鼻咽癌中p53基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌中ｐ５３基因突变情况。方法：用非同位素不对称ＰＣＲ－单链构象多态性技术（ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ），分析了鼻咽癌活检组织、细胞株和裸鼠移植瘤中ｐ５３基因第５、６、７和８外显子（ｅｘｏｎ）的基因突变，并对其中ｅｘｏｎ８突变的ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１进行ＤＮＡ测序。结果：在２０例鼻咽癌活检组织中没有发现突变；但在鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２、ＳＵＮＥ－１和瘤株ＳＵＮＴ－１中存在第８外显子突变，而ＨＫ１为第５外显子突变。ＤＮＡ测序发现ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１的突变点在ｅｘｏｎ８的密码子（ｃｏｄｏｎ）２８０上，由ＡＧＡ（精氨酸）→ＡＣＡ（苏氨酸）。结论：ｐ５３基因突变热点的ｅｘｏｎ５、６、７和８可能在鼻咽癌变过程中没有重要意义，而在裸鼠移植瘤和细胞株建立过程中起重要作用。ＥＢＶ由于和鼻咽癌的关系密切，在鼻咽癌中可能存在ＥＢＶ编码蛋白与ｐ５３结合或蛋白表达被ＥＢＶ抑制等其他途径使ｐ５３失活。     

鼻咽癌裸鼠移植瘤及其相应体外细胞株的建立与特性研究

从新鲜鼻咽活检组织建立了一株鼻咽癌（ＮＰＣ）裸鼠移植瘤株（ＳＵＮＴ一１）及其相应的体外传代上皮细胞株（ＳＵＮＥ一１）。证实ＳＵＮＴ一１和ＳＵＮＥ一１为典型低分化鳞癌细胞，染色体分析二者均为人类肿瘤核型。以ＰＣＲ技术检测ＳＵＮＴ一１的Ｐ１～Ｐ１８和ＳＵＮＥ一１直到第６１代培养的细胞中的ＥＢＶ一ＤＮＡ均为阳性。用原位溶细胞电泳技术（Ｉｎｓｉｔｕｌｙｉｎｇｇｅｌ）ＥＢＶ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，亦显示相应的ＥＢＶＤＮＡ区带。ＥＢＶ基因组为线性特征，且在ＳＵＮＴ一１Ｐ１８和ＳＵＮＥ一１Ｐ５３细胞的电镜检查中均发现直径为９６一１００ｎｍ的ＥＢＶ样颗粒。用不对称ＰＣＲ一ＳＳＣＰ检测，显示有Ｐ５３第８外显子突变。带ＥＢＶ基因的ＮＰＣ瘤株及相应的上皮细胞株建立，为从分子水平、细胞水平上研究肿瘤的发生发展过程，以及治疗等方面提供了丰富的和更切合人体肿瘤的材料和模型。     

鼻咽癌中EB病毒基因组状态研究

用多聚酶链反应扩增Ｅｐｓｔｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的Ｂａｍ ＨＩ Ｗ片段，在２０例低分化鼻咽癌活检组织中，检测出ＥＢＶ ＤＮＡ片段；裸鼠低分化ＮＰＣ移植瘤株ＳＵＮＴ－１从第３４代持续存在ＥＢＶ ＤＮＡ，其相应体外细胞株ＳＵＮＥ－１第１至６２代仍阳性。     

肺癌组织抑癌基因P53异常分析

Ｐ５３基因５－８外显子ＰＣＲ产物的ＤＮＡ序列分析及石蜡包埋组织Ｐ５３鼠抗人单克隆抗体（Ｄｏ－１）免疫组化分析发现：５７例原发性肺癌中３７例有Ｐ５３蛋白积累。ＤＮＡ／ＰＣＲ产物直接测序发现：９／１２例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ），８／１５非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）Ｐ５３基因突变，错义突变为１２／１７，Ｇ→Ｔ突变为６／１７。免疫组化发现：１１／１９例ＳＣＬＣ，１９／３７例ＮＳＣＬＣ Ｐ５３蛋白染色阳性。４／     

P~(53)基因突变及P~(53)突变蛋白在卵巢上皮肿瘤中表达检测方法的探讨

采用改进的ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术和ＳＰ免疫组化技术检测３６例卵巢上皮癌，１２例卵巢上皮交界瘤和１５例良性卵巢上皮肿瘤的Ｐ５３基因的突变和突变蛋白的表达。结果卵巢上皮癌Ｐ５３基因突变率为３０．６％，突变蛋白表达为５８．４％。Ｐ５３基因突变主要发生在外显子５～８上，以第７外显子突变率最高。交界性肿瘤个别出现Ｐ５３基因突变和突变蛋白表达，而在良性肿瘤无一例出现。提示Ｐ５３基因突变是卵巢癌形成过程中的晚期事件。Ｐ５３基因突变可作为肿瘤标记物判定卵巢癌的预后。ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ非同位素基因突变技术克服了常规ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测方法的缺陷，可提高准确性。     

卵巢恶性肿瘤p53基因表达产物及检测p53第七外显子突变的初步分析研究

为探讨ｐ５３基因突变表达产物与卵巢恶性肿瘤临床生物学行为以及ｐ５３第七外显子突变情况之间的关系。采用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）对５０例卵巢恶性肿瘤中的２３例病人新鲜组织标本进行ｐ５３基因突变蛋白表达检测。结果显示：卵巢恶性肿瘤免疫组化ｐ５３阳性表达率２４％。２３例新鲜组织标本中４例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测第七外显子异常。提示ｐ５３阳性表达可能与遗传因素有关（Ｐ＝０．０３８）；卵巢恶性肿瘤第七外显子突变可出现ｐ５３蛋白高表达；第七外显子突变可出现于不同临床分期及组织分型     

卵巢恶性肿瘤p53基因表达产物及检测p53第七外显子突变的初步 …

为探讨ｐ５３基因突变表达产物与卵巢恶性肿瘤临床生物学行为以及ｐ５３第七外显子突变情况之间的关系，采用聚合酶链反应单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）对５０例卵巢恶性肿瘤中的２３例病人新鲜组织标本进行了ｐ５３基因突变蛋白表达检测，结果显示：卵巢恶性肿瘤免疫组化ｐ５３阳性表达率２４％，２３例新鲜组织标本中４例ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测第七外显子异常。提示ｐ５３阳性表达可能与遗传因素有关（Ｐ＝０．０３８），     

食管鳞状上皮细胞癌中P53基因突变的PCR—SSCP检测

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了４０例食管鳞状细胞癌Ｐ５３基因第５、６、７和第８外显子的突变情况。结果显示：１３例（３２．５％）有Ｐ５３基因突变，突变主要发生在第５和第８外显子，与癌分化程度无明显关系，但伴淋巴结癌转移病例中的Ｐ５３基因的突变频率明显高无转移者（Ｐ〈０．０５）。本研究提示，Ｐ５３基因突变存在于中，晚期食管癌中，并可能与食管鳞癌的进展与转移有关。     

胃癌P53基因突变和蛋白表达的研究

为了解中国人胃癌Ｐ５３基因突变情况，应用银染聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术对Ｐ５３基因第５、６、７、８外显子进行检测。对来自癌组织ＤＮＡ和癌旁正常组织ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳带迁移作对比分析，发现３７例胃癌中，１１例胃癌样品电泳带迁移异常，依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，研究结果表明：胃癌Ｐ５３基因５－８外显子的突变率为３０％。微波处理ＡＢＣ法检测突变型Ｐ５３蛋白表     

非小细胞肺癌患者ＸＲＣＣ１基因多态性对ｐ５３基因突变发生的影响

目的：观察非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者ＸＲＣＣ１基因３９９位点多态性以及吸烟对ｐ５３基因突变发生的影响。方法：运用不对称ＰＣＲ技术扩增ｐ５３基因的第５～８外显子,用聚合酶链反应 单链构象多态性分析法（ＰＣＲ-ＳＳＣＰ）检测ｐ５３基因突变,并对有差异的结果测序验证;运用ＰＣＲ技术扩增ＸＲＣＣ１基因的第１０外显子,从正反两个方向对扩增片段进行ＤＮＡ测序分析其多态性;同时了解吸烟与它们的关系。结果：３８例可手术的ＮＳＣＬＣ患者中发现１６例有ｐ５３基因的突变,发生突变的１６例中６例至少携带１个ＸＲＣＣ１-３９９Ｇｌｎ等位基因,１０例为野生基因型ＸＲＣＣ１-３９９Ａｒｇ／Ａｒｇ,用二项分类Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型分析ＸＲＣＣ１-３９９Ｇｌｎ多态性与ｐ５３基因突变两者的关系,优势比（ＯＲ）为１.５３６（９５％ＣＩ：０.３７６～６.２８０）;该模型中吸烟与ｐ５３基因突变的ＯＲ为１.５２４（９５％ＣＩ：０.２５０～９.２９５）。结论：ＮＳＣＬＣ患者中,ＸＲＣＣ１基因３９９位点多态性和吸烟情况对ｐ５３基因突变发生无明显影响。     

人乳腺癌组织p53基因突变及过度表达的临床意义

应用聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析和流式细胞术（ＦＣＭ），研究３０例患者乳膛癌组织Ｐ５３基因５￣８外显子的突变情况、Ｐ５３蛋白免疫组化检出情况、ＤＮＡ倍体及雌激素受体（ＥＲ）含量；并与各生物学参数进行了相关研究，以探讨Ｐ５３基因与乳腺癌发生、发展的关系。结果提示：１．全组１４例（４６．７％）发现Ｐ５３基因突变，其中１例为原位导管癌。２．Ｐ５３蛋白检出阳性率为５３．３％（１６／３     

肺癌患者癌组织和痰液细胞中p53和K-ras基因突变的研究

目的 检测肺癌组织和肺癌患者痰液脱落细胞中ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ基因突变情况,比较联合检测ｐ５３、Ｋ－ｒａｓ和单一检测ｐ５３或Ｋ－ｒａｓ基因在肺癌诊断中的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法检测了５９例肺癌组织、癌旁肺组织、１４全肺部良性病变肺组织及患者痰液脱落细胞中ｐ５３基因第５～８外显子、Ｋ－ｒａｓ基因第１外显子突变。结果 肺癌组织中ｐ５３基因突变率为３７．３％（２２／５９）,痰液脱落细胞为３     

非小细胞肺癌中p53基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变的情况，应用改良聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术检测１７例非小细胞肺癌中ｐ５３基因第５～８外显子的突变情况，有８例存在ｐ５３基因突变，突变率为４７．００％（８／１７），其中鳞癌为５５．５６％（５／９），腺癌为３７．５０％（３／８）。本研究结果表明：非小细胞肺癌中ｐ５３基因突变较为常见；改良后的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术对非小细胞肺癌的基因诊断具有潜在性应用价值     

非小细胞肺癌p16基因突变的初步研究

为了解非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ｐ１６基因突变的情况,本研究应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测了２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织中ｐ１６基因外显子２的突变情况,现将结果报告如下。１　材料与方法２４例ＮＳＣＬＣ肿瘤组织及同一病例非肿瘤肺组织均为住院病例手术切除标本,并经病理证实。按常规方法提取ＤＮＡ。ＰＣＲ反应在ＰＥ９６００热循环仪中进行,扩增ｐ１６基因第２外显子,引物序列：　　ＰＳ１：５′－ＡＣＡＡＧＣＴＴＣＣＣＴＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣ－３′ＰＳ２：５′－ＴＣＴＧＡＧＣＴＴＴＧＧＡＡＧＣＴＣＴＣＡＧ－３′循…     

p53基因突变与EB病毒相关性鼻咽部T细胞淋巴瘤

目的：了解Ｐ５３基因突变与埃伯斯坦－巴尔病毒相关性鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤的关系。方法;应用免疫组织化学方法,原位杂交（ＩＳＨ）,ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对２６例确诊为鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤的病例进行Ｐ５３蛋白及基因的检测。结果：ＥＢＶ编码的小ＲＮＡ探讨（ＥＢＥＲ）１７／２６例阳性;Ｐ５３蛋白１３／２６例阳性;对其中１２例进行Ｐ５３外显子５,７,８的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测,发现Ｐ５３突变７／１２例阳性,ＥＢＶ阳性组５     

鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤中癌细胞的凋亡

观察鼻咽癌细胞株ＣＮＥ－１和ＣＮＥ－２裸鼠移植瘤组织中肿瘤细胞凋亡的形态学特征,并探讨ｐ５３,ｂｃｌ－２和ｂａｘ在瘤细胞凋亡中所起的作用。方法：ＣＮＥ－１和ＣＮＥ－２鼻咽癌细胞株接种于裸鼠并在裸鼠体内连续传３代。     

乳腺癌p53基因突变规律及其预后意义

目的 探讨ｐ５３基因突变在乳腺癌发生发展中的演变规律及其与预后的关系。方法 应用ＰＣＲ－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法检测５５例原发性乳腺癌患者ｐ５３基因５～８外显子的突变情况。结果 ｐ５３基因突变发生的频率为３６．４％（２０／５５）,Ｉ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌中ｐ５３基因突变阳性率分别为４７．２％（１７／３６）和１５．８％（３／１９）,而且突变多发生在５～６外显子。突变阳性患者其无病生     

人乳头瘤病毒感染和p53基因突变与宫颈癌的关系

目的：探讨人乳头瘤病毒１６ 和１８ 型及抑癌基因ｐ５３ 突变对宫颈的致癌作用以及 Ｈ Ｐ Ｖ 感染与ｐ５３ 基因突变的相关性。方法：采用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术和限制性酶切片段多态性分析（ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ） 技术对３４ 例原发性宫颈癌组织及３０ 例正常宫颈组织 Ｈ Ｐ Ｖ１６ ,１８ 型 Ｄ Ｎ Ａ 及抑癌基因ｐ５３ 的突变进行了检测。结果： Ｈ Ｐ Ｖ１６ ,１８ Ｄ Ｎ Ａ 在宫颈癌的总阳性率为６４７ ％ （２２／３４） ,正常宫颈组织只有６７ ％ 阳性,８例宫颈癌组织出现ｐ５３ 基因第６ 外显子突变,其中２ 例为 Ｈ Ｐ Ｖ１６ Ｄ Ｎ Ａ 阳性、１ 例 Ｈ Ｐ Ｖ１８ Ｄ Ｎ Ａ 阳性。结论：宫颈癌的发病与 Ｈ Ｐ Ｖ 感染及ｐ５３ 基因突变有关,宫颈癌组织中ｐ５３ 基因突变与 Ｈ Ｐ Ｖ 感染无关。     

鼻咽癌中p53蛋白积聚对瘤细胞有丝分裂和凋亡的影响

目的：观察疗前鼻咽癌组织中Ｐ５３蛋白的积聚及其对瘤细胞有丝分裂和凋亡的影响。方法随机收集１９９７年疗前鼻咽癌活检标本４３例,采用免疫组化ＬＳＡＢ法ＤＯ－７一抗检测Ｐ５３蛋白的表达。在Ｈ＆Ｅ染色切片上位细胞死亡试剂盒检测瘤细胞凋亡,平均每个高倍视野下的凋亡瘤细胞数为凋亡指数（ＴＵＮＥＬ ｉｎｄｅｘ,Ｔ１）。比较高于位细胞死亡试剂盒检测瘤细胞凋亡,平均每个高倍视野下的细胞瘤细胞数为凋亡指数（ＴＵＮＥＬ     

食管鳞癌自发细胞凋亡和核增殖抗原p53关系的研究

目的通过对食管鳞癌组织中凋亡细胞的原位观察和核增殖抗原（ＰＣＮＡ）的表达状态的研究,探讨不同增殖情况的食管鳞癌组织细胞凋亡情况,同时研究ｐ５３基因的突变和ｐ５３蛋白的表达对食管鳞癌组织细胞凋亡的影响。方法３０例术前未经任何治疗的食管鳞癌手术标本,分别进行凋亡细胞的原位检测（ＴＵＮＥＬ）、ＰＣＮＡ、ｐ５３蛋白的免疫组化染色和ｐ５３基因５,６,７,８外显子ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测。结果不同增殖能力的癌组织中,细胞凋亡的程度差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因突变组中,增殖程度高与增殖程度低者之间癌细胞凋亡的程度差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ｐ５３基因突变组与非突变组、ｐ５３蛋白表达阳性组与非阳性组癌细胞凋亡的程度差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论食管鳞癌组织中,细胞增殖活跃则自发性凋亡也相应增多