杏仁蛋白酶解工艺以及抗氧化活性研究

以提取精油后的杏仁渣为原料,烘干挥发尽有机溶剂后,制备匀浆液.使用722型分光光度计检测吸光度,对4种蛋白酶作用后的酶解液进行清除羟自由基(·OH)能力研究.结果表明:脱脂杏仁匀浆液经酶解后,清除羟自由基能力显著提高;不同蛋白酶的酶解液对羟自由基清除率不同,其中碱性蛋白酶酶解液清除能力最强.通过单因素试验与正交优化试验确定酶解液具有最佳抗氧化性的酶解条件.极差分析结果显示,影响杏仁水解液抗氧化性的酶解工艺条件的主次顺序依次为温度、底物浓度、酶添加量、初始pH值.方差分析结果表明在试验设计范围内,温度、pH值、酶添加量以及底物浓度4种因素对于羟自由基(·OH)清除率影响差异均极显著.杏仁蛋白水解液具有最高抗氧化活性的酶解工艺条件为,底物浓度2.5%,碱性蛋白酶用量20000 U/g以蛋白质计,酶解温度70℃,pH=9,作用时间0.5 h.验证试验显示在该条件下羟自由基清除率可达63%.     

酶法制备花生多肽工艺条件优化的研究

采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解花生粕中的蛋白质,制取抗氧化活性较高的花生多肽,以水解度(DH)和羟自由基清除率(E)为指标,确定了最佳用酶为碱性蛋白酶。考察了底物质量分数、加酶量、时间、温度和pH值5个因素对水解度(DH)和羟自由基清除率(E)的影响,采用单因素试验和响应面分析的方法确定了花生粕酶解制备花生多肽最佳工艺参数,条件为:底物质量分数8%、加酶量8070U/g底物,pH7.7,温度55℃、时间3h,该条件下得到的花生多肽羟自由基清除率为62.15%。     

缢蛏酶解产物清除羟自由基能力的研究

研究利用水解位点较多的中性蛋白酶对缢蛏蛋白进行水解,以酶解产物(4mg/m L)对羟自由基的清除率为指标,对酶解工艺参数进行研究,通过正交试验优化酶解工艺,得出抗氧化活性最强的酶解工艺参数为:pH=7、料液比(m:V)为1:3.5、酶添加量1200 U/g、水解温度为40℃、水解时间为2h,在此参数下,羟自由基的清除率可达(76.01±0.3)%。     

鱿鱼酮体酶解液抗氧化活性研究

以秘鲁鱿鱼酮体为原料,制备稀释的匀浆液.使用721分光光度计检测吸光度,对4种蛋白酶作用后的酶解液进行清除羟自由基(·OH)能力研究.结果表明:鱿鱼匀浆经酶解后,清除羟自由基能力显著提高;不同蛋白酶的酶解液对羟自由基清除率不同,其中木瓜蛋白酶酶解液清除能力最强.通过单因素试验与正交优化试验确定酶解液具有最 佳抗氧化性的酶解条件,底物浓度为4%,木瓜蛋白酶用量为18000U/g蛋白质,酶解温度65℃,pH=8,作用时间为0.5 h的鱿鱼酮体匀浆酶解液具有最高的清除羟自由基活性.验证实验显示在该条件下羟自由基清除率可达29.92%.方差分析结果表明温度、pH值、酶添加量以及底物浓度4种因素对于羟自由基(·OH)清除率影响差异均极显著.     

Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏制备抗氧化肽

通过Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白制备抗氧化肽,以酶解液的水解度(DH)、DPPH·和羟自由基清除率为指标,比较不同酶添加量、p H值、温度、料液比以及酶解时间对酶解效果的影响,并用响应面法优化Alcalase蛋白酶酶解反应的工艺条件。结果:Alcalase蛋白酶酶解大黄鱼内脏蛋白的最优工艺条件为:酶解p H9.0、底物质量浓度8 g/100 m L、温度62℃、加酶量4.26%、酶解时间3.7 h。在此条件下,蛋白质水解度为30.66%,DPPH自由基清除率为85.97%,羟自由基清除率为75.79%。对优化的酶解液进行氨基酸成分分析表明:大黄鱼内脏多肽含有丰富的组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、酪氨酸(Tyr)、谷氨酸(Glu)、脯氨酸(Pro),具有较高的抗氧化活性。     

水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽工艺的研究

实验是以水牛奶为原料,分离纯化后得到乳清蛋白。利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶5种不同的蛋白酶对水牛奶乳清蛋白酶解以制备抗氧化活性多肽。酶筛选结果显示,中性蛋白酶是最适宜酶解水牛奶乳清蛋白制备抗氧化活性肽,其酶解液的还原能力和DPPH自由基清除率较其他4种酶高。探讨酶解反应时pH、温度、时间、酶浓度对酶解反应的水解度、酶解液的还原能力和DPPH自由基的清除率的影响,在单因素试验基础上,采用响应面法对酶解工艺进行优化。结果表明,中性蛋白酶酶解乳清蛋白的最佳工艺参数为:pH为7.4,温度为50.5℃,酶与底物浓度比为2.1%,酶解时间5.0h,此时2mg/mL酶解物的DPPH自由基清除率为32.58%。实测结果与预测值吻合效果良好。     

脱脂米糠抗氧化肽的制备工艺研究

为了得到脱脂米糠抗氧化肽的最佳制备工艺,研究了胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解脱脂米糠蛋白的进程特性以及不同的酶解条件对脱脂米糠抗氧化肽活性的影响。从5种蛋白酶中筛选出最合适的酶,通过单因素实验考察了底物浓度、加酶量、pH、温度以及时间对酶解产物水解度和ABTS自由基清除率的影响,在单因素实验的基础上,以酶解产物的ABTS自由基清除率为响应值,进行Box-Behnken中心组合实验。结果表明:选用碱性蛋白酶制备脱脂米糠抗氧化肽效果最好;最佳酶解工艺条件为加酶量1.8%、温度50℃、时间276 min、pH9.0、底物浓度5%;在最佳酶解工艺条件下,所得脱脂米糠抗氧化肽对ABTS自由基清除率可达71.85%。     

酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

本文研究了酶法水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,通过水解度与羟自由基(·OH)清除率来综合评价水解产物的抗氧化能力。以·OH清除率为指标,从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适酶。在单因素实验研究酶浓度、底物浓度与水解时间对酶解产物·OH清除率和水解度影响的基础上,通过L_9(4~3)正交实验对水解工艺进行优化。结果得出,碱性蛋白酶活力高于其他4种蛋白酶,能使蛋白质充分水解,正交实验各因素对水解产物·OH清除率的影响程度依次为底物浓度酶浓度水解时间。其中,碱性蛋白酶的最佳水解工艺条件为:底物浓度3.0%、酶浓度3500 U/g、p H9.0、温度55℃、水解时间3.5 h。在此条件下,水解产物的·OH清除率可达82.7%,水解度为23.1%。碱性蛋白酶水解滑菇蛋白制备抗氧化肽的工艺可行,为滑菇蛋白高附加值产品的开发提供技术参考。     

响应面法优化制备南瓜籽抗氧化肽的工艺

以南瓜籽分离蛋白为原料,采用酸性蛋白酶酶解制备南瓜籽抗氧化肽。选用加酶量、酶解温度、pH值、底物质量浓度、酶解时间作为研究对象,以酶解液对DPPH自由基的清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用Plackett-Burman筛选试验确定显著因素,然后通过三因素三水平的Box-Behnken响应面分析法优化制备南瓜籽抗氧化肽的酶解工艺条件。结果表明：酸性蛋白酶酶解南瓜籽蛋白质的最佳工艺条件为：酶解温度50℃、pH2.5、酶解时间5h、底物质量浓度0.05g/mL、加酶量6000U/g pro,在此条件下,DPPH自由基清除率可达到92.82%。     

响应面法优化坛紫菜抗氧化肽酶法制备工艺

以坛紫菜为原料,通过酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和纤维素酶酶解制备活性肽,以DPPH自由基清除率和多肽得率为评价指标,研究坛紫菜水解肽的抗氧化能力。结果表明:5种酶的酶解产物都具有抗氧化能力,中性蛋白酶酶解产物DPPH自由基清除率最高,选择它为最佳工具酶。通过单因素和响应面试验优化酶解工艺,得到最佳酶解工艺:酶解时间3.6 h、酶解温度47℃、酶用量16362 U/g、底物浓度3.0%、pH7.0。此条件下制备得到的水解肽具有较强抗氧化能力,DPPH自由基清除率可达(91.83±0.81)%。     

花果山“糯米茶”中黄酮化合物的分离纯化及活性研究

利用溶剂提取法对花果山"糯米茶"中的黄酮化合物进行提取,并利用硅胶柱色谱分离法对其进行分离纯化,同时通过DPPH抗氧化活性体外评价体系测定其清除自由基的能力。结果显示,"糯米茶"中的黄酮化合物具有一定的的清除DPPH自由基的能力,"糯米茶"是可开发的抗衰老、抗氧化的保健茶。     

板栗糯米清酒中氨基酸分析及其抗氧化活性

为进一步确定板栗糯米清酒的营养及保健价值,首先对酒样所含氨基酸种类及含量进行分析,然后通过与糯米清酒及不同抗氧化剂之间的比较,对板栗糯米清酒的亚油酸体系抗氧化性能、还原能力、金属螯合能力、清除DPPH自由基能力以及总酚含量等进行初步研究。结果表明,板栗糯米清酒中17种氨基酸含量均高于糯米酒中的氨基酸含量,其中天冬氨酸、苏氨酸、谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸的含量是糯米酒中的二倍以上。板栗糯米清酒具有抑制亚油酸自氧化的能力,抑制率可达到80.70%,还原能力较强,金属螯合活性较低为11.57%,DPPH自由基清除率达到38.67%,总酚含量约为187.1 μg/mL,板栗糯米清酒具有较强的抗氧化活性,优于相同工艺的糯米清酒。     

酒曲中乳酸菌的筛选及其在板栗糯米饮料发酵中的应用

为筛选出适合植物基质发酵的优良乳酸菌。本文以米曲为目标乳酸菌的供体,筛选高产酸、耐胃肠环境能力良好的乳酸菌,并评估了乳酸菌的抗氧化活性及其在板栗糯米饮料中的发酵能力。从酒曲中共分离出84株乳酸菌,其中有38株的产酸量≥10 g/L;在进一步的耐酸耐胆盐、模拟胃肠实验中,共筛出3株乳酸菌株;经16S rDNA鉴定这3株乳酸菌均为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）。菌株DH16发酵上清液的DPPH自由基、羟自由基清除率和SOD酶活力最高,分别为98.56%、42.27%和20.3 U/mL;完整细胞悬液中,菌株DH20的DPPH自由基清除率最高（22.49%）,菌株DH16的羟自由基清除率最高（22.77%）。利用3株乳酸菌作为发酵剂所得的板栗糯米饮料口感均衡、抗氧化能力较强,因此本文筛出的3株乳酸菌在植物基饮料开发方面具有良好的应用前景。     

大米蛋白的木瓜酶酶解及其水解物的抗氧化活性

以大米蛋白为原料,研究其酶解工艺及其水解物的抗氧化活性.选取底物浓度、加酶量、酶解pH、酶解温度为考察因素,进行了酶解工艺的单因素及正交试验.试验结果表明,底物浓度([S])10%,加酶量([E] /[S])5%,酶解pH 6.0,酶解温度60℃,酶解时间90 min为最佳酶解参数,在此条件下大米蛋白水解物的固形物含量为25.6mg/mL,对DPPH自由基清除率为54.5%.抗氧化试验显示,大米蛋白水解物具有一定的清除DPPH自由基和羟自由基能力,其IC50分别为1.738和0.238mg/mL.大米蛋白水解物同样也具有较强的还原能力.由此得出,大米蛋白水解物是一种天然的抗氧化肽.     

酶法水解脱脂米糠蛋白抗氧化性质研究

以脱脂米糠为原料,采用碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备米糠蛋白,并将制备酶解液与抗坏血酸在超氧阴离子自由基(O2-.)清除率、羟自由基(.OH)清除率、H2O2清除能力及还原能力等方面进行比较,研究米糠蛋白抗氧化活性。结果表明,米糠蛋白具有较强抗氧化活性,虽效果不如抗坏血酸;但对超氧阴离子自由基(O2-.)(最高为98.41%)、羟自由基(.OH)(最高达97.04%)及H2O2均有不同程度清除作用,并具有一定还原能力;且抗氧化能力与添加量存在一定量效关系,其中还出现有促氧化特殊现象。     

黄精在酿造黄酒中的作用研究

以糯米和黄精为原料,采用半固态发酵工艺酿制黄精黄酒,分析添加不同量的黄精粉和黄精汁对黄酒品质的影响。结果表明,添加糯米质量分数2%、5%、10%的黄精粉和料液比为20∶1、10∶1、5∶1（g∶mL）的黄精汁均能提高产酒率、酵母的比生长速率、体外抗氧化能力,其中添加糯米质量分数5%的黄精粉效果最佳,酵母比生长速率为0.043 5 h-1,DPPH自由基清除率为46.82%,总酚含量为74.56 μg/mL,总黄酮含量为14.90 μg/mL。     

酸枣仁蛋白的不同蛋白酶酶解产物功能特性及抗氧化活性分析

以酸枣仁为原料,采用碱提酸沉法对酸枣仁蛋白进行提取,用三种不同蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶）对酸枣仁蛋白进行酶解,得到三种酶解物,研究不同酸枣仁蛋白酶解物的功能特性和抗氧化活性。结果表明,与酸枣仁蛋白相比,不同酸枣仁蛋白酶解物的溶解性、持油性、起泡性及其稳定性、乳化性及其稳定性均具有不同程度地提高,其中,木瓜蛋白酶解物的溶解性、持油性、起泡性和乳化性最强,碱性蛋白酶解物的起泡稳定性和乳化稳定性最强;体外抗氧化研究表明,相比于酸枣仁蛋白,不同蛋白酶所得酶解产物的抗氧化活性均明显提高,其中,碱性蛋白酶酶解物的DPPH清除能力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子清除率和ABTS自由基清除能力均高于其他酶解产物,当质量浓度为2.5 mg/mL时,DPPH自由基清除率最高为95.87％、超氧阴离子自由基率为44.77％、ABTS自由基清除率为90.84％、羟基自由基清除率为47.77％。本研究表明,酸枣仁蛋白酶解物具有较好的食品加工性能,其抗氧化活性明显增高,可以作为一种潜在的蛋白质资源应用到食品中,为酸枣仁蛋白酶解物在食品行业中的应用提供理论依据。     

Evaluation Of Antioxidant Properties In Vitro of Plastein-Reaction-Stressed Soybean Protein Hydrolysate

Alcalase was used in the present study to carry out an enzymatic hydrolysis of soybean protein isolate and a plastein reaction of the prepared hydrolysate in vitro, aiming to investigate the influence of the plastein reaction on the antioxidant properties of the modified hydrolysate. Soybean protein hydrolysate was prepared in a degree of hydrolysis of 14.0%, exhibited a scavenging activity of 43.6% on ABTS radical in vitro, and thus was used as the substrate of the plastein reaction to prepare the plastein-reaction-stressed hydrolysate. Response surface methodology was applied to select suitable reaction conditions as follows: enzyme addition level 1037 U/g peptides, substrate concentration 29.7% (w/v), reaction temperature 20.3°C. The stressed hydrolysate showed the highest scavenging activity on ABTS radical (about 47.9%) or maximal reaction extent when reaction time was 6 h. Three stressed hydrolysates with different reaction extents were prepared and evaluated for other antioxidant activities. Compared to the original hydrolysate, the stressed hydrolysate with lower reaction extent exhibited a similar (P > 0.05) scavenging activity on DPPH (or superoxide) radical and reducing power, but a significant higher activity (P < 0.05) on hydroxyl radical. The stressed hydrolysate with the highest reaction extent behaved as these investigated antioxidant properties were significantly higher (P < 0.05) than the original hydrolysate except for scavenging activity on DPPH radical. The results of the present study highlight that the alcalase-catalyzed plastein reaction appears to be capable of improving antioxidant properties of soybean protein hydrolysate.     

体外模拟消化对大米谷蛋白结构及水解产物生物活性的影响

通过体外模拟消化,研究不同消化时间下谷蛋白结构与抗氧化和血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制活性的关系。利用内源荧光光谱和傅里叶变换红光谱测定谷蛋白水解过程结构变化。通过测定水解产物抗氧化能力和ACE抑制率表征酶解产物的活性,利用四极杆串联飞行时间质谱鉴定具有抗氧化和ACE抑制活性的组分。结果表明,谷蛋白水解度在2 h内快速增加,随后趋于平缓。水解导致谷蛋白λmax红移且荧光强度增强,α-螺旋含量显著增加、β-折叠相对含量显著降低（P＜0.05）。α-螺旋结构含量的增加降低了水解物的抗氧化能力,谷蛋白β-折叠结构含量的减少能增强水解物的ACE抑制能力。水解0.5 h抗氧化能力最强,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率的半抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）为（1.113±0.015）mg/mL,·OH清除率IC50为（0.518±0.053）mg/mL、Fe2＋螯合能力IC50为（0.678±0.019）mg/mL。ACE抑制率先增加后降低,在2 h达到最高,IC50为（0.693±0.011）mg/mL。水解度的增加降低了水解物抗氧化能力,但增强了ACE抑制能力。水解物在0.5～2 h抗氧化能力和ACE抑制能力呈现负相关关系,随后抗氧化能力和ACE抑制能力均下降。水解物抗氧化肽和ACE抑制肽分子质量均小于2 kDa,筛选出以VEGGFLFIV为代表抗氧化活性多肽,且ACE抑制肽大部分N-端是疏水性氨基酸或者碱性氨基酸。因此,通过控制谷蛋白体外消化水解度,可制备最优的大米谷蛋白抗氧化或降血压相关功能性产品。     

Drying kinetics,physico‐chemical properties,antioxidant activity and phenolic composition of foam‐mat dried germinated rice bean (Vigna umbellata) hydrolysate

This research was aimed to study physico‐chemical properties and antioxidant activities of foam‐mat dried germinated rice bean (Vigna umbellata) hydrolysate. Germination led to an increase in released phenolic content and antioxidant activity (DPPH radical scavenging activity and FRAP) of rice bean hydrolysate. The hydrolysate obtained from germinated rice bean (GRB) and non‐germinated rice beans (NGRBs) was foam‐mat dried at 60 and 70 °C. Semi‐theoretical and empirical model could suitably describe the drying characteristic of foamed bean hydrolysate. Total phenolic content and antioxidant activities of foam‐mat dried samples decreased with increasing air‐drying temperature (P ≤ 0.05). Gallic acid, catechol and epicatechin were major phenolic compounds in foam‐mat dried samples prepared from both GRB and NGRB. The higher phenolic content and antioxidant activities were found in foam‐mat dried hydrolysate of GRB. Electron spin resonance spectrometry revealed that foam‐mat dried rice bean hydrolysate showed a strong ability to scavenge free radicals, especially carbon‐centred radicals.