益气逐瘀方对缺氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡及miR-24/Bim通路的影响

目的研究益气逐瘀方(参元丹)对缺氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡及miR-24/Bim通路的影响。方法分离并培养乳鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型,Lipofectamine2000转染miR-24 mimic/inhibitor至心肌细胞,实验分为正常组、缺氧组、参元丹组、参元丹+miR-24 mimic组、参元丹+miR-24 inhibitor组,治疗组予参元丹含药血清干预。比色法检测心肌细胞培养基上清液LDH、CPK活性,MTT法检测心肌细胞存活率,Annexin V/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡,qRT-PCR检测心肌细胞miR-24、Bim mRNA表达。结果与低氧组相比,参元丹组、参元丹+miR-24 mimic组、参元丹+miR-24 inhibitor组均能显著降低细胞培养基上清液LDH、CPK活性(P<0.05),提高心肌细胞存活率(P<0.05),降低心肌细胞凋亡(P<0.05),升高心肌细胞miR-24 mRNA表达(P<0.05),降低Bim mRNA表达(P<0.05);治疗组之间比较,参元丹+miR-24 mimic组作用更显著(P<0.05)。结论益气逐瘀方参元丹能够减轻缺氧诱导乳鼠心肌细胞损伤及细胞凋亡,其作用机制可能与其上调miR-24表达,同时抑制其靶基因Bim mRNA表达有关。     

益气化浊汤下调胰岛素分泌受损INS-1细胞miR-124-3p改善胰岛素分泌

目的:研究益气化浊汤调控miR-124-3p改善胰岛素分泌受损INS-1细胞的作用机制。方法:四氧嘧啶诱导INS-1细胞建立胰岛素分泌受损(ISD)模型,分设model组、低剂量益气化浊汤干预组(YD-lo)、高剂量益气化浊汤组(YD-hi),正常INS-1细胞设为control组,测各组细胞胰岛素分泌水平及测miR-124-3p表达丰度;生物信息学法预测miR-124-3p潜在靶基因;测各组细胞miR-124-3p靶基因PLC-B1及其下游IP3R表达;双荧光报告基因实验行靶基因验证;测miR-124-3p mimic与miR-124-3p inhibitor转染后ISD-INS-1细胞PLC-B1及IP3R表达。结果:model组基础胰岛素分泌(BIS)、葡萄糖刺激后胰岛素分泌(GSIS)较control组均下降(P0.05),YD-lo组BIS、GSIS较model组无差异(P0.05),YD-hi组BIS、GSIS较model组均升高(P0.05); miR-124-3p表达丰度,model组较control组下降(P0.05),YD-lo组较model组无差异(P0.05),YD-hi组较model组升高(P0.05)。生物信息学法分析结果显示PLC-B1为miR-124-3p潜在靶基因;PLC-B1、IP3R-1 mRNA相对表达量,model组较control组均下降(P0.05),YD-lo组较model组均无差异(P0.05),YD-hi组较model组均升高(P0.05);双荧光报告基因实验验证PLC-B1为miR-124-3p靶基因;相较control组,转染miR-124-3p mimics后,PLC-B1、IP3R的mRNA及蛋白表达量均明显降低(P0.05),转染miR-124-3p inhibtor后,PLC-B1、IP3R的mRNA及蛋白表达量均无变化(P0.05);益气化浊汤可减少转染miR-124-3p mimics后ISD-INS-1细胞PLC-B1、IP3R基因及蛋白表达量的降低(P0.05)。结论:益气化浊汤能促进ISD-INS-1细胞胰岛素分泌;miR-124-3p过表达是INS-1细胞胰岛素分泌下降的机制之一;益气化浊汤可通过下调ISD-INS-1细胞miR-124-3p表达,增加PLC-B1表达,减少它对PLC-B1/IP3R通路的抑制,改善胰岛素分泌。     

miR-140-5p通过NF-κB通路调控人骨关节炎软骨细胞自噬的研究

目的探讨miR-140-5p在正常和骨关节炎软骨细胞中的表达情况及其在骨关节炎发病机制中的作用。方法①通过定量实时聚合酶链反应(RT-qPCR)检测骨关节炎软骨细胞和正常软骨细胞中miR-140-5p和基质金属蛋白酶13(MMP-13)表达水平。②将软骨细胞分为3组,对照组加入白细胞介素-1β(IL-1β)培养,miR-140-5p mimic组同时转染miR-140-5p mimic,miR-140-5p inhibitor组同时转染miR-140-5p inhibitor。采用MTT法检测各组软骨细胞增殖情况,采用RT-qPCR和Western blot法检测各组MMP-13、 Beclin-1、ATG7和NF-κB信号通路中NF-κBp65表达情况。结果骨关节炎软骨细胞中miR-140-5p相对表达水平较正常软骨细胞中显著降低(P0.05),MMP-13相对表达水平较正常软骨细胞中显著增高(P0.05)。与对照组比较,miR-140-5p mimic组软骨细胞增殖明显,miR-140-5p inhibitor组软骨细胞增殖明显受到抑制。与对照组比较, miR-140-5p mimic组软骨细胞中MMP-13、NF-κBp65mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P均0.05),而miR-140-5p inhibitor组均明显升高(P均0.05); miR-140-5p mimic组软骨细胞中Beclin-1和ATG7mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P均0.05),而miR-140-5p inhibitor组均明显降低(P均0.05)。结论 miR-140-5p能够通过抑制NF-κB信号通路促进骨关节炎软骨细胞的增殖和自噬,延缓骨关节炎的进展,为探索靶向miR-140-5p治疗骨关节炎提供了一定参考。     

苦木碱F通过miR-331-3p调控宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨苦木碱F调控miR-331-3p在宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡中的作用及机制。方法:MTT法检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响; 流式细胞术检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响; RT-qPCR检测苦木碱F处理HeLa细胞后miR-331-3p的表达; miR-331-3p mimic或miR-331-3p inhibitor 转染HeLa细胞,经苦木碱F处理后检测HeLa细胞的增殖及凋亡情况; 使用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-331-3p与蛋白酶体活化复合物3(PSME3)的靶向关系; Western blot检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白表达情况。结果:苦木碱F能显著抑制HeLa细胞增殖,促进凋亡,且具有浓度依赖性(P<0.01); 苦木碱F显著上调HeLa细胞中miR-331-3p的表达(P<0.01); miR-331-3p mimic能显著抑制HeLa细胞增殖能力,促进细胞凋亡; miR-331-3p inhibitor能显著降低苦木碱F对HeLa细胞增殖的抑制以及凋亡的促进作用(P<0.05); 生物信息学预测PSME3是miR-331-3p的靶基因之一,双荧光素酶报告基因结果显示miR-331-3p与PSME3 3'UTR靶向结合; 与苦木碱F+NC inhibitor +NC-siRNA组比较,苦木碱F+miR-331-3p inhibitor +NC-siRNA组中细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,β-catenin和Bcl-2蛋白水平升高,Bax蛋白水平降低,而敲低PSME3能逆转这一结果,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦木碱F通过介导miR-331-3p/PSME3轴抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

上调miR-590-3p对胰腺癌细胞侵袭转移的作用及影响机制

目的 观察miR-590-3p基因表达对人胰腺癌Capan-2细胞侵袭转移能力的影响。方法 人胰腺癌Capan-2细胞分为两组：阴性对照组（NC组）及转染miR-590-3p mimics组（miR-590-3p mimics组）。采用qRT-PCR法检测正常胰腺导管上皮细胞hTERT-HPNE以及胰腺癌Capan-2细胞中miR-590-3p的表达,通过流式细胞术检测miR-590-3p对Capan-2细胞凋亡的影响,通过MTT实验检测miR-590-3p对Capan-2细胞增殖的影响,通过划痕实验检测细胞迁移能力的变化,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化,采用Western blot法检测AKT/mTOR通路相关蛋白表达变化。结果 胰腺癌Capan-2细胞较正常胰腺导管上皮细胞中miR-590-3p表达水平显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与NC组相比,miR-590-3p mimics组miR-590-3p mRNA表达水平显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）;流式细胞术实验结果显示,与NC组相比,miR-590-3p mimics组细胞...     

款冬花多糖调控miR-889-3p/TLR4对IL-6诱导的乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

[目的] 探讨款冬花多糖对白细胞介素-6（IL-6）诱导的乳腺癌细胞恶性行为作用机制。[方法] IL-6诱导人乳腺癌细胞MCF-7后,不同浓度的款冬花多糖处理。转染miR-NC、miR-889-3p mimics的MCF-7细胞经IL-6处理;转染NC-inhibitor、miR-889-3p-inhibitors的MCF-7细胞经款冬花多糖与IL-6处理;噻唑蓝（MTT）、平板克隆形成以及Transwell^TM实验分析细胞增殖、迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-889-3p、Toll 样受体 4（TLR4）的表达量;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、TLR4蛋白表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-889-3p与TLR4的靶向关系。[结果] 款冬花多糖可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖（P＜0.05）、迁移及侵袭能力（P＜0.05）,而提高miR-889-3p的表达（P＜0.05）,呈剂量依赖性;TLR4是miR-889-3p的靶基因,miR-889-3p可靶向调控TLR4的表达;转染miR-889-3p mimics可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭（P＜0.05）;转染miR-889-3p-inhibitors可恢复款冬花多糖对IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭。[结论] 款冬花多糖可通过调节miR-889-3p/TLR4表达而抑制IL-6诱导的乳腺癌细胞恶性行为。     

葛根素通过circ-TLK1/miR-367-3p/TLR4抑制SK-N-SH细胞氧糖剥夺损伤

目的探讨葛根素对缺血性脑卒中(ischemicstroke,IS)神经细胞损伤的保护作用及机制。方法建立氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)诱导的人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH损伤模型,以葛根素进行干预,采用q RT-PCR法检测细胞circ-丝氨酸/苏氨酸蛋白扰动样激酶1(tousled-like kinase1,TLK1)和miR-367-3p mRNA表达情况;采用MTT法检测细胞存活率;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用Western blotting检测细胞Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)蛋白表达情况。采用生物信息学在线软件预测miR-367-3p与circ-TLK1、TLR4之间的靶向关系;采用双荧光素酶标记实验和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)实验验证靶向结合关系。结果与模型组比较,葛根素能够明显提高OGD诱导的SK-N-SH细胞存活率(P0.05、0.01、0.001),显著降低细胞凋亡率(P0.01、0.001),显著降低IL-6和TNF-α水平(P0.01、0.001)。模型组circ-TLK1 mRNA表达水平显著升高(P0.001),葛根素抑制circ-TLK1 mRNA表达水平(P0.001),过表达circ-TLK1能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P0.01、0.001)。circ-TLK1能够靶向负调控miR-367-3p表达,模型组miR-367-3p mRNA表达水平显著降低(P0.001),葛根素显著上调miR-367-3p m RNA表达水平,抑制miR-367-3p能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P0.05、0.001)。miR-367-3p能够靶向负调控TLR4蛋白表达,模型组TLR4蛋白表达水平显著升高(P0.001),葛根素显著下调TLR4蛋白表达水平(P0.001),过表达TLR4能够逆转葛根素对OGD诱导的SK-N-SH细胞损伤保护作用(P0.05、0.001)。circ-TLK1能够通过结合miR-367-3p调控TLR4表达。结论葛根素能够通过作用于circ-TLK1/miR-367-3p/TLR4对IS神经细胞损伤起到保护作用。     

獐牙菜苦苷通过调控miR-351-5p表达对6-羟基多巴胺诱导PC12细胞帕金森模型损伤的影响

目的 探讨獐牙菜苦苷对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导PC12细胞损伤的影响及其分子机制。方法 以100μmol/L 6-OHDA处理PC12细胞建立帕金森病细胞模型,将PC12细胞分为对照组、6-OHDA组、獐牙菜苦苷低、中、高剂量组(30、60、120μmol/L)、anti-miR-NC组、anti-miR-351-5p组、獐牙菜苦苷(120μmol/L)+miR-NC组、獐牙菜苦苷(120μmol/L)+miR-351-5p组。MTT法检测细胞存活率,采用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达,RT-qPCR法检测miR-351-5p表达。结果 与对照组比较,6-OHDA组PC12细胞存活率、SOD活性、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),LDH活性、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白表达升高(P<0.05),miR-351-5p表达升高(P<0.05);与6-OHDA组比较,獐牙菜苦苷处理或干扰miR-351-5p表达可升高PC12细胞...     

熊果酸调控外泌体介导的miR-155-5p保护脓毒症大鼠心肌组织的作用研究＊

目的 研究熊果酸通过外泌体介导微小核糖核酸-155-5p（micro ribonucleic acid-155-5p，miR-155-5p）对脓毒症大鼠心肌的保护作用。方法 从60只SD雄鼠中随机挑出50只为建模大鼠，通过腹腔注射内毒素（lipopolysaccharide，LPS）法建立脓毒症大鼠模型。余下10只为正常对照组。将建模成功大鼠随机分为5组，熊果酸高、中、低剂量组、GW4869组、模型组。熊果酸高、中、低剂量组腹腔注射5 mg/kg LPS+50%二甲基亚砜（dimethylsurfoxide，DMSO）后立即尾静脉注射熊果酸120、80、40 mg/kg+50% DMSO混合液；GW4869组腹腔注射5 mg/kg LPS+50% DMSO后立即尾静脉注射鞘磷脂酶抑制剂GW4869 2.5 μg/g+50% DMSO混合液；模型组大鼠腹腔注射5 mg/kg LPS+50% DMSO后，尾静脉注射等体积生理盐水；正常对照组仅腹腔注射等体积生理盐水后，尾静脉注射等体积生理盐水。另将各组外泌体与原代培养乳鼠心肌细胞共培养，设置未加外泌体仅加入等体积PBS的心肌细胞为PBS对照组；通过脂质体转染技术将miR-155-5p minic转染至大鼠心肌细胞，将转染miR-155-5p心肌细胞与动物实验中各组外泌体共培养24 h，另设置未转染miR-155-5p minic且不加外泌体仅加入等体积PBS的心肌细胞为PBS对照组，仅转染miR-155-5p minic且不加外泌体的心肌细胞为miRNA-155-5p minic转染组和GW4869+熊果酸+miR-155-5p minic组（其中熊果酸分别设置低、中、高剂量）。结果 模型组和GW4869组大鼠心肌细胞出现明显空泡样变、核肿胀，组织水肿明显，可见明显炎性浸润，熊果酸3剂量组大鼠心肌组织病变均出现好转；各组均从外周血中分离出外泌体；模型组和熊果酸3剂量组外泌体中miR155-5p表达水平均高于正常对照组（P<0.05），GW4869组外泌体中miR155-5p表达水平低于正常对照组（P<0.05）；经培养鉴定证实所取细胞为乳鼠心肌细胞；模型组、GW4869组、熊果酸3剂量组白介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、白介素6（interleukin-6，IL-6）水平均高于磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）对照组和正常对照组（P<0.05），熊果酸3剂量组上述指标水平均低于模型组和GW4869组（P<0.05）；miR-155-5p minic转染乳鼠心肌细胞后miR-155-5p minic转染组细胞中miR-155-5p表达水平升高（P<0.05）。将各组外泌体与miR-155-5p minic转染后细胞共孵育，GW4869组细胞培养基中IL-1β、IL-6浓度均高于其余各组（P<0.05），模型组+miR-155-5p minic均高于miR-155-5p minic转染组（P<0.05），GW4869+熊果酸高剂量+miR-155-5p minic组与miR-155-5p minic转染组差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 熊果酸可改善脓毒症大鼠心肌病变，且可通过抑制外泌体中miR-155-5p表达水平，抑制心肌细胞炎症反应。     

温郁金提取物抑制miR-103a表达对MPP+诱导的SK-N-SH 细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨温郁金提取物是否通过抑制微小RNA (miRNA)-103a的表达影响帕金森细胞的增殖与凋亡。方法:将SK-N-SH细胞分为对照组、模型组、温郁金提取物低、中、高剂量组(以下简称低、中、高剂量组)、miR-103a组、miR-NC组、高剂量+miR-NC组、高剂量+miR-103a组。对照组不作处理,模型组及低、中、高剂量组给予1-甲基4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导,低、中、高剂量组分别给予8、16、24μg/mL的温郁金提取物。miR-103a组转染miR-103a mimic并给予MPP+,miR-NC组转染miR-103a mimic阴性对照(miR-NC)并给予MPP+,高剂量+miR-NC组转染miR-NC并给予24μg/mL温郁金提取物,高剂量+miR-103a组转染miR-103a mimic并给予24μg/mL温郁金提取物。流式细胞术检测各组细胞周期与凋亡,蛋白免疫印迹试验检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3 (Caspase3)、细胞核相关抗原Ki-67蛋白表达,比色法检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测miR-103a表达。结果:与对照组比较,模型组细胞G0-G1期细胞比例、细胞凋亡率、Caspase3蛋白表达、miR-103a表达及MDA含量增加(P0.05),S期细胞比例、Ki-67蛋白表达、GSH-Px活性减少(P0.05)。与模型组比较,中、高剂量组G0-G1期细胞比例、细胞凋亡率、Caspase3蛋白表达、miR-103a表达及MDA含量减少(P0.05),S期细胞比例、Ki-67蛋白表达、GSH-Px活性增加(P0.05),且呈浓度依赖性(P0.05)。与miR-NC组比较,miR-103a组细胞G0-G1期细胞比例、细胞凋亡率、Caspase3蛋白表达、miR-103a表达及MDA含量增加(P0.05),S期细胞比例、Ki-67蛋白表达、GSH-Px活性减少(P0.05)。与高剂量+miR-NC组比较,高剂量+miR-103a组细胞G0-G1期细胞比例、细胞凋亡率、Caspase3蛋白表达、miR-103a表达及MDA含量增加(P0.05),S期细胞比例、Ki-67蛋白表达、GSH-Px活性减少(P0.05)。结论:温郁金提取物可通过下调miR-103a表达,促进MPP+诱导的SK-N-SH细胞增殖,抑制其凋亡并减轻氧化应激。     

养正散结汤调控miR-7/EGFR表达抑制胃癌细胞增殖

目的探讨养正散结汤(YZSJD)对胃癌细胞微小RNA(miRNA)表达谱的影响及YZSJD通过调控miRNA发挥抑制胃癌细胞增殖作用可能的分子机制。方法 SD大鼠灌胃YZSJD(16.4 g·kg~(-1)),每日1次,连续7 d,制备大鼠含药血清。AGS、SGC-7901、HS-746T、MKN-45胃癌细胞给予10%YZSJD大鼠含药血清干预;miRNA芯片检测胃癌细胞的miRNA表达情况;qRT-PCR法检测胃癌细胞miR-7表达。MKN-45细胞转染miR-7 mimic、miR-7 inhibitor后,采用CCK-8法检测细胞增殖;Western Blot法检测MKN-45细胞表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达。结果 YZSJD干预后,胃癌细胞miRNA表达谱发生显著改变,促癌性miRNA发生下调,抑癌性miRNA显著上调。与对照组比较,AGS、SGC-7901、HS-746T和MKN-45胃癌细胞中药组的miR-7相对表达量显著上调,差异均有统计学意义(P0.05)。与阴性对照组比较,miR-7 mimic能够显著上调MKN-45细胞的miR-7表达,差异有统计学意义(P0.05);胃癌细胞MKN-45在转染miR-7 mimic 48,72,96 h后,细胞增殖抑制率显著下调,差异均有统计学意义(P0.05);在转染miR-7 inhibitor 72,96 h后,细胞增殖促进率显著上调,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,中药组的MKN-45细胞EGFR蛋白相对表达水平明显下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论中药复方YZSJD能影响胃癌细胞miRNA表达谱,其可能通过调节miR-7/EGFR表达发挥抑制胃癌细胞增殖的作用。     

蒲公英提取物对类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨蒲公英提取物对类风湿性关节炎成纤维样滑膜(FLS)细胞增殖、凋亡及炎症的影响及其可能作用机制。方法:原代分离培养类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞，不同浓度的蒲公英提取物处理成纤维样滑膜细胞，检测细胞增殖、凋亡及IL-6、TNF-α;qRT-PCR法检测miR-708-5p的表达量；miR-NC、miR-708-5p mimics分别转染至成纤维样滑膜细胞，anti-miR-NC、anti-miR-708-5p分别转染至成纤维样滑膜细胞后加入5 mg/mL蒲公英提取物培养细胞，检测细胞增殖、凋亡及IL-6、TNF-α。结果:蒲公英提取物处理后细胞活力和IL-6、TNF-α的水平降低(P<0.05),miR-708-5p的表达量、细胞凋亡率升高(P<0.05);转染miR-708-5p mimics可降低细胞活力和IL-6、TNF-α的水平(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);转染anti-miR-708-5p可减弱蒲公英提取物对成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡及炎症反应的作用。结论:蒲公英提取物可通过促进miR-708-5p表达而抑制类风湿性关节炎成...     

miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧致SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

目的观察miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中的作用并从炎症/凋亡途径探讨其机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、OGD/R组、OGD/R+miR-204-5p mimic组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor组、OGD/R+miR-204-5p mimic negative control组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor negative control组。采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术、TUNEL染色法检测细胞凋亡、酶联免疫法检测炎症因子(IL-10、IL-1β、TNF-α、PGE2)含量、qRT-PCR检测miR-204-5p的表达、western blot检测炎症及凋亡相关蛋白(COX-2、Bcl-2、Bax)的表达。结果与对照组相比,OGD/R组细胞miR-204-5p表达显著降低,IL-1β、TNF-α、PGE2含量增多,IL-10含量减少,COX-2、Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,细胞损伤明显加重;与OGD/R组比较,miR-204-5p mimic下调COX-2、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,IL-10含量增加,IL-1β、TNF-α、PGE2含量减少,细胞活力明显增加、凋亡率显著降低,细胞损伤减轻。结论 miR-204-5p对OGD/R致SH-SY5Y细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻细胞炎症和凋亡有关。     

葛根芩连汤调控微RNA-542-3p对溃疡性结肠炎的保护机制

目的:探讨葛根芩连汤上调微RNA-542-3p(miR-542-3p)表达保护溃疡性结肠炎(UC)大鼠的机制研究。方法:选取8~10周龄SD大鼠经UC造模及鉴定后分成模型组、美沙拉嗪组、葛根芩连汤低剂量、中剂量、高剂量组,同批次等体质量健康大鼠作为空白对照组,每组16只。UC结肠细胞进入对数生长期后消化传代至24孔板培养,每孔加入2×105个细胞,用Lipofectamine 3000转染miR-NC、miR-542-3p、anti-miR-NC、anti-miR-542-3p质粒至UC大鼠结肠上皮细胞并分组,miR-NC、miR-542-3p组细胞经含10%生理盐水处理24 h,而anti-miR-NC、anti-miR-542-3p组用含10%葛根芩连汤处理24 h,处理结束后分析细胞上清液炎症介质和氧化应激相关指标的变化。酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测大鼠结肠组织和细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)含量;化学比色法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-542-3p表达水平。结果:与模型组比较,葛根芩连汤中剂量、高剂量组TNF-α、IL-6、IL-8含量显著降低(P<0.05)。与模型组比较,葛根芩连汤中剂量、高剂量组MDA水平显著降低,SOD、GSH-PX水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,葛根芩连汤中、高剂量组miR-542-3p表达水平显著升高(P<0.05)。与UC+miR-NC组比较,UC+miR-542-3p组细胞miR-542-3p表达水平显著升高;TNF-α、IL-6、IL-8含量显著降低;MDA水平显著降低以及SOD、GSH-Px水平显著升高(P<0.05)。与UC+anti-miR-NC+葛根芩连汤组比较,UC+anti-miR-542-3p+葛根芩连汤组细胞miR-542-3p表达水平显著降低;TNF-α、IL-6、IL-8含量显著升高;MDA水平显著升高以及SOD、GSH-Px水平显著降低(P<0.05)。结论:葛根芩连汤上调miR-542-3p表达保护UC大鼠,消除肠道炎症。     

马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响

目的 研究马钱苷联合miR-3619-5p靶向迁移侵袭增强因子1(migration and invasion enhancer 1,MIEN1)对宫颈癌SiHa细胞迁移和凋亡的影响。方法 采用qRT-PCR法检测宫颈癌SiHa、Hela、CasKi细胞和正常宫颈上皮Ect1/E6E7细胞中miR-3619-5p m RNA表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-3619-5p mimics上调miR-3619-5p的表达,给予马钱苷处理,采用CCK-8法分析细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡;Transwell小室分析细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blotting法分析剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved cystein-asparate protease-3,cleaved Caspase-3)和基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotease-2,MMP-2)蛋白表达。生物信息学软件预测miR-3619-5p的靶基因,利用荧光素酶报告系统鉴定二者的靶向关系。在宫颈癌SiHa细胞中共转染miR-3619-5p mimics和MIEN1过表达载体...     

miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧致SH-SY5Y细胞损伤中的作用研究

目的观察miR-204-5p在氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)致人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中的作用并从炎症/凋亡途径探讨其机制。方法 SH-SY5Y细胞分为control组、OGD/R组、OGD/R+miR-204-5p mimic组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor组、OGD/R+miR-204-5p mimic negative control组、OGD/R+miR-204-5p inhibitor negative control组。采用MTT法测定细胞增殖、流式细胞术、TUNEL染色法检测细胞凋亡、酶联免疫法检测炎症因子(IL-10、IL-1β、TNF-α、PGE2)含量、qRT-PCR检测miR-204-5p的表达、western blot检测炎症及凋亡相关蛋白(COX-2、Bcl-2、Bax)的表达。结果与对照组相比,OGD/R组细胞miR-204-5p表达显著降低,IL-1β、TNF-α、PGE2含量增多,IL-10含量减少,COX-2、Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白水平下降,细胞损伤明显加重;与OGD/R组比较,miR-204-5p mimic下调COX-2、Bax蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,IL-10含量增加,IL-1β、TNF-α、PGE2含量减少,细胞活力明显增加、凋亡率显著降低,细胞损伤减轻。结论 miR-204-5p对OGD/R致SH-SY5Y细胞损伤具有明显保护作用,其机制可能与减轻细胞炎症和凋亡有关。     

雪松醇调节miR-503-5p/TCF3轴对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

[目的]探讨雪松醇调节miR-503-5p/T细胞因子3(TCF3)轴对乳腺癌（BC）细胞增殖、迁移和侵袭的影响。[方法]实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测BC组织和细胞中miR-503-5p及TCF3蛋白表达水平;以不同浓度的雪松醇（0、14、28、56、112、225μmol/L）干预MCF7细胞,噻唑蓝比色法（MTT）法检测细胞增殖情况;将MCF7细胞分为：control组（正常培养）、雪松醇组（112μmol/L）、inhibitor-NC（转染inhibitor-NC）、miR-503-5p inhibitor组（转染miR-503-5p inhibitor）。qRT-PCR检测细胞中miR-503-5p的表达水平;MTT法与胸腺嘧啶核苷类似物（Edu）染色和Transwell小室分别检测细胞增殖、迁移和侵袭;蛋白免疫印迹（Western blot）方法检测增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、TCF3蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-503-5p和TCF3的靶向关系;小鼠体内肿...     

安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及Tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察安神定志方对阿尔茨海默病细胞模型miR-103a-3p及其介导的Tau蛋白磷酸化的影响，探讨其可能作用机制。方法 采用β淀粉样蛋白_25-35诱导PC12细胞构建阿尔茨海默病体外模型，将细胞分为空白组、模型组、安神定志方组、过表达组和安神定志方+过表达组(联合组)，采用安神定志方含药血清和miR-103a-3p模拟剂进行干预。流式细胞仪检测细胞凋亡，试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量，RT-qPCR检测细胞miR-103a-3p mRNA表达，Western blot检测细胞脑源性神经营养因子(BDNF)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、p-TrkB、Tau、p-Tau蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组PC12细胞各时点细胞活力明显降低，凋亡率明显增加，LDH活性和MDA含量明显增加，SOD和GSH-Px活性明显降低，miR-103a-3p mRNA表达明显升高，p-Tau蛋白表达明显升高，BDNF、p-TrkB蛋白表达明显降低(P<0.01)；与模型组比较...     

黄芪甲苷调控miR-17-5p与PCSK9/VLDLR信号通路抗动脉粥样硬化的分子机制研究

为了研究黄芪甲苷对miR-17-5p及其下游前蛋白转化酶枯草溶菌素(proprotein convertase subtillisin/kexin type 9,PCSK9)/极低密度脂蛋白受体(very low density lipoprotein receptor,VLDLR)信号通路的调控作用,探索黄芪甲苷抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的可能作用机制。在细胞实验中通过加入氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)构建血管内皮细胞损伤模型,根据干预方法不同将细胞分为模型组、miR-17-5p抑制剂组、空白血清组、黄芪甲苷含药血清组;干预后检测各组细胞活性,细胞miR-17-5p、VLDLR和PCSK9 mRNA及蛋白表达。在动物实验中将15只C57BL/6小鼠作为对照组,将45只ApoE^-/-小鼠分为模型组、miR-17-5p抑制剂组、黄芪甲苷组,每组15只;干预8周后检测小鼠外周血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,检测小鼠主动脉miR-17-5p、VLDLR和PCSK9 mRNA表达水平,观察各组小鼠病理学改变。细胞实验结果显示,与模型组相比,miR-17-5p抑制剂组、黄芪甲苷含药血清组VSMC细胞活性均明显较高(P<0.05);与模型组相比,miR-17-5p抑制剂组、黄芪甲苷含药血清组VSMC细胞的miR-17-5p和VLDLR mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05),VSMC细胞的PCSK9 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。动物实验结果显示,与模型组相比,miR-17-5p抑制剂组和黄芪甲苷组外周血清中IL-6和TNF-α水平均明显降低(P<0.05),血清中IL-10水平均明显升高(P<0.05);与模型组相比,miR-17-5p抑制剂组、黄芪甲苷组主动脉miR-17-5p和VLDLR mRNA水平均明显降低(P<0.05),PCSK9 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);病理学观察发现miR-17-5p抑制剂组和黄芪甲苷组AS程度降轻。综上所述,黄芪甲苷能够防治AS的发生发展,其作用机制可能与靶向调控miR-17-5p影响PCSK9/VLDLR信号通路,抑制血管炎性反应,减轻内皮细胞损伤有关。     

miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin轴与胃癌临床特征的关联性及益气化瘀解毒方抑制上皮间质转化的机制

目的：明确miR-27a-3p/RCBTB1/β-catenin与胃癌临床特征的关系,探讨益气化瘀解毒方抑制胃癌上皮间质转化（EMT）的作用机制。方法：生物信息学分析miR-27a-3p、RCBTB1在胃癌中的表达与临床意义;高通量测序检测小鼠肝转移瘤组织内mRNA表达差异;质粒转染构建沉默或过表达miR-27a-3p、RCBTB1的稳定细胞株;Transwell、划痕实验检测胃癌细胞侵袭迁移能力的改变;脾脏注射MFC细胞建立小鼠胃癌肝转移模型并以益气化瘀解毒方干预,检测肝转移瘤数量,苏木精-伊红染色（HE）染色法检测胃癌细胞肝脏浸润情况;RT-PCR、Western Blot检测miR-27a-3p、RCBTB1、β-catenin、E-cadherin、Snail的表达。结果：miR-27a-3p在胃癌组织中较正常组织升高（P<0.01）,且Ⅳ期胃癌组织中miR-27a-3p表达较Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期增高（P<0.05）。与对照组比较,miR-27a-3p过表达组胃癌细胞侵袭迁移能力增强,miR-27a-3p沉默组细胞侵袭性减弱（P<0.01）。高通量测序显示,益气化瘀解...