刺五加皂甙对脑缺血大鼠皮质少突胶质细胞变化的影响

目的观察刺五加皂甙对全脑缺血大鼠皮质少突胶质谱系细胞的影响作用,探讨其对缺血性脑损伤的防护作用机制。方法 70只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组、刺五加皂甙组。采用四血管结扎的全脑缺血模型,制模成功后随机分为脑缺血组、刺五加皂甙组。刺五加皂甙组大鼠按剂量3.0mg/kg腹腔注射;用免疫组织化学法检测皮质少突胶质细胞标记物[2型星形胶质祖细胞标记物B5(A2B5)、少突胶质细胞标记物4(O4)、2’,3’-环核苷酸磷酸水解酶(CNPase)]及髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的变化。结果与假手术组比较,脑缺血大鼠皮质A2B5表达1d时即已增多、1w时显著增多、并持续至1个月;O4、MBP表达于脑缺血1d时显著减少、1w时回升、1个月时恢复至假手术组水平;CNPase阳性表达在脑缺血后1d即显著下降、1w时减少到最低点、1个月时恢复至假手术组水平。与脑缺血组比较,刺五加皂甙组大鼠皮质A2B5表达有不同程度减少,O4、CNPase、MBP表达有不同程度增加。结论刺五加皂甙对少突胶质谱系细胞缺血性反应有保护作用。     

局灶性脑缺血大鼠纹状体区域Shh信号通路成分的表达变化及对髓鞘修复的影响

目的检测Sonic Hedgehog(Shh)信号通路及其转录因子Gli1在局灶性脑缺血后不同时间点的表达变化,探讨该通路对脑缺血后髓鞘再生的影响。方法线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,使用免疫组化和RT-PCR的方法观察脑缺血后1 d,3 d,7 d和14 d Shh,Gli1的表达变化。碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)是髓鞘的组成成分,用作髓鞘的标志物,观察脑缺血后上述各时间点MBP的表达变化。结果正常大鼠Shh和Gli1广泛分布于脑白质和灰质,如皮质,胼胝体和纹状体等区域。Shh和Gli1的表达在脑缺血后3 d~14 d呈逐渐上升趋势。MBP的表达在脑缺血后1 d~28 d逐渐下降。结论脑缺血性损伤可激活Shh信号通路,激活的Shh可能通过调控细胞的增殖参与神经修复,针对Shh的表达量进行干预治疗将为脱髓鞘疾病的治疗提供理论依据。     

大鼠局灶性脑缺血后少突胶质前体细胞激活及髓鞘再生的实验研究

目的探讨脑缺血再灌注大鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)及髓鞘的表达变化。方法线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,免疫组化方法检测脑缺血再灌注后不同时间点1d、1w和2w不同脑区(梗死中心区、梗死周边区和梗死对侧区)OPCs特异性细胞标志物NG2的阳性细胞数及和髓鞘标志物碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达变化。结果脑缺血后梗死中心区NG2阳性细胞数和MBP的表达随着再灌注时间延长而逐渐减少;梗死周边区NG2阳性细胞数在1w～2w增加,MBP的表达在24h～1w内降低,2w恢复到正常水平;梗死对侧区NG2阳性细胞数和MBP的表达无明显变化。梗死周边区OPCs细胞呈"单极"或"双极"分裂状,并从梗死灶的外带迁移到内带,提示OPCs细胞激活、增生并发生迁移。结论脑缺血再灌注后梗死周边区NG2细胞增多,使得一度缺失的成熟少突胶质细胞及髓鞘得到补充,提示NG2细胞可能参与缺血损伤的修复过程。     

局灶脑缺血再灌注后成年大鼠大脑MyT1表达变化

目的 探讨脑缺血再灌注后成年大鼠大脑MyT1表达变化及其意义.方法 以线栓法制作成年SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(阻塞90min再灌注1,7,14d);用免疫荧光组织化学法检测脑缺血再灌注成年大鼠早期大脑梗死中心区、梗死周边区和缺血对侧区MyT1阳性细胞数量.结果 (1)脑缺血再灌注后各时间点梗死中心区MyT1阳性细胞数明显减少;(2)脑缺血再灌注后梗死周边区MyT1阳性细胞数从脑缺血后第1天开始增加;脑缺血后7d和14d时,各组大鼠MyT1阳性细胞增加数较之对照组大鼠有显著的差别.结论 成年SD大鼠脑缺血再灌注后梗死周边区MyT1表达显著增加,可能参与了少突胶质前体细胞的发育过程,调节髓鞘蛋白基因的转录,参与缺血性脑损伤的修复过程.     

脑缺血再灌注模型大鼠神经生长抑制因子Nogo-A的表达变化

目的 研究大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型神经生长抑制因子Nogo-A的表达变化,探讨Nogo-A在神经再生中的作用.方法 36只雄性SD大鼠260-280g,随机分成6组,分别为正常对照组、缺血2h再灌注1d、3d、7d、14d和28d组.免疫组织化学方法观察缺血侧纹状体在上述各时间点Nogo-A阳性细胞的染色情况(n=3).Western Blot方法检测Nogo.A的蛋白表达(n=3).结果 缺血侧纹状体区域Nogo-A阳性表达细胞于再灌注后ld增加,7d回到正常水平,14d再次增加,28d降低.Nogo-A的蛋白表达与免疫组化结果呈现一致的趋势.结论 Nogo-A在腩梗死的早期(14d)表达增加,抑制了神经的再生;后期(28d)减少,提示可能参与了神经组织的修复和可塑性的形成.     

大鼠脑缺血后胼胝体少突胶质细胞变化的特征

目的 观察脑缺血大鼠胼胝体少突胶质谱系细胞的动态变化规律.方法 采用4-VO脑缺血模型,随机分为2d、4d、7d、14d和28d 5个时间点及假手术组,每组8只;用组织芯片免疫组织化学检测胼胝体A2B5、O4、CNPase蛋白表达变化.结果 (1)CNPase阳性细胞于脑缺血后有不同程度减少,2d即明显减少,7d时减少到最低,14d时回升,28d时恢复至假手术组水平;与假手术组比较,脑缺血后2d、4d、7d有显著差异(P＜0.05).(2)O4阳性细胞数于脑缺血后2d时显著减少,4d时回升,28d时恢复至假手术组水平;与假手术组比较,2d、4d有显著差异(P＜0.05).(3)A2B5阳性细胞于脑缺血后随着再灌注时间延长而增加,2d时即已增多,持续至28d时达到高峰;与假手术组比较,7d、14d、28d有显著差异(P＜0.05).结论 脑缺血后OPC反应性增生,未成熟和成熟OLG减少,以未成熟OLG为著;提示未成熟OLG对缺血有易损性,而OPC有耐受性.     

妥泰对围产期缺氧缺血性脑损伤Wistar大鼠海马少突胶质细胞的影响

目的观察妥泰对围产期缺氧缺血性脑损伤Wistar大鼠海马少突胶质细胞的影响。方法夹闭妊娠Wistar大鼠子宫血管,制成围产期急性缺氧缺血性脑损伤模型,治疗组于生后30min内通过胃管给予妥泰,分为1次给药组及5次给药组,观察脑缺血后再灌注7d、14d、21d、28d MBP标记的少突胶质细胞的变化。结果HI对照组新生鼠出生后21d、28d MBP阳性细胞数显著低于正常对照组(P<0.05);妥泰1次治疗组21d、28d MBP阳性细胞数显著高于HI对照组(P<0.05);妥泰5次组14d、21d、28d MBP阳性细胞数显著高于HI对照组,7d、14d、21d显著高于妥泰1次组(P<0.05)。结论妥泰可以明显减少围产期缺氧缺血性脑损伤大鼠成熟少突胶质细胞的死亡及脱髓鞘反应,且多次给药组作用强于单次给药组。     

氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠海马髓鞘及少突胶质细胞系变化初步研究

目的 研究氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠不同时期海马髓鞘损伤及少突胶质细胞系变化.方法 健康成年雄性SD大鼠建立氯化锂-毛果芸香碱慢性癫(痫)模型,分为对照组、急性期组(致(痫)后24 h内)、潜伏期组(致(痫)后2周内)、慢性期组(致(痫)后2个月),各组(均n=4).采用伊文思蓝法检测各组大鼠海马血脑屏障(BBB)通透性改变;免疫荧光染色法检测海马神经元数目、髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平、2',3'-环核苷酸3'-磷酸二酯酶(CNPase)阳性成熟少突胶质细胞数目、未成熟少突胶质细胞标记物(04)表达水平、硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)阳性少突胶质祖细胞数目.结果 大鼠致(痫)后,急性期组、潜伏期组和慢性期组大鼠海马各区域BBB通透性均较对照组增加(P＜0.05),以急性期组增加最为显著.各组大鼠海马不同区域NeuN阳性神经元数目均较对照组显著下降(P＜0.05).潜伏期组和慢性期组海马各区域MBP表达水平及CNPase阳性细胞数目均显著低于对照组(P＜0.05);各组海马CA1、Hilus区O4表达水平及NG2阳性细胞数目均较对照组显著增加(P＜0.05),以潜伏期组增加最为明显.结论 氯化锂-毛果芸香碱致(痫)大鼠海马区BBB通透性增加,未成熟少突胶质细胞和少突胶质祖细胞免疫荧光表达上调,髓鞘及成熟少突胶质细胞存在一定程度损伤.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后MBP、MAG Lingo-1的表达及丁苯酞对其的影响

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织中髓鞘碱性蛋白(MBP)、髓鞘相关糖蛋白(MAG)和Nogo受体作用蛋白-1(Lingo-1)表达情况及丁苯酞(NBP)对其的影响。方法 72只大鼠随机分为对照组、模型组和药物组。通过阻塞大鼠左侧大脑中动脉造成脑缺血2 h后再灌注1 d、3 d、5 d、7 d,建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。药物组大鼠腹腔注射丁苯酞20 mg/(kg·d),2次/d;对照组注射生理盐水。用免疫组化法检测大鼠缺血侧脑皮质MBP、MAG和Lingo-1的表达并测定相应灰度值。结果模型组、药物组较对照组MBP表达减少,MAG及Lingo-1表达增多;药物组较模型组MBP表达增多,MAG表达减少,差异均有统计学意义(P 0. 05);药物组和模型组Lingo-1表达差异无统计学意义(P 0. 05)。结论脑缺血再灌注诱发脑皮质髓鞘损伤,丁苯酞对受损髓鞘有一定保护作用。     

Olig家族研究进展及其与白质损伤的关系

Olig家族是近年来新发现的一种碱性-螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子,它决定少突胶质细胞系的发生,并与少突胶质细胞的成熟密切相关,Olig蛋白的作用受多种基因信号的调控.本文就Olig家族在中枢神经系统发生中的作用及其与脱髓鞘疾病髓鞘修复的关系作一综述.     

人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经元特异性烯醇化酶表达的影响及其意义

目的 探讨人参皂甙Rg1对局灶性脑缺血大鼠脑组织神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达的影响及其意义.方法 给大鼠腹腔注射人参皂甙Rg1 20mg/kg,每日2次,连续5d;然后采用改良的线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,观察大鼠脑缺血后不同时间段(3h、24h、48h、72h)神经功能缺损评分;应用免疫组化法检测脑组织NSE的表达;并与对照组(生理盐水)和假手术组比较.结果 人参皂甙Rg1组大鼠脑缺血后各时间点神经功能缺损评分明显低于对照组(均P＜0.05).与假手术组相比,对照组脑缺血后3h NSE表达即明显降低;人参皂甙Rg1组各时间点NSE阳性细胞数明显多于对照组(均P＜0.01).结论 人参皂甙Rg1可使缺血脑组织的NSE表达上调,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一.     

氯沙坦对局部脑缺血大鼠脑血管紧张素Ⅱ 1型受体mRNA表达的影响

目的研究大鼠局部脑缺血后血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体mRNA(AT1RmRNA)基因的表达及氯沙坦对其影响。方法将36只SD雄性大鼠按时间段随机分为2组(每组各18只),每组再随机分为假手术组、缺血组和氯沙坦用药组3个亚组(每组各6只)。采用尼龙线栓塞大鼠大脑中动脉而造成局部脑缺血模型,应用RTPCR方法检测脑组织缺血24、48h后缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA的表达水平。结果脑缺血24h各组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平无差异(p>0.05);脑缺血48h后与假手术组比较,缺血组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平升高(P均<0.05);而与缺血组比较,氯沙坦用药组缺血侧及非缺血侧大脑皮层AT1RmRNA表达水平降低(P均<0.05),但仍高于假手术组(P均<0.05)。结论氯沙坦能降低局部脑缺血后AT1RmRNA表达水平,AT1R在局部脑缺血中起着重要的作用,它可能成为缺血性脑卒中的一个治疗靶点。     

Thrombin in ischemic neuronal death

Thrombin plays a role in cerebral ischemia as rats subjected to focal cerebral ischemia were protected by the intracerebral injection of hirudin, a selective thrombin inhibitor. To separate the roles of thrombin in cell death and in coagulation, we have used an in vitro approach to test the effect of hirudin and of protease nexin-1 (PN-1), a cerebral thrombin inhibitor, on neuronal ischemia. Rat organotypic hippocampal slice cultures were subjected to oxygen (5%) and glucose (1 mmol/L) deprivation (OGD) during 30 min. Hirudin or PN-1 administered after OGD significantly prevented neuronal death in the CA1 region. After 24 h, there was a marked increase in thrombin immunoreactivity on Western blots. Thrombin therefore contributes to ischemic damage in neural tissue in vitro.     

大鼠局灶性脑缺血损伤中IGF-I mRNA表达

目的　观察局灶性脑缺血损伤中 IGF- I m RNA的表达特点 ,探讨其调控机制。方法　采用自体血凝块注入颈内动脉的方法制作大鼠局灶性脑缺血 2 h、4 h、6 h、12 h、2 4 h、4 8h模型 ,应用原位杂交及 RT- PCR方法 ,检测缺血中心区及半暗带区 IGF- I m RNA的表达。结果　局灶性脑缺血损伤时 ,缺血中心区及半暗带区 IGF- I m R-NA表达增加 ,尤以缺血半暗带区增加明显。结论　 IGF- I对局灶性脑缺血损伤具有保护作用。     

降纤酶对大鼠局灶性脑缺血血管内皮细胞超微结构及内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨降纤酶对缺血性脑水肿病理过程中血脑屏障（BBB）内皮细胞的保护作用以及其对内皮细胞凋亡的影响。方法 选用Wistar雄性大鼠42只，体重250－300g，鼠龄3－4个月，随机分成降纤酶组、盐水对照组和假手术组，参考Longa等方法建立大鼠大脑缺血动物模型，彩和电观察大鼠BBB的超微结构和TUNEL试剂盒检测内皮细胞的凋亡。结果 通过电镜观察发现降纤酶组的毛细血管内皮细胞膜完整，水肿较轻，其损伤程度明显较对照组轻。降纤酶组在缺血6h和缺血24h随缺血时间延长缺血中心区凋亡细胞数量减少，而缺血半影区凋亡细胞数量增加，其凋讯细胞数量明显少于盐水对照组同一时期值。结论 降纤酶对脑缺血的血管内皮细胞及BBB具有明显的保护作用。