USP22的作用机制及其与肿瘤关系的研究现状

泛素化特异性蛋白酶22 (USP22)是一种去泛素化酶,其通过去除蛋白底物的泛素连接,影响c-Myc、Bmi-1、FBP-1等靶基因的表达,从而调控细胞周期进展、细胞生长分化等一系列生物学行为,可能导致肿瘤的发生.目前已发现USP22在甲状腺癌、喉癌、口腔鳞癌等多种肿瘤组织细胞中高表达,且与恶性肿瘤的分期、预后密切相关,是近年来被广泛研究的肿瘤标记物,对USP22生理作用机制的探讨已成为目前肿瘤学方面的研究热点.USP22可能作为抗肿瘤治疗新的作用靶点,但相关药物仍需进一步研究.     

去泛素化酶USP35在癌症中的研究进展

USP家族是去泛素化酶中数量最多的家族,泛素特异性蛋白酶35(ubiquitin specific peptidase35,USP35)是USP家族成员。近年来的研究显示,USP35在癌症进展中发挥了关键作用,在肺癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、皮肤黑色素瘤、结直肠癌、肾透明细胞癌等多种癌组织中有表达。本文就USP35作用机制、结构、以及近年来在癌症中的研究进展进行综述。     

USP7蛋白与肿瘤的关系的研究进展

泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin-specific protease 7,USP7),也称为疱疹病毒属伴随的泛素特异性的蛋白酶(herpesvirus-associated ubiquitin specific protease,HAUSP),是泛素特异性修饰酶家族(ubiquitin specific processing enzymes,UBPs)的成员之一。USP7蛋白作为一个去泛素化蛋白酶,对卷入细胞周期、癌基因和抑癌基因等相关蛋白具有重要的调控作用。所以,USP7是一个极具前景的抗癌靶点。本文拟就USP7蛋白与肿瘤的关系的研究进展进行综述。     

USP9X与前列腺癌的研究新进展

泛素特异性肽酶9X(USP9X)作为去泛素化酶家族的亚家族泛素特异性蛋白酶(USPs)的成员之一,是一种去泛素化蛋白酶,泛素-蛋白酶体途径参与人体内许多细胞生命活动。最近多项研究表明其已成为肿瘤细胞生长和自我更新的潜在驱动因素,类似于激酶信号传导途径中的磷酸酶,甚至一些报道将USP9X描述为致癌基因。USP9X在多种类型的恶性肿瘤中表达异常,在前列腺癌中USP9X可以去泛素化及稳定前列腺癌细胞中ERG蛋白水平,防止其蛋白酶体降解,从而控制前列腺癌的发展。     

USP10与常见癌症的诊治及预后关系研究现况

泛素特异性蛋白酶10(USP10)是去泛素化酶(DUB)家族中的重要成员之一,该酶主要通过泛素依赖的蛋白分解代谢、泛素周期等途径调控细胞增殖、凋亡,DNA损伤修复,炎症反应等过程。另外,USP10在多种癌症发生发展中的重要作用越来越受关注。现就USP10与常见癌症的诊治与预后的研究现状进行综述,以期发现与USP10相关的某些关键的分子机制,为癌症诊断与治疗提供参考。     

USP7在HBV相关肝癌中高表达并提示患者不良预后

目的去泛素化酶(USP)通过去除底物的泛素部分,调节蛋白质活性和细胞的稳态。泛素化特异性蛋白酶7(USP7)是去泛素化蛋白酶家族中的一员,与多种肿瘤的发生发展密切相关。目前研究发现USP7在多种肿瘤组织中呈现高表达,且其高表达与患者临床病理特征及不良预后密切相关。然而USP7在HBV相关肝癌中的作用目前尚未报道。我们旨在探究USP7在HBV相关肝癌中的表达水平及预测价值。方法我们通过免疫组织化学的方法对65例HBV相关肝癌瘤体的石蜡切片中的USP7蛋白进行检测,t检验分析USP7在癌及癌旁中表达,χ~2检验评估USP7表达与临床病理参数间的相关性,Kaplan-Meier法评估生存期。结果研究表明,USP7蛋白在HBV相关肝癌患者组织中高表达,且与患者肿瘤大小、数量及不良预后正相关。结论我们认为USP7可能是HBV相关肝癌患者生存预后的预测因子,或许能成为HBV相关肝癌疾病诊断和治疗的新靶点。     

USP15生物学功能的研究进展

去泛素化酶(DUBs)是体内分解蛋白泛素链的一类蛋白酶体系,对蛋白泛素化降解过程起校正作用。泛素特异性蛋白酶(USP)家族是DUBs中最大的家族,通过多种途径参与免疫应答,且与一些疾病和肿瘤的发生具有明显相关性。USP15是USP家族的重要组成部分,参与调节转化生长因子β、p53、核因子κB等重要的信号转导通路,与一些肿瘤的发生发展相关。USP15也可通过调节I型干扰素产生和T细胞活化参与免疫反应,并具有多种重要生物学功能,包括维持基因稳定性、调节转录因子及抗病毒等重要的细胞活动。     

泛素特异性蛋白酶USP48在乳腺癌中表达的初步研究

目的 泛素特异性蛋白酶48(Ubiquitin-Specific Protease 48,USP48)是泛素特异性蛋白酶(USP)家族的成员,在特定癌症类型中下调。然而,USP48在乳腺癌患者中的表达模式和临床病理意义尚不清楚。本研究目的是初步探讨USP48在乳腺癌中的表达情况。方法 挖掘 oncomine 数据库,提取 USP48 在乳腺癌与正常组织转录水平表达情况;采用实时定量 PCR、Western blot 检测10 例分子分型为 Luminal A型的乳腺癌及正常乳腺癌旁组织中USP48 mRNA及蛋白水平加以验证。结果 Oncomine 数据库预测USP48 mRNA在侵袭性乳腺癌中表达水平降低;新鲜乳腺癌标本中,USP48 mRNA和蛋白水平明显低于相对应的癌旁正常乳腺组织。结论 初步研究显示,USP48 mRNA和蛋白水平在乳腺癌中下调,USP48可能在乳腺癌中发挥抑癌基因发挥作用,为探索USP48在乳腺中的致病机制研究和生物学作用奠定初步研究基础。     

泛素特异性蛋白酶4对透明细胞肾细胞癌细胞增殖能力的影响

目的探讨人类泛素特异性蛋白酶4（USP4）对透明细胞肾细胞癌（KIRC）细胞增殖能力的影响。方法从TCGA数据库及GEO数据库中下载KIRC患者的基因表达及临床信息资料，进行转化及整理；同时利用Ualcan、HPA数据库等在线工具对数据库中的KIRC患者进行进一步分析，研究USP4表达与KIRC患者临床病理特征(包括TNM分期和病理分级)以及生存预后的关系。在KIRC细胞株Caki-1、OSRC-2中转染USP4干扰和过表达质粒，通过平板克隆、细胞计数试剂盒8实验检测USP4对KIRC细胞增殖能力的影响。结果生物信息学分析显示，USP4在KIRC组织中的mRNA及蛋白表达水平均明显低于癌旁正常肾脏组织（均P＜0.05）。KIRC组织中USP4mRNA表达水平与患者肿瘤T分期、病理分期、组织学分级、总生存率、疾病特异性生存率、无进展生存率均有关（均P＜0.05）；与性别、年龄、N分期、M分期均无关（均P＞0.05）。细胞实验结果显示，USP4蛋白在Caki-1、OSRC-2细胞中显著过表达，而过表达USP4会明显降低Caki-1、OSRC-2细胞增殖能力和克隆形成能力（均P＜0.05）；敲低USP4会明显提高Caki-1细胞克隆形成能力（均P＜0.05）。结论USP4在KIRC组织中低表达，而过表达USP4可抑制KIRC细胞增殖能力。     

泛素特异性蛋白酶25在肿瘤和免疫应答中作用的研究进展

泛素特异性蛋白酶25(USP25)属于去泛素化酶家族成员,其通过解离泛素链分子维持细胞泛素的动态平衡,从而反向调节蛋白质泛素化的降解。越来越多的研究表明USP25在肿瘤和免疫中发挥着重要作用,本文就USP25在肿瘤和机体的免疫应答中的作用及机制的研究进展作一综述,以期为临床医师提供参考。     

泛素特异性蛋白酶2a的原核表达纯化及酶活性分析

目的 为了探讨泛素特异性蛋白酶2a(USP2a)在肿瘤发生发展中的催化机制,构建USP2a C末端催化结构域原核表达质粒pET28a-USP2a-C,分析USP2a C末端催化结构域的活性情况.方法 利用荧光检测方法测定USP2a-C的酶促动力常数,并采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/ MS)分析USP2a的肽酶和异肽酶活性.结果 结果表明获得了可溶性表达的USP2a-C融合蛋白,酶促动力学分析 USP2a-C 水解底物 Ub-AMC 的催化效率 Kcat/Km =2. 53 × 105 mol/(L · s);LC-MS/MS分析结果表明USP2a-C能有效分解 Di-Ub和Ub-V77两种不同性质的底物,并且两者之间的催化活性差异无统计学意义.结论 获得了可溶性表达的 USP2a-C蛋白,并且分析证明其具有完整的去泛素化酶的活性.     

去泛素化酶X染色体连锁的泛素特异肽酶9的研究进展

X染色体连锁的泛素特异肽酶9(ubiquitin-specifitin peptidase 9 x-Linked,USP9X)是去泛素化酶中的一种。泛素化与去泛素化是重要的蛋白质翻译后修饰,去泛素化酶能从特异性底物上移除泛素异肽酶类从而逆转泛素化进程。USP9X在许多生物进程(包括胚胎发育、细胞黏着与极化、凋亡、转录调控等)中都有着重要的作用。迄今为止,已发现USP9X在多种类型的恶性肿瘤中都存在着表达异常,而且与肿瘤的分期及预后相关,甚至还可能参与了肿瘤化疗的耐药,是近年来研究的热点。因此,针对USP9X的靶点治疗将会为难治性肿瘤开辟出一条新的路径,对其更进一步研究有着深远意义。     

氯喹通过上调泛素-蛋白酶体相关分子表达抑制LPS活化巨噬细胞的实验研究

目的 观察氯喹(chloroquine,CQ)对脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)刺激的巨噬细胞中泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)相关分子A20、TRIM33和USP28表达的影响.方法 应用LPS刺激小鼠Raw264.7细胞,荧光定量PCR检测酸化抑制剂CQ对LPS诱导锌指蛋白A20、泛素连接酶TRIM33和泛素特异性蛋白酶USP28的mRNA表达,Western blot检测CQ对LPS诱导A20和TRIM33的蛋白表达.应用siRNA转染技术沉默A20,荧光定量PCR检测CQ对LPS诱导炎性细胞因子TNF的mRNA表达.结果 与LPS对照组比较,经CQ预处理的Raw264.7细胞中,A20、TRIM33、USP28的mRNA表达均显著上调[(3.197 ±0.013) vs (1.292 ±0.009),(1.627±0.113)vs(0.797±0.083),(1.387±0.144)vs(0.742±0.061),P＜0.05],A20和TRIM33的蛋白表达也同样上调.采用siRNA干扰A20基因表达,则CQ预处理组细胞中LPS诱导的TNF-α mRNA表达显著上调[(7.650 ±0.113) vs (4.145±0.120),P＜0.01].结论 CQ可显著上调LPS活化的巨噬细胞中泛素化相关分子A20、TRIM33和USP28的表达,而干扰A20基因表达可显著上调LPS活化Raw264.7细胞中TNF-α的mRNA表达,提示泛素-蛋白酶体系统及其相关分子参与CQ抑制LPS-TLR4信号通路的活化.     

泛素特异性蛋白酶18在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性的影响研究

目的 检测泛素特异性蛋白酶18（USP18）在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性（细胞增殖、细胞克隆、细胞周期、细胞凋亡）的影响。方法 2013年7月—2014年7月选取5种肝癌细胞株（Hep G2、Hep G2.2.15、Hep 3B、Huh-7、SMMC-7721）,采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）和Western blotting法分别检测USP18 mRNA和USP18表达水平,选择表达活性最强的细胞株进行小干扰RNA（siRNA）转染。利用LipofectamineTM 2000法将USP18 siRNA转染肝癌细胞,分为正常组、阴性对照组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组。采用RT-PCR和Western blotting法检测干扰效率,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,平板克隆形成实验检测克隆形成率,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 5种肝癌细胞株中USP18 mRNA和USP18表达水平比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,其中Hep 3B肝癌细胞株中USP18 mRNA和USP18表达水平高于其他4种肝癌细胞株（P＜0.05）,故选取Hep 3B肝癌细胞株进行后续实验。Hep 3B肝癌细胞株转染USP18 siRNA后48 h,转染效率达（91.00±5.67）%。5组干扰效率比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;其中siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组干扰效率高于正常组和阴性对照组（P＜0.05）。转染后1、2、3 d,siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组吸光度低于正常组和阴性对照组（P＜0.05）。siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组克隆形成率低于正常组和阴性对照组,细胞凋亡率高于正常组和阴性对照组（P＜0.05）。5组细胞周期分布比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。正常组与阴性对照组吸光度、克隆形成率、细胞周期分布、细胞凋亡率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 USP18在Hep 3B肝癌细胞株中的表达较高,USP18基因敲减可以抑制肝癌细胞增殖、减少细胞克隆、阻滞细胞周期进程,增加细胞凋亡。     

泛素特异性蛋白酶在消化系统肿瘤中的研究进展

泛素特异性蛋白酶(ubiquitin specific proteases,USPs)是一类通过切割泛素前体、对底物蛋白去泛素化,从而调节细胞内诸多生理和病理过程的重要酶类家族.研究结果显示,USPs在癌症发展中起到重要作用,本文综述了近年来USP s在消化系统肿瘤中的研究成果,包括食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌...     

USP37稳定SREBP1a促进胆固醇摄取和脂质沉积

目的 筛选影响胆固醇调节元件结合蛋白1a(cholesterol regulatory element binding protein, SREBP1a)蛋白稳定性的去泛素化酶,并探索其调控机制。方法 通过去泛素化酶库筛选显著影响SREBP1a表达的去泛素化酶,免疫蛋白印记实验和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)评估去泛素化酶对SREBP1a以及升脂基因表达的影响;通过红色荧光蛋白标记人源低密度脂蛋白(human Dil-low density lipoprotein, Human Dil-LDL)摄取和油红O染色等实验技术检测细胞摄取低密度脂蛋白(LDL)和脂质沉积情况。结果 去泛素化酶库筛选发现泛素特异肽酶37(ubiquitin specific peptidase 37,USP37)可显著增加肝细胞SREBP1a蛋白表达水平,促进胆固醇摄取及脂质沉积。USP37基因敲除可显著降低SREBP1a蛋白表达水平,抑制升脂基因表达及脂质沉积。结论 去泛素化酶USP37通过稳定SREBP1a蛋白表达,促进胆固醇摄取及脂质沉积,揭示了SREBP1a翻译后调控的新模式。     

USP14调控OSBPL2蛋白去泛素化作用的实验研究

目的：研究泛素特异性蛋白酶14（ubiquitin?specific peptidase 14,USP14）通过调控氧化固醇结合样蛋白2（oxysterol binding protein?like 2,OSBPL2）的泛素化水平稳定OSBPL2表达的分子机制。方法：以HeLa细胞为工具细胞,通过对USP14过表达、敲降以及活性抑制,检测OSBPL2的表达水平;采用体外过表达实验考察USP14对OSBPL2的泛素信号和泛素化水平的调控;采用免疫共沉淀（co?immunoprecipitation,Co?IP）阐明USP14与OSBPL2相互作用的具体结构域、不同结构域在蛋白相互作用中的作用以及OSBPL2的关键泛素化位点。结果：USP14与OSBPL2存在相互作用关系并稳定OSBPL2的表达而不改变其转录水平;体外过表达和Co?IP实验结果表明,USP14催化（catalytic,CAT）结构域与OSBPL2氧固醇结合蛋白相关结构域（OSBP?related domain,ORD）的相互作用降低OSBPL2的泛素化水平;类泛素（ubiquitin?like,UBL）结构域在USP14与OSBPL2相互作用中起到了促进作用;Lys209和Lys361是OSBPL2泛素化和去泛素化的关键位点。结论：USP14通过调控OSBPL2蛋白Lys209和Lys361两个位点的泛素化进而调控其泛素化水平,稳定OSBPL2蛋白的表达。     

去泛素化酶USP10RNAi慢病毒载体的构建及其对PC12细胞增殖的影响

目的:构建大鼠去泛素化酶USP10 siRNA重组慢病毒载体,为探讨USP10对神经元的调控作用提供体外模型。方法:设计并合成3对特异性大鼠USP10基因的RNAi靶序列,聚合酶链反应(PCR)扩增后,用AgeⅠ及EcoRⅠ双酶切及连接酶构建线性化的GV208慢病毒载体;转化感受态细胞,经Amp抗性筛选阳性克隆,PCR鉴定阳性克隆载体并测序;病毒包装并转染至293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,荧光法检测滴度。用重组慢病毒感染PC12细胞,Western Blot检测USP10蛋白的表达,CCK-8法检测PC12细胞增殖。结果:经测序鉴定成功构建了3对USP10 RNAi慢病毒载体,感染PC12细胞后,USP10蛋白的表达显著被抑制,PC12细胞的增殖能力明显减弱。结论:成功构建能高效、稳定抑制USP10表达的PC12细胞株,并明显抑制PC12细胞增殖能力,为探讨USP10对神经元的调控作用提供基础。     

siRNA干扰USP7表达对喉癌细胞生物学特性的影响

目的：通过小干扰RNAs（siRNA）干扰泛素特异性蛋白酶7（USP7）在喉癌细胞中的表达,来探讨 USP7对喉癌细胞生物学特性的影响。方法自行设计并使用高效siRNA在喉癌HEP2细胞株特异性干扰USP7表达,然后利用CCK‐8法、Tr‐answell小室迁移实验和流式细胞术观察USP7干扰后对喉癌细胞增殖、迁移能力和凋亡的影响。结果自行设计的siRNA可高效抑制喉癌 HEP2细胞USP7 mRNA及蛋白表达,显著抑制喉癌细胞的增殖、迁移能力,促进喉癌细胞的凋亡。结论 siRNA‐USP7可以显著抑制喉癌细胞增殖和迁移能力,并促进凋亡,提示USP7可能是晚期喉癌治疗的一个重要靶标。     

泛素特异性蛋白酶7的表达与男性不育的相关性

目的 探讨弱精子症(asthenozoospermia)和少弱精子症(oligoasthenozoospermia)患者精子中泛素特异性蛋白酶7(ubiquitin specific peptidase 7,USP7)的表达及其与男性不育的相关性.方法 随机选取就诊于重庆医科大学附属第二医院妇产科生殖医学中心的不育症患者120例,根据2010年世界卫生组织标准进行精液参数常规分析,包括精子浓度和运动能力,分为弱精子症组(A组)37例、少弱精子症组(OA组)26例和正常精子(normozoospcrmia)组(N组)57例.采用免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测USP7在人精子中的定位与表达变化,并进行相关性分析.结果 USP7定位于精子尾部中段和主段,与N组(1.63±0.76)相比,在A组(0.86±0.53)或OA组(0.62±0.43)精子中USP7蛋白的表达下降(P＜0.01).经相关分析,USP7蛋白水平与精子浓度(r=0.455 0,P=0.005 3)、前向运动精子百分率(r=0.431 2,P=0.008 7)和总活动率(r=0.443 8,P=0.006 7)呈正相关.结论 USP7表达下降与人精子活力和浓度降低有关,其可作为评估男性生育力的指标之一.