对氧磷和氧毒死蜱对大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响

目的研究有机磷类杀虫剂对氧磷（PO）和氧毒死蜱（CPO）对大鼠脑G蛋白偶联受体激酶2介导的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体磷酸化的影响。方法制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱M2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱M2受体或β2-肾上腺素受体、G蛋白偶联受体激酶-2、[γ-p32]ATP与对氧磷（PO）、氧毒死蜱（CPO）共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。结果氧毒死蜱完全抑制大鼠脑M2受体的磷酸化,其半数抑制浓度为（IC50）70μmol/L;对氧磷不抑制毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化;氧毒死蜱和对氧磷都不抑制β-肾上腺素受体的磷酸化。结论氧毒死蜱有选择性地抑制大鼠脑毒蕈碱乙酰胆碱M2受体的磷酸化,说明某些有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他靶分子或作用途径。     

有机磷类杀虫剂存在其他作用靶分子

目的：研究有机磷类杀虫剂对大鼠脑G蛋白偶联受体激酶2介导的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体磷酸化的影响,揭示有机磷类杀虫剂存在的其他作用靶分子或作用途径.方法：制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱m2受体;将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体或β-肾上腺素受体,G蛋白偶联受体激酶-2,[γ-p32]ATP与对氧磷（PO）、氧毒死蜱（CPO）共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测m2受体磷酸化结果.结果：氧毒死蜱完全抑制大鼠脑m2受体的磷酸化,其半数抑制浓度为（IC50）70μmol/L;对氧磷不抑制m2受体的磷酸化;氧毒死蜱和对氧磷都不抑制β-肾上腺素受体的磷酸化.结论：氧毒死蜱有选择性地抑制大鼠脑m2受体的磷酸化,说明某些有机磷杀虫剂的毒性作用存在其他靶分子或作用途径.     

胆碱能受体和肾上腺素能受体磷酸化的调节作用机制研究

目的：研究受体激活剂或抑制剂影响G蛋白偶联受体激酶2（GRK2）介导的胆碱能m2受体和β2肾上腺素能受体膜蛋白（β2-AR）磷酸化的调节机制。探讨兴奋剂使m2受体和β2-AR受体活化,引发受体磷酸化级联反应,进而影响蛋白激酶催化受体磷酸化的起始机制。方法：制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒草碱乙酰胆碱m2受体;分别将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体或β-肾上腺素受体,G蛋白偶联受体激酶-2,[γ-P^32]ATP与受体激活剂或抑制剂共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测m2受体磷酸化结果。结果：m2受体激活剂氨甲酰胆碱明显增强m2受体的磷酸化,而m2受体抑制剂阿托品或肝素（GRK2抑制剂）完全阻断了m2受体的磷酸化。m2受体的磷酸化是依赖激活剂如氨甲酰胆碱作用发生的,呈明显的剂量依赖关系;β2-AR的激活剂特布他林增强肾上腺素能受体的磷酸化,而肝素可完全阻断β2-AR的磷酸化;并且证实氨甲酰胆碱对mAChR2,特布他林对β2-AR磷酸化的增强作用是选择性的作用结果;HEL299细胞磷酸化实验结果也显示氨甲酰胆碱可以增强HEL299细胞m2受体的磷酸化,阿托品可以抑制HEL299细胞m2受体的磷酸化。结论：实验证实氨甲酰胆碱、特布他林和阿托品等一些m2受体和β2-AR的激活剂及抑制剂对M2受体和β2-AR磷酸化的调节作用。提示激活剂增强m2受体和β2-AR的磷酸化可能是这些受体活化一个重要部分,由此开始加速受体敏感性下调,受体耐受性增强。     

G蛋白β、γ亚基对M2受体的磷酸化的影响

目的：探讨G蛋白β、γ亚基在调节G蛋白偶联受体激酶活性的重要作用和G蛋白β、γ亚基影响M2受体磷酸化新的作用机制。方法：利用四个柱层析分离G蛋白α亚基与G蛋白β、γ亚基;将纯化的G蛋白β、γ亚基、GRK-2,[γ-P^32]标记的ATP与mAChR2,共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶片干燥后放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。结果：G蛋白β、γ亚基在没有激动剂存在的情况下明显增强M2受体的磷酸化。氨甲酰胆碱明显增强M2受体的磷酸化,阿托品或肝素（GRK2抑制剂）完全阻断M2受体的磷酸化。M2受体的磷酸化是依赖激活剂如氨甲酰胆碱作用发生的,这种依赖关系呈明显的剂量关系。结论：G蛋白β、γ亚基是通过上调GRK2活性增强M2受体的磷酸化的。说明Gβγ同Gα一样均可引起效应蛋白的激活,在细胞信号转导中起同样重要作用,共同介导一系列的生物学效应。     

毒蕈碱样乙酰胆碱受体信号转号转导机制研究进展

M受体是与G蛋白相偶联的受体。激动剂作用于M1、M3和M5受体亚型经Gq/11蛋白激活PLC-β，加速PIP2水解，激动剂作用于M2和M4受体亚型经Gi蛋白抑制腺苷酸环化酶活性，使cAMP产量降低。近来发现，激动剂持续作用可使M受体发生脱敏，内化等一系列生理反应，进而导致G蛋白介导的信号转导终止和M受体循环再利用。     

M5毒蕈碱乙酰胆碱受体参与药物成瘾的研究进展

M5受体是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族的一个新成员,是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族(M1-M5亚型)最后一个被克隆出来的,属于G蛋白偶联受体。免疫沉淀和mRNA原位杂交实验表明M5受体在中枢神经系统中特定区域表达,包括海马、丘脑、黑质和中脑腹侧背盖区(VTA)部位)[1,2,3]。可是和其他M受体比     

G蛋白耦联受体激酶与心力衰竭

本文回顾了目前所知G蛋白耦联受体激酶(GRK)在正常心脏及心力衰竭中的作用机制,并介绍其在心力衰竭基因治疗中的新近展,旨在探讨通过调节心脏GRK而产生的潜在的心力衰竭治疗策略。哺乳动物体内有7种GRK基因,GRK2和GRK5在心肌β肾上腺能受体系统有非常重要的作用。在心脏发育过程中,GRK2是唯一的关键性亚型。免疫组织化学研究表明,非心肌的心脏细胞中GRK2成分较高。GRK催化G蛋白耦联受体的磷酸化,从而使GPCR减敏。因此,GRK的磷酸化是调节其活性及蛋白稳定性的重要机制。心力衰竭时GRK表达和活性均有所增高,这并非保护性机制,而是促使心力衰竭恶化的重要因素。GRK2的靶向抑制可能是挽救衰竭心肌非常有前景的治疗途径。     

G蛋白偶联受体激酶2与肿瘤的关系及其调节机制研究进展

G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)是一种多功能蛋白,可通过调节G蛋白偶联受体(GPCR)信号转导,以及通过磷酸化或直接与大量的非蛋白相互作用来充当信号转导枢纽。GRK2可影响细胞增殖生存的级联调节网络,调控细胞代谢网络的关键途径,肿瘤细胞内的血管生成和炎性反应也与其有关。此外,GRK2还可与多种非GPCR及非受体底物(包括IGF-1R、EGFR、ERK、MEK等)相互作用并对其进行调节(或受其调节),表明其通过磷酸化依赖性和非依赖性机制影响多种细胞功能。GRK2的非经典作用使该激酶影响细胞微环境内的许多基本生理过程,如炎性基因表达、细胞迁移及线粒体代谢。GRK2在心脏、免疫和其他细胞类型中均发挥作用。总之,GRK2在人体内的表达失衡将会影响到恶性肿瘤的增殖、迁移和侵袭的能力。     

G protein-coupled receptor kinase 4 regulates expression and phosphorylation status of AT1 receptor in rat vascular smooth muscle cells

目的 应用siRNA干扰抑制大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4)的表达,探讨GRK4对血管紧张素Ⅱ1型(angiotensinⅡtype1,AT1)受体的调节作用.方法 免疫组化检测大鼠回结肠动脉血管平滑肌组织GRK4蛋白表达;以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞株)为研究对象,免疫印迹检测GRK4、AT1受体蛋白表达变化,免疫共沉淀检测GRK4和AT1受体的相互作用和AT1受体磷酸化改变.结果 大鼠动脉平滑肌组织GRK4表达良好;siRNA干扰后,GRK4蛋白表达明显下降(P＜0.05);AT1蛋白表达降低(P＜0.05),AT1受体磷酸化明显增强(P＜0.05);GRK4和AT1受体存在共连接,抑制GRK4表达后增加GRK4与AT1受体之间的共连接.结论 GRK4能够调控大鼠胸主动脉平滑肌细胞AT1受体蛋白表达及其磷酸化状态,该调节作用可能与两者的共连接有关.     

G蛋白偶联受体激酶4对大鼠血管平滑肌细胞AT1受体的调节作用

目的应用siRNA干扰抑制大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞G蛋白偶联受体激酶4(G protein-coupled recep-tor kinase 4,GRK4)的表达,探讨GRK4对血管紧张素Ⅱ1型(angiotensinⅡtype 1,AT1)受体的调节作用。方法免疫组化检测大鼠回结肠动脉血管平滑肌组织GRK4蛋白表达;以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞株)为研究对象,免疫印迹检测GRK4、AT1受体蛋白表达变化,免疫共沉淀检测GRK4和AT1受体的相互作用和AT1受体磷酸化改变。结果大鼠动脉平滑肌组织GRK4表达良好;siRNA干扰后,GRK4蛋白表达明显下降(P<0.05);AT1蛋白表达降低(P<0.05),AT1受体磷酸化明显增强(P<0.05);GRK4和AT1受体存在共连接,抑制GRK4表达后增加GRK4与AT1受体之间的共连接。结论 GRK4能够调控大鼠胸主动脉平滑肌细胞AT1受体蛋白表达及其磷酸化状态,该调节作用可能与两者的共连接有关。     

Toll-like receptor 2及其信号传导通路在阿片类物质诱导细胞凋亡中的作用

目的:成瘾物质(Addictivedrugs)导致的中毒性脑病的中枢神经系统损害以神经元凋亡为突出表现,具体机制仍有待进一步的研究探讨.方法:Toll-like receptor2(TLR2)不仅是激活机体自身免疫防御和炎症反应的重要受体,而且广泛参与多种细胞功能,包括细胞凋亡.我们使用体外培养的HEK293和高表达TLR2的HEK293 2种细胞,以及体外培养小鼠皮层原代神经元细胞,研究经过吗啡处理后细胞存活率和凋亡的变化,以探讨TLR2信号通路在吗啡诱导的细胞凋亡中的作用.结果:TLR2高表达导致吗啡诱导的细胞存活率下降和细胞凋亡的显著增加.使用MyD88抑制体竞争性抑制MyD88并阻断TLR2信号通路后,吗啡诱导的TLR2高表达细胞的凋亡也被明显抑制.长期的吗啡处理导致正常神经元的TLR2在信使RNA(mRNA)水平和蛋白水平表达明显增高,而且在TLR2功能缺失的原代神经元细胞中,吗啡诱导的caspase-3活性增高被阻断,吗啡诱导的神经元凋亡也被明显抑制.结论:TLR2信号通路参与吗啡诱导的神经元凋亡.     

Effect of insulin on the expression of interleukin 2 receptor

Summary In this paper, we report our work about the effect of insulin on the expression of interleukin 2 receptor (IL-2R). Our experiments showed that insulin was not T cell growth factor, but was able to augment the expression of IL-2R during T cell activation by PHA and to delay the decline rate of IL-2R⁺ cell. As a result, the percentage of IL-2R⁺ cells significantly increased during and after activation. Furthermore, insulin was capable of enhancing the production of interleukin 1 by macrophage and interleukin 2 by T lymphocyte. Based on these results, we suggest that there are at least two related mechanisms involved in the augmentation of the expression of IL-2R on activated T cells, i.e., direct action of insulin on T cells and indirect action of insulin by enhancing the production of interleukin l.     

乳腺癌组织中雌、孕激素受体及C-erbB-2基因的表达与预后关系的探讨

目的探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和C-erbB-2基因在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测254例乳腺癌组织中ER、PR及C-erbB-2的表达。结果ER、PR及C-erbB-2的阳性表达率分别为54.05%、62.59%和54.72%;ER、PR的阳性表达与腋淋巴结转移呈负相关(P<0.05);C-erbB-2的阳性表达与腋淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与肿瘤大小、临床分期、复发转移及生存相关,阴性表达组5年生存明显优于阳性表达组;三者的表达状况与年龄、绝经与否及病理类型均无关;ER与PR的表达呈显著正相关,ER、PR和C-erbB-2之间的表达呈负相关(P<0.05)。结论联合检测乳腺癌组织中ER、PR和C-erbB-2的表达对乳腺癌患者治疗方案的制定和判断预后有重要意义。     

Effects of surgical trauma on interleukin 2 production and interleukin 2 receptor expression

Summary To elucidate the mechanism of immunologic abnormalities induced by surgical trauma, we measured interleukin 2 (IL-2) production and IL-2 receptor expression in peripheral blood mononuclear cells from 16 patients with cholelithiasis. Compared with preoperative levels, IL-2 production and IL-2 receptor expression were significantly reduced on postoperative day 4, and the reduction was consistent with the suppression of lymphocyte proliferative response to phytohemagglutinin.     

Expression of Angiopoietin-2 Gene and Its Receptor Tie2 in Hepatocellular Carcinoma

The relationship of angiogenesis and solid tumoris one hot spot in tumor researching field.Tumor isconsisted of tumor cells and vessels. Tumor inducesand promotes angiogenesisand vice versa. Angiogen-esis promotes tumor development and provides path-ways for tumor metastasis[1,2 ] .Anti- angiogenesis isconsidered one potent anti- tumor therapy. Hepato-cellular carcinoma( HCC) is characteristic of highblood infusion,high vascular metastasis and recur-rence. Angiogenesis may play an important …     

肾组织磷脂酶A2受体和血清抗磷脂酶A2受体抗体在膜性肾病中的诊断价值

目的：检测特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)、继发性膜性肾病(secondary membranous nephropathy,SMN)患者肾组织中磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)的表达及血清抗PLA2R 抗体滴度,分析其在诊断IMN中的价值。方法：2014年5月至2015年2月中南大学湘雅二医院肾内科肾活检患者73例, 分为IMN组(n=48)、SMN组(n=17)和微小病变性肾病组(n=8)。采用间接免疫荧光法检测各组肾组织PLA2R及血清抗 PLA2R抗体的表达。结果：IMN组肾组织PLA2R阳性率为91.7%,SMN组阳性率为29.4%,IMN组阳性率、荧光强度明 显高于SMN组(均P<0.05);IMN组血清PLA2R抗体阳性率为85.4%,SMN组阳性率为29.4%,IMN组抗体阳性率及滴度 明显高于SMN组(均P<0.05);微小病变性肾病组肾组织PLA2R抗原及血清抗体均呈阴性。IMN组血清PLA2R抗体滴度 与24 h尿蛋白呈正相关(r=0.432,P<0.01),与血清白蛋白呈负相关(r=–0.307,P<0.05)。结论：检测肾组织PLA2R和血 清PLA2R抗体的表达有助于IMN的诊断及鉴别诊断,监测血清PLA2R抗体滴度有助于评估疾病活跃程度和治疗效果。     

雌激素受体、孕激素受体、CerbB-2在乳腺癌中的表达及其意义

①目的探讨乳腺癌中CerbB-2基因蛋白及雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的表达及其预后相关性。②方法收集180例乳腺癌石蜡标本,应用免疫组化“二步法”检测CerbB-2、ER、PR在上述病变中的表达。③结果ER阳性63例,PR阳性81例,CerbB-2阳性108例,ER、PR、CerbB-2表达与乳腺癌患者年龄、肿块大小、肿块部位、淋巴结转移情况、月经状态有一定相关性。ER、PR表达与CerbB-2表达呈负相关,ER、PR表达呈显著正相关。④结论ER、PR及CerbB-2的表达与临床各因素有一定相关性,可作为独立的预后因素指导乳腺癌的治疗。     

黄芪对阿霉素肾病大鼠白细胞介素-2及其受体的影响

目的 :通过测定黄芪对阿霉素肾病大鼠白细胞介素 2 (IL 2 )及白细胞介素 2受体 (IL 2R)的影响 ,以探讨黄芪治疗肾病的免疫机制。　方法 :ELISA法测定血清IL 2、血清和尿可溶性IL 2R ,PAP四层法测定肾间质中表达IL 2R的细胞。　结果 :实验 4周时 ,治疗组血IL 2及尿IL 2R明显低于肾病组 (P <0 .0 5 ) ,而与正常对照组比较差异不显著 ,肾病组肾间质中表达IL 2R的细胞数明显高于正常对照组和治疗组 (P <0 .0 5 )。多因素相关分析提示 ,黄芪治疗 4周时 ,血IL 2水平与尿蛋白、血清胆固醇及三酰甘油呈正相关 (P <0 .0 5 ) ,与血清清蛋白呈负相关(P <0 .0 5 ) ;尿IL 2R与尿蛋白呈正相关 (P <0 .0 5 ) ;肾间质中表达IL 2R的细胞数与血IL 2及血IL 2R呈正相关(P <0 .0 5 )。　结论 :黄芪可能通过IL 2及IL 2R系统对肾病产生治疗作用     

结核病患者中性粒细胞表面Toll样受体2和Toll样受体4的表达及意义

目的:检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(M.tb)前后表面Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,并探讨其意义。方法:采用流式细胞仪检测结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达,同时检测正常人PMN表面TLR2和TLR4的表达率;再用M.tb感染结核病患者和正常人外周血,检测PMN表面TLR2和TLR4表达情况。结果:结核病患者外周血感染M.tb前PMN表面TLR2和TLR4表达率明显高于正常人(P0.01);结核病患者和正常人外周血在感染M.tb后PMN表面TLR2和TLR4表达率均较感染前明显降低(P0.01)。结论:结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达和活化有助于机体抵御结核感染,TLR2和TLR4共同参与了宿主对M.tb的免疫应答。     

腺苷A2A受体与神经系统疾病

作为一种重要的神经递质,腺苷能通过与细胞膜上的腺苷受体（adenosine receptors,AR）结合而发挥细胞调节作用。 AR属于G蛋白偶联受体家族,哺乳动物的AR至少包含A1、A2A、A2B和A3等4个亚型,其中A2A受体与多种临床疾病的发生、发展都有着密切的关系。本文主要综述了A2A受体与多种神经精神疾病之间关系的研究进展,以期为这些疾病的防治研究提供新的线索。