意义(P>0·05)。结论LIF对妊娠的正常维持有一定的保护作用,LIF在早孕绒毛组织中的低表达,可能与hCG及孕酮水平下降有关,是导致难免流产的原因之一。     

天冬氨酰-β-羟化酶、缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子在稽留流产绒毛中的表达及意义

目的探讨天冬氨酰-β-羟化酶(AAH)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)在正常早孕及稽留流产绒毛组织中的表达及意义。方法选取正常早期妊娠孕妇80例(对照组)、稽留流产孕妇120例(研究组),并按照胚胎在宫内停育时间将120例稽留流产组分为2周组和≥2周组。分别用免疫组化法检测两组绒毛组织中AAH、HIF-1a、VEGF的表达。结果研究组AAH、HIF-1α和VEGF的阳性表达率分别为90.8%、87.5%和72.5%,对照组均阳性表达(P0.05)。在2周组AAH、HIF-1α和VEGF中阳性表达率分别为89.6%、85.4%和72.9%,≥2周组分别为91.7%、97.2%和72.2%,两组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 AAH、HIF-1a、VEGF在稽留流产患者绒毛中表达明显低于正常早孕绒毛中的表达,其低表达可能是导致稽留流产的发生的重要因素。     

白血病抑制因子在早期妊娠、先兆流产及难免流产患者蜕膜组织中表达的研究

目的探讨白血病抑制因子(LIF)在蜕膜组织中的表达,及其与早期妊娠、流产的关系. 方法采用放射免疫方法检测正常早孕妇女(正常早孕组)、先兆流产妇女(先兆流产组)及难免流产妇女(难免流产组)的血清孕酮及人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术对3组孕妇蜕膜组织中LIF-mRNA的表达进行定量分析.结果 (1)孕酮及hCG水平在3组孕妇间的比较正常早孕组孕妇血清中孕酮、hCG水平分别为(91.5±27.2) nmol/L、(69.9±14.9) kU/L,先兆流产组孕妇分别为(88.4±24.7) nmol/L、(57.6±11.2) kU/L,两组孕妇血清孕酮、hCG水平比较,差异均无显著性(P>0.05);而难免流产组孕妇血清孕酮、hCG水平分别为(33.1±19.6) nmol/L、(10.3±3.2) kU/L,与前两组分别两两比较,差异均有极显著性(P<0.01).(2)LIF-mRNA平均相对含量在3组孕妇间的比较正常早孕组孕妇为2.10±0.32;先兆流产组孕妇为1.92±0.20;难免流产组孕妇为0.70±0.06.正常早孕组与先兆流产组比较,差异无显著性(P>0.05).而难免流产组与前两组分别行两两比较,差异均有显著性(P<0.05).结论 LIF-mRNA在早期妊娠蜕膜组织中的表达量降低,可能是导致hCG及孕酮分泌下降,最终造成难免流产的原因之一.     

蛋白酶体亚基LMP 2在稽留流产的蜕膜和绒毛组织中的表达

目的探讨蛋白酶体亚基LMP-2在稽留流产中的作用。方法 用免疫组化方法研究LMP-2在201例稽留流产中的48例绒毛和45例脱膜与114例正常早孕人工流产中的56例绒毛和58例蜕膜中的表达。结果LMP-2在稽留流产的绒毛和蜕膜中的表达均低于正常早孕人工流产的绒毛和蜕膜,二者间的表达强度差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 LMP-2在稽留流产中绒毛与蜕膜的表达减弱提示泛素-蛋白酶体通路介导的细胞蛋白降解参与调控滋养层细胞的生长过程。     

正常及复发性流产绒毛组织中血管生成相关基因的表达

目的:探讨正常早孕及不明原因早期复发性流产(RSA)绒毛组织中血管生成调节因子VEGF、Flk1、HIF-1α和vasohibin的表达与RSA的关系。方法:采用免疫组化方法检测38例不明原因早期RSA绒毛组织和20例因非意愿妊娠行人工流产的健康者正常妊娠绒毛组织中VEGF、Flk1、HIF-1α和vasohibin的表达。结果:与正常组相比,RSA组VEGF和Flk1表达明显降低(P<0.05),vasohibin表达明显增高(P<0.05),HIF-1α的表达无明显变化(P>0.05)。结论:RSA的发生可能与血管生成调节因子表达异常导致的绒毛蜕膜组织中血管重铸障碍有关。     

肝素结合性表皮生长因子在早孕绒毛及蜕膜组织中的表达

目的　探讨肝素结合性表皮生长因子 (HB- EGF)在早孕绒毛及蜕膜组织中的表达 ;评估 HB- EGF在人类胚泡着床和早期胎盘组织发育中的作用。　方法　采用免疫组化法检测 18例早孕绒毛及蜕膜组织中的 HB- EGF的表达及定位。　结果　全部早孕绒毛及蜕膜组织标本均有 HB-EGF表达 ,早孕绒毛滋养细胞表达高于蜕膜组织 ,HB- EGF阳性产物定位于早孕绒毛及蜕膜组织中的细胞膜上和细胞浆内 ,呈棕黄色。　结论　人类早孕绒毛及蜕膜组织表达 HB- EGF可能与胚泡着床、胎盘形成和维持胎盘功能有关。     

凝集素受体WGA、RCA和ECL在米非司酮流产绒毛及蜕膜组织中表达的研究

目的:通过麦胚凝集素(WGA)受体、蓖麻凝集素(RCA)受体和鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)受体在米非司酮流产的绒毛及蜕膜组织中的表达,探讨米非司酮的抗早孕机理。方法:以生物素标记的凝集素WGA、RCA和ECL为探针,应用亲和组织化学染色法检测3种凝集素受体在米非司酮流产组(实验组)和人工流产组(对照组)早孕绒毛及蜕膜组织上皮细胞及其间充质细胞的分布。结果:实验组WGA受体、RCA受体和ECL受体在蜕膜组织上皮细胞的表达比对照组均显著降低(P0.01)。实验组ECL受体在绒毛上皮的表达显著低于对照组(P0.01),实验组WGA和RCA受体在绒毛上皮细胞的表达与对照组无显著差异(P0.05)。实验组3种凝集素受体在绒毛及蜕膜的间充质细胞的表达,与对照组无显著差异(P0.05)。结论:米非司酮可能通过下调蜕膜上皮组织中WGA受体、RCA受体和ECL受体的表达,阻碍胚胎发育而导致流产。