痹肿消汤对实验性关节炎大鼠血浆TNF-α及IL-1β的影响

目的：观察痹肿消汤（bizhongxiao decotion, BZXD）对实验性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α（tumornecrosis factorα,TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的影响，探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的作用机制。方法：75只SD大鼠随机分为4组，皮下注射Ⅱ型胶原诱导实验性关节炎模型，采用放射免疫法检测各组大鼠不同时间血浆TNF-α和IL-1β水平。结果：造模大鼠88%出现关节炎症状；造模25d后，模型组、痹肿消汤组及甲氨喋呤组大鼠TNF-α和IL-1β水平明显高于正常组（P<0.05）；且模型组TNF-α和IL-1β水平明显高于痹肿消汤组及甲氨喋呤组（P<0.01）；随着时间延长，模型组TNF-α和IL-1β水平逐渐升高，痹肿消汤组及甲氨喋呤组则逐渐降低；而痹肿消汤组TNF-α和IL-1β水平低于甲氨喋呤组（P<0.05）。结论：TNF-α和IL-1β在RA滑膜组织炎症形成和发展中发挥着重要作用；痹肿消汤与甲氨喋呤均能下调血浆TNF-α和IL-1β水平，但痹肿消汤的作用优于甲氨喋呤。     

冬眠合剂对严重烫伤大鼠早期肺组织的保护作用

目的 探讨冬眠合剂对严重烫伤大鼠早期肺组织的保护作用及可能机制。方法 66只雄性SD大鼠随机分为假烫伤组（n=6,模拟烫伤+12 mL/kg生理盐水皮下注射）、单纯烫伤组（n=30,Ⅲ度烫伤+12 mL/kg生理盐水皮下注射）和烫伤+冬眠合剂组（n=30,Ⅲ度烫伤+12 mL/kg冬眠合剂皮下注射）。于模拟烫伤后3 h（假烫伤组）和烫伤后3、6、12、24、48 h时点（单纯烫伤组和烫伤+冬眠合剂组）分批采集大鼠血样,处死动物后留取并制备肺组织标本。ELISA法测定血浆致炎因子白介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）、抑炎因子白介素10（IL-10）及内皮细胞表面标志物可溶性细胞间黏附分子1（sICAM-1）和内皮素1（ET-1）水平;酶学分光光度法和免疫组织化学法分别检测肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)活性和巨噬细胞表面标志物CD68表达。HE染色光学显微镜观察肺组织病理学改变。结果 血清IL-1β、TNF-α、sICAM-1和ET-1水平及肺组织MPO活性和CD68阳性表达率,单纯烫伤组>烫伤+冬眠合剂组>假烫伤组;血清IL-10水平,烫伤+冬眠合剂组>单纯烫伤组>假烫伤组;部分时点检测指标组间比较差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与单纯烫伤组烫伤后24 h比较,烫伤+冬眠合剂组相应时点的肺间质水肿程度较轻。结论 冬眠合剂可显著减轻严重烫伤早期大鼠肺间质水肿和炎症反应程度,其机制可能与调节炎症反应,减少内皮细胞的活化与损伤有关。     

蒽贝素对大鼠胶原诱导性关节炎炎症评分及炎症细胞因子的影响

目的探讨蒽贝素对胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis,CIA）大鼠炎症评分及炎症细胞因子的影响。方法将50只大鼠随机分为正常对照组（8只）和造模组（42只）。造模组大鼠采用注射牛Ⅱ型胶原（bovine typeⅡcollagen,CⅡ）+完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant,CFA）乳剂进行初次免疫,1周后注射CⅡ+不完全弗氏佐剂（incomplete Freund’s adjuvant,IFA）乳剂加强免疫,建立CIA模型。将造模成功的32只CIA大鼠随机分为4组:CIA模型组、甲氨蝶呤组(1 mL·100g^-1灌胃,2次·周-1)和蒽贝素低剂量、高剂量2组(均以1mL·100g^-1灌胃,1次·d-1),每组8只。CIA模型组、正常对照组均以0.5%羧甲基纤维素钠1mL·100g^-1灌胃,1次·d-1。分别于实验第14、21、28、35天各组称体质量及对关节炎症进行评分。实验第36天检测各组血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukine-1β,IL-1β）的水平。结果与正常对照组比较,CIA模型组、甲氨蝶呤组,蒽贝素低剂量、高剂量2组实验第14、21、28、35天体质量均减轻和关节炎症评分及实验第36天血清TNF-α、IL-1β水平均明显升高（均P<0.05）;与CIA模型组比较,甲氨蝶呤组,蒽贝素低剂量、高剂量2组实验第21、28、35天体质量均增加和关节炎症评分及实验第36天血清TNF-α、IL-1β水平均明显降低（均P<0.05）;与甲氨蝶呤组比较,蒽贝素高剂量组实验第28、35天体质量均增加,实验第36天血清IL-1β含量明显降低（均P<0.05）。结论蒽贝素可降低胶原诱导性关节炎大鼠炎症细胞因子水平,缓解关节炎的症状,具有抗炎作用,可能对类风湿关节炎有一定的疗效。     

阿司匹林对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的抑制作用及其机制

 目的  观察阿司匹林对博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法  取体质量250 g左右的健康清洁级雄性SD大鼠60只,随机分为生理盐水对照组、博莱霉素模型组、甲基强的松治疗组、阿司匹林治疗组,每组15只。生理盐水对照组经气管插管注入生理盐水0.2 mL,其他各组注入博莱霉素 5 mg/kg制备成模型。甲基强的松治疗组和阿司匹林治疗组每天灌胃给药分别予甲基泼尼松龙6 mg/kg、阿司匹林10 mg/kg,于第7、14、28天每组各处死5只,取其肺组织作以下测试:HE染色病理学观察;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测羟脯氨酸、IL-4、TNF-α、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF β)和角化细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)水平;Real Time PCR检测TGF β的mRNA表达。结果  博莱霉素模型组大鼠肺组织在第7天时出现明显的出血渗出性炎症反应,在第28天时出现明显的肺组织纤维化;其肺组织的羟脯氨酸、IL-4和TNF-α水平较生理盐水对照组有明显升高(P<0.05),TGF-β蛋白和TGF β mRNA的表达也明显高于生理盐水对照组(P<0.01)。阿司匹林治疗组肺组织病理与博莱霉素模型组比较,第7天时大鼠肺组织的炎性渗出有明显减轻,第28天时肺组织纤维化程度较轻。阿司匹林治疗组大鼠肺组织的羟脯氨酸、IL-4、TNF-α含量较博莱霉素模型组有明显下降(P<0.01),其肺组织TGF-β蛋白含量和mRNA表达明显低于博莱霉素模型组(P<0.05)。阿司匹林治疗组与甲基强的松治疗组相比较,在第28天时肺组织羟脯氨酸含量低于甲基强的松治疗组(P<0.01),而IL-4、TNF-α、TGF-β、TGF-β mRNA的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论  阿司匹林可抑制炎症细胞分泌TGF-β、IL-4和TNF-α,减轻博莱霉素导致的肺间质纤维化反应,其作用机制可能与下调TGF β mRNA和蛋白的表达有关。     

HGF对脑缺血/再灌注大鼠脑iNOS,NO及IL-1β的影响

目的：探讨肝细胞生长因子(HGF)对脑缺血/再灌注(I/R)大鼠脑诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、NO及白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。方法：SD大鼠随机分为以下5组：假手术组(Sham组);I/R组;HGF1,HGF2,HGF3组,即I/R大鼠分别注射15,30,60 μg/kg HGF。线栓法建立局灶性脑I/R模型,脑缺血1.5 h再灌注24 h后,测定缺血区脑组织iNOS活性及NO含量,检测iNOS及IL-1β mRNA水平的变化,测定iNOS蛋白表达水平及IL-1β含量。另取体外培养的大鼠大脑皮层神经元行 I/R 处理,检测iNOS和IL-1β 蛋白表达水平及NO含量。结果：大鼠缺血区脑组织iNOS活性升高、NO含量增加,iNOS和IL-1β mRNA表达上调,iNOS 蛋白表达增多,IL-1β含量增加。注射不同剂量HGF均能降低缺血区脑组织iNOS活性及NO含量,下调iNOS和IL-1β mRNA的表达,抑制iNOS蛋白的表达,降低IL-1β含量。此外,HGF可明显下调体外 I/R 神经元IL-1β和iNOS蛋白的表达,降低NO含量。结论：抑制IL-1β的表达,减少iNOS的表达,降低NO含量可能是HGF减轻脑缺血损伤的机制之一。     

炎症预激活间充质干细胞条件培养基调控坏死性小肠结肠炎小肠炎性反应的作用研究

背景　骨髓间充质干细胞具有强大的免疫调节和抗炎能力。既往研究发现不同状态间充质干细胞条件培养基能下调多种小肠损伤炎性反应,对肠道起到保护作用,但对于坏死性小肠结肠炎（NEC）炎性反应的作用和机制尚未明确。目的　建立新生大鼠NEC模型,探讨炎症预激活间充质干细胞条件培养基调控NEC炎性反应的作用。方法　2018年7月—2019年4月,建立新生大鼠NEC模型,随机选取造模后的80只SPF级新生Sprague-Dawley（SD）大鼠,根据处理方式分为对照组、单纯NEC损伤组、NEC损伤+正常间充质干细胞条件培养基（MSC-CMNOR）组、NEC损伤+经肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素（IL）-1β和一氧化氮（NO）联合培养诱导的炎症预激活间充质干细胞条件培养基（MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO）组,每组20只。采用腹腔注射给药的方式,对照组、单纯NEC损伤组、NEC损伤+MSC-CMNOR组、NEC损伤+MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO组分别给予等量的0.9%氯化钠溶液、DMEM-F12培养基、MSC-CMNOR及MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO。在注射药物后第4天开腹观察小肠大体标本,收集回肠末端和血液标本,行苏木素-伊红（HE）染色观察小肠病理学变化并进行病理学评分,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对小肠组织及血清标本行炎性因子检测。结果　小肠大体标本变化：对照组新生大鼠小肠色泽红润,无充血,弹性好,有蠕动,未见肠壁积气或坏死。单纯NEC损伤组及NEC损伤+MSC-CMNOR组新生大鼠肠道色泽呈暗红色,充血明显,可见肠壁积气、坏死,弹性差,肠管扩张。NEC损伤+MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO组新生大鼠肠道轻度充血,未见肠壁积气或坏死,弹性尚可。小肠组织病理学评分及NEC发生率：对照组、单纯NEC损伤组、NEC损伤+MSC-CMNOR组、NEC损伤+MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO组病理学评分总分为16、51、43、16分;4组病理学评分比较,差异有统计学意义（H=41.70,P<0.01）。其中单纯NEC损伤组、NEC损伤+MSC-CMNOR组病理学评分高于对照组（P<0.01）,NEC损伤+MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO组病理学评分较单纯NEC损伤组降低（P<0.01）。对照组无NEC发生,单纯NEC损伤组、NEC损伤+MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO组、NEC损伤+MSC-CMNOR组分别有17、4、16只诊断为NEC（NEC发生率为85.0%、20.0%、80.0%）;4组NEC发生率比较,差异有统计学意义（χ2=44.00,P<0.01）。4组血清和小肠组织中促炎因子和抑炎因子水平：4组血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12水平比较,差异有统计学意义（P<0.01）;4组小肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10水平比较,差异有统计学意义（P<0.01）。其中,与单纯NEC损伤组、NEC损伤+MSC-CMNOR组相比,NEC损伤+MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO组血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12水平降低,IL-10水平升高,MSC-CMTNF-α+IL-1β+NO组小肠组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,IL-10水平升高（P<0.01）。结论　炎症预激活间充质干细胞条件培养基对NEC新生大鼠的肠道具有保护作用,能够调控促炎因子和抑炎因子的平衡,减轻肠道的损伤。     

川芎嗪对大鼠肠粘连组织MMP-9、TIMP-1和细胞因子表达的影响

目的:观察川芎嗪对肠粘连模型大鼠粘连肠组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表达及血清白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及转化生长因子(TGF-β)水平的影响,探讨川芎嗪预防肠粘连作用机制。方法:72只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、假手术组、手术组及川芎嗪组,每组18只。正常对照组不行手术,假手术组仅行腹腔开关术,川芎嗪组术后每天腹腔注射川芎嗪溶液10mL(净含川芎嗪约0.1g),其余三组注射等量生理盐水。各组于术后第2、7、14天取血,肉眼观察肠粘连的程度分级;酶联免疫吸附法测定血清细胞因子IL-1、TNF-α、TGF-β。免疫组织化学染色加图像分析法观测MMP-9及TIMP-1表达。结果:手术组及川芎嗪组肠粘连程度显著增加(P<0.05),与手术组比较,川芎嗪组肠粘连程度明显减轻(P<0.05)。与手术组比较,川芎嗪组IL-1、TNF-α及TGF-β水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。术后2天,与手术组比较,川芎嗪组肠组织MMP-9表达显著降低(P<0.05),TIMP-1未见明显改变(P>0.05)。术后7天及14天,川芎嗪组肠组织TIMP-1表达较手术组有显著增高(P<0.05),MMP-9无明显改变(P>0.05)。结论:川芎嗪可能通过影响血细胞因子IL-1β、TNF-α和TGF-β1水平及肠组织MMP-9和TIMP-1表达,一定程度上抑制大鼠肠粘连。     

IL-27通过STAT3信号通路改善脂多糖诱导的小鼠急性肺炎

目的：探讨IL-27通过调控STAT3信号通路在脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺炎中的作用。方法：32只雄性小鼠随机分为正常对照组、LPS组、LPS+IL-27组、LPS+IL-27抗体组,每组8只。麻醉处死后取小鼠肺脏,HE染色观察各组小鼠肺组织损伤情况;qRT-PCR检测各组小鼠肺组织及血清中STAT3、SOCS3的mRNA表达水平;Western blot检测各组小鼠肺组织中STAT3、p-STAT3、SOCS3的蛋白表达水平;采用ELISA法分别检测肺组织匀浆及血清中TNF-α、IL-1β、IL-10、TGF-β1的表达水平。免疫组织化学及Western blot检测TNF-α、IL-1β在肺组织中的蛋白表达。结果：HE染色结果发现,正常对照组,LPS组和LPS+IL-27抗体组肺泡结构被破坏,肺泡壁弥漫性增厚,有明显的炎性细胞浸润;LPS+IL-27组病理改变较LPS组明显减轻,炎性细胞浸润减少。与正常对照组比,LPS组和LPS+IL-27抗体组小鼠肺组织STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;LPS+IL-27组较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）,LPS+IL-27组SOCS3表达水平显著高于LPS+IL-27抗体组（P＜0.05）。各组小鼠肺组织及血清TNF-α、IL-1β表达水平较正常对照组均显著升高（P＜0.05）;LPS+IL-27组TNF-α、IL-1β表达水平较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）;LPS组和LPS+IL-27抗体组IL-10表达水平均显著高于正常对照组（P＜0.05）;LPS+IL-27组IL-10、TGF-β1的表达水平均显著高于LPS+IL-27抗体组（P＜0.05）。免疫组织化学结果显示,与正常对照组比,LPS组和LPS+IL-27抗体组TNF-α阳性表达主要表达在细胞浆中,IL-1β阳性表达主要表达与细胞膜与细胞浆中,Western blot结果发现TNF-α、IL-1β在肺组织中均呈高表达（P＜0.05）;LPS+IL-27组TNF-α、IL-1β的表达水平较LPS组和LPS+IL-27抗体组显著降低（P＜0.05）。结论：外源性IL-27可能通过抑制STAT3信号通路相关蛋白磷酸化水平改善LPS诱导的小鼠急性肺炎。     

湿润烧伤膏对糖尿病大鼠创面组织细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1 mRNA表达水平及超微结构的影响研究

目的　探讨湿润烧伤膏（MEBO）干预糖尿病性溃疡创面组织细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）mRNA表达及超微结构的作用机制。方法　于2015年6月选取145只12周龄的雄性健康SPF级SD大鼠,采用随机数字表法将其分为空白组（35只）和糖尿病模型组（110只）,糖尿病模型组采用腹腔注射链脲佐菌素（STZ）法制备糖尿病大鼠模型,8周后选取空白组30只和糖尿病模型组成模大鼠90只,采用随机数字表法将糖尿病模型组成模大鼠分为模型亚组、贝复济亚组及MEBO亚组,各30只,均制备糖尿病性溃疡创面模型。模型制备成功后,空白组及模型亚组给予0.9%氯化钠溶液纱条、贝复济亚组给予贝复济溶液纱条、MEBO亚组给予MEBO纱条局部换药处理,1次/d,共12 d。各组分别于创面干预治疗后第3、6、12天,每次随机选取10只大鼠,取相同位点创面组织,应用荧光聚合酶链式反应（PCR）技术检测ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达水平,电镜观察创面组织超微病理结构。结果　模型亚组第3天创面组织ICAM-1 mRNA表达水平低于空白组,第6、12天创面组织ICAM-1 mRNA表达水平均高于空白组（P<0.05）;贝复济亚组第12天创面组织ICAM-1 mRNA表达水平低于模型亚组（P<0.05）;MEBO亚组第3天创面组织ICAM-1 mRNA表达水平高于模型亚组,第6、12天创面组织ICAM-1 mRNA表达水平均低于模型亚组（P<0.05）。模型亚组第3天创面组织VCAM-1 mRNA表达水平低于空白组,第6、12天创面组织VCAM-1 mRNA表达水平均高于空白组（P<0.05）;贝复济亚组、MEBO亚组第3天创面组织VCAM-1 mRNA表达水平均高于模型亚组,第6、12天创面组织VCAM-1 mRNA表达水平均低于模型亚组（P<0.05）。病理结果显示：干预后第6、12天,与模型亚组比较,贝复济亚组和MEBO亚组细胞结构均逐步改善,能促进各细胞器形态恢复正常。结论　MEBO能够调控糖尿病性溃疡创面组织中糖基化终末产物（AGEs）-AGEs受体（RAGE）信号通路下游因子ICAM-1、VCAM-1的表达,改善细胞超微结构,促进糖尿病性溃疡创面愈合。     

中药合剂在大鼠烧伤炎症反应中的作用

目的：探讨中药合剂对烧伤炎症反应的调理作用。方法：SD大鼠110只随机分为对照组、烫伤组和烫伤后中药合剂喂服组（中药组）,烫伤组和中药组制备成III度30%总体表面积烫伤模型;采用放射免疫法,分别于伤后6 h,1,5,10,20 d时检测大鼠血清TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,IL-4和IL-10含量。结果：烫伤组和中药组血清中各指标伤后明显升高,中药组促炎因子（TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8）分别在不同时相点低于烫伤组,而抗炎因子（IL-4,IL-10）分别在不同时相点高于烫伤组。结论：中药合剂对烧伤炎症反应具有明显调理作用,且为双向性调理。     

整肠生对新型冠状病毒肺炎患者细胞因子水平和临床预后的影响

目的: 探讨整肠生（地衣芽孢杆菌活菌胶囊）改善新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease-19, COVID-19）患者高细胞因子水平和临床预后的效果,为临床开展肠道微生态疗法提供实验依据。方法: 回顾性分析2020年2月至3月武汉市同济医院中法新城院区收治的38例成年重症/危重症COVID 19患者,其中,18例患者接受了整肠生治疗（治疗组）,20例患者未接受整肠生治疗（对照组）。两组患者除接受常规治疗外,治疗组患者每天还服用整肠生以调节肠道微生态。记录两组患者临床基本特征,治疗前后白细胞、淋巴细胞及血小板计数,TNF-α、IL-1β、IL-6、PCT、CRP、ALT、白蛋白和肌酐水平,以及临床预后指标。结果： 治疗2周后,治疗组和对照组患者外周血中淋巴细胞计数明显高于治疗前（P<0.01）,血清C反应蛋白水平显著低于治疗前（P均<0.01）,但两组患者间淋巴细胞计数和C反应蛋白差异无统计学意义（P>0.05）。经整肠生治疗2周后,治疗组患者血清中TNF α和IL-1β水平显著低于治疗前,并低于对照组（P<0.05）,但是两组患者的临床结局尚无显著差异（P>0.05）。结论： 整肠生可以降低COVID 19患者血清中TNF-α和IL-1β水平,但尚未观察到患者临床结局的显著改善。     

MiR-101-3p通过靶向抑制斯钙素1减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的：探究微小RNA-101-3p (microRNA-101-3p,miR-101-3p)对IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤的影响及其 潜在的机制。方法：将骨关节软骨细胞随机分为对照组(NC组)、IL-1β组、阴性对照组(IL-1β+miR-NC组),miR-101- 3p组(IL-1β+miR-101-3p组),细胞转染后再用IL-1β(10 ng/mL)诱导软骨细胞。Real-time PCR和蛋白质印迹法检测不同 浓度的IL-1β(0,1,5,10 ng/mL)诱导的细胞中miR-101-3p和斯钙素1(stanniocalcin 1,STC1)的表达;采用MTT检测细 胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;caspases检测试剂盒检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3/9(caspase-3/9)的表 达;蛋白质印迹法检测炎性和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)、金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9) 和II型胶原的表达。另外,将野生型STC1 的3'-非编码区(untranslated regions,UTR)(STC1-3'-UTR-WT)或者突变型STC1 的3'-UTR(STC1-3'-UTR-MUT)分别与miR-101-3p模拟物(miR-101-3p mimic)和对照物(miR-NC)共转染细胞,采用荧光素 酶报告实验检测miR-101-3p对STC1的调控作用。在miR-NC(miR-NC组),miR-101-3p(miR-101-3p组),anti-NC(anti-NC 组)和anti-miR-101-3p(anti-miR-101-3p组)分别转染细胞后,采用蛋白质印迹法检测细胞中STC1蛋白的表达。为检测 STC1是否参与miR-101-3p对软骨细胞的作用,将细胞随机分为miR-101-3p组(IL-1β+miR-101-3p组)、过表达对照组(IL- 1β+miR-101-3p+ad-GFP组)、过表达STC1组(IL-1β+miR-101-3p+ad-STC1组)。同样分别用MTT 检测细胞增殖;流式细胞 仪检测细胞凋亡;caspases检测试剂盒检测caspase-3/9的表达;蛋白印迹法检测炎性和ECM相关蛋白的表达。结果： 与0 ng/mL IL-1β相比,不同浓度IL-1β诱导的软骨细胞中miR-101-3p水平显著下降(均P<0.05),STC1的水平则显著上 升(均P<0.05)。与NC组相比,IL-1β组软骨细胞增殖率下降(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),caspase-3/9,IL-6和TNF-α 的水平均显著上升(均P<0.05),MMP9的表达显著上调(P<0.05),II型胶原表达显著下调(P<0.05)。与IL-1β+miR-NC组 相比,IL-1β+miR-101-3p组软骨细胞增殖率上升(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05);caspases,IL-6和TNF-α的水平均显著 下降(均P<0.05);MMP9的表达下降(P<0.05),II型胶原表达上调(P<0.05)。荧光素酶报告检测结果表明：与miR-NC 组相比,miR-101-3p组可靶向抑制STC1的水平(P<0.05)。蛋白质印迹法结果表明：与miR-NC组相比,miR-101-3p组 STC1水平下降(P<0.05);与anti-NC组相比,anti-miR-101-3p组STC1水平上升(P<0.05)。与miR-101-3p+ad-GFP组相比, miR-101-3p+ad-STC1组STC1反转了miR-101-3p对IL-1β诱导的软骨细胞增殖、凋亡、炎性反应及ECM相关蛋白的影响。 结论：调节miR-101-3p/STC1通路能够保护IL-1β诱导的骨关节软骨细胞损伤。     

小剂量糖皮质激素辅助头孢哌酮/舒巴坦治疗肺炎克雷伯杆菌致大鼠重症肺炎对sICAM-1、IL-8、IL-10水平影响

目的探析小剂量糖皮质激素辅助头孢哌酮/舒巴坦治疗肺炎克雷伯杆菌致大鼠重症肺炎对s ICAM-1、IL-8、IL-10水平影响。方法建立重症肺炎大鼠模型,分为A、B、C三组,A组地塞米松+头孢哌酮+舒巴坦,B组头孢哌酮+舒巴坦,C组不适用药物,比较三组第6、8、10天时的s ICAM-1、IL-8、IL-10水平。结果三组第6、8、10天时s ICAM-1、IL-8水平的两两比较均存在统计学意义(P<0.05),其且A组s ICAM-1、IL-8水平呈现降低趋势,B、C组均逐渐升高。A、B两组第6、8、10天时IL-10水平的比较均无统计学意义(P>0.05);但均显著低于C组,与C组的两两比较有统计学意义(P<0.05)。结论联合应用小剂量糖皮质激素辅助头孢哌酮/舒巴坦可有效防止s ICAM-1、IL-8、IL-10水平的持续升高,利于重建炎症介质/抗炎介质平衡,减轻肺组织损伤,对于重症肺炎临床用药有较大借鉴作用。     

米诺环素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨米诺环素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制。方法：54只雄性SD大鼠随机 分成假手术对照组、缺血再灌注组和米诺环素组,每组18只。米诺环素组在缺血再灌注模型的基础上,自手术前 36 h开始给予米诺环素灌胃给药(45 mg/kg),以后每12 h给药1次(22.5 mg/kg)。再灌注后2,6,24 h检测血清谷丙转 氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平;肝组织行HE染色,观察病理组织学改变并计算评分(根据Suzuki标准);肝组织匀浆检测丙二醛 (malondialdehyde,MDA)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)水平;real-time PCR检测肝组织肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β) mRNA的表达;Western印迹测定Dickkopf-1(DKK-1)和β-连 环蛋白(β-catenin)的表达。结果：再灌注2,6,24 h后,与缺血再灌注组比较,米诺环素处理组血清ALT,AST,LDH 水平,以及肝组织病理学半定量评分、肝组织中TNF-α和IL-1β mRNA水平的表达均降低(均P<0.05);氧化损伤指标 MDA和MPO在肝组织中的含量减少(均P<0.05);米诺环素组DKK-1的蛋白表达下调(P<0.05),β-catenin蛋白表达上调 (P<0.05)。结论：米诺环素可减轻缺血再灌注对肝的损伤,其机制可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而减轻肝氧 化应激,并抑制促炎性细胞因子的释放。     

脑舒明方对局灶性脑缺血大鼠NF-κB，TNF-α和IL-1β表达的影响

目的：探讨脑舒明方对脑缺血大鼠的影响。方法：采用大脑中动脉阻塞法复制大鼠中脑动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组(n=36)、脑舒明方低剂量组(n=36)、中剂量组 (n=36)及高剂量组(n=36),另设正常组(n=12)及假手术组(n=12)。每组分别于造模后3,7,14 d处死并检测相关指标, 参照Ayelet Levy 14分评分法进行神经功能损伤评分,采用免疫组织化学检测核转录因子(nuclear factor kappa-B,NF- κB)/p50,NF-κB/p65,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-1β的蛋白质表达;采用实时荧光定量PCR 检测NF-κB,TNF-α和IL-1β的mRNA表达。结果：与假手术组比较,各个时间点的MCAO模型组及脑舒明方各剂量组 大鼠炎性指标显著增强(均P<0.05或P<0.01),都有神经功能障碍,但随着时间推移炎症指标及神经功能障碍会逐渐改 善。用药治疗3,7,14 d时,分别与模型组比较,脑舒明方各剂量组大鼠的神经功能评分均得到改善,NF-κB/p50, NF-κB/p65,TNF-α和IL-1β的蛋白质表达,以及NF-κB,TNF-α和IL-1β的mRNA表达均降低,差异均有统计学意义(均 P<0.05或P<0.01)。结论：脑舒明方可减轻脑缺血大鼠的损伤。     

布地奈德干预肺纤维化JAK-1/STAT1途径的研究

目的观察吸入布地奈德(BUD)对肺纤维化大鼠肺组织细胞黏附因子-1(ICAM-1)、Janus激酶-1(JAK-1)、信号转导子与转录激活子1(STAT1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法实验分为博莱霉素(BLM)组、生理盐水(NS)组和BUD组,每组15只。BLM组、BUD组气管内灌注BLM,NS组气管内灌注NS,继之第0~6天每天雾化1次,BUD组雾化吸入BUD,BLM组和NS组雾化吸入NS,第7、14、28天分别处死3组大鼠各5只。用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;免疫组化法测定肺组织中ICAM-1、JAK-1及STAT1的表达。结果第7、14天,BLM组肺泡炎程度重于BUD组(P<0.05);第7、14、28天,BLM组肺纤维化程度重于BUD组(P<0.05)。第7、14天,BUD组肺组织中ICAM-1、JAK-1、STAT1表达明显低于BLM组(P<0.05)。结论 JAK-1/STAT1信号途径参与了肺纤维化的发生发展,而吸入型BUD可分别通过抑制肺组织ICAM-1、JAK-1、STAT1的表达加强对肺组织的保护作用。     

叶酸对大鼠肺缺血再灌注损伤的保护作用

目的: 探讨叶酸对大鼠肺缺血再灌注损伤的影响。方法: 选取健康成年雄性SD大鼠30只，随机均分为5组，每组6只，其中3组叶酸组分别以5、10、20 mg/d叶酸灌胃1周；然后叶酸组及缺血再灌注组大鼠构建肺缺血再灌注模型，夹闭左肺门30 min，再灌注2 h；假手术组游离左肺门不夹闭；HE染色观察每组大鼠肺组织病理变化；ELISA法测定大鼠血清IL-8和TNF-α水平。结果： 与假手术组比较，缺血再灌注组大鼠肺组织病理损伤明显较重(P<0.01)；与缺血再灌注组比较，叶酸组肺组织病理损伤明显较轻(P<0.01)；与5 mg/d叶酸组比较，10 mg/d与20 mg/d叶酸组肺组织病理损伤明显较轻(P<0.01)，而后两组比较未见显著性差异(P>0.05)。与假手术组比较，缺血再灌注组、叶酸组IL-8和TNF-α表达水平均明显增高(P<0.01)；与缺血再灌注组比较，叶酸组IL-8和TNF-α表达水平明显降低（P<0.01）；与5 mg/d叶酸组比较，10 mg/d与20 mg/d叶酸组TNF-α表达水平明显降低(P<0.05)，而后两组比较差异无统计学意义(P>0.05)；叶酸组IL-8 水平降低呈一定的剂量依赖性(P<0.05)。结论： 叶酸对大鼠肺缺血再灌注损伤有一定的保护作用，且在一定范围内随叶酸剂量的增加而增强。     

4种炎症因子在牙周炎与冠心病相关性中的作用

目的：探讨4种炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1在牙周炎与冠心病（CHD）相关性中的可能角色,进一步探索牙周炎和CHD的相关机制。方法：选取2015年7月至2016年5月就诊于温州市中医院口腔科及温州市人民医院心内科的129例研究对象,其中健康者39名,单纯中重度牙周炎患者35例,单纯CHD患者31例,CHD伴中重度牙周炎患者24例,采用定制的Procarta Plex多因子ELISA试剂盒检测每位受检者的血清IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1含量。结果：经协方差分析排除危险因素BMI和血压的作用后,各组血清IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1的差异有统计学意义（P＜0.05）,CHD伴中重度牙周炎组最高。除MCP-1以外,中重度牙周炎组和CHD组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均高于健康组。结论：中重度牙周炎患者升高的血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,可能促进CHD的发生发展。     

补肾活血中药介导Wnt/β-catenin信号通路延缓椎间盘终板压力退变的机制研究

背景　椎间盘退行性变是导致脊柱退行性疾病发生的根本因素,终板是椎间盘力学传导与营养传输的主要结构,终板退变会加速椎间盘退变的发生,中药复方对延缓椎间盘退变具有独特的疗效,但具体作用机制尚不完全明确。目的　观察补肾活血中药对压力下离体兔脊柱运动节段椎体终板的影响,阐明其调控终板软骨细胞、延缓椎间盘退行性变的效应特点及作用机制。方法　2019年将40只健康新西兰兔采用随机数字表法分为对照组、中药组、中药抑制剂组、中药激动剂组,每组10只。采用具有自主知识产权的脊柱运动节段离体加载和培养装置进行造模,并通过HE染色病理形态学方法、免疫组化法、荧光定量聚合酶链式反应法（RT-PCR）和Western blot检测方法检测相关指标,包括蛋白多糖、Ⅱ型胶原及Wnt-3α、β-catenin mRNA和蛋白的表达水平。结果　（1）药物对椎间盘退变的影响：①HE染色显示,培养第7天时中药组软骨细胞分散程度、数目及软骨层排列均较对照组完整;培养第14天时对照组、中药组终板软骨组织退变程度均加重,对照组退变程度较中药组更加明显。②免疫组化法检测结果显示,中药组培养第1、3天时细胞外基质蛋白多糖、Ⅱ型胶原表达量均较对照组升高（P<0.05）;中药组及对照组培养第7、14天细胞外基质蛋白多糖、Ⅱ型胶原表达量均较培养前降低（P<0.05）;中药组细胞外基质蛋白多糖表达量与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,而对照组Ⅱ型胶原表达量较中药组升高（P<0.05）。③RT-PCR检测结果显示,中药组及对照组培养第1、3、7、14天时Wnt-3α和β-catenin mRNA表达水平均较培养前降低（P<0.05）,中药组培养第1、3、7、14天时Wnt-3α、β-catenin mRNA表达水平均较对照组降低（P<0.05）。④Western blot检测结果显示,中药组及对照组培养第1、3、7、14天时Wnt-3α、β-catenin蛋白表达水平与培养前比较,差异有统计学意义（P<0.05）;中药组培养第1、3、7、14天时Wnt-3α蛋白表达水平较对照组升高（P<0.05）,但β-catenin蛋白表达水平较对照组降低（P<0.05）。（2）药物延缓椎间盘退变机制：①HE染色显示,中药激动剂组较中药抑制剂组培养第3天时终板软骨组织结构的完整性、软骨层排列较好。②免疫组化法检测结果显示,中药激动剂组、中药抑制剂组蛋白多糖、Ⅱ型胶原表达量分别与中药组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。③RT-PCR检测结果显示,中药激动剂组、中药抑制剂组第3天时Wnt-3α mRNA表达水平分别与中药组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;中药激动剂组β-catenin mRNA表达水平较中药组降低（P<0.05）,中药抑制剂组β-catenin mRNA表达水平较中药组升高（P<0.05）。④Western blot检测结果显示,中药激动剂组第3天时Wnt-3α和β-catenin蛋白表达水平以及中药抑制剂组Wnt-3α蛋白表达水平分别与中药组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;而中药抑制剂组β-catenin蛋白表达水平较中药组升高（P<0.05）。结论　补肾活血中药可以通过介导Wnt/β-catenin信号通路调控终板软骨细胞延缓椎间盘退变进程。     

IL-22在大鼠牙周炎发展中时序性表达的研究

目的 探索大鼠牙周炎发展过程中IL-22(interleukin-22,IL-22)、IL-22受体1(interleukin-22 receptor 1,IL-22R1)和白介素-22结合蛋白(interleukin-22-binding protein,IL-22BP)的时序性表达的意义。方法 将SD大鼠均分为对照组(0周)、牙周炎1周组、牙周炎2周组、牙周炎3周组、牙周炎5周组,用高糖饮食+丝线结扎+接种牙龈卟啉单胞菌的方法造模,在各时间节点取相关组织,观察牙周组织病理改变和牙槽骨吸收情况,检测IL-22、IL-22R1、IL-22BP的含量及mRNA的表达量。结果 对照组牙周组织正常;在建模1周可以观察到上皮损伤和轻度炎性细胞浸润,在建模第3周组达到高峰期;建模第5周组炎症减轻,上皮细胞增生和屏障完整性的恢复,从而形成了牙周袋;与对照组比较,各牙周炎组大鼠牙槽骨吸收明显,根分叉逐渐暴露,腭侧多边形面积增加,上颌软组织中IL-22和IL-22R1含量及mRNA的相对表达量增加,IL-22BP含量及mRNA的相对表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);随着造模时间的延长,牙槽骨吸收逐渐加重、腭侧多边形面积增加,差异有统计学意义(P<0.05);IL-22和IL-22R1含量及mRNA的相对表达量在第3周达到高峰,第5周有所降低,差异有统计学意义(P<0.05);IL-22BP含量及mRNA的相对表达量降低,在第3周达到低谷,第5周有所增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-22、IL-22R1和IL-22BP与牙周炎的病情发展密切相关,调节IL-22、IL-22R1和IL-22BP的表达,可为牙周炎的诊疗带来新的思路。