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1.
目的:建立简便、稳定的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分离和培养方法。方法:采用胰蛋白酶/胶原酶(1∶1,V∶V) 混合酶液灌注消化揉搓方法分离获得HUVECs,简化完全培养液的组成成分(不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子),以含20%的胎牛血清(FBS) M199液进行培养;采用细胞形态学和Ⅷ因子免疫组织化学染色法及荧光DiI-Ac-LDL法进行鉴定。结果:接种培养的血管内皮细胞(VECs)4 h开始铺展贴壁,3~7 d生长最快,8~10 d汇合呈单层“铺路石”样外观,免疫组织化学染色法和荧光法鉴定纯度达95%以上。结论:混合酶液灌注消化揉搓方法获得了足够数目和纯度的VECs ,保持了细胞的同源同代性。  相似文献   

2.
人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定   总被引:6,自引:0,他引:6  
目的 探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法 ,建立血管内皮细胞培养模型 ,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法 采用胶原酶Ⅱ灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞 ,当原代培养细胞 80 %以上汇合后 ,用胰蛋白酶消化传代 ;根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和分泌蛋白流式细胞术 (FM术 )免疫荧光检查对细胞进行鉴定。结果 种植在培养瓶中的内皮细胞 12小时贴壁生长 ,48~ 72小时生长最快 ,7~ 10天汇合。内皮细胞呈接触抑制生长、呈鹅卵石样外观 ,FM术检测CD3 1和VⅢ -R -Ag均为阳性表达。 结论 消化酶灌注脐静脉消化内皮细胞是获取血管内皮细胞的一种好方法 ,可靠性大 ,成功率高 ,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型  相似文献   

3.
目的:建立体外培养原代人脐静脉内皮细胞的方法及体外模拟自然生理剪切力条件下白细胞流动体系.方法:采用胶原酶、胰蛋白酶联合消化法培养人脐静脉内皮细胞,根据细胞生长特点、形态特征、免疫荧光对细胞进行鉴定,并通过体外层流体系观察白细胞和人脐静脉内皮细胞的相互作用.结果:种植在培养瓶中的内皮细胞4h贴壁生长,48~72 h生长最快,5~7 d汇合.内皮细胞呈接触抑制生长、呈鹅卵石样外观,VWF相关抗原检测为阳性.人脐静脉内皮细胞经凝血酶刺激后,内皮细胞表面表达P-选择素并可以介导白细胞在其表面滚动.讨论:形态学及免疫学鉴定结果表明培养细胞为人脐静脉内皮细胞,体外层流体系的建立为以后研究工作奠定了基础.  相似文献   

4.
目的:探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法,建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法:采用0.1%Ⅱ型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于M199培养基(含15%胎牛血清,促内皮生长因子1%,青霉素100u/ml,链霉素100mg/ml)内培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化传代,并以倒置光显微镜观察内皮细胞生长情况,以免疫荧光方法对内皮细胞进行鉴定。结果:原代培养细胞在接种2h后开始贴壁生长,倒置光显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排列,免疫荧光显示细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原阳性。结论:用胶原酶灌注消化脐静脉是获得内皮细胞的一种较可靠的方法。  相似文献   

5.
目的:摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法:采用0.25%胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,用含20%FBS的DMEM培养基培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果:原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3~5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论:用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。  相似文献   

6.
目的 :建立血管内皮细胞培养模型 ,为体外研究血管内皮细胞提供重要的实验手段。方法 :用 0 .2 5%的胰蛋白酶消化、分离人脐静脉内皮细胞 ,种植在培养板中 ,观察其生长情况 ,且用间接酶免法及电镜下进行内皮细胞鉴定。结果 :种植在培养板中的内皮细胞 4h开始贴壁生长 ,48~ 72 h生长最快 ,7~ 1 0 d呈多角形。内皮细胞胞浆中有 VWF相关抗原和电镜下可见胞浆中有W- P小体 ,可确定培养的细胞为血管内皮细胞。结论 :用胰酶灌注脐静脉消化内皮细胞是获得血管内皮细胞的一种好方法 ,获得细胞数量多、成活率高。  相似文献   

7.
人脐静脉血管内皮细胞的培养和鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的: 建立血管内皮细胞体外培养的模型,为研究内皮细胞提供重要的实验方法.方法: 采用0.1%I型胶原酶消化灌注脐静脉,在37 ℃水浴箱内孵育18~20 min,离心后向沉淀内加入L-DMEM培养液(含10 mg/L内皮细胞生长因子),吹打成单细胞悬液,放入预铺1.5%明胶的培养瓶内,在CO2培养箱中培养,48 h后换液1次,以后每2~3 d换液1次,每天在倒置相差显微镜下观察细胞,免疫组织化学法进行Ⅷ因子相关抗原鉴定.结果: 经胶原酶消化法获得的细胞经过镜下观察和Ⅷ因子相关抗原鉴定证明是脐静脉内皮细胞.结论: 用胶原酶消化法是获得血管内皮细胞的一种好方法,获得的细胞数量多、成活率高.  相似文献   

8.
目的研究人脐静脉内皮细胞的体外培养方法,并进行细胞鉴定。方法胰蛋白酶灌流消化法收集人脐静脉内皮细胞,加入DMEM/F12混合培养基,37℃5%CO2培养箱中培养,观察细胞形态及生长状况,近融合时消化传代培养。采用形态学观察和CD34免疫组化法进行细胞鉴定。结果原代培养的人脐静脉内皮细胞约于24h完全贴壁,4~5d后融合成单层铺路石样结构。CD34染色证实培养的细胞是人脐静脉内皮细胞。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得大量连续传代扩增的人脐静脉内皮细胞。  相似文献   

9.
目的:摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法:采用0.25%胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,含20%FBSDMEM养基培养,待细胞80%融合后,以O.25%胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果:原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3-5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论:用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。  相似文献   

10.
人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法,提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带(至少20 cm)冲净淤血,采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液,一根用0.2%胶原酶Ⅱ,另一根用0.1%胶原酶Ⅰ和0.25%胰酶等比混合消化液,比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10 ng/mL的VEGF的培养基中培养,观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点,同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞,胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶,且比较理想的消化时间均为13 min,细胞接种后4~5 h开始贴壁生长,1周左右可生长成单层,光镜下呈多角形,"铺路石"样排列,免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法,而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液,成功率高,可靠性大,可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。  相似文献   

11.
造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展   总被引:2,自引:0,他引:2  
张迦维  陈宝安 《现代医学》2005,33(2):126-128
本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。  相似文献   

12.
随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。  相似文献   

13.
对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。  相似文献   

14.
利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞,并进行传代培养,采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力,并表达神经巢蛋白,分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原,为中枢神经系统的干细胞。  相似文献   

15.
目的:探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法:分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果:空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论:EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。  相似文献   

16.
Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells (hAMSCs). Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco's modified Eagle's medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.  相似文献   

17.
大鼠胃壁细胞的分离及培养   总被引:13,自引:0,他引:13  
目的 完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法 制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果 获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论 此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .  相似文献   

18.
新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记   总被引:2,自引:1,他引:2  
目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞,为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织,用含碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)无血清培养技术培养神经干细胞,免疫组化技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团,并能表达Nestin;荧光染料的标记效率可达93.4%,细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力,荧光染料的标记可获得较高的标记效率,可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。  相似文献   

19.
睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞共培养的初步研究   总被引:2,自引:2,他引:0  
目的 观察睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养时SCs对MSCs扩增的影响. 方法 取雄性SD大鼠睾丸,分离出SCs,取SD大鼠,分离出骨髓MSCs,将两种细胞用"三明治"式的方法共培养7 d. 结果 共培养组的MSCs前四天生长较对照组快,第5天无明显差异,第6和第7天细胞数量迅速减少. 结论 在体外共培养的早期,SCs可以显著促进MSCs的生长,但在后期则反而抑制MSCs的生长,具体原因有待进一步研究.  相似文献   

20.
目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。  相似文献   

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