杏仁蛋白酶解工艺以及抗氧化活性研究

以提取精油后的杏仁渣为原料,烘干挥发尽有机溶剂后,制备匀浆液.使用722型分光光度计检测吸光度,对4种蛋白酶作用后的酶解液进行清除羟自由基(·OH)能力研究.结果表明:脱脂杏仁匀浆液经酶解后,清除羟自由基能力显著提高;不同蛋白酶的酶解液对羟自由基清除率不同,其中碱性蛋白酶酶解液清除能力最强.通过单因素试验与正交优化试验确定酶解液具有最佳抗氧化性的酶解条件.极差分析结果显示,影响杏仁水解液抗氧化性的酶解工艺条件的主次顺序依次为温度、底物浓度、酶添加量、初始pH值.方差分析结果表明在试验设计范围内,温度、pH值、酶添加量以及底物浓度4种因素对于羟自由基(·OH)清除率影响差异均极显著.杏仁蛋白水解液具有最高抗氧化活性的酶解工艺条件为,底物浓度2.5%,碱性蛋白酶用量20000 U/g以蛋白质计,酶解温度70℃,pH=9,作用时间0.5 h.验证试验显示在该条件下羟自由基清除率可达63%.     

糯米酶解工艺以及抗氧化活性研究

使用4种蛋白酶水解白糯米,以羟自由基清除率作为指标,选取中性蛋白酶作为水解用酶。考察了蛋白质底物浓度、酶添加量、酶解温度、初始pH 4种因素对于中性蛋白酶糯米酶解液羟自由基捕获能力的影响。在单因素实验基础之上,使用L9(34)正交优化试验设计,确定酶解液具有最高抗氧化能力的酶解工艺条件。优化后的工艺参数为底物浓度2%,酶添加量24 000 U/g(以蛋白质计),酶解温度55℃,pH8,作用时间0.5 h。在该条件下羟自由基清除率平均值可达56.05%。底物浓度、酶添加量、温度以及pH 4种因素对于羟自由基(.OH)清除率差异影响均极显著。糯米酶解液中的抗氧化肽等成分在60℃～100℃的温度范围内活性保持很好。     

驼乳与牛乳乳清蛋白酶解工艺优化及其产物抗氧化能力分析

为了研究不同蛋白水解酶对驼乳和牛乳抗氧化能力的影响,向驼乳和牛乳乳清蛋白中添加不同蛋白水解酶,探究乳清蛋白抗氧化活性肽的最佳制备条件,并对其抗氧化能力进行比较分析。首先从3种蛋白酶中筛选出最佳用酶,在此基础上以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-Trinitrophenylhydrazine,DPPH)自由基的清除率为响应值,进行单因素和响应面试验,同时研究了驼乳和牛乳乳清蛋白抗氧化肽对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子的清除效果。结果表明,木瓜蛋白酶水解物的能力最强,水解度可达15%。驼乳乳清蛋白最佳酶解工艺为酶解pH6.4,酶解温度55 ℃,底物浓度2.73%,DPPH自由基清除率可达71.9%。牛乳乳清蛋白最佳酶解工艺为酶解pH6,酶解温度54 ℃,底物浓度4%,DPPH自由基清除率达69.9%。在最佳酶解条件下,驼乳乳清蛋白酶解液的·OH清除率为58.2%,O₂-·清除率为67.2%;牛乳乳清蛋白酶解液·OH清除率为52.2%,·O₂-清除率为60.7%。驼乳乳清蛋白酶解液的抗氧化性在不同程度上均高于牛乳乳清蛋白酶解液,驼乳和牛乳乳清酶解液的DPPH自由基清除能力较强,其次是O₂-·清除能力,·OH清除能力最弱。     

抗氧化活性林蛙胎卵多肽酶解酶的筛选

以东北林蛙胎卵为原料,以酶解液对DPPH自由基和羟自由基(.OH)清除率为指标,分别研究木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶和胰蛋白酶在最佳酶作用条件下酶解时间对酶解液清除DPPH自由基、.OH的影响,筛选出适合生产抗氧化活性林蛙胎卵蛋白肽的碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶,再经过复合双酶酶解林蛙胎卵实验,结果表明,以中性蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解林蛙胎卵3h得到肽液的.OH清除率与DPPH自由基清除率最高,达到80.91%和70.45%。     

鳙鱼肉酶解物清除羟自由基的研究

采用优化酶法从鳙鱼肉蛋白中制备具有清除Fenton体系产生的羟自由基(·OH)活性的抗氧化肽.应用响应面分析法以酶解液对Fenton体系产生的羟自由基(·OH)的清除率为指标优化最佳酶解工艺;酶解液相对分子质量分布采用凝胶层析法测定.复合蛋白酶是水解鳙鱼肉制备具有清除羟自由基活性酶解物的适合酶,最佳酶解条件为:温度40℃、酶解时间30 min、PH=7.0、酶加量为600 U/g底物、底物:水=1:2;活性肤相对分子质量范围为519～1088.响应面分析法是优化酶解工艺可行的方法;具有清除羟自由基活性的肽是一些寡肽.     

鸡骨酶解物的抗氧化活性研究

分别选用复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、Alcalase蛋白酶、胰酶、胰蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解鸡骨泥,研究鸡骨酶解物(蛋白质含量3 mg/mL)对DPPH、羟自由基(OH·)的清除能力及其还原性.试验结果表明:Protamex复合蛋白酶酶解鸡骨产物的DPPH清除率最强,即81.44%;复合风味蛋白酶酶解物OH·清除率达30.32%,还原性测定的吸光值为0.3.总之,鸡骨酶解物的DPPH清除能力强于羟自由基清除能力和还原力.在研究不同浓度和水解度对鸡骨酶解物清除DPPH活性的影响时发现,随着酶解物蛋白质质量浓度的增大,酶解物的DPPH清除率升高.复合风味蛋白酶、Protamex复合蛋白酶的鸡骨酶解物蛋白质质量浓度分别为4、6mg/mL时,其DPPH清除率分别达91.49%、97.3%.但DPPH清除率与水解度不呈正相关性,只有在特定水解度下,使抗氧化肽含量最高时,水解物才表现出最强的抗氧化能力.例如复合风味蛋白酶、AS.1398中性蛋白酶、Protamex复合蛋白酶、胰酶的最佳水解度分别为12.59%、23.78%、14.45%、20.04%.     

鳙鱼肉酶解工艺及其产物清除羟自由基活性的研究

以高产低值的鳙鱼肉为原料,通过测定水解度及酶解产物对Fenton体系产生的羟自由基的清除效果,从胃蛋白酶、Alcalase2.4L、木瓜蛋白酶、胰酶4种常用蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶作为酶解鳙鱼肉制备清除羟自由基活性酶解物的水解酶;以羟自由基清除率为指标,利用正交试验对酶解条件进行优化,将优化酶解条件下的酶解产物进行高效液相色谱分离,测定分子量分布。结果表明:木瓜蛋白酶在温度45℃、p H7.0、酶加量2%、底物浓度20%、时间3 h的水解条件下,酶解产物对羟自由基清除率达76.13%。木瓜蛋白酶酶解物利用高效体积排阻色谱测定其主要分子量范围是2 691~32 u。     

酶解法制备草鱼鱼鳞多肽及其清除羟自由基的研究

采用复合蛋白酶酶解草鱼鱼鳞制备多肽并研究其清除羟自由基能力,考察酶解条件对多肽清除羟自由基的影响,通过单因素试验和响应面试验优化得到清除羟自由基的多肽酶解工艺条件为：底物质量浓度为6g/100mL,酶解时间2.11h,加酶量为5.22g/100mL,酶解温度49.33℃,最高清除率为99.24%。层析分离的结果有5 个洗脱峰,第4 个峰的羟自由基清除率最高,达到98.34%。     

酶解青蛤边下脚料制备抗氧化肽的研究

为了充分利用青蛤(Cyclina sineusis Gmelin)加工过程中产生的边下脚料制备抗氧化肽,对青蛤边下脚料进行了匀浆预处理。以酶解产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶6种蛋白酶中筛选出木瓜蛋白酶作为最佳酶解用酶,通过单因素试验和正交试验确定木瓜蛋白酶酶解青蛤边下脚料制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:加酶量2 500 U/g、底物浓度7%、反应pH 7.0、反应温度50℃、反应时间3 h。在该条件下对青蛤边下脚料的水解率为31.56%,酶解产物的DPPH自由基清除率为74.62%,羟自由基清除率为59.29%,超氧阴离子自由基清除率为27.84%。     

酪蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究

采用正交试验设计,以羟自由基清除率为衡量指标,筛选三种蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件。试验结果表明,木瓜蛋白酶最佳酶解条件为pH7.5,酶浓度8%,温度45℃,反应时间90min,羟自由基清除率为71.28%,与同浓度维生素C、维生素E的清除率差异均不显著(p>0.05);枯草杆菌蛋白酶(As1.398)最佳酶解条件为pH7.0,酶浓度2%,温度50℃,反应时间90min,羟自由基清除率为68.60%;胃蛋白酶最佳酶解条件为pH1.4,酶浓度6%,温度37℃,反应时间30min,羟自由基清除率为66.53%。试验发现,不同的酪蛋白酶解物都有抗脂质过氧化作用,最大抑制率为59.28%。