β-1,4-半乳糖基转移酶-I在大鼠骨性关节炎模型中滑膜组织表达的意义

背景：观察β-1,4-半乳糖基转移酶-I（β-1,4-GalT-I）在手术诱导的大鼠骨性关节炎模型中的表达情况及细胞定位,并探讨其在OA病理过程中可能的生物学作用。 方法：健康成年SD大鼠90只随机分为三组：OA模型组（40只）、假手术组（40只）和正常组（10只）。采取前交叉韧带切断加内侧半月板前1/3切除法破坏SD大鼠右膝关节稳定性以建立大鼠OA模型。于术后1、2、4、6、10周取实验动物右膝关节的滑膜与软骨组织,并分离获取成纤维样滑膜细胞进行培养,利用real-time PCR检测软骨、滑膜组织及TNF-α刺激成纤维样滑膜细胞后β-1,4-GalT-I在mRNA水平的表达变化;运用Western-blotting和免疫组化检测β-1,4-GalT-I在蛋白水平的表达情况;利用免疫荧光双标法检测β-1,4-GalT-I与巨嗜细胞样滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞、中性粒细胞及TNF-α的定位情况;运用ELISA检测成纤维样滑膜细胞在脂多糖及脂多糖联合β-1,4-GalT-I抗体等刺激下TNF-α的表达情况。 结果：β-1,4-GalT-I mRNA在OA组大鼠的滑膜组织中表现出上调趋势,于术后2w、4w达到高峰;在蛋白水平,β-1,4-GalT-I在OA术后4w组的滑膜组织中达到高峰。但是,β-1,4-GalT-I在软骨组织中的表达未检测到明显差异。在OA滑膜炎症过程中,β-1,4-GalT-I主要表达于巨嗜细胞样滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞和中性粒细胞,并且β-1,4-GalT-I与TNF-α共定位。在体外细胞培养中,成纤维样滑膜细胞中β-1,4-GalT-I的表达与TNF-α刺激呈浓度和时间依赖性。此外,β-1,4-GalT-I抗体可减弱脂多糖刺激成纤维样滑膜细胞产生TNF-α的能力。 结论：β-1,4-GalT-I可能参与了OA的滑膜炎症反应,并在这一过程中发挥重要作用。 [关键词] β-1,4-半乳糖基转移酶-I;骨性关节炎;滑膜炎症;肿瘤坏死因子α;大鼠     

JAK/STAT途径介导Aβ寡聚体诱导小胶质细胞TNF-α的释放

目的 研究β淀粉样蛋白（Aβ）寡聚体对晚期糖基化蛋白相关受体（RAGE）介导小胶质细胞产生炎症反应的影响,分析Janus 激酶/ 信号转导和转录激活子（JAK/STAT）途径与Aβ寡聚体诱导肿瘤坏死因子α（TNF-α）释放的关系。方法 取经过刺激及阻断处理原代培养的小胶质细胞,经酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清液TNF-α的水平。结果 经Aβ寡聚体处理24h后TNF-α表达增加,分别经抗RAGE IgG和AG490预处理后再经Aβ寡聚体处理小胶质细胞,TNF-α释放明显被抑制。 结论 RAGE是Aβ寡聚体诱导小胶质细胞炎症反应的受体,JAK/STAT途径可能参与Aβ寡聚体诱导小胶质细胞TNF-α的释放。     

脑心通对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用

目的 研究脑心通对局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠的保护作用。方法 随机将健康雄性SD大鼠30只分为假手术组（A组）、缺血组（B组）、脑心通治疗组（C组）,每组10只,B组和C组采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫组织化学法和Western blot法检测脑组织中小胶质细胞的激活及人白细胞分化抗原68（CD68）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达。结果 脑缺血灶范围内CD68、TNF-α、IL-1β的表达,B组明显高于A组,C组明显低于B组。结论 脑心通通过抑制脑缺血再灌注损伤后炎症反应,对脑缺血大鼠有一定程度的神经保护作用。     

鞘内注射氟代柠檬酸对骨癌痛大鼠的镇痛作用

目的通过观察鞘内注射氟代柠檬酸（FC）对骨癌痛大鼠机械性痛敏的影响,探讨脊髓胶质细胞在骨癌痛中的作用。方法 （1）20只大鼠分为假手术组和骨癌痛组两组,骨癌痛组分别在注射Walker256细胞后第7、14、21天各处死5只大鼠取腰段脊髓,假手术组术后第7天取腰段L4～L5脊髓,分别测定两组星形胶质细胞标志物胶原纤维酸性蛋白（GFAP）和小胶质细胞标志物补体受体-3单克隆抗体（OX-42）的表达。（2）12只骨癌痛模型大鼠,成功建模置管后第14天随机分为PBS组和FC组两组,鞘内分别注射PBS、FC1nmol（10μl）,在给药前后测定大鼠机械性缩足反射阈值（PWMT）。结果 （1）骨癌痛组与假手术组比较,大鼠脊髓背角星形胶质细胞和小胶质细胞活化明显,平均吸光度值较假手术组显著增加（P〈0.01）。（2）FC组大鼠鞘内注射FC1 nmol后,PWMT较PBS组和给药前显著升高（P〈0.01）。结论脊髓胶质细胞的激活参与了骨癌痛疼痛信息处理过程。     

同型半胱氨酸对神经小胶质细胞IL-1β、IL-6表达的影响

目的：研究同型半胱氨酸（HCY）对神经小胶质细胞（bv-2细胞）白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）表达的影响。方法：在细胞培养液中加入HCY、半胱氨酸（DL-CY）、空白对照组及溶剂对照组干预后,用细胞计数试剂盒（CCK8法）观察各组细胞增殖活性,并用酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定细胞培养上清液IL-1β、IL-6浓度,用实时荧光定量核酸扩增检测系统（QPCR）的方法评价IL-1β、IL-6 mRNA表达改变。结果：实验各组中细胞增殖活性差异均无统计学意义（P＞0.01）,而HCY组IL-1β、IL-6的mRNA表达及上清液中蛋白表达与其他各组相比均有显著增加（P＜0.01）。结论：HCY上调神经小胶质细胞IL-1β、IL-6的表达。     

雪旺氏细胞表达β-1，4半乳糖基转移酶-Ⅰ对神经元轴突生长的影响

为了探讨周围神经雪旺氏细胞中不同β-1，4半乳糖基转移酶-I(β-1，4-galactosyltransferase 1，β-1，4-GalT-I)表达水平对神经元轴突生长的影响，本实验首先构建了正、反义β-1，4-GalT-I表达质粒；然后将构建的不同浓度的正、反义表达质粒超表达于分离、纯化的大鼠雪旺氏细胞；最后将转染的雪旺氏细胞与分离的大鼠背根神经节共培养，根据共培养神经元轴突延伸的数目和面积，分析雪旺氏细胞中不同β-1，4-GalT-I表达水平对神经元轴突生长的影响。结果发现：转染正义β-1，4-GalT-I的雪旺氏细胞能促进共培养神经节轴突的长出和延伸。在一定的转染浓度内，这种促神经生长作用随转染浓度增大而增强，而转染反义β-1，4-GatT-I却有相反的作用。提示周围神经雪旺氏细胞中表达β-1，4-GalT-I可能在维持正常神经的功能和促进损伤神经的修复发挥重要作用。     

NF-KappaB､p38 MAPK和JNK通路在运动神经损伤 引起的大鼠病理性疼痛中的作用及机制

 【目的】 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活的下游信号转导途径-核转录因子kappaB (NF-κB)､ JNK和p38 MAPK是否参与运动神经损伤引起的大鼠病理性疼痛的形成,并探讨其可能机制｡【方法】 采用痛行为学测试和免疫荧光组织化学方法,观察鞘内注射NF-κB 抑制剂(PDTC)､ p38 MAPK 抑制剂(SB203580)和JNK 抑制剂(SP600125)对腰5脊神经前根切断(L5-VRT)大鼠机械性痛过敏及腰5背根神经节(DRG)内电压门控钠通道(Nav1.3)表达的影响｡ 【结果】 ①L5-VRT术前应用NF-κB抑制剂PDTC可完全抑制大鼠双侧机械性痛过敏的形成,并阻断同侧L5 DRG内Nav1.3的上调;②术前应用p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125主要抑制大鼠对侧后肢的机械性痛过敏;对手术同侧DRG内Nav1.3的表达,SB203580和SP600125分别具有完全阻断和部分阻断作用;③术后7 d给予PDTC或SB203580或SP600125对已形成的大鼠机械性痛过敏均无影响｡ 【结论】 运动神经损伤可能通过NF-κB､ p38 MAPK和JNK途径调控未损伤DRG神经元内Nav1.3的表达从而进一步调控L5-VRT引起的大鼠后肢机械性痛过敏｡     

长期口服复方尼尔雌醇和小剂量17β-雌二醇对去卵巢大鼠海马结构内神经生长因子表达的影响

目的：观察长期雌激素缺乏大鼠海马结构内神经生长因子（NGF）表达的变化，同时比较长期口服复方尼尔雌醇和小剂量17β-雌二醇对去卵巢大鼠海马结构内NGF表达的作用。方法：7月龄SD大鼠按体重随机分成5组：正常对照组、假手术组(SHAM)、去卵巢组(OVX)、17β-雌二醇预防干预组(OVX/ERT)和复方尼尔雌醇预防干预组(OVX/NL)。5组均在去卵巢后35周处死。用免疫组织化学的方法（SABC法）显示老年大鼠海马结构内NGF的表达，细胞计数及图像分析法观察去卵巢大鼠海马结构内NGF表达的变化。结果：正常组、SHAM组、OVX/ERT组、OVX/NL组海马结构内的各亚区均可见较多NGF阳性神经元。OVX组海马结构内各亚区NGF阳性神经元较少。OVX组海马结构内各亚区NGF阳性神经元数量和平均光密度均低于其它4组（P<0.05）。结论：长期雌激素缺乏将导致大鼠海马结构内NGF表达的下降，长期口服小剂量17β-雌二醇和复方尼尔雌醇补充治疗有利于去卵巢大鼠海马结构内神经元NGF的正常表达，从而发挥雌激素的神经营养作用。复方尼尔雌醇获得了与小剂量17β-雌二醇相同的效果。     

TNF-α 通过 p38 丝裂原活化蛋白激酶信号通路对小胶质细胞HMGB1 表达的调控作用

目的：观察P38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580对 TNF-α诱导的原代培养大鼠小胶质细胞高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)表达的影响。方法： 采用原代培养大鼠小胶质细胞,设立对照组、TNF-α组(25 ng/mL)、TNF-α(25 ng/mL)+SB 203580组(10 μmol/L)、SB 203580组(10 μmol/L),各组细胞经药物处理16 h后分别用ELISA法检测细胞培养上清中HMGB1的表达情况,Western 印迹检测细胞HMGB1和磷酸化p38MAPK表达情况,用反转录PCR检测HMGB1 mRNA表达。结果：经TNF-α刺激 后,大鼠小胶质细胞及其培养上清液中HMGB1蛋白表达增高;SB 203580可抑制TNF-α诱导的磷酸化p38 MAPK表达 (P<0.01),同时下调HMGB1mRNA和HMGB1蛋白的表达。结论：TNF-α可诱导小胶质细胞晚期炎症因子HMGB1的表 达,并且其诱导机制与p38 MAPK被快速激活相关。     

2，4，6-三硝基苯磺酸致肠炎大鼠背根神经节神经元电生理特性

目的 研究2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）致肠炎大鼠的背根神经节（DRG）神经元电生理特性,为更全面地了解炎症性肠病（IBD）提供借鉴。方法 SD大鼠（雄性,体质量160～200 g）随机分为实验组和对照组,实验组（n=5）给予30% TNBS溶液（剂量 40 mg/kg）灌肠,对照组（n=5）给予等效体积的生理盐水灌肠。在灌肠的第8天（炎症急性期）处死大鼠,对其结肠进行H-E染色,以确定造模是否成功;取其DRG神经元用全细胞膜片钳技术分析其电生理特性。结果 实验组大鼠体质量降低（P<0.001）,H-E染色示肠黏膜腺体结构严重破坏,炎性细胞浸润明显,表明造模成功。TNBS致肠炎后大鼠DRG神经元动作电位的阈电流降低（P<0.05）。结论 TNBS致肠炎后大鼠DRG神经元兴奋性增高。     

体外培养的皮层神经元和胶质细胞上COX-2的表达

目的观察环氧合酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）在体外培养的皮层神经元和胶质细胞上的表达。方法在体外培养鼠的皮层神经元和神经胶质细胞,神经元培养第6、10、12d时收获细胞,神经胶质细胞传代后培养待细胞密度约为每毫升5×105时和6×105时收获细胞,然后进行免疫染色以观察神经元和胶质细胞上COX-2的表达。同时用免疫荧光双标记法对COX-2阳性的细胞类型进行了鉴定。结果体外培养6、10和12d时的胚鼠皮层神经元细胞均呈现OX-2免疫阳性,但不同时间点免疫染色强度不同,10d时免疫染色最强;而体外培养的新生鼠的皮层神经胶质细胞只有极个别细胞呈现COX-2免疫阳性;双标记结果表明这些胶质细胞既有星形胶质细胞,又有小胶质细胞。结论离体条件下COX-2主要在神经元上表达,而神经胶质细胞则很少表达,与在体研究结果基本一致。     

不同年龄糖尿病大鼠脑组织LRP-1表达与Aβ1-40的相关性

目的  研究糖尿病大鼠脑组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白1（Lrp-1 ）和β淀粉样蛋白（Aβ1-40）的含量,探讨二者的关系。方法  采用高脂高糖饮食加小剂量腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型。将Wistar大鼠随机分为3月龄正常对照组、6月龄正常对照组、3月龄糖尿病组(DM3组)、6月龄糖尿病组(DM6组)。应用免疫组化法测定Lrp-1、Aβ1-40的表达。酶联免疫吸附试验（Elisa）法测定Lrp-1、Aβ1-40在脑组织的表达量。结果  ①Aβ1-40表达于大鼠大脑皮质、海马等处的神经元、神经胶质细胞的胞浆、胞膜及软脑膜动脉和穿支动脉的外膜及平滑肌细胞处;在同月龄大鼠中,糖尿病组Aβ1-40在脑组织中表达均较正常大鼠组明显增多（P＜0.05）;两组大鼠随着月龄的增长Aβ1-40在脑组织中的表达逐渐增加（P＜0.05）;②Lrp-1表达于大脑皮质、海马等处的神经元细胞的胞浆、胞膜及软脑膜动脉和穿支动脉的内膜和毛细血管内皮细胞上;在同月龄大鼠中,糖尿病组较正常大鼠组Lrp-1的表达明显减少（P＜0.05）;两组大鼠随月龄增长Lrp-1表达逐渐减少（P＜0.05）;③Aβ1-40 和Lrp-1呈负相关。结论  Aβ1-40沉积可能与Lrp-1的表达下调有关。     

神经钙蛋白在奥沙利铂引起的神经病理性疼痛中的作用

目的 探讨神经钙蛋白(CaN)在奥沙利铂引起的神经病理性疼痛中的作用.方法 取鼠龄为6周的SPF级SD雄性大鼠,体重约200～250 g,前期将大鼠随机分为两组(n=5):生理盐水组和CIPN模型组.CIPN模型组大鼠采用腹腔注射6 mg/kg奥沙利铂诱发其发生外周神经性病变(CIPN),于模型制备前2d及制备后的1、2、3、4、5、7、14 d,采用von frey细丝测定各组大鼠左后足机械痛缩足阈值(PWT),选择疼痛最高点作为实验点.正式实验将大鼠随机分为3组(n=12):对照组(处理前)、CIPN模型7d组、CIPN模型14 d组.于模型制备后7和14 d,痛阈测定结束后,取L4-5段脊髓背角(DH)及背根神经节(DRG),采用qPCR和Western blot方法分别检测DH和DRG中CaN mRNA及其蛋白表达水平,采用免疫荧光双标记法检测DRG中星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、小胶质细胞标志物植物凝集素(IB4)、CaN的表达.结果 CIPN模型组大鼠术后第2、3、4、5、7、14天的PWT均较生理盐水组的同时间点的PWT显著下降(P＜0.05),且PWT在单次注射6 mg/kg奥沙利铂后的第7和14天到达最低点.在DH中,第7、14天CaN mRNA表达相较于对照组有所下调;在DRG中,第7、14天CaN mRNA的表达水平与对照组相比无明显变化,蛋白表达水平与mRNA表达水平保持一致.在DH和DRG中,对照组中GFAP、CaN及IB4、CaN大量共表达,而在CIPN模型7、14 d组中共表达明显减少,且胞体形态发生变化.结论 奥沙利铂可能主要积累在DRG和DH中,对周围的神经造成损伤,诱导CaN表达下调,降低PWT值,导致痛觉的发生及感受.     

A型肉毒素对带状疱疹后神经痛小鼠炎性神经递质表达的影响

目的：观察A型肉毒素（BTX-A）对带状疱疹后神经痛（PHN）小鼠炎性神经递质表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法：将36只PHN雄性C57小鼠随机分成A、B、C 3组，每组12只。A组在疱疹部位注射0.9%氯化钠溶液；B组在疱疹部位注射BTX-A（2 U/kg）；C组在L5背根神经节（DRG）处注射BTX-A（2 U/kg）。连续干预7 d后处死小鼠，取小鼠DRG和相应的脊髓节段，采用RT-qPCR和ELISA法检测各组小鼠DRG和脊髓中炎性神经递质TNF-α、IL-1β、神经激肽A的mRNA表达，采用Western blot检测各组小鼠DRG和脊髓中Na1.3、Na1.8通道蛋白表达。结果：RT-qPCR检测结果显示，与A组比，B组和C组炎性神经递质TNF-α、IL-1β、神经激肽A的mRNA表达水平显著降低（P＜0.05），但B和C 2组间比较差异无统计学意义。ELISA法检测结果显示，与A组比，B组和C组TNF-α、IL-1β、神经激肽A的蛋白含量显著降低（P＜0.05），但B和C 2组间比较差异无统计学意义。Western blot结果显示，与A组比，B组和C组Na1.3、Na1.8通道蛋白表达显著降低（P＜0.05），但B和C 2组间比较差异无统计学意义。结论：BTX-A能有效抑制PHN，其作用机制可能是通过降低通道蛋白Na1.3、Na1.8的表达，抑制炎性神经递质TNF-α、IL-1β、神经激肽A的mRNA表达水平和蛋白含量。     

神经干细胞分化过程中NgR表达的变化

目的 检测大鼠脊髓来源神经干细胞分化过程中NgR的表达情况.方法 悬浮培养法培养大鼠脊髓来源的神经干细胞,形成神经球后,以免疫荧光法鉴定神经干细胞,检测神经球及其分化后不同时间点、不同细胞亚型的NgR表达情况.结果 神经干细胞分化前和分化第1天所有细胞都显著表达NgR,NgR表达阳性率在分化第2天降至82.1%±4.14%,分化第3天降至最低点35.3%±4.31%.分化后形成的细胞中只有神经元和少量未分化细胞表达NgR,星形胶质细胞和少突胶质细胞不表达NgR.结论 在神经干细胞分化成星形胶质细胞和少突胶质细胞的过程中NgR基因表达被关闭,而在其分化成神经元的过程中则始终表达NgR.     

加味四君子汤对严重烫伤大鼠肠组织细胞因子的影响

目的观察加味四君子汤对严重烫伤大鼠肠组织TNF-α、IL-1β、IL-10、ICAM-1mRNA水平的影响。方法将90只SD大鼠随机分为四君子汤组(n=40)、单纯烫伤组(n=40)、假伤组(n=10)。各组大鼠背部脱毛后,假伤组模拟烫伤,其余2组造成大鼠背部30%TBSAⅢ度烫伤。四君子汤组予加味四君子汤灌胃,单纯烫伤组、假伤组予生理盐水灌胃,2mL·次-1,3次·d-1,持续14d。观察各组大鼠一般情况,采用Real-time PCR技术检测各组大鼠服药后第1、3、7、14天小肠组织TNF-α、IL-1β、IL-10、ICAM-1mRNA表达水平。结果四君子汤组大鼠较单纯烫伤组精神好,活动更多,进食、饮水增加。1)与假伤组比较:单纯烫伤组大鼠各时点肠组织TNF-α、IL-1β、IL-10、ICAM-1mRNA水平均明显升高(P<0.05);四君子汤组第1、3、7天肠组织TNF-α、IL-1β、IL-10、ICAM-1mRNA水平均明显升高(P<0.05),但第14天TNF-α、IL-10水平2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2)与单纯烫伤组比较:四君子汤组第3、7、14天肠组织TNF-α、IL-1βmRNA水平均显著下降(P<0.05),IL-10 mRNA水平第1、3天显著增加(P<0.05),第7、14天则显著下降(P<0.05),ICAM-1 mRNA水平各时点均显著下降(P<0.05)。结论加味四君子汤可以降低烫伤大鼠小肠组织中促炎因子TNF-α、IL-1β、ICAM-1水平,促进抗炎因子IL-10的产生,对严重烧伤后肠道炎性反应具有调控作用。     

胶质细胞系源性神经营养因子保护帕金森模型大鼠黑质多巴胺能神经元机制的研究

目的 探讨胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line-derived neumtrophic factor，GDNF）在保护黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元过程中，钙结合蛋白D28K（calbindin 28K，CB）和星形胶质细胞的可能作用。方法 采用大鼠右侧纹状体内注射6-羟多巴胺（6-OHDA）制备帕金森病（Parkinson disease，PD）模型。注射后第7天，根据行为学分析筛选模型鼠，将模型鼠随机分为3组：空白对照组，PBS组（右侧黑质注射pm）和GDNF组（右侧黑质注射GDNF）。空白对照组动物分别于6-OHDA注射后第7天、14天、21天和28天时，PBS组和GDNF组动物分别于6-OHDA注射后第14天、21天和28天时，行黑质节段连续冠状石蜡切片，以酪氨酸羟化酶（tyrosine hydmxylase．TH）、CB和胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrous acid protein，GFAP）免疫组织化学染色，分别显示DA能神经元、含cB神经元和星形胶质细胞，光镜观察以及细胞计数，统计学处理。结果 ①TH免疫组织化学染色结果：6-OHDA注射后第28天，GDNF组大鼠右侧黑质rrH表达阳性神经元数量显著多于空白对照组和PBS组；②CB免疫组织化学染色结果：6-OHDA注射后第7天，空白对照组大鼠右侧黑质尚可观察到cB表达阳性神经元，之后的时间点空白对照组和PBS组均观察不到，而GDNF组大鼠右册黑质处在所检测的各时间点均可观察到cB表达阳性神经元；③GFAP免疫组织化学染色结果：空白对照组在6-OHDA注射后第7天时有少量的GFAP表达阳性细胞，于注射后第14天时GFAP表达阳性细胞数达高峰，之后逐渐减少，注射后第28天时已基本检测不到；PBS组GFAP表达阳性细胞数量与空白对照组的表现一致，而GDNF组大鼠黑质在所检测的各时间点均可观察到大量反应性增生的星形胶质细胞。结论 CB和（或）星形胶质细胞可能参与GDNF保护并促进PD模型大鼠黑质DA能神经元存活的过程。     

蒽贝素对大鼠胶原诱导性关节炎炎症评分及炎症细胞因子的影响

目的探讨蒽贝素对胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis,CIA）大鼠炎症评分及炎症细胞因子的影响。方法将50只大鼠随机分为正常对照组（8只）和造模组（42只）。造模组大鼠采用注射牛Ⅱ型胶原（bovine typeⅡcollagen,CⅡ）+完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant,CFA）乳剂进行初次免疫,1周后注射CⅡ+不完全弗氏佐剂（incomplete Freund’s adjuvant,IFA）乳剂加强免疫,建立CIA模型。将造模成功的32只CIA大鼠随机分为4组:CIA模型组、甲氨蝶呤组(1 mL·100g^-1灌胃,2次·周-1)和蒽贝素低剂量、高剂量2组(均以1mL·100g^-1灌胃,1次·d-1),每组8只。CIA模型组、正常对照组均以0.5%羧甲基纤维素钠1mL·100g^-1灌胃,1次·d-1。分别于实验第14、21、28、35天各组称体质量及对关节炎症进行评分。实验第36天检测各组血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukine-1β,IL-1β）的水平。结果与正常对照组比较,CIA模型组、甲氨蝶呤组,蒽贝素低剂量、高剂量2组实验第14、21、28、35天体质量均减轻和关节炎症评分及实验第36天血清TNF-α、IL-1β水平均明显升高（均P<0.05）;与CIA模型组比较,甲氨蝶呤组,蒽贝素低剂量、高剂量2组实验第21、28、35天体质量均增加和关节炎症评分及实验第36天血清TNF-α、IL-1β水平均明显降低（均P<0.05）;与甲氨蝶呤组比较,蒽贝素高剂量组实验第28、35天体质量均增加,实验第36天血清IL-1β含量明显降低（均P<0.05）。结论蒽贝素可降低胶原诱导性关节炎大鼠炎症细胞因子水平,缓解关节炎的症状,具有抗炎作用,可能对类风湿关节炎有一定的疗效。     

背根神经节巨噬细胞迁移抑制因子参与 调控神经病理性疼痛的机制研究

目的 探讨脊髓背根神经节（DRG）巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）对神经病理性疼痛的作用及可 能的调控机制。方法 成年雄性SD 大鼠随机分为3 组（n =8）：假手术组（Sham 组）、坐骨神经结扎（CCI）模 型对照组（以下简称CCI 组）、ISO-1 组（CCI+ 鞘内注射ISO-1）。鞘内置管5 d 后予以左侧坐骨神经结扎。 CCI 组和ISO-1 组连续14 d 鞘内注射10% DMSO 10 μl 或含ISO-1 30 μg 的DMSO 10 μl,每天1 次。在术前1 天, 术后第1、3、5、7、10 及14 天（给药2 h 后）测定机械痛阈值;在第7 和14 天取大鼠DRG,ELISA 检测肿瘤 坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）的表达变化,Western blot 检测MIF 表达变化,并于第14 天记 录受损坐骨神经传导速度（CV）。结果 与Sham 组比较,术后CCI 组机械痛阈值均降低（P <0.05）;与CCI 组比较, ISO-1 组术后第10 和14 天机械缩足反射阈值均升高（P <0.05）。与Sham 组比较,CCI 组第7 和14 天背根神经 节MIF、TNF-α、IL-1β 表达上调（P <0.05）;与CCI 组比较,ISO-1 组第7 和14 天MIF、TNF-α、IL-1β 表达下调（P <0.05）。神经电生理的结果显示,与Sham 组比较,CCI 大鼠坐骨神经的CV 降低,差异有统计学意 义（P <0.05）;ISO-1 组与CCI 组大鼠坐骨神经的CV 比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 鞘内注射MIF 拮抗剂ISO-1 可以减轻大鼠机械痛敏,下调DRG MIF、TNF-α 和IL-1β 表达,但不能修复受损坐骨神经。 MIF 拮抗剂ISO-1 可能通过抑制脊髓背根神经节炎症反应,减轻大鼠神经病理性疼痛。     

痹肿消汤对实验性关节炎大鼠血浆TNF-α及IL-1β的影响

目的：观察痹肿消汤（bizhongxiao decotion, BZXD）对实验性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α（tumornecrosis factorα,TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的影响，探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的作用机制。方法：75只SD大鼠随机分为4组，皮下注射Ⅱ型胶原诱导实验性关节炎模型，采用放射免疫法检测各组大鼠不同时间血浆TNF-α和IL-1β水平。结果：造模大鼠88%出现关节炎症状；造模25d后，模型组、痹肿消汤组及甲氨喋呤组大鼠TNF-α和IL-1β水平明显高于正常组（P<0.05）；且模型组TNF-α和IL-1β水平明显高于痹肿消汤组及甲氨喋呤组（P<0.01）；随着时间延长，模型组TNF-α和IL-1β水平逐渐升高，痹肿消汤组及甲氨喋呤组则逐渐降低；而痹肿消汤组TNF-α和IL-1β水平低于甲氨喋呤组（P<0.05）。结论：TNF-α和IL-1β在RA滑膜组织炎症形成和发展中发挥着重要作用；痹肿消汤与甲氨喋呤均能下调血浆TNF-α和IL-1β水平，但痹肿消汤的作用优于甲氨喋呤。