大鼠血管钙化模型炎症因子及其受体的表达

目的观察血管钙化大鼠模型血清炎症因子[C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）]表达的变化,以及大鼠主动脉组织中与血清炎症因子相对应的受体表达的变化,以探讨炎症因子在血管钙化中的作用和意义。方法实验动物按电脑随机数字表法分为正常组和钙化组,每组8只,钙化组采用维生素D3（300 000 U/kg1次肌肉注射）和尼古丁（25 mg/kg溶于花生油中,早、晚各灌胃1次）诱导大鼠血管钙化模型,用Von Kossa染色检测血管钙化程度,用钙离子测试盒、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和ALP活性,用放射免疫法检测大鼠血清炎症因子含量,用免疫组织化学法检测血管组织炎症因子受体表达。结果Von Kossa染色可见血管钙化模型大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量、ALP活性明显高于正常组,差异有统计学意义[分别为（0.42±0.05）μmol/g蛋白vs.（0.23±0.02）μmol/g蛋白,P〈0.01;（170.70±14.04）U/g蛋白vs.（110.30±14.05）U/g蛋白,P〈0.01]。钙化组血清炎症因子（CRP、IL-6和MCP-1）的表达比正常组明显上调,差异有统计学意义[分别为（2.20±0.14）mg/L vs.（1.69±0.24）mg/L,P〈0.01;（182.80±4.48）ng/L vs.（153.10±4.28）ng/L,P〈0.01;（83.07±2.37）ng/L vs.（70.52±2.12）ng/L,P〈0.01]。与正常组相比,血管钙化模型大鼠主动脉组织中的炎症因子相应受体（IL-6受体和MCP-1受体）的表达亦同步上调。结论钙化大鼠血清炎症因子和主动脉相应受体表达上调,提示炎症因子参与血管钙化的发生和发展过程。     

C型钠尿肽在大鼠血管钙化中的作用

目的探讨C型钠尿肽（C-type natriuretic peptide，CNP）在血管钙化中的作用。方法用肌注维生素D3和尼古丁灌胃诱导大鼠血管钙化（VDN组大鼠），背部皮下埋泵CNP[500ng／（ks．h）]持续释药4周。进行Von Kossa染色、钙含量及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性测定。放射免疫法测定血浆和血管组织CNP含量；半定量RT-PCR方法测定血管CNP、钠尿肽受体（NRB、NPR-C）及骨桥蛋白（osteopontin，OPN），     

积雪草酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激及细胞凋亡的影响

目的探讨积雪草酸对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏氧化应激及细胞凋亡的影响。方法29只清洁级健康雄性sD大鼠（体质量170～210g,2～3月龄）腹腔注射65μg／g链脲佐菌素,建模成功后将存活的24只大鼠按数字表法随机分至糖尿病组（n=6）、10μg·g^-1·d^-1。积雪草酸组（n=6）、20μg·g^-1·d^-1积雪草酸组（n=6）、40μg·g^-1·d^-1积雪草酸组（n=6）。另以6只健康SD大鼠为正常对照组。干预8周后观察各组大鼠尿白蛋白排泄率、血糖、血尿素氮、血肌酐变化;检测。肾皮质中超氧化物歧化酶、丙二醛水平;采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测肾脏聚ADP-核糖多聚酶表达水平,Westernblot法检测半胱氨酸蛋白酶3表达水平。应用单因素方差分析和LSD法进行数据统计。结果与正常对照组相比,糖尿病组大鼠尿白蛋白排泄率、血糖、血尿素氮、血肌酐显著升高,肾皮质超氧化物歧化酶活性显著下降,丙二醛含量显著升高,肾脏细胞凋亡率、聚ADP-核糖多聚酶表达和半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达水平显著升高（分别为31．0％±5．5％VS5．0％±1．2％、3．9±0．5VS1．7±0．6、1．7±0．4vs0．4±0．3,t值分别为0．84、7．45、6．14,均P〈0．01）。与糖尿病组相比,3个积雪草酸干预组尿白蛋白排泄率、血尿素氮、血肌酐明显降低,超氧化物歧化酶活性明显上升,丙二醛含量明显下降,。肾脏细胞凋亡率明显减少（糖尿病组为31．0％±5．5％,10μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为20．6％±4．7％,20μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为15．8％±2．6％,40μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为10．3％±3．3％）,聚ADP-核糖多聚酶表达明显下调（糖尿病组为3．9±0．5,10μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为3．0±0．2,20μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为2．6±0．4,40μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为2．0±0．3）,半胱氨酸蛋白酶3蛋白表达下调（糖尿病组为1．7±0．3,10μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为1．0±0．2,20μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为0．7±0．2,40μg·g^-1·d^-1积雪草酸组为0．5±0．3）。结论积雪草酸对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠肾脏病变有一定保护作用,其机制可能与氧化应激反应和细胞凋亡被抑制有关。     

干酪乳杆菌对利福平和异烟肼联用所致大鼠肝损伤的保护作用

目的观察干酪乳杆菌代田株（Lactobacillus casei strain Shirota,LcS）对RFP和INH联合用药所致大鼠肝损伤的保护作用。方法将72只无特定病原体（SPF）级雄性SD大鼠,按随机数字表法分为：正常对照组,模型组,LcS低、中、高剂量组,双环醇组,每组12只。模型组,LcS低、中、高剂量组及双环醇组大鼠每天灌胃RFP（50mg／kg）和INH（50mg／kg）,2h后LcS低、中、高剂量组大鼠分别灌胃10×10^8、20×10^8、40×10^8菌落形成单位（CFU）／kg的LcS,持续28d。正常对照组大鼠灌胃0．9％生理盐水（20ml／kg）,双环醇组大鼠灌胃7．5mg／kg双环醇,每天1次,持续28d。检测大鼠肝脏指数、肝匀浆超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量、血清谷氨酸氨基转氨酶（ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、血清总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）等,并进行比较。结果RFP和INH给药28d后,模型组大鼠肝脏系数升高到（3．14±0．15）％,肝匀浆中MDA和SOD分别达到（4．52±0．52）nmol／mg蛋白和（72．51±11．05）U／mg蛋白;血清ALT和ALP分别达到（65．45±20．10）U／L和（322．79±61．73）U／L,TBA、TBIL、DBIL、IBIL分别达到（91．34±16．93）μmol／L、（7．82±2．53）μmol／L、（4．70±1．29）／μmol／L和（3．69±0．54）μmol／L。LcS补充后,与模型组相比,LcS高剂量组大鼠肝脏系数降低到（2．88±0．12）％;LcS低、中、高剂量组大鼠MDA含量明显下降,分别达到（2．94±0．48）nmol／mg蛋白、（2．82±0．36）nmol／mg蛋白和（2．62±0．28）nmol／mg蛋白;SOD活性明显增强,分别达到（84．60±8．50）U／mg蛋白、（86．28±5．52）U／mg蛋白和（2．62±0．28）U／mg蛋白。与模型组相比,LcS高剂量组的ALT、ALP均降低,分别为（49．92±15．32）U／L和（280．70±54．32）U／L;LcS低、中、高剂量组的TBA水平分别降低到（67．63±18．95）μmol／L、（55．32士19．17）μmlol／L和（52．92±23．00）μmol／L;LcS中、高剂量组的DBIL和IBIL水平也明显降低,其中DBIL分别降低到（3．64±1．68）μmol／L和（2．92±0．86）μmol／L,IBIL分别降低到（3．21±0．22）μmol／L和（3．12±0．42）μmol／L,差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。与模型组相比,双环醇组大鼠的血清TBA、TBIL、DBIL、IBIL水平分别降低到（64．49±22．41）μmol／L、（6．33±1．46）μmol／L、（3．54土1．21）μmol／L和（3．01±0．36）μmol／L,差异均有统计学意义（P值均〈0．05）。结论干酪乳杆菌能减轻RFP和INH联合所致的大鼠肝损伤。     

麝香保心丸对实验大鼠血管钙化的作用

目的在大鼠血管钙化模型上,探讨麝香保心丸对血管钙化的影响及其可能作用机制。方法实验动物随机分正常组、钙化组及钙化+麝香保心丸组,每组6只。钙化组采用维生素D3(3×105U/kg 1次,肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中,早、晚各灌胃1次)诱导大鼠血管钙化模型,钙化+麝香保心丸组于造模后第2天开始,每天麝香保心丸灌胃[14.0 mg/(kg·d)],用Von Kossa染色检测血管钙化程度,用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和ALP活性,用放射免疫法检测大鼠血浆单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量,用免疫组织化学法检测血管组织MCP-1受体表达。结果维生素D3和尼古丁能够诱导典型大鼠血管钙化模型,Von Kossa染色可见血管钙化模型大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀,钙化组血管钙含量、ALP活性高于正常组(P0.01),同时,血浆MCP浓度、血管组织MCP-1及其受体表达明显上调(P0.01);用麝香保心丸干预后,血管钙化程度减轻(P0.01)。血浆MCP-1及其受体的表达下调,差异有统计学意义。结论麝香保心丸可抑制血管钙化,并且提示可能通过下调MCP-1表达和ALP活性抑制血管钙化的发生和发展过程。     

Salusin-β在血管钙化模型的表达变化及意义

目的在大鼠血管钙化模型上观察血浆和主动脉组织salusin-β表达。方法实验动物按电脑随机数字表法随机分为正常组和钙化组,每组8只。钙化组采用维生素D3(300 000 U/kg 1次,肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中早、晚各灌胃1次)诱导大鼠血管钙化模型。常规饲养4周后取材,用Von Kossa染色检测血管钙化程度;用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和碱性磷酸酶活性;用放射免疫法检测大鼠血浆和主动脉组织salusin-β含量。结果维生素D3和尼古丁能够诱导典型大鼠血管钙化模型,Von Kossa染色可见血管钙化模型大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量、碱性磷酸酶活性明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);同时,钙化组血浆和主动脉组织中salusin-β的表达明显上调。结论大鼠血管钙化模型中salusin-β的表达上调。     

睾酮对维生素D3和尼古丁诱导的主动脉血管钙化的影响

目的建立SD大鼠血管钙化模型,并观察睾酮在主动脉血管钙化中的作用。方法将10周龄SD雄性大鼠分为:对照组、钙化组、钙化+低剂量睾酮组和钙化+高剂量睾酮组,每组8只。除对照组外,其余三组采用维生素D3(300 k U/kg一次肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中早、晚各灌胃1次)诱导大鼠血管钙化模型;低剂量睾酮组注射1 mg/kg外源性睾酮(隔日注射1次),高剂量睾酮组注射2 mg/kg睾酮(隔日注射1次),持续8周后处死。采用ELISA法测定大鼠血清睾酮和骨形态发生蛋白4(BMP-4)含量,采用试剂盒检测血管组织钙离子及碱性磷酸酶(ALP)含量,蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测主动脉血管组织BMP-4、骨桥蛋白(OPN)的蛋白表达水平,Von Kossa染色法观察血管钙化情况。结果 (1)成功制备了大鼠血管钙化模型:Von Kossa染色可见钙化组大鼠血管中膜大量黑色颗粒样钙盐沉积,而对照组血管结构完好,未见黑色钙盐沉积物。(2)睾酮对血管钙化的影响:睾酮组钙含量、ALP、BMP-4、OPN水平显著低于钙化组(P0.01),且高剂量睾酮组低于低剂量睾酮组,对照组水平最低; Von Kossa染色可见钙化组血管中膜出现大量黑色颗粒样钙盐沉积,而低剂量睾酮组和高剂量睾酮组均见少量钙盐沉积,对照组无钙盐沉积。结论外源性睾酮能一定程度上减轻维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化。     

阿司匹林对脑缺血-再灌注大鼠脑能量代谢的影响

目的观察阿司匹林（ASA）对脑缺血一再灌注大鼠脑组织能量代谢的影响。方法取雄性sD大鼠50只，随机分为假手术组（12只）、溶剂组（26只）、ASA组（12只），根据再灌注时间将每组再分为24、72h两个亚组。线栓法制作大脑中动脉缺血2h，再灌24、72h模型。ASA组大鼠于再灌注同时灌胃给予ASA，60mg／kg（60mgASA加0．05ml无水乙醇助溶，用中性PBS液定容至10m1），1ml/100g。溶剂组大鼠灌胃给予等体积的0．5％无水乙醇PBS溶液。高效毛细管电泳分析法测定三磷酸腺苷酶（ATP）含量，无机磷法测定Na＋-K＋-ATP酶和Ca2＋-ATP酶活性，比色法测定乳酸脱氢酶及乳酸含量。结果①ASA组大鼠再灌注24、72hATP含量为（27．7±3．5）、（29．7±2．5）μml/g（湿重）；Na＋-K＋-ATP酶为（8．6±0．9）、（7．8±0．6）μmol·mg-1·h-1；Ca2＋-ATP酶为（6．1±0．8）、（6．6±0．7）μmol·mg-1·h-1，与溶剂组大鼠的（10．3±1．0）、（4．6±0．8）μmol／g（湿重），（4．5±0．7）、（5．8±0．8）及（4．5±0．4）、（2．5±0．5）μmol·mg-1·h-1比较，差异有统计学意义（P〈0．01或0．05）；与假手术组比较，除Ca2＋ATP酶含量高于假手术组[（4．3±0．5）、（4．6±0．3）μmol·mg-1·h-1]外，其他指标差异无统计学意义。②ASA组再灌注24、72h乳酸含量为（0．68±0．25）、（0．62±0．15）mmol／g（蛋白）；乳酸脱氢酶活性为（9769±957）、（9677±532）U／g（蛋白）；与溶剂组大鼠的（0．42±0．12）、（0．33±0．16）mmol／g（蛋白），（4033±723）、（5902±689）U／g（蛋白）比较，差异有统计学意义（P〈0．01或0．05）；与假手术组大鼠的（0．58±0．19）、（0．61±0．23）mmol／g（蛋白），（9430±273）、（9382±375）U／g（蛋白）比较，差异无统计学意义。结论阿司匹林对脑缺血-再灌损伤24和72h大鼠脑组织均有明显的保护?     

原发性胆汁性肝硬化／自身免疫性肝炎重叠综合征28例临床和病理学分析

目的总结原发性胆汁性肝硬化（PBC）-自身免疫性肝炎（AIH）重叠综合征患者临床及组织病理学特点。方法采用2009年美国肝病学会修订的PBC诊断标准和2008年简化的AIH诊断标准,对28例PBC—AIH重叠综合征患者的临床及病理学资料进行回顾性分析。结果28例PBC—AIH重叠综合征患者ALT为154．93±28．68U／L,AST为185．21±39．25U／L,ALP为283．86±30．99U／L,γ-GT为352．36±71．15U／L,TBIL为34．15±7．79μmol／L,DBIL为11．15±0．86μmol／L,均显著高于正常人（ALT为17．8±1．60U／L,AST为20．29±1．02U／L,ALP为67．89±3．31U／L,γ-GT为20．51±3．33U／L,TBII,为11．15±0．86μmol／L,DBIL为3．35±0．28μmol／L,P〈0．05）;血清IgG和IgM升高,自身抗体中ANA（78．6％）和AMA—M2（71．4％）阳性率较高;肝穿组织可见界面性肝炎和小胆管损伤。结论PBC—AIH重叠综合征多见于女性,在临床及组织病理学上兼有PBC和AIH的双重特点。     

阿托伐他汀对糖基化白蛋白诱导的大鼠肾脏病变的保护作用

目的观察阿托伐他汀能否改善牛血清糖基化白蛋白（GBA）诱导的肾脏病变。方法健康雄性SD大鼠40只（体重230～250g）,采用随机数字表法分为正常对照组（给予普通饲料）、高脂组（仅给予高脂饲料）、GBA组（腹腔注射GBA40mg·kg-1·d-1,并给予高脂饲料）、GBA＋阿托伐他汀组（腹腔注射GBA40mg·kg-1·d-1,阿托伐他汀20mg·kg-1·d-1灌胃,并给予高脂饲料）,每组各10只。24周后酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测血清糖基化终末产物水平,采用实时定量聚合酶链反应（PCR）法测定大鼠肾组织糖基化终末产物受体（RAGE）mRNA表达,采用免疫组化法检测大鼠肾组织中S100（一种糖基化终末产物）、RAGE蛋白的表达,采用HE染色进行肾脏病理观察,同时测量肾小球及系膜区面积。应用t检验和方差分析进行数据分析。结果实验24周4组大鼠之间血糖、血清胆固醇和血肌酐水平差异均无统计学意义（F=1．780、2．012、2．075,均P〉0．05）。与高脂组比较,GBA组的大鼠血清糖基化终末产物水平明显升高[（72±4）比（50±5）μg／L,t=3．445,P〈0．05],肾脏中肾小球肥大,系膜区基质增生明显[肾小球面积分别为（9505±326）、（7920±518）μm2,t=2．587,P〈0．05;系膜区面积分别为（5752±316）、（1898±259）μm2,t=9．435,P〈0．05],肾脏RAGEmRNA表达明显升高（9．7±1．0比2．4±0．5,t：6．629,P〈0．05）,同时肾脏S100、RAGE蛋白表达增加。与GBA组比较,GBA＋阿托伐他汀组的大鼠血清糖基化终末产物水平明显降低[（53±3）比（72±4）μg／L,t=3．298,P〈0．05],肾脏中肾小球肥大明显好转、系膜基质增生程度减轻[肾小球面积分别为（7276±326）、（9505±326）μm2,t=4．834,P〈0．05;系膜区面积分别为（2436±316）、（5752±316）μm2,t=7．418,P〈0．05],肾脏RAGEmRNA表达水平下降（3．3±0．8比9．7±1．0,t=4．978,P〈0．05）,同时肾脏S100、RAGE蛋白表达减少。结论阿托伐他汀可通过降低血清糖基化终末产物水平、下调肾脏RAGE的表达来减轻糖基化终末产物诱导的肾脏病变。     

吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及机制

目的研究吡格列酮对糖尿病大鼠血管钙化的影响及其可能机制。方法将36只SD雄性大鼠随机平均分为6组:对照组、糖尿病组、钙化组、糖尿病+钙化组、钙化+吡格列酮组、糖尿病+钙化+吡格列酮组;建立大鼠血管钙化模型(维生素D3+华法林)和糖尿病模型(链尿佐菌素);并对血管组织进行Von Kossa染色、钙含量和碱性磷酸酶活性检测,qRT-PCR检测mRNA表达,免疫组织化学法检测骨保护素蛋白表达。结果钙化组血管平滑肌细胞及其间质内有大量黑色颗粒沉积;糖尿病+钙化组较糖尿病组和钙化组血管组织钙含量、碱性磷酸酶活性分别升高3.63倍、1.35倍和3.69倍、1.30倍(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达降低(P<0.05);糖尿病+钙化+吡格列酮组较糖尿病+钙化组钙含量、碱性磷酸酶活性分别下调13.70%、18.04%(P<0.05),骨保护素mRNA含量及其蛋白表达升高(P<0.05)。结论吡格列酮可以减轻血管钙化程度并上调骨保护素mRNA含量及蛋白表达,骨保护素可能是抑制血管钙化主要因素之一。     

白细胞介素17促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化

目的研究白细胞介素17(IL-17)是否促进主动脉瓣膜钙化形成及其可能机制。方法利用体外主动脉瓣膜间质细胞培养技术,瓣膜间质细胞培养传代3⁵次后,采用简单随机抽样法分为两组:(1)对照组,细胞培养基中添加2 ml RPMI-1640完全培养液;(2)实验组,细胞培养基中添加2 ml RPMI-1640完全培养液和IL-17(50 ng/ml)。继续孵育48 h后,用细胞茜素红钙染色检测两组瓣膜间质细胞钙化情况,用Western blot和RT-PCR检测两组瓣膜间质细胞碱性磷酸酶(ALP)及骨形态蛋白2(BMP-2)的表达情况。结果实验组细胞中明显钙结节形成,对照组细胞中少量钙结节形成;与对照组比较,实验组细胞ALP和BMP-2蛋白(0.741±0.063比0.184±0.032;0.900±0.060比0.396±0.030,均为P<0.01)与基因(0.236±0.004比0.106±0.003;0.523±0.052比0.194±0.047,均为P<0.01)表达量均明显升高。结论 IL-17可促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化。     

基质金属蛋白酶9在大鼠单纯收缩期高血压模型发生中的作用

目的 研究基质金属蛋白酶9（MMP-9）在单纯收缩期高血压形成中的作用.方法 选用8周龄Wistar 雄性大鼠20只作为研究对象,随机分成两组,模型组（n=10）和对照组（n=10）.应用华法林和维生素K1诱导动脉中层钙化,8周后右侧颈动脉插管进行有创血压和心室内压力的检测.以及取材主动脉,Von Kossa染色分析动脉钙化程度;采用原子吸收光谱法测定血管组织中钙含量.采用弹性纤维染色法观察主动脉组织中弹性纤维形状;应用免疫组织化学和Western blot检测主动脉组织中MMP-9的表达水平.结果 模型组大鼠血压与对照组相比明显增高[收缩压：（ 151±9） vs （113±7） mmHg,P＜0.01,舒张压：（122±10） vs （98±8） mmHg,P＜0.05];而各组间平均左室内压无明显变化.模型组大鼠血压变化的同时伴有动脉形态结构的改变,主动脉和颈动脉中层钙化明显,模型组主动脉钙含量明显高于对照组[（17.9±1.8）vs（5.8±0.6）mg/g,P＜0.01].弹力纤维断裂变直,失去波浪形状.Western免疫印迹法分析模型组MMP-9蛋白表达较对照组明显升高.结论 利用华法林和维生素K1诱导的单纯收缩期高血压大鼠是可重复性好,便捷,以及与人体衰老相似较为理想的模型.MMP-9酶表达明显增多可促使大动脉中层弹力蛋白降解和钙在弹力纤维薄层的沉积,从而在单纯收缩期高血压形成中发挥着一定作用.     

体外培养高糖、高脂喂养大鼠主动脉平滑肌细胞钙化的研究

目的 检测高糖、高脂喂养Goto-Kakizaki（GK）糖尿病大鼠主动脉平滑肌细胞（SMCs）的血管钙化指标,探讨糖尿病血管钙化的相关机制.方法 高糖、高脂喂养GK及Wistar大鼠2周,同时分离培养两组大鼠的主动脉SMCs,Wistar大鼠SMCs作为对照.通过细胞计数法观察细胞生长状况,以甲基百里香酚蓝比色法测定两组大鼠细胞层及培养上清中钙的含量,实时定量PCR检测两组细胞碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）、核心结合因子α-1（Cbfα-1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的基因表达.结果 与Wistar大鼠SMCs相比,GK大鼠SMCs生长速度明显缓慢（F =363.392,P＜0.05）;细胞层钙含量[（0.56±0.22） vs.（0.39±0.09）,t=2.47,P＜0.05]明显增加,培养上清中钙含量[（0.82±0.22）vs.（1.20±0.17）,t=-22.573,P＜0.05]明显减少.GK大鼠SMCs中ALP （t=12.963,P＜0.05）、OPN（t=8.305,P＜0.05）及Cbfα-1（t=10.109,P＜0.05）的基因表达增加,同时α-SMA（t=-8.219,P＜ 0.05）的基因表达减少.结论 高糖、高脂喂养的GK糖尿病大鼠的主动脉平滑肌细胞易发生钙化.     

PI3K／Akt信号通路在骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化调控中的作用

目的：研究PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002对骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）增殖及分化的影响。方法采用贴壁法体外分离人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,加入PI3K抑制剂LY294002（1、10μmol/L）,应用MTT法测定细胞增殖,常规成骨诱导分化培养3或7d,采用碱性磷酸酶（ALP）染色观察成骨分化水平,化学比色法测定ALP活性,茜素红染色后观察矿化钙结节数量并定量分析,Westernblot检测磷酸化Akt蛋白表达,应用Realtime-PCR检测各组细胞BMP2、Runx2、OPN及Osterix等成骨分化标记物的基因表达水平。结果从24至72h,LY294002对hMSCs增殖均产生显著抑制,随时间推延,可见抑制增殖效果增强（P＜0.05）。ALP染色和定量测定提示10μmol/L的ALP活性最强,在不同时间显著高于对照组和1μmol/L组（P＜0.05）。成骨诱导培养3和7d,1、10μmol/L组矿化量都显著高于对照组（P＜0.05）。10μmol/L组矿化量在成骨诱导7d也显著高于1μmol/L组（P＜0.05）。Westernblot检测结果证实成骨诱导可激活Akt磷酸化蛋白表达,但LY294002可抑制该蛋白磷酸化。成骨诱导分化7d,1、10μmol/L均明显促进BMP2、Runx2、OPN、Osterix4种基因mRNA表达（均P＜0.05）。结论PI3K/Akt信号通路参与hMSCs增殖和分化过程。成骨分化伴随下游Akt蛋白表达。PI3K抑制剂可抑制hMSCs增殖,但同时促进其向成骨分化和矿化。     

雌激素对去卵巢大鼠血管钙化的影响

目的:探讨雌激素对去卵巢大鼠血管钙化的影响.方法:将40只雌性SD大鼠随机分为5组,每组8只.空白对照组正常喂养.去卵巢钙化组、β2雌二醇(E2)溶媒对照组和E2干预组均切除双侧卵巢,假手术钙化组切除卵巢周围等体积的脂肪组织,术后给予维生素D3 30万U·kg-1·.d-1注射3d建立血管钙化模型.E2溶媒对照组和E2...     

CD137-CD137配体对巨噬细胞基质金属蛋白酶9及血管平滑肌细胞钙化形成的影响

目的探讨CD137-CD137配体(CD137L)信号是否通过调控巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达影响血管平滑肌细胞(VSMC)钙化形成。方法采用巯基乙酸盐腹腔灌洗法获取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞(PM),采用组织块贴壁法取3~6代胸主动脉VSMC分为对照组、共培养组、CD137激动组和MMP-9抑制组(n=3)。对照组用重组CD137L蛋白干预VSMC,共培养组用PM和VSMC共培养,CD137激动组和MMP-9抑制组分别用重组CD137L蛋白和MMP-9抑制剂干预PM后,与VSMC共培养,再加入重组CD137蛋白(10μg/ml)干预。采用Western blot检测各组钙化相关的骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx-2)表达,微板法检测钙离子浓度和碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa和茜素红染色检测各组细胞钙化程度。结果CD137激动组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显高于共培养组(P<0.01),而MMP-9抑制组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显低于CD137激动组,差异有统计学意义[0.25±0.27 vs 2.12±0.34,0.30±0.32 vs 2.63±0.41,(1.92±0.09)mmol/g vs(4.99±0.37)mmol/g,(1.11±0.50)KU/g vs(2.63±0.04)KU/g,P<0.01]。共培养组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。CD137激动组茜素红染色红色颗粒物质沉积和Von Kossa染色黑色颗粒物质沉积明显多于对照组和共培养组;MMP-9抑制组钙化程度显著降低;对照组和共培养组钙化程度则无明显差异。结论CD137-CD137L信号可能通过调控巨噬细胞MMP-9表达影响VSMC钙化形成。     

Involvement of matrix metalloproteinase-2 in the development of medial layer vascular calcification in uremic rats

Vascular calcification is the most important cause of cardiovascular disease in patients with chronic kidney disease (CKD). Medial layer vascular calcification, which is recognized to be an active process (i.e. the transformation of vascular smooth muscle cells into osteoblast-like cells), is common in CKD patients. We have recently reported the possibility of an interaction between elastin degradation and medial layer vascular calcification. Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2), which induces the degradation of elastin, has been implicated in the elastic calcification in arteries of dialysis patients; however, the precise mechanisms by which elastin degradation interacts with the development of vascular calcification remain to be studied. To clarify the mechanisms by which elastin degradation is involved in the development of medial layer vascular calcification in the uremic milieu, we induced aortic medial layer calcification in 5/6 nephrectomized uremic rats (male Sprague-Dawley rats) fed a diet containing high phosphate (1.2%) and lactate (20%). After 10 weeks, the rats were euthanized for the measurement of serum chemistry profiles and histological analyses. The uremic rats showed significant increases in blood pressure, serum creatinine, phosphate, and parathyroid hormone levels compared with normal rats. Von Kossa staining showed medial layer aortic calcification in the uremic rats. In calcified lesions, thin elastic lamellae were observed by elastin staining, indicating that elastin degradation could occur in the area. Furthermore, MMP-2 expression determined by immunohistochemistry was also observed in the same area. Elastin degradation accompanied by MMP-2 expression might be involved in the development of medial layer vascular calcification in uremic rats.